小檗碱对人肝癌SMMC-7721细胞 bcl-2、bax表达的影响

目的:研究小檗碱(Berberine)对体外培养肝癌SMMC-7721细胞bcl-2和bax表达的影响。方法:体外培养人肝癌SMMC-7721细胞,采用CCK8法测定Berberine不同浓度(0mmol/L、0.1mmol/L、0.2mmol/L、0.5mmol/L)及不同时间点(24h、48h、72h)对细胞增殖的影响,选取最适浓度和最适时间点,采用Western blot检测凋亡相关蛋白bcl-2和bax的表达。结果:CCK8发现Berberine对肝癌SMMC-7721细胞有显著的增殖抑制作用,在48h时间点和0.2mmol/L浓度条件下抑制最明显。Western blot检测结果发现,Berberine可致人肝癌SMMC-7721细胞bcl-2表达下调,bax表达上调,bax/bcl-2比值升高,促进凋亡发生。结论:Berberine抑制肝癌SMMC-7721细胞生长,通过上调bax蛋白、下调bcl-2蛋白,诱导凋亡。     

白藜芦醇对人肝癌细胞SMMC-7721增殖影响的研究

目的已有较多研究表明白藜芦醇能抑制多种肿瘤的生长和促进肿瘤细胞的凋亡,观察白藜芦醇对原发性肝癌(简称肝癌)细胞SMMC-7721增殖的影响,探讨其可能的调控机制。方法 MTT法观察不同浓度白藜芦醇(50、100μmol/L)对肝癌细胞SMMC-7721增殖的影响;应用锥虫蓝拒染法检测白藜芦醇对肝癌细胞SMMC-7721的细胞毒性作用;流式细胞术测定肝癌细胞SMMC-7721细胞周期的变化;Western blot法测定细胞周期相关蛋白(Cyclin D1、Cyclin E、P21)变化。结果白藜芦醇呈浓度和时间依赖地抑制肝癌细胞SMMC-7721的增殖(P<0.05)。100μmol/L白藜芦醇干预48 h后,可使G0/G1期肝癌SMMC-7721细胞比例升高,S期细胞比例下降,Cyclin D1和Cyclin E的蛋白表达水平均受到抑制,同时P21蛋白的表达水平上调(P<0.05)。结论白藜芦醇可能通过调控细胞周期来抑制肝癌细胞SMMC-7721的增殖。     

缺氧环境肝癌SMMC-7721细胞ABCG2和HIF-1α的表达及其关系

目的探讨在缺氧条件下人肝癌SMMC-7721细胞中三磷腺苷结合盒转运体G2(ABCG2)和缺氧诱导因子-1α(HIF-lα)的表达及其关系。方法将SMMC-7721细胞分为对照组、缺氧24h组、缺氧48h组及缺氧72h组,Western blot检测各组SMMC-7721细胞ABCG2和HIF-1α蛋白的表达。将缺氧72h组SMMC-7721细胞分别用终浓度为1.0、2.0、4.0μmol/L的HIF-1α抑制剂YC-1处理,Western Blot检测不同浓度YC-1处理的SMMC-7721细胞ABCG2和HIF-1α蛋白的表达。结果随缺氧时间延长,ABCG2和HIF-1α蛋白表达均逐渐增加(P<0.05),且ABCG2与HIF-1α的表达呈正相关(r=0.944,P<0.05);随YC-1浓度的增加,缺氧72h组SMMC-7721细胞ABCG2和HIF-1α蛋白表达下调(P<0.05)。结论 ABCG2和HIF-1α的表达随缺氧加重而增加,ABCG2表达上调可能是HIF-1α介导肝癌细胞缺氧环境中生存及耐药的机制之一。     

三七提取液对SMMC-7721细胞Bcl-2与Bax蛋白表达的影响

目的:研究三七提取液体外抑制人肝癌细胞株SMMC-7721增殖及对凋亡调控基因Bax、Bcl-2蛋白表达的影响.方法:不同浓度的三七提取液作用于体外培养的SMMC-7721细胞,采用MTT法检测细胞的抑制率;以流式细胞术观察细胞凋亡率的变化;以蛋白免疫印迹(Western blotting)法检测细胞凋亡相关因子Bcl-2及Bax和蛋白水平的表达情况.结果:三七提取液对人肝癌SMMC-7721细胞的增殖具有抑制作用,且具有明显的时间和剂量相关性.细胞凋亡率随着药物浓度的增加而逐步增高.三七提取液作用后细胞内Bcl-2蛋白表达水平降低,Bax蛋白表达水平均升高,二者的变化趋势均呈一定的时间依赖关系.结论:三七提取液能够显著抑制人肝癌细胞增殖,诱导SMMC-7721细胞凋亡,其作用机制可能与上调Bax的表达及下调Bcl-2的表达有关.     

