芪苈强心胶囊改善心肌纤维化及对TGF-β1/Smad3信号转导通路的影响

目的探讨芪苈强心胶囊对慢性心力衰竭(CHF)大鼠心肌纤维化(MF)的作用及其可能机制。方法2012年4—10月于重庆医科大学附属第一医院动物实验中心进行实验。取SD大鼠68只随机分为假手术组8只,余60只建立大鼠CHF模型,8周后随机分为模型组、依那普利组和芪苈强心胶囊高、中、低剂量组。给药4周后检测血浆脑钠肽(BNP)的含量,计算左室质量指数(LVMI),天狼猩红染色(PSR)观察左室心肌胶原形态,测量胶原容积分数(CVF),免疫组化法检测心室中转化生长因子β1(TGF-β1)和Smad3蛋白的表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠BNP、LVMI、Ⅰ/ⅢCVF、TGF-β1和Smad3蛋白表达均明显增加(t=9.75、2.04、9.59、8.57、9.23,P<0.05或P<0.01);与模型组比较,依那普利组、芪苈强心胶囊各剂量组BNP、LVMI、Ⅰ型CVF、Ⅲ型CVF、TGF-β1和Smad3蛋白表达均明显降低(芪苈强心胶囊低、中剂量组BNP除外,芪苈强心胶囊低剂量组Ⅲ型CVF和Ⅰ/ⅢCVF除外),差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);与依那普利组比较,芪苈强心胶囊中、高剂量组各项指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论芪苈强心胶囊能减轻CHF大鼠的心室肥厚,抑制MF和改善心功能,这种作用可能与抑制TGF-β1/Smad3信号转导有关。     

Apelin-13对压力超负荷大鼠心肌纤维化及TGF-β1/Smads信号通路的影响

目的 观察血管紧张素Ⅱ1型受体相关蛋白内源性配体-13（Apelin-13）对压力超负荷大鼠心肌纤维化的影响,探讨其可能的影响机制。方法 40只成年雄性SD大鼠随机分为假手术组（Sham组）、模型组（AOB组）、Apelin-13组、阻断剂组（SB431542组）。假手术组游离但不结扎腹主动脉,其余3组于左肾动脉上方0.5 cm处行腹主动脉缩窄术建立压力超负荷模型,3 d后各组给予相应药物干预。4周后取材,计算大鼠心脏指数（H/B）和左心室质量指数（left ventricular mass index,LVMI）;Masson染色光镜下观察心肌组织形态学改变,测算心肌胶原容积分数（collagen volume fraction,CVF）;ELISA法测定血清转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）浓度;Western-blotting检测TGF-β1及Ⅰ型、Ⅲ型胶原纤维的蛋白表达量;RT-PCR检测心肌组织Smad3 mRNA、Smad7 mRNA的表达水平。结果 与Sham组相比,AOB组大鼠H/B、LVMI、CVF、血清TGF-β1均明显升高（P〈0.05）,心肌组织TGF-β1、Ⅰ型胶原纤维、Ⅲ型胶原纤维及Smad3mRNA表达水平亦显著升高（P〈0.05）;与AOB组相比,Apelin-13和SB431542干预组上述指标均明显下调（P〈0.05）。Smad7 mRNA在各组间的表达呈相反趋势。结论 Apelin-13可通过部分抑制TGF-β1/Smads通路以减轻压力超负荷大鼠心肌纤维化。     

