前列腺癌相关基因PAX5启动子甲基化的临床意义

目的：探讨PAX5基因启动子甲基化作为前列腺癌生物标志物的临床价值。 方法：采用Real time RT-PCR检测前列腺细胞系（RWPE-1、LNCaP、PC-3、DU145）中PAX5 mRNA的表达,甲基化特异性PCR(MSP)法分析4株前列腺细胞的甲基化状态;去甲基化药物处理后,Real time RT-PCR法检测肿瘤细胞PAX5基因mRNA表达; Real time MSP法检测64例前列腺癌患者、22例前列腺增生患者与47例健康体检者血清中PAX5基因启动子甲基化水平,并统计分析血清PAX5基因启动子甲基化水平与临床病理参数的相关性;运用ROC曲线分析PAX5基因启动子甲基化在前列腺癌诊断中的价值。结果：Real time RT-PCR结果显示,与正常前列腺上皮细胞RWPE-1相比,PAX5 mRNA在3株前列腺癌细胞中均表达下调;LNCaP、PC-3、DU145前列腺癌细胞均可检测到PAX5基因启动子甲基化,而正常前列腺上皮细胞RWPE-1不存在PAX5基因启动子甲基化;去甲基化药物可恢复PAX5基因mRNA表达;Real time MSP结果显示,前列腺癌患者的血清PAX5基因启动子甲基化水平显著高于前列腺增生患者和健康体检者;前列腺癌患者的血清PAX5基因启动子甲基化率与Gleason评分和TNM分期有关;ROC结果显示PAX5基因的诊断价值优于PSA。结论：本研究结果提示启动子甲基化是前列腺癌细胞中PAX5基因表达下调的主要原因,血清PAX5启动子甲基化是一种潜在的前列腺癌诊断标志物。     

宫颈癌及宫颈上皮内瘤变MGMT基因甲基化及其相关性研究

目的：探讨宫颈癌和宫颈上皮内瘤变（CIN）患者宫颈脱落细胞中O6-甲基鸟嘌呤- DNA甲基转移酶（MGMT）基因启动子区甲基化状态在宫颈癌临床早期诊断和筛查中的作用。方法选取对照组20例,CINI、CINII、CINIII期患者各50例和宫颈癌患者50例,采用甲基化特异性PCR检测宫颈脱落细胞中MGMT基因启动子区甲基化状态并进行比较。结果宫颈癌和CINI、II、III期患者MGMT基因启动子区甲基化阳性率分别为82.0%（41/50）、24.0%（12/50）、50.0%（25/50）和80.0%（40/50）,而对照组未检测到MGMT基因启动子区甲基化。与对照组比,宫颈癌组和CINI、II、III期组MGMT基因启动子区甲基化阳性率的差异均有统计学意义（均P＜0.05）。宫颈癌组中MGMT基因启动子甲基化与其临床分期及组织分化程度有显著相关性（均P＜0.05）。结论 MGMT基因启动子区甲基化可能参与宫颈癌的发生、发展,有助于宫颈癌的早期辅助诊断和筛查。     

宫颈癌组织中抑癌基因Syk启动子甲基化的研究

目的 探讨宫颈癌组织中脾酪氨酸激酶(Syk)基因启动子甲基化程度及其临床意义.方法 采用甲基化特异性PCR(MSP)方法检测60例宫颈癌、50例宫颈上皮内瘤变(CIN)和20例正常宫颈组织中Syk基因启动子甲基化情况.结果 宫颈癌组织中Syk基因启动子甲基化率明显高于CIN组织及正常宫颈组织(χ2=17.13、19.71,P<0.05);Syk基因甲基化程度在宫颈癌组织中的表达与肿瘤淋巴结转移有明显相关性(χ2=10.22,P<0.01),但与病人年龄、肿瘤大小、临床分期、组织学类型及病理类型无明显相关性(P>0.05).结论 Syk 基因启动子甲基化可能与宫颈癌发生及其淋巴转移有关.     