TNF-α对人肝癌细胞系CD15和CD15s含量及细胞侵袭性的影响

目的检测TNF-α对人肝癌细胞系中CD15、CD15s和ST3GaL糖基转移酶含量及细胞侵袭能力的影响。方法应用Western blot方法检测TNF-α作用前后人原发性肝癌细胞系HepG-2和人高转移肝癌细胞系SMMC-7721中CD15,CD15s和ST3GaL糖基转移酶含量的变化,Transwell检测TNF-α作用前后HepG-2、SMMC-7721细胞侵袭力的变化情况。结果 TNF-α作用后,HepG-2细胞系CD15含量较对照组下降(P<0.05),CD15s含量较对照组明显上调(P<0.05),ST3GaL糖基转移酶家族蛋白(6种)中ST3GaL-Ⅱ和ST3GaL-Ⅳ表达较对照组明显上调(P<0.05),其他4种ST3Gal-Ⅰ、ST3Gal-Ⅲ、ST3Gal-Ⅴ和ST3Gal-Ⅵ的表达无明显变化(P>0.05),细胞侵袭力提高(P<0.05)。SMMC-7721细胞系CD15、CD15s含量较对照组无明显改变(P>0.05),细胞侵袭力无显著变化(P>0.05)。结论在人原发性肝癌细胞系HepG-2中,TNF-α可能通过影响CD15、CD15s、糖基转移酶ST3GaL-Ⅱ、ST3GaL-Ⅳ的含量促进细胞侵袭能力。     

索拉非尼联合5-氮杂-2′-脱氧胞苷对肝癌SMMC-7721细胞DNMT3B基因表达的影响

目的:探讨索拉非尼联合5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对人肝癌细胞SMMC-7721的作用及其调控DNMT3B基因表达可能的分子 机制.方法:单独及联合给药后以MTT法测定SMMC-7721的增殖,Transwell检测其侵袭,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot法观 察DNMT3B、p-Akt-Ser473及ERK蛋白的表达.结果:索拉非尼、5-Aza-CdR对肝癌SMMC-7721细胞半数抑制浓度(IC50)分别为11、6 μmol/L,联合用药选取(6+4)μmol/L作为后续用药浓 度.与对照组比较单药及联合用药均能抑制细胞侵袭、促进细胞凋亡、减少p-Akt-Ser473和DNMT3B蛋白的表达(P<0.05~P<0.01).结论:索拉非尼和5-Aza-CdR联合用药能有效降低索拉非尼用药浓度,降低肝癌SMMC-7721细胞DNMT3B蛋白表达水平.     

柴胡皂甙d对人肝癌细胞COX-2表达及细胞内钙离子的影响

目的 观察柴胡皂甙d(SSd)对肝癌SMMC-7721细胞环氧合酶-2(COX-2)蛋白表达和细胞内Ca2+变化的影响,探讨其抗癌作用机制.方法 肝癌SMMC-7721细胞株经不同终浓度的SSd(2.5、5.0、10.0和20.0 mg/L)作用48 h后,MTT比色法检测细胞增殖抑制率,荧光染色法观察其凋亡状况,Western blotting检测COX-2表达,放射免疫法检测前列腺素E2含量,免疫荧光分光光度计法检测细胞内钙离子浓度.结果 SSd对肝癌SMMC-7721细胞生长、增殖有明显抑制作用,并诱导其凋亡.同时,SSd可以降低肝癌细胞COX-2蛋白表达和前列腺素E2含量水平,提高胞内钙离子浓度.在2.5～10.0 mg/L作用终浓度范围内,上述作用呈现一定的量效关系.结论 提高细胞内钙离子浓度,可能是SSd抑制COX-2活性,诱导人肝癌细胞凋亡的机制之一.     