芪苈强心胶囊对心肌梗死大鼠心肌纤维化及TGF-β1／Smad3信号通路的影响

目的探讨芪苈强心胶囊对心肌梗死后大鼠心肌纤维化的影响及其作用机制。方法 SD雄性大鼠结扎冠脉左前降支,建立急性心肌梗死(Acute Myocardial Infarction,AMI)模型,4周后根据心脏超声结果随机分为模型组和芪苈强心组,另设假手术组,分别给予1 g/(kg·d)芪苈强心及等体积蒸馏水灌胃。4周后超声心动图检测大鼠心脏功能,取梗死周围心肌组织采用HE及Masson染色观察心肌病理形态改变,免疫组织化学方法检测心肌α-SMA表达,Western blotting方法检测心肌α-SMA、胶原Ⅰ(collagenⅠ)、转化生长因子-β_1(TGF-β_1)及p-Smad3蛋白表达。结果与假手术组比较,模型组左心室短轴缩短分数(FS)和射血分数(EF)明显降低(P0.05),左心室收缩末期内径(LVIDs)和收缩末期容量(ESV)显著升高(P0.05),心肌纤维化明显(P0.05),α-SMA、collagenⅠ、TGF-β_1和p-Smad3等表达增加(P0.05)。与模型组比较,芪苈强心组EF和FS明显升高(P0.05),LVIDs和ESV明显降低(P0.05),心肌纤维化程度减轻(P0.05),α-SMA、collagenⅠ、TGF-β_1和p-Smad3等表达明显降低(P0.05)。结论芪苈强心胶囊能够降低心肌梗死大鼠心肌纤维化程度,改善心脏功能,其作用机制可能与调控TGF-β_1/Smad3信号通路相关蛋白有关。     

芪苈强心胶囊治疗慢性心力衰竭大鼠的实验研究

目的 观察芪苈强心胶囊对慢性心力衰竭大鼠心功能及凋亡蛋白caspase-3的影响,探讨治疗慢性心力衰竭的作用机制. 方法 结扎大鼠冠状动脉左前降支,建立AMI模型,存活者随机分为模型组、芪苈强心胶囊高、中、低剂量组(简称高、中、低剂量组)和卡托普利组,另设假手术组.芪苈强心胶囊组术后予药粉1.2g/(kg·d)、0.6g/(kg·d)、0.3g/(kg·d)治疗,卡托普利组予卡托普利25mg/(kg·d)治疗,模型组和假手术组仅予等体积生理盐水,治疗4周后对相关指标进行检测. 结果 与模型组相比,芪苈强心胶囊能有效降低各治疗组体重(BW)、心脏质量指数(HMI)、左心室质量指数(LVMI)及左心室舒张末压(LVEDP),有效增加左心室收缩末压(LVSP)左心室最大压力上升及下降速度(±dp/dtmax),以高剂量组较为明显;模型组caspase-3蛋白表达较假手术组显著增加,芪苈强心胶囊治疗高、中剂量组较模型组显著降低. 结论 芪苈强心胶囊治疗能明显改善AMI心力衰竭大鼠心功能,下调caspase-3蛋白表达水平,有效抑制心力衰竭后心肌细胞凋亡.推测芪苈强心胶囊能有效改善心功能的作用机制可能与其抑制心肌重构及心肌细胞凋亡有关.     

木疏胶囊抗大鼠肝纤维化机制研究

目的通过观察木疏胶囊对肝纤维化大鼠纤维化相关基因表达的影响,探讨木疏胶囊抗肝纤维化分子水平的作用机制。方法 Wistar大鼠随机分为正常对照组,模型对照组,木疏胶囊预防组和治疗组,鳖甲软肝片预防组和治疗组。40%CCl4油溶液诱导大鼠肝纤维化模型。HE染色和Masson染色观察肝组织病理改变。RT-PCR法检测各组TGF-β1,α-SMA,col-Ⅰ,col-Ⅲ基因表达。结果 40%CCl4皮下注射诱导大鼠肝纤维化模型,病理观察证实造模成功。与模型对照组比较,各用药组各指标PCR产物均显著降低（P〈0.01）,木疏胶囊预防组分别与鳖甲软肝片预防组和治疗组比较显示TGF-β,α-SMA,col-Ⅰ,col-Ⅲ基因表达的降低均有统计学差异（P〈0.01）,木疏胶囊治疗组分别与鳖甲软肝片预防组和治疗组比较,TGF-β,α-SMA,col-Ⅰ,col-Ⅲ基因表达的降低均有统计学差异（P〈0.05或P〈0.01）。结论木疏胶囊预防和治疗用药均可使肝纤维化大鼠肝组织TGF-β1、α-SMA、Col-Ⅰ、Col-Ⅲ基因表达下降。     