宫颈癌性别决定基因9基因启动子区甲基化水平检测对宫颈癌的价值研究

目的检测宫颈癌性别决定基因9(SOX9)基因启动子区的甲基化水平并探讨其在宫颈癌诊断、治疗及预后评估中的临床意义。方法采用双探针实时定量聚合酶链式反应(PCR)技术检测48例宫颈癌脱落细胞标本(宫颈癌组)和48例正常宫颈脱落细胞标本(正常宫颈组)中SOX9基因启动子区的甲基化水平,比较两组间的差异及其与宫颈癌组各病理分型间的关系。结果宫颈癌组的平均甲基化分值高于正常宫颈组,差异有统计学意义(P=0.000)。宫颈鳞癌SOX9基因启动子区甲基化分值高于腺癌,G3高于G1～G2,有淋巴结转移和脉管癌栓的高于无淋巴结转移和脉管癌栓的,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 SOX9基因启动子区甲基化与宫颈癌的发生、发展密切相关,可用于指导宫颈癌的诊断、治疗和预后评估。     

宫颈癌性别决定基因9基因启动子区甲基化水平检测对宫颈癌的价值研究

目的检测宫颈癌性别决定基因9(SOX9)基因启动子区的甲基化水平并探讨其在宫颈癌诊断、治疗及预后评估中的临床意义。方法采用双探针实时定量聚合酶链式反应(PCR)技术检测48例宫颈癌脱落细胞标本(宫颈癌组)和48例正常宫颈脱落细胞标本(正常宫颈组)中SOX9基因启动子区的甲基化水平,比较两组间的差异及其与宫颈癌组各病理分型间的关系。结果宫颈癌组的平均甲基化分值高于正常宫颈组,差异有统计学意义(P=0.000)。宫颈鳞癌SOX9基因启动子区甲基化分值高于腺癌,G3高于G1～G2,有淋巴结转移和脉管癌栓的高于无淋巴结转移和脉管癌栓的,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 SOX9基因启动子区甲基化与宫颈癌的发生、发展密切相关,可用于指导宫颈癌的诊断、治疗和预后评估。     

子宫颈癌候选抑癌基因Syk表达及其启动子甲基化的测定

采用逆转录PCR（RT-PCR）法检测60例宫颈癌、50例宫颈上皮内瘤变（CIN）和20例正常宫颈组织中SykmRNA的表达,采用甲基化特异性PCR（MSP）检测Syk基因启动子甲基化情况。正常宫颈组织和CINⅠ组织中均有Syk基因表达,CINⅡ-Ⅲ组织56％（18／32）、宫颈癌组织35％（21／60）表达;有淋巴结转移的宫颈癌组织表达比例为1／13,无淋巴结转移者为43％（20／47）。宫颈癌组织中Syk基因启动子甲基化率57％（34／60）,明显高于CIN组织[18％（9／50）,X^2值为7．13,P〈0．01],正常宫颈组织和CINⅠ组织中均无Syk基因启动子的甲基化,淋巴结转移的宫颈癌组织比例为11／13;Syk基因及其启动子甲基化程度与患者年龄、肿瘤大小、临床分期、组织学类型及病理类型无明显相关性（P〉0．05）,与Syk基因表达缺失明显相关（P〈0．05）。Syk基因启动子甲基化可能是导致Syk基因失活的原因之一,可能与宫颈癌发生发展有关。     

宫颈癌细胞PAX1基因甲基化的CRISPR靶向调控系统的构建

目的:建立PAX1基因甲基化的CRISPR靶向调控系统。方法:首先,通过甲基化特异性PCR（MSP）测定宫颈癌细胞系（CaSki,SiHa）及正常细胞（人胚肾细胞HEK293T）中 PAX1基因启动子的DNA甲基化水平;通过荧光定量PCR（RT-PCR）和免疫印迹（Western blotting）分别检测上述细胞系的mRNA及蛋白表达。然后,在PAX1高甲基化的宫颈癌细胞共转染sgRNA（single guide RNA）和dCas9-Tet1质粒,采用焦磷酸测序（Pyrosequencing）和 RT-PCR分别检测其基因甲基化和表达水平的改变。最后,结合生物信息学预测和RT-PCR评估该CRISPR系统的脱靶效应。结果:与HEK293T细胞相比,宫颈癌细胞的PAX1基因启动子呈现高甲基化,且其mRNA（CaSki:t=9.13;SiHa:t=12.31;P<0.05）和蛋白表达水平（CaSki:t=16.72;SiHa:t=11.81;P<0.05）均降低。在CaSki及SiHa细胞系中,去甲基化sgRNA3（act-sgRNA3）组调控最显著,其PAX1基因的甲基化水平在CaSki和SiHa细胞系中分别下降了22.21%（t=6.65,P<0.05）、19.62%（t=17.00,P<0.05）,其mRNA表达水平均显著上调（P<0.05）。且该系统脱靶效应基因的表达差异均小于2倍。结论:本研究成功建立了PAX1基因甲基化的CRISPR靶向调控系统,可有效的降低其甲基化水平,增强其内源性的表达水平。     