金雀异黄素抑制肝癌干细胞样细胞的特性及对氟尿嘧啶耐药性的影响

目的：研究金雀异黄素对SMMC-7721细胞系肝癌干细胞样细胞特性以及氟尿嘧啶敏感性的影响。方法不同浓度金雀异黄素处理SMMC-7721细胞系球形成细胞。肿瘤球形成法检测自我更新能力。MTT比色法测定氟尿嘧啶药物敏感性。Western blot分析干细胞标志物CD133、CD44、Gli1和ABCG2蛋白表达。结果金雀异黄素显著抑制SMMC-7721细胞肿瘤球形成,并优先抑制球形成细胞增殖活性(P<0.05)。金雀异黄素(10μmol/L)有效逆转球形成细胞对氟尿嘧啶的耐药性。金雀异黄素降低CD133、CD44、Gli1和ABCG2蛋白表达水平。结论金雀异黄素抑制肝癌干细胞样细胞特性和氟尿嘧啶耐药性,其作用机制与抑制干细胞标志物蛋白表达和阻断Hedgehog信号传导有关。     

Survivin-ASODN对肝癌SMMC-7721细胞凋亡的促进作用及其机制

目的：应用反义寡核苷酸（ASODN）技术靶向抑制生存素（survivin）基因,研究其对肝癌 SMMC-7721细胞凋亡的影响,阐明survivin反义寡核苷酸（survivin-ASODN）促进SMMC-7721细胞凋亡的作用机制。方法：设计合成survivin-ASODN序列（FAM荧光素标记）。利用脂质体介导法分别用浓度为100、200、300、400和600 nmol?L-1 survivin-ASODN转染SMMC-7721细胞(ASODN转染组),并设空白对照组、空脂质体对照组 和正义寡核苷酸（SODN）对照组。应用流式细胞术(FCM)检测不同浓度survivin-ASODN体外转染SMMC-7721细胞24、48和72 h后SMMC-7721细胞凋亡率及细胞周期;Western blotting法检测survivin蛋白表达水平。结果：与各对照组比较,荧光素标记的ASODN转染SMMC-7721细胞24 h后,细胞生长开始受到抑制,细胞凋亡率增加,呈现剂量-时间依赖性（P<0.05）;作用48 h后,ASODN转染组细胞在G1期前出现明显的亚二倍体凋亡峰,G0/G1期细胞明显减少（P<0.05）,G2/M期细胞显著增加（P<0.05）,细胞被阻滞于G2/M期。与各对照组比较,不同浓度ASODN转染组SMMC-7721细胞survivin蛋白表达水平下降（P<0.05）,且随作用时间的延长而降低（P< 0.05）。结论：survivin-ASODN通过抑制survivin蛋白表达、改变细胞周期进程等机制促进SMMC-7721细胞凋亡,并且呈现时间-剂量依赖性。     

全反式维甲酸对人肝癌SMMC-7721细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其分子机制

目的： 探讨全反式维甲酸(ATRA）对人肝癌SMMC-7721细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响,阐明其分子机制。方法：将处于对数生长期的SMMC-7721细胞分为空白对照组和10、20、40 μmol?L-1ATRA组。利用MTS／PMS法检测SMMC-7721细胞的增殖能力,划痕愈合和侵袭实验检测SMMC-7721细胞的迁移与侵袭能力,Real-time PCR和Western blotting法检测SMMC-7721细胞中MMP-9 mRNA和蛋白的表达。结果：与空白对照组比较,20和40 μmol?L-1ATRA组SMMC-7721细胞增殖率明显降低（P<0.01）。划痕实验,20和40 μmol?L-1ATRA组SMMC-7721细胞处理24 h 后划痕距离较空白对照组明显增加（P<0.05）;Transwell实验,与空白对照组比较,10、20和40 μmol?L-1ATRA组SMMC-7721细胞处理24 h后穿膜细胞数量明显减少（P<0.05）;Real-time PCR分析和Western blotting检测,与空白对照组比较,20和40 μmol?L-1ATRA组SMMC-7721细胞处理24 h后,MMP-9 mRNA和蛋白表达水平明显降低（P<0.01）。结论： ATRA可抑制人肝癌SMMC-7721细胞增殖、迁移与侵袭能力,其机制可能与下调MMP-9有关。
     

非上皮性肿瘤组织中CD117、CD34的表达

目的：探讨胃肠道间质瘤的诊断和免疫组化结果。方法：收集我院1995-2005年手术切除的胃肠道非上皮性肿瘤存档的36份病例进行研究。结果：典型的平滑肌和神经来源的肿瘤CD117和CD34阴性,间质瘤是Desmin和Actin阳性反应以外CD117、CD34均为阳性表达,神经来源的肿瘤NSE和S-100均阳性表达。结论：间质瘤（GIST）是消化道最常见的间叶源性肿瘤,间质瘤的生物学特点与胃肠平滑肌瘤和神经鞘瘤不同,免疫组化常表达CD117、CD34。     