TGF-β/Smad与Wnt/β-catenin在博莱霉素致大鼠肺纤维化中的表达及相互作用

【摘要】目的 观察TGF-β/Smad和Wnt/β-catenin通路相关基因在肺纤维化大鼠模型肺组织中的表达,探讨两条通路对肺纤维化的影响及其相互作用。方法 取Wistar大鼠36只,随机分为正常对照组和肺纤维化模型组,每组18只。采用气管内注入BLM建立Wistar大鼠肺纤维化模型,每组分别于第14天、21天和28天处死大鼠各6只;取肺组织称重,测定肺组织中HYP、IL-1β水平,观察肺组织Col-Ⅰ、IL-1β、TGF-β1、Smad3、α-SMA、Wnt1、β-catenin、LEF-1mRNA的表达,并进行HE染色和Masson胶原染色。结果 （1）与正常对照组比,造模后14~28天大鼠肺指数均明显升高（P<0.01）;肺组织HE染色呈现明显的肺纤维化病理改变,Masson染色结果可见造模后14~28天肺间质蓝色胶原呈渐进性增加。（2）造模后第14天,肺组织IL-1β含量、IL-1β mRNA相对含量均显著升高（P<0.01）,随后逐渐降低,至造模后第28天IL-1β表达量接近正常水平（P>0.05）。（3）造模后14~28天大鼠肺组织HYP含量、Col-ⅠmRNA相对表达量均明显升高（P<0.01）。（4）与正常组相比,模型组中TGFβ1、Smad3、α-SMA、Wnt1、β-Catenin、LEF-1 mRNA表达显著增加（P<0.01）,且TGFβ1、Smad3 mRNA分别与Wnt1、LEF-1、β-catenin mRNA的表达呈显著正相关。结论 TGF-β/Smad和Wnt/β-catenin通路相关基因在博来霉素致大鼠肺纤维化中表达上调,两条通路对肺纤维化均有促进作用且它们间可能存在一定联系。     

芪苈强心胶囊对H2O2诱导的H9C2大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的观察芪苈强心胶囊对H2O2诱导的H9C2大鼠心肌细胞凋亡的影响,探讨芪苈强心胶囊抗心力衰竭的作用机制。方法H9C2大鼠心肌细胞分为正常对照组、模型组、芪苈强心组,后2组采用100μmol/L H2O2处理6 h造成心肌细胞损伤模型,芪苈强心组加入含药血清,3组继续培养12、24、48 h,MTT法测定细胞增殖率。各组给药孵育48 h后,收集细胞,FCM方法测定细胞凋亡率,RT-PCR和Western blot法检测Caspase-3、Bcl-2、Bax、Fas/FasL mRNA和蛋白的表达。结果与模型组比较,芪苈强心组能增加H9C2细胞增殖活性,RT-RCR和Western blot方法结果显示芪苈强心组细胞凋亡率、Caspase-3、Bax、Fas、FasL表达明显下降,Bcl-2、Bcl-2/Bax明显上升。结论芪苈强心胶囊能下调Caspase-3、Fas/FasL表达,调节Bcl-2/Bax平衡,抑制心肌细胞凋亡,对心肌细胞起到一定的保护作用。     

自发性高血压大鼠心肌纤维化中Smads通路的改变及卡托普利的调控作用

目的 观察TGFβ-Smads传导通路在自发性高血压大鼠心肌纤维化形成中的作用机制及其卡托普利的调控作用.方法 取15周龄雄性自发性高血压大鼠20只,随机均分为模型组及卡托普利组;另取10只同龄健康雄性WKY大鼠作为正常对照组.卡托普利组给予45mg/kg卡托普利灌胃,模型组、正常对照组给予等量0.9%氯化钠溶液灌胃,2次/d,疗程为12周.12周后,采用ELISA法检测血清Ⅰ、Ⅲ型胶原;采用半定量RT-PCR法检测转化生长因子β1（TGFβ1）的表达;免疫组化检测Smad2/3及Smad7的表达.结果 与正常对照组比较,模型组大鼠心肌Ⅰ、Ⅲ型胶原及TGFβ1、Smad2/3的表达均明显升高（均P＜0.05）,Smad7的表达明显降低（P＜0.05）;与模型组比较,卡托普利组大鼠心肌Ⅰ、Ⅲ型胶原及TGFβ1、Smad2/3的表达均明显降低（均P＜0.05）,Smad7的表达明显升高（P＜0.05）.结论 自发性高血压大鼠TGFβ-Smad通路的激活可能是导致其心肌组织中Ⅰ、Ⅲ型胶原表达增高从而形成心肌纤维化的机制之一;卡托普利具有抑制高血压所导致的心肌纤维化的作用.     