宫颈癌宫颈活检组织DAPK1基因启动子甲基化的临床意义

目的 研究宫颈活检组织DAPK1基因甲基化在宫颈癌中的临床意义. 方法采用甲基化特异性PCR检测宫颈癌患者和正常女性宫颈活检组织DAPK1基因启动子甲基化,比较其差异并分析宫颈癌患者宫颈活检组织DAPK1基因启动子甲基化与临床病理因素的关系. 结果宫颈癌患者宫颈活检组织DAPK1基因启动子甲基化率显著高于正常女性（P ＜ 0.05）.宫颈癌患者宫颈活检组织DAPK1基因启动子甲基化率在年龄、吸烟史、酗酒史和病理类型无明显差异（P ＞ 0.05）,在HPV感染、分化程度、肿瘤直径、淋巴结转移、远处转移和Figo分期中的差异具有统计学意义（P ＜ 0.05）. 结论宫颈癌患者宫颈活检组织DAPK1基因启动子甲基化率显著高于正常人,与病情及预后密切相关.     

宫颈癌中DAPKⅠ、RARβ甲基化与高危型HPV感染的相关研究

目的：研究宫颈癌及宫颈癌前病变患者宫颈脱落细胞中死亡相关蛋白激酶Ⅰ（DAPKⅠ）和β视黄酸受体（RARβ）甲基化情况及其与高危型人乳头瘤病毒（HPV）感染的关系。方法：取宫颈炎患者48例、宫颈轻中度鳞状上皮内瘤变（CINⅠ/CINⅡ）患者14例,重度鳞状上皮内瘤变（CINⅢ）14例,宫颈浸润性鳞癌（ICC）患者28例,采集其宫颈脱落细胞,用甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）检测DAPKⅠ、RARβ甲基化情况,用HPV分型检测法检测高危型HPV感染情况。结果：在宫颈炎、CINⅠ/CINⅡ、CINⅢ和ICC组中DAPKⅠ甲基化率分别为2.08%、14.28%、50.00%、60.71%,RARβ甲基化率分别为4.55%、7.69%、42.86%、53.57%,高危型HPV感染率为33.33%,50%,71.43%和89.29%。DAPKⅠ、RARβ甲基化与高危型HPV感染的相关系数分别为0.48和0.46。结论：DAPKⅠ、RARβ甲基化是宫颈癌发生的早期事件,DAPKⅠ、RARβ甲基化与高危型HPV感染呈正相关。     

子宫颈鳞状细胞癌组织中DNMT1mRNA表达和E-cad甲基化检测

目的:探讨宫颈鳞状细胞癌组织中DNA甲基化转移酶(DNMT1)mRNA的表达和上皮钙粘附素(E-cad-herin)的甲基化状况,分析其与宫颈鳞状细胞癌发生发展的关系.方法:应用原位杂交技术检测20例正常宫颈、60例CIN(CIN Ⅰ、CIN Ⅱ、CINⅢ各20例)和40例宫颈鳞状细胞癌组织中DNMT1 mRNA的表达情况;利用甲基化特异性PCR(methylation specific polymerase chain reaction,MSP)方法检测E-cad基因启动子区甲基化状况,分析官颈鳞状细胞癌中DNMT1 mRNA的表达与E-cad启动子区甲基化状况及2者之间的相关性.结果:DNMT1 mRNA在正常官颈、CIN和宫颈鳞状细胞癌组织中表达逐渐增加,差异有统计学意义(P<0.05);DNMT1 mRNA在CIN Ⅰ、CINIⅡ、CINⅢ组织中表达的差异有统计学意义(P<0.05).E-cad启动子甲基化率在正常宫颈、CIN、宫颈鳞状细胞癌组织中依次升高,差异有统计学意义(P<0.05).E-cad启动子甲基化与DNMT1 mRNA的表达呈正相关(r=0.401,P<0.05).结论:DNMT1 mRNA过表达和E-cad启动子异常甲基化与子宫颈鳞状细胞癌的发生发展关系密切;E-cad启动子甲基化过程可能是在DNMT1的催化作用下完成的.     