CD55CD59CD34对PNH早期诊断研究应用

目的:探讨CD55、CD59、CD34抗原在阵发性睡眠性血红蛋白尿综合征(PNH)的早期诊断中的价值。方法:应用流式细胞仪测定PNH患者CD55、CD59、CD34抗原阳性表达变化,并与非PNH组以及正常对照组CD55、CD59、CD34抗原表达情况进行分析,同时做糖水试验、Ham试验、RC%、NAP积分检测。结果:PNH、AA-PNH患者CD55+、CD59+表达率较正常对照组及其它病组明显减少,差异有显著性(P<0.01);PNH患者CD34+表达率较正常对照组及其它病组明显增高(P<0.01),而AA患者CD34+表达率最低。结论:CD55、CD59、CD34抗原表达率可作为PNH综合征早期诊断最敏感指标,而基础检测对PNH的诊断及病情监控有重要意义,可达到早发现、早鉴别、早诊断、早治疗的目的。     

宫颈癌组织中CD13与CD34的表达

目的:探讨CD13与CD34标记宫颈癌微血管的意义。方法:60例宫颈癌组织中,FIGOⅠ期32例,Ⅱ期28例;鳞癌45例,腺癌15例;有盆腔淋巴结转移19例。应用免疫组化SP法检测CD13和CD34标记的宫颈癌组织中的微血管密度(MVD)。结果:Ⅱ期、有盆腔淋巴转移及病理类型为腺癌的宫颈癌组织中CD13标记的MVD高于Ⅰ期、无转移病理类型为及鳞癌者(t=5.673,11.541和3.041,P<0.05),而CD34标记的MVD与宫颈癌的分期、有无盆腔淋巴结转移及病理类型均无关(t=1.791,1.108和1.304,P>0.05)。结论:CD13标记的MVD可能更有助于宫颈癌患者的预后判断。     

Differential number of CD34+, CD133+ and CD34+/CD133+ cells in peripheral blood of patients with congestive heart failure

Background

Endothelial progenitor cells (EPC) which are characterised by the simulateous expression of CD34, CD133 and vascular endothelial growth receptor 2 (VEGF 2) are involved in the pathophysiology of congestive heart failure (CHF) and their number and function is reduced in CHF. But so far our knowledge about the number of circulating hematopoietic stem/progenitor cells (CPC) expressing the early hematopoietic marker CD133 and CD34 in CHF is spares and therefore we determined their number and correlated them with New York Heart Association (NYHA) functional class.

Methods

CD34 and CD133 surface expression was quantified by flow cytometry in the peripheral venous blood of 41 healthy adults and 101 patients with various degrees of CHF.

Results

CD34+, CD133+ and CD34+/CD133+ cells correlated inversely with age. Both the number of CD34+ and of CD34+/CD133+ cells inversely correlated with NYHA functional class. The number of CD133+ cells was not affected by NYHA class. Furthermore the number of CD133+ cells did not differ between control and CHF patients.

Conclusion

In CHF the release of CD34+, CD133+ and CD34+/CD133+ cells from the bone marrow seems to be regulated differently. Modulating the releasing process in CHF may be a tool in CHF treatment.     

CD34在胎儿头皮毛囊中的表达

目的:观察胎儿头皮毛囊中CD34的表达。方法:获取因胎儿畸形引产的胎龄8个月的死亡2 h胎儿头皮,分成2份。1份制备冷冻切片,CD34免疫荧光标记,激光共聚焦显微镜观察摄片;另1份无菌处理,消化头皮获取游离毛囊,制备毛囊细胞悬液,采用流式细胞术检测。结果:共聚焦显微镜下观察到,CD34主要表达于胎儿头皮的毛囊外根鞘隆突区,也见于毛球处、表皮基底部;流式细胞仪检测出CD34+细胞占毛囊总数的8.54%~13.04%。结论:胎儿头皮毛囊隆突区有较多的CD34+细胞,推测该部位为毛囊干细胞的居处。部分毛囊中部、毛球处出现CD34+细胞,提示不同毛发周期,干细胞或其直接子代的居所发生变化。胎儿表皮基底层存在均匀分散的CD34+细胞。     