羊栖菜多糖对TGF-β1诱导的大鼠肺成纤维细胞的影响

目的 研究羊栖菜多糖对TGF-β1诱导的大鼠肺成纤维细胞的影响,探讨其抗肺纤维化作用及机制。方法 将实验分成对照组、TGF-β1组、TGF-β1+不同剂量羊栖菜多糖组（25、50、100μg/ml）,采用MTT法检测细胞增殖,RT-PCR法检测Smad 3、Smad 7、α-SMA、Ⅰ型胶原mRNA的表达,ELISA法检测Ⅰ型胶原蛋白的表达, Western blot法检测α-SMA的表达。结果 TGF-β1能诱导肺成纤维细胞增殖及表达Smad3 mRNA、Smad7 mRNA、Ⅰ型胶原、α-SMA（P < 0.05）。羊栖菜多糖可以不同程度抑制TGF-β1诱导的肺成纤维细胞的增殖以及Smad3mRNA、Ⅰ型胶原和α-SMA的表达,且呈剂量依赖性（P < 0.05）,能促进TGF-β1诱导的肺成纤维细胞表达Smad7 mRNA, 呈剂量依赖性（P < 0.05）。结论 在离体细胞,羊栖菜多糖能抑制TGF-β1诱导的肺成纤维细胞增殖、分化与表达,其机制可能与其下调Smad3,促进Smad 7表达从而抑制TGF-β/Smads信号通路有关。     

芪苈强心胶囊辅治对慢性心力衰竭患者肱动脉血管内皮舒张功能的影响

目的研究芪苈强心胶囊对慢性心力衰竭(CHF)患者肱动脉血管内皮舒张功能的影响。方法120例CHF患者随机分2组,芪苈强心组(60例):患者常规抗心力衰竭治疗加口服芪苈强心胶囊2～4粒,每日3次。卡托普利组(60例):常规抗心力衰竭治疗加口服卡托普利12.5～25mg,每日3次。均治疗4周。治疗前后分别进行肱动脉血管舒张功能检测及运动耐量试验。健康对照组40例,不予任何药物及处理。结果CHF患者肱动脉流量介导性舒张(FMD)活性较对照组显著减弱(P<0.01)。芪苈强心组治疗后肱动脉FMD活性显著增强,与卡托普利组比较差异有统计学意义(P<0.01)。芪苈强心组运动耐受时间(13±2)min较卡托普利组(7±3)min延长,6min最大步行距离(442±67)m较卡托普利组(385±69)m延长,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论CHF患者存在明显的血管内皮依赖性舒张功能障碍。芪苈强心胶囊通过增强FMD活性,对该病具有良好的治疗作用。     

芪黄明目胶囊对糖尿病小鼠视网膜病变及生长因子表达的影响

目的探讨芪黄明目胶囊对2型糖尿病小鼠视网膜病变及生长因子表达的影响。方法选取36只KK/Upj-Ay小鼠,按空腹血糖水平随机分为模型组、芪黄明目胶囊高剂量组(8.32 g生药/kg)、芪黄明目胶囊中剂量组(4.16 g生药/kg)、芪黄明目胶囊低剂量组(2.08 g生药/kg),各9只;另设9只C57BL/6小鼠为对照组。采用灌胃给药,芪黄明目胶囊各组按照相应的剂量给予芪黄明目胶囊,对照组和模型组给予等体积的蒸馏水,1次/d,连续3个月。3个月后,视网膜消化铺片,进行HE-PAS染色;分别用Real Time PCR(qPCR)和Western blot法测定各组小鼠视网膜血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、色素上皮衍生因子(PEDF)、转化生长因子-β(TGF-β)、胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)mRNA及其蛋白表达。计量资料的比较采用ANOVA分析及Dunnet t检验。结果模型组小鼠视网膜VEGF、bFGF、TGF-β、IGF-ⅠmRNA及蛋白表达量显著高于对照组,而PEDF mRNA及蛋白表达量显著低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.01)。与模型组比较,芪黄明目胶囊中、高剂量组小鼠VEGF、IGF-ⅠmRNA表达及芪黄明目胶囊高剂量组小鼠TGF-βmRNA表达显著减少(P<0.05);芪黄明目胶囊中、高剂组小鼠视网膜VEGF、TGF-β、IGF-Ⅰ蛋白表达显著减少,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论芪黄明目胶囊可能通过抑制小鼠视网膜VEGF、TGF-β、IGF-Ⅰ的表达,来延缓糖尿病视网膜病变的发展。     