HPV-DNA分型检测在ASCUS患者分流管理中的价值

目的:评价人乳头瘤病毒(HPV)DNA分型检测在未明确诊断意义的宫颈非典型鳞状上皮细胞(atypicalsquamous cells of undetermined significance,ASCUS)患者中的应用价值。方法:对薄层液基细胞学检查结果为AS-CUS的患者进行阴道镜检查及组织病理学检查,并同时行HPV-DNA分型检测。结果:⑴165例ASCUS患者中,组织学诊断为慢性宫颈炎、湿疣、CINI、CINII中HPV-DNA的检出率分别为9.0%、66.7%、76.7%、90.0%;⑵组织学诊断为CINIII和侵袭性子宫颈癌(invasive cervical cancer,ICC)的患者HPV-DNA检出率均为100%,与CINI和CI-NII相比,差异有统计学意义(P<0.05);⑶HPV检测CIN和ICC的灵敏度为94.7%,特异度70.1%,阳性预测值27.4%,阴性预测值99.0%。结论:HPV-DNA分型检测可有效检出宫颈细胞学ASCUS中CIN及宫颈癌患者,可对患者进行有效分流管理。     

HPV E6/E7 mRNA联合液基细胞学检查在宫颈癌筛查中的意义

目的 探讨宫颈E6/E7 mRNA和液基细胞学(TCT)两种方法联合应用在宫颈癌筛查中的意义。方法 选取宫颈有高危HPV感染者311例,进行TCT、E6/E7 mRNA及组织学检查,以组织学病理结果作为金标准。结果 两种方法联合检测对高级别鳞状上皮内病变(HSIL)组的敏感性为72.97%,特异性为90.08%,阳性预测值为81.82%,阴性预测值为85.51%;E6/E7 mRNA检查对HSIL组诊断的敏感性为69.64%,特异性为59.30%,阳性预测值和阴性预测值分别为47.56、80.27%。TCT对HSIL组诊断的敏感性为56.25%,特异性为88.94%,阳性预测值、阴性预测值分别为74.12、81.94%。结论 E6/E7 mRNA检查的敏感性比TCT高,而TCT检测特异性高于E6/E7 mRNA。E6/E7 mRNA与TCT联合后敏感性和特异性都显著提高,阳性预测值、阴性预测值都在80%以上。E6/E7 mRNA及TCT两种方法联合检测可以提高宫颈癌筛查的敏感性及特异性。     

超声光散射成像与超声弹性成像技术联合应用在乳腺癌诊断中的价值

目的：探讨超声光散射成像（diffused optical tomography,DOT）与超声弹性成像技术（ultrasonic elastography,UE）联合应用在乳腺诊断中的价值。方法：通过117例患者的179个病灶分别进行DOT和UE检查,并与病理结果对照,对比分析DOT及UE在乳腺癌超声诊断中的敏感度、特异度、准确度、阳性预测值、阴性预测值。结果：DOT对乳腺癌诊断的敏感度87．14％、特异度79．82％、准确率82．68％、阳性预测值73．49％、阴性预测值90．62％。UE对乳腺癌诊断的敏感度72．86％,特异度90．83％、准确率83．80％、阳性预测值83．61％、阴性预测值83．90％。联合应用DOT和UE的敏感度91．43％、特异度92．66％、准确率92．18％、阳性预测值88．89％,阴性预测值94．39％。结论：DOT和UE检查均为有效的诊断方法,联合应用DOT和UE可以提高乳腺癌的诊断效能,对临床治疗方案的选择及患者的预后具有重要的意义。     

联合应用磁共振灌注成像和弥散成像对前列腺癌的诊断价值研究

目的：探讨联合应用磁共振灌注加权成像（PWI）和弥散加权成像（DWI）对前列腺癌的诊断和鉴别诊断价值。方法：收集行PWI和DWI检查的前列腺癌（PCa）38例、良性前列腺增生（BPH）33例及慢性前列腺炎11例,利用灌注参数相对负性强化积分（rNEI）、弥散参数表观弥散系数（ADC）及综合应用两者进行诊断,并与病理诊断相比较,分别通过ROC曲线分析比较,并计算各诊断方法的敏感度、特异度、准确度、阳性预测值及阴性预测值等指标。结果：应用PWI、DWI及联合应用两者诊断前列腺癌的敏感度、特异度、准确度、阳性预测值及阴性预测值分别是79．2％、89．1％、86．2％、75．0％、91．2％;84．0％、92．5％、90．0％、82.3％、93.3％和90．1％、94．8％、93．7％、92．9％、94．0％。结论：PWI及DWI2种方法均可以有效诊断前列腺癌;两种成像方法综合应用可提高诊断的准确度。     