骨髓增生异常综合征中骨髓CD34~+、CD34~-细胞凋亡和增殖的实验研究

目的:分析骨髓增生异常综合征(MDS)患者骨髓CD34+细胞和CD34-细胞凋亡和增殖情况,从该角度探讨MDS的发病机制。方法:流式细胞术分析20例高危MDS、20例低危MDS患者及10例正常对照者骨髓CD34+细胞的比例,CD34+细胞和CD34-细胞凋亡、增殖的百分率,计算各组中的凋亡/增殖(A/P)比。结果:(1)MDS患者CD34+细胞的比例明显高于对照组,其中高危组CD34+细胞的比例明显高于低危组(P<0.05),而低危组与对照组比较无显著差异;(2)CD34+,CD34-细胞的凋亡率在MDS低危组中均为最高,明显高于MDS高危组和对照组,在低危组中,CD34-细胞的凋亡率(80.36±1.82)%明显高于CD34+细胞(54.75±2.18)%(P<0.05),而在高危组中,CD34+,CD34-细胞的凋亡率无显著差异;(3)CD34+细胞的增殖率在MDS高危组中最高,明显高于低危组和对照组,而CD34-细胞的增殖率在MDS高危和低危组间无显著差异,在高危组中,CD34+细胞的增殖率(50.67±3.37)%明显高于CD34-细胞的(30.99±1.96)%(P<0.05);(4)无论CD34+,CD34-细胞的A/P值在MDS低危组中均明显高于高危组和正常对照组,而在MDS各亚组中,CD34-细胞的A/P值明显高于CD34+的A/P值(P<0.05)。结论:CD34+细胞百分率随MDS危险度增加而逐渐增加,在低危组中以CD34-细胞的凋亡占主导,随着病情进展,在高危组中则以CD34+细胞的增殖占主导,提示异常的凋亡和增殖在MDS的发生和发展中起重要作用。     

胶原三螺旋重复蛋白1（Cthrc1）及CD34在瘢痕疙瘩中的表达及其意义

目的探讨胶原三螺旋重复蛋白1（Cthrc1）在瘢痕疙瘩中的表达及其与血管增生的相关性。方法采用免疫组化方法检测了34例瘢痕疙瘩组织及10例正常前胸皮肤组织中Cthrc1、CD34的表达。结果瘢痕疙瘩皮损中Cthrc1表达较其在正常人成纤维细胞中的表达显著增强（P〈0.05）,正常人成纤维细胞弱阳性表达或者不表达;瘢痕疙瘩皮损真皮乳头微血管数较正常人真皮乳头显著增多（P〈0.05）;瘢痕疙瘩皮损中Cthrc1的表达水平与血管密度计数（mi-crovessel density,MVD）均呈显著相关性（r=-0.4889,P〈0.05）。结论 Cthrc1在瘢痕疙瘩皮损中表达异常,高水平的Cthrc1表达可能与瘢痕疙瘩侵袭性有关,并促进真皮乳头血管形成。     

CD34在肝细胞癌诊断中的价值

目的 :探讨血管标记物 CD34 ( QBend10 )在鉴别肝细胞癌和肝硬变中的作用。　 方法 :采用免疫组化方法在 2 1例肝细胞癌、4例肝炎肝硬变、4例轻度肝炎组织中对肝窦血管 CD34的表达进行观察 ,并对上述组织进行网状纤维染色。　 结果 :CD34在所有肝细胞癌中血窦标记阳性且染色强 ,而癌旁组织则标记阴性 ,肝硬变及肝炎组织均标记阴性。网织纤维染色在所有肝细胞癌中有减少。　 结论 :CD34在肝细胞癌血窦中表达不同于其它肝病 ,因而在鉴别高分化肝细胞癌与肝硬变以及在细针穿刺活检中有重要价值     

Vimentin CD117及CD34在消化道间质瘤中表达的意义

目的总结Vimentin CD117 CD34在GIST的表达,分析表达结果的诊断意义.方法选取76例GIST,标记Vimentin CD117 CD34抗体.结果Vimentin染色均阳性,CD117染色75例阳性,CD34染色52例阳性.结论Vimentin CD117 CD34对GIST特异性表达,对GIST具有诊断意义.     

肾小球肾炎时肾组织CD34的表达

目的：探讨多种类型肾小球肾炎时肾组织中CD34的表达及病理学意义。方法：对66例原发性和继发性肾小球肾炎患者肾活检组织进行CD34、α-平滑肌肌动蛋白的免疫组织化学染色，探讨二者的关系。结果：在病理条件下，肾小球系膜细胞出现CD34的表达；肾小球系膜细胞可同时表达CD34和α-平滑肌肌动蛋白，二者显著相关。结论：CD34是系膜细胞表型转化的一种有效标志物。