CSD肽对肺成纤维细胞细胞外基质及Smad信号表达的影响

目的研究CSD肽（CSD-p）对转化生长因子β1（TGF-β1）刺激下人胚肺成纤维细胞的细胞外基质及Smad信号表达的影响。方法体外培养人胚肺成纤维细胞,分为4组：对照组（无TGF-β1处理）、TGF-β1处理组、CSD-p处理组、TGF-β1及CSD-p联合处理组。RT-PCR测定各组窖蛋白1mRNA的表达;Western blot检测各组窖蛋白1、α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、胶原Ⅰ、p-Smad2、p-Smad3及Smad7蛋白的表达。结果 TGF-β1刺激人胚肺成纤维细胞后,窖蛋白1的mRNA和蛋白表达较对照组明显降低（mRNA：0.404±0.027比1.540±0.262;蛋白：0.278±0.054比1.279±0.085;P〈0.01）。经TGF-β1刺激,人胚肺成纤维细胞的胶原Ⅰ（1.127±0.078比0.234±0.048）、α-SMA（1.028±0.058比0.295±0.024）,p-Smad2（1.162±0.049比0.277±0.014）、p-Smad3（1.135±0.057比0.261±0.046）蛋白表达增加（P〈0.01）;Smad7表达较对照组明显降低（0.379±0.004比1.249±0.046,P〈0.001）。与TGF-β1处理组比较,CSD肽明显抑制TGF-β1诱导的胶原Ⅰ（0.384±0.040）、α-SMA（0.471±0.071）、p-Smad2（0.618±0.096）、p-Smad3（0.461±0.057）蛋白表达;上调Smad7的蛋白表达（0.924±0.065比0.379±0.004）。结论 CSD肽下调TGF-β1刺激下人胚肺成纤维细胞的胶原Ⅰ及α-SMA蛋白的表达,可能通过抑制TGF-β1/Smads信号通路激活,提示使用CSD肽增加窖蛋白1功能可能对肺纤维化具有一定的干预作用。     

依达拉奉可减轻大鼠氧化应激及延缓心肌纤维化

目的探讨依达拉奉减轻氧化应激和抗心肌纤维化作用。方法将50只8周龄SD雄性大鼠随机分5组(对照组,模型组,
依达拉奉低、中、高浓度组)。采用异丙肾上腺素(ISO)构建大鼠心肌纤维化模型,依达拉奉（Eda）各剂量组同时予以依达拉奉干
预,共14 d。第15天检测各组心肌纤维化程度、左心室质量指数（LVMI）、胶原容积分数（CVF）,以及心肌组织Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋
白（ColⅠ、Col Ⅲ）、羟脯氨酸（Hyp）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、一氧化氮（NO）含量,采用免疫荧光和Western blot
检测心肌组织TGF-β1的表达。结果模型组CVF和LVMI均显著高于对照组（P均为0.000）,依达拉奉组随着治疗浓度的增加
（低、中、高浓度）,CVF和LVMI呈下降趋势（P<0.05）;模型组ColⅠ、Col Ⅲ和Hyp均显著高于对照组（P均为0.000）,随着治疗浓
度的增加,ColⅠ、Col Ⅲ和Hyp呈下降趋势;模型组MDA显著高于对照组（P=0.000）,SOD和NO水平则显著低于对照组（P均
为0.000）;依达拉奉低、中、高浓度组SOD和NO明显高于模型组（P<0.05）;模型组TGF-β1显著高于对照组（P=0.000）,依达拉奉
低、中、高浓度组TGF-β1明显低于模型组;MDA与LVMI、CVF、ColⅠ、Col Ⅲ、Hyp呈正相关,而SOD和NO均与LVMI、CVF、
ColⅠ、Col Ⅲ、Hyp呈负相关;TGF-β1与LVMI、CVF、ColⅠ、Col Ⅲ、Hyp、MDA呈正相关,而与SOD、NO呈负相关。结论依达
拉奉能减轻氧化应激及抑制TGF-β1表达从而延缓心肌纤维化。
     