痰P16基因甲基化及K-ras基因突变联合检测对周围型肺癌的诊断价值

目的探讨痰脱落细胞P16基因甲基化及K-ras基因突变联合检测对周围型肺癌的诊断价值。方法选择49例周围型肺结节患者的痰液及术后病理标本作为研究对象,同时以15例正常人作为对照组,应用甲基化特异性PC R(m ethylation-specific PC R,M SP)和PC R-测序法检测其P16基因甲基化及K-ras基因突变情况。结果痰脱落细胞及肿瘤标本P16 M SP阳性率分别为51.2%(21/41)和58.5%(24/41),两者比较差异无统计学意义(χ2=0.4432,P>0.05),但明显高于良性肺结节及正常人(χ2分别为4.056、6.513及5.677,P<0.05);痰脱落细胞及肿瘤标本K-ras基因突变率为17.1%(7/41)和22.0%(9/41),两者比较差异无统计学意义(χ2=0.0038,P>0.05),而良性肺结节及正常人痰脱落细胞和肿瘤标本未检测到K-ras基因突变。如果以痰脱落细胞P16M SP阳性和K-ras基因突变分别作为筛选肺癌的标准,则对周围型肺癌诊断的敏感度和阴性预测值P16 M SP阳性为51.2%和25.9%,K-ras基因突变为17.1%和19.0%;而P16 M SP阳性及K-ras基因突变联合检测对肺癌的敏感度和阴性预测值分别上升为61.0%和30.4%。结论痰脱落细胞P16基因甲基化及K-ras基因突变联合检测可以提高周围型肺癌的诊断效率,对周围型肺癌的诊断具有一定价值。     

宫颈细胞学检查为ASCUS的临床意义及处理

目的：探讨薄层细胞学技术（TCT）结果为未明确意义不典型鳞状细胞（atypical squamouns cell of undetermined significance,ASCUS）的临床意义及处理方法。方法：对2006年6月～2009年6月北京市顺义区老年妇幼保健院妇科门诊行液基TCT检查结果回报为ASCUS的患者132例均进行阴道镜检查及多点活检,对其结果进行临床及病理分析。结果：132例ASCUS患者活检病理为炎症81例,占61.36%;轻度宫颈上皮非典型增生（CINⅠ）24例,占18.18%;中度宫颈上皮非典型增生（CINⅡ）14例;占10.61%;重度宫颈上皮非典型增生及宫颈原位癌（CINⅢ）11例,占8.33%;浸润癌2例,占1.52%。阴道镜拟诊为宫颈上皮内瘤变（CIN）及浸润癌的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值分别为98.04%、95.06%、92.59%、98.72%。结论：阴道镜对宫颈病变有较高的诊断价值,对ASCUS患者,在基层医院可以直接行阴道镜检查并多点活检行组织病理学检查。     

宫保散对宫颈癌前病变合并HPV感染的临床研究与治疗

目的:近年来宫颈癌的发病表现为年轻化,所以阻断宫颈癌前病变的过程仍然是治疗宫颈癌的关键。宫颈癌是多种因素共同作用的结果,HPV病毒感染这一病因已经是确定的。研究观察宫保散在临床治疗宫颈癌前病变合并HPV感染的疗效,对防止宫颈癌前病变发生癌变具有重要的临床意义。方法:采用宫保散局部用药,涂于宫颈表面,按疗程观察病例258例宫颈糜烂的患者其中CINI43例CINⅡ11例,且CINI合并HPV感染29例,CINⅡ合并HPV感染的为7例。随机分为两组治疗组为宫保散组,对照组为尤靖安组。结果;所有患者都可评价疗效和安全性,治疗组CIN治愈率71.4%,对照组CIN治愈率46.2%;治疗组HPV转阴率为75%,对照组为62.5%;CINⅠ合并HPV感染的转阴率为86.2%,CINⅡ合并HPV转阴率为28.6%。结论:提示宫保散具有抗病毒、抗炎作用并且可提高CINⅠ-CINⅡ患者HPV的转阴率,同时对宫颈癌前病变具有很好的治疗效果具有促使不典型增生组织向正常转化的作用。