低氧对大鼠肺组织结构的影响及其机制的探讨

目的观察间歇性常压低氧对SPF级SD大鼠肺组织中转化生长因子-β1(TGF-β1)、通道蛋白Smad4、Ⅰ型胶原、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达及肺组织结构的影响。方法将SD大鼠置于常氧或间歇性常压低氧(101kPa,10%O2,每天低氧8h)条件下,分别于3、7、14、21d每组处死5只大鼠,HE染色观察肺组织病理改变,免疫组化染色检测肺组织TGF-β1、Ⅰ型胶原表达,RT-PCR检测TGF-β1、Ⅰ型胶原的mRNA表达量,Westernblot法检测Smad4通道蛋白的表达,ELISA法检测肺泡灌洗液中TNF-α的表达。结果 HE染色提示低氧第3d低氧组大鼠肺组织即出现轻度水肿及炎症细胞浸润,且随低氧时间延长,炎症反应加重,肺泡间隔逐渐增厚;低氧组大鼠肺组织中TGF-β1、Smad4、Ⅰ型胶原蛋白表达量及TGF-β1mRNA、Ⅰ型胶原mRNA均较对照组高(P<0.01),随低氧时间延长,各因子表达量逐渐增高,且Smad4蛋白表达水平与TGF-β1表达水平呈正相关(r=0.944,P<0.01);肺泡灌洗液中TNF-α表达量较对照组高(P<0.01)。结论低氧可能通过诱发肺组织水肿及炎症反应,上调TNF-α水平、激活TGF-β1/Smads通路从而增加Ⅰ型胶原合成,引发细胞外基质沉积,肺泡间隔增厚。     

抵当陷胸汤对糖尿病大鼠肝脏TGF-β1/Smad3信号通路的影响

目的 观察抵当陷胸汤通过调节TGF-β1/Smad3信号通路干预糖尿病大鼠肝纤维化病变的部分机制。方法 根据数字随机表法将34只SD大鼠分为空白组（10只）、模型组（8只）、抵当陷胸汤组（8只）和ALT-711组（8只）,按55 mg/kg剂量腹腔单次注射链脲佐菌素溶液制备糖尿病模型,予以相应的药物每天按相应剂量经胃灌药,于第8周末,麻醉后取材。采用Western blot法和实时荧光定量PCR法分别检测大鼠肝脏转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）及其信号蛋白Smad3蛋白及其mRNA表达水平。结果 与空白组比较,模型组大鼠肝组织TGF-β1、Smad3蛋白及mRNA表达水平均明显上调（P<0.05）,p-Smad3蛋白表达水平明显上调（P<0.05）;与模型组比较,抵当陷胸汤组和ALT-711组大鼠肝脏组织TGF-β1、Smad3蛋白及mRNA表达水平均明显下调（P<0.05）,p-Smad3蛋白表达水平明显下调（P<0.05）;抵当陷胸汤组和ALT-711组大鼠肝脏组织TGF-β1、Smad3、p-Smad3蛋白及TGF-β1、Smad3 mRNA表达水平比较,差异均无统计学意义（P>0.05）。结论 抵当陷胸汤通过抑制TGF-β1/Smad3信号通路激活干预糖尿病肝纤维化病变。     

卡托普利对大鼠心肌梗死后肿瘤坏死因子-α和基质金属蛋白酶-2表达的影响

目的探讨卡托普利对心肌梗死后心力衰竭大鼠心肌肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)的表达以及心室重构和心室功能的影响。方法结扎大鼠冠状动脉前降支建立心肌梗死模型,术后24 h存活大鼠分为模型组和模型+卡托普利组(卡托普利500 mg.kg-1.d-1,饮水给药)。另设假手术组,假手术组和模型组大鼠饲普通饮水。术后6周免疫组织化学法检测TNF-α、Ⅰ型和Ⅲ型胶原,蛋白印迹法检测MMP-2,Van Gieson染色测胶原容积分数;压力传感器记录左心室血流动力学改变。结果与假手术组相比,模型组和模型+卡托普利组大鼠的心室功能明显降低(P<0.05),卡托普利能显著改善心肌梗死后心室功能(P<0.05);与假手术组相比,模型组和模型+卡托普利组非梗死区胶原容积分数(CVF)、Ⅰ/Ⅲ胶原比均升高(P<0.01),全心质量/体质量(THW/BW)及左心室实际质量/体质量(LVW/BW)显著增加(P<0.01);但卡托普利干预后CVF、Ⅰ/Ⅲ胶原比及THW/BW、LVW/BW均低于模型组(P<0.05)。与假手术组相比,模型组非梗死区MMP-2和TNF-α表达升高(P<0.01);卡托普利干预后MMP-2和TNF-α的表达明显低于模型组(P<0.01)。结论卡托普利能明显减轻大鼠心肌梗死后心室重构,改善心室功能,其作用可能与调节心脏TNF-α和MMP-2的表达有关。     

依那普利对大鼠肾间质纤维化中TGF-β1,p-Smad2/3及Smad7的作用

目的:观察依那普利对肾间质纤维化大鼠肾组织中TGF-β1,p-Smad2/3及Smad7的影响,探讨依那普利抗肾间质纤维化的作用机制.方法:将30只雌性SD大鼠随机分为假手术组、模型组和依那普利治疗组.对治疗组和模型组大鼠行左侧输尿管结扎术建立单侧输尿管梗阻的动物模型.术后14 d处死大鼠,留取梗阻侧肾组织行HE和Masson染色以观察各组大鼠肾组织病理改变,用免疫组织化学方法检测Col Ⅰ,TGF-β1,P-Smad2/3和Smad7的蛋白水平表达,用RT-PCR方法检测TGF-β1,和Smad7mRNA水平表达.结果:模型组肾间质损伤指数、胶原相对面积及间质内Col Ⅰ表达均较假手术组增高(P<0.01),依那普利治疗后好转.假手术组肾组织TGF-β1蛋白及mRNA表达、p-Smad2/3蛋白表达较低,模型组表达明显增强(P<0.01),依那普利治疗后明显减弱(P<0.01).假手术组肾组织可见较多的Smad7蛋白及mRNA表达,模型组肾组织Smad7表达明显减弱(P<0.01),依那普利治疗后Smad7表达较模型组增强(P<0.01).结论:依那普利可以通过影响单侧输尿管梗阻大鼠肾组织中TGF-β/Smads信号通路中的TGF-β1,p-Smad2/3和Smad7而起到抑制纤维化的作用.     

肝纤维化中丹参素对TGFβ1/Smads/ERK信号通路的影响及其相互关系

目的探讨肝纤维化过程中转化生长因子β1(transforming growth factorβ,TGFβ1)/Smads/细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)通路的相互作用。方法体外分离培养大鼠肝星状细胞(hepatic stellatecell,HSC),MTT法筛选丹参素最适浓度;以最适浓度丹参素及ERK阻断剂(PD98059)作用于经TGFβ1处理的HSC,CCK-8法检测各组HSC增殖;免疫细胞化学染色法检测各组HSC内α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle sctin,α-SMA)及Ⅰ、Ⅲ型胶原表达;RT-PCR检测各组HSC的Smad2、Smad3、Smad7 mRNA表达量;Western blot法检测各组Smad2/3、ERK1/2蛋白磷酸化及Smad7蛋白水平。结果 0.062 5～0.25 mmol/L的丹参素可有效抑制HSC增殖,作为最适处理浓度;PD98059(100μmol/L)可抑制TGFβ1诱导的HSC增殖,丹参素剂量依赖性抑制TGFβ1诱导的HSC增殖(P<0.01);TGFβ1促进细胞内α-SMA及Ⅰ、Ⅲ型胶原表达,PD98059及丹参素降低TGFβ1诱导的α-SMA及Ⅰ、Ⅲ型胶原水平;PD98059可拮抗TGFβ1诱导的Smad2、Smad3、Smad7 mRNA的表达(P<0.05,P<0.01),丹参素下调Smad2、Smad3 mRNA水平,但上调Smad7 mRNA水平(P<0.01);PD98059及丹参素抑制TGFβ1诱导的Smad2/3、ERK1/2蛋白磷酸化(P<0.01),但对TGFβ1诱导的Smad7蛋白表达上调有不同效应(P<0.01)。结论 TGFβ1上调Smad2、Smad3 mRNA表达及蛋白磷酸化,进而诱导HSC增殖、活化及胶原合成,ERK通路可能参与HSC中TGFβ1诱导Smad基因表达及蛋白磷酸化过程。丹参素对TGFβ1/Smad/ERK信号通路具有抑制效应。     

卡维地洛对异丙肾上腺素诱导大鼠心肌重塑中Rho/Rock信号通路的影响

目的研究卡维地洛对异丙肾上腺素诱导大鼠心肌重塑中的作用及对Rho/Rock信号通路的影响。方法 24只雄性SD大鼠随机分成3组:空白对照组(对照组)、ISO模型组(模型组)、卡维地洛(Carvedilol Car)组(治疗组),每组8只。模型组和治疗组皮下多点注射ISO[5 mg/(kg·d)×10 d]建立大鼠心肌纤维化模型,其中治疗组给予Car[10 mg/(kg·d)]灌胃,模型组及对照组每日给予相同体积的生理盐水灌胃。6周后取左室心肌组织进行MASSON染色、免疫组织化学染色,分别检测胶原容积分数(CVF)、心肌组织中转化生长因子-β1(TGF-β1)表达量;RT-PCR法检测心肌组织RhoA和Rho激酶(Rock)mRNA的表达。结果与对照组比较,模型组大鼠CVF增加,TGF-β1表达增高(P<0.01),左室组织RhoA和Rho激酶mRNA表达上调(P<0.01);与模型组比较,治疗组CVF表达下降(P<0.01),TGF-β1、RhoA和Rho激酶mRNA表达减少(P<0.01),但均仍高于对照组(P<0.01)。结论 ISO诱导心肌纤维化伴有Rho/Rock信号通路激活,卡维地洛能抑制Rho/Rock信号转导通路的活性、抑制TGF-β1表达,减轻心肌纤维化。     

芪贞降糖颗粒对糖尿病肾病大鼠TGF-β1/Smad信号通路的调控作用

目的 观察芪贞降糖颗粒对糖尿病肾病大鼠TGF-β1/Smad信号通路的调控作用,探讨其改善糖尿病肾病的作用机制。方法 采用高脂饲料喂养联合链尿佐菌素腹腔注射方法复制2型糖尿病肾病大鼠模型,选取模型复制成功的大鼠,随机分为模型组,二甲双胍组,芪贞降糖颗粒低、中、高剂量组,每组10只,另取10只正常大鼠作为正常对照组。灌胃给药8周,检测各组大鼠尿α1微球蛋白、β2微球蛋白和白蛋白含量。苏木素-伊红染色观察大鼠肾组织的损伤程度,免疫荧光染色观察大鼠肾组织转化生长因子β1（transforming growth factor beta 1,TGF-β1）和转化生长因子βⅠ型受体（transforming growth factor beta type Ⅰ receptor,TGF-βRⅠ）的表达分布。RT-PCR检测肾组织TGF-β1、TGF-βRⅠ、Smad3和Smad7 mRNA的表达水平,Western blot检测肾组织TGF-β1、TGF-βRⅠ、Smad3、p-Smad3、Smad7和p-Smad7的蛋白表达水平。结果 与正常对照组相比,模型组大鼠尿α1微球蛋白、β2微球蛋白及白蛋白含量均明显增加（P＜0.05）,肾组织损伤明显,TGF-β1和TGFβ-RⅠ表达增加;TGF-β1、TGF-βRⅠ、Smad3 mRNA表达水平显著增高（P＜0.05）,Smad7 mRNA表达水平显著降低（P＜0.05）,TGF-β1、TGF-βRⅠ、Smad3和p-Smad3蛋白表达水平显著增加（P＜0.05）,Smad7和p-Smad7蛋白表达水平显著降低（P＜0.05）。与模型组相比,芪贞降糖颗粒组上述指标均具有不同程度的逆转,差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论 芪贞降糖颗粒能够改善糖尿病大鼠肾组织的损伤程度,其机制可能与调控TGF-β1/Smad信号通路的蛋白表达有关。