半巢式甲基化特异性聚合酶链反应在胃癌p16基因甲基化检测中的应用

目的　改进甲基化特异性聚合酶链反应 (MSP) ,采用半巢式MSP检测胃癌组织p16基因启动子区CpG岛的甲基化状态。方法　用亚硫酸氢盐修饰被测DNA后 ,采用半巢式MSP(引物分别为MS ,M1A和MS ,M2A) ,分析了 6 0例胃癌组织及相应正常组织中p16基因的甲基化状态。结果　单独用MSP ,胃癌组织中p16基因甲基化的发生率为 80 %。采用半巢式MSP ,甲基化发生率为86 7% ,比单独采用MSP提高了几个百分点 ,并提示胃癌病例的p16基因启动子区存在甲基化发生的不同模式。结论　半巢式MSP能够有效地提高灵敏度和减少假阳性。同时 ,免疫组化的结果也说明了p16基因异常甲基化与胃癌组织P16蛋白的表达密切相关。     

p16基因甲基化对胃癌的早期诊断

目的:检测胃癌患者癌组织及全血DNAp16基因甲基化,并探讨其在胃癌早期诊断中的作用。方法:收集新鲜的胃癌组织及血液标本4 4例,胃溃疡等胃部良性疾病患者标本2 0例。采用甲基特异性PCR(MSP)技术分别检测肿瘤组织DNA和全血DNA中p16基因启动子甲基化。结果:38.6 % (17/ 4 4 )胃癌组织出现p16基因甲基化,出现甲基化组织对应的血液标本中88.2 % (15 / 17)出现p16基因甲基化。胃溃疡等胃部良性疾病患者标本中未发现甲基化。肿瘤组织中p16基因的甲基化状况与全血中出现p16基因甲基化关系密切(P<0 .0 1)。结论:胃癌组织及血液标本中p16基因甲基化的检测有助于胃癌的早期诊断。     

胃癌中p16蛋白表达和p16基因启动子甲基化的研究

目的:探讨胃癌中p16基因的失活机制。方法:采用免疫组织化学SP方法检测40例胃癌组织和43例正常胃黏膜组织中p16蛋白的表达情况,采用甲基化特异性PCR(MSP)方法研究40例胃癌组织和35例正常胃黏膜组织p16基因启动子的甲基化状况。结果:23例胃癌组织的p16基因启动子发生了甲基化,甲基化发生率为58%,正常胃黏膜组织中未发现甲基化,两组间比较差异有显著性(P<0.01)。31例胃癌组织中的p16蛋白表达阴性,正常胃黏膜组织中6例表达阴性,两组间差异有显著性(P<0.01)。胃癌组织中,MSP方法和免疫组织化学方法结果间差异无显著性(P>0.05)。结论:胃癌的发生与p16基因失活关系密切,启动子甲基化可能抑制了蛋白的表达,这种途径可能是胃癌中p16基因失活的重要机制。     

巢式甲基化特异性聚合酶链反应在p16基因启动子过甲基化检测中的应用

目的　介绍巢式甲基化特异性聚合酶链反应 (nMSP)法 ,探讨了最佳PCR扩增条件 ,并用该法分析新鲜癌组织、石蜡包埋组织及肿瘤患者血清中p16基因启动子的甲基化状态。方法　将基因组DNA变性成为单链 ,用亚硫酸氢盐修饰单链DNA ,将所有未甲基化的胞嘧啶被转变为尿嘧啶 ,而甲基化的胞嘧啶则不变。设计针对甲基化和非甲基化等位基因特异引物 ,进行巢式聚合酶链反应扩增 ,最后经凝胶电泳检测目的片段。结果　在 3种类型的标本中都检测出了p16基因启动子甲基化。用甲基化特异性聚合酶链反应法 (MSP)和nMSP法分别检测 34例非小细胞肺癌 (NSCLC)患者血清 ,p16基因启动子甲基化阳性率分别为 5 3% (18/34)和 74 % (2 5 /34) ,nMSP法具有更高的灵敏度。结论　筑巢式甲基化特异性聚合酶链反应是一种灵敏度高、特异性强的甲基化检测方法 ,可广泛应用于不同类型标本基因启动子甲基化分析。     

血液系统恶性肿瘤p16基因甲基化研究

多种肿瘤抑制因子１基因（ＭＴＳ１／ｐ１６）是１９９４年Ｋａｍｂ等［１］克隆出的一种新的抑癌基因，其失活以纯合子缺失及甲基化为主，而点突变则极少见。为进一步探讨血液系统恶性肿瘤ｐ１６基因失活的发生率及其与疾病的发生、发展、预后的关系，我们对１９９５～１...     

食管癌中p16基因甲基化的研究进展

食管癌是我国最常见的恶性肿瘤之一,食管癌的发生是一个多步骤,多因素参与的复杂的生物学过程,涉及遗传学与表观遗传学信息的改变。DNA甲基化是最重要的一种表观遗传修饰方式,高甲基化所致基因转录失活,     

结直肠癌患者p16基因甲基化的检测

目的检测p16基因启动子区异常甲基化发生情况,探讨p16基因异常甲基化作为结直肠癌临床辅助诊断分子生物学标志物的可能性。方法选取2004年5月至2004年12月第三军医大学西南医院及贵州省人民医院普外科住院的结直肠癌患者53例,所有患者均经病理学诊断证实,并按Dukes病理分期分为四期,提取肿瘤组织DNA,分别应用巢式甲基化特异性PCR(nested methylation specific polymerase chain reaction,nested-MSP)及甲基化特异性PCR(methylation specific polvmerase chain reaction,MSP)方法,检测患者肿瘤组织中p16基冈的异常甲基化情况;比较MSP及nested-MSP两方法的灵敏度。结果应用MSP方法,Dukes A、B期患者和Dukes C、D期患者p16基因的甲基化率分别为23.8%和59.4%,两组比较有显著性差异(P<0.05);应用nested-MSP方法,Dukes A、B期患者和Dukes C、D期患者p16基因的甲基化率分别为52.4%和84.4%,两组比较有显著性差异(P<0.05)。应用MSP与nested-MSP方法检测肿瘤组织p16基因甲基化的阳性率分别为45.3%(24/53)、71.7%(38/53),两组比较有显著性差异(P<0.01)。结论应用nested-MSP方法检测肿瘤组织p16基因甲基化的灵敏度明显高于普通的MSP方法,分析患者DNA的p16基因异常甲基化有可能成为结直肠癌辅助诊断及预后评估的有效方法之一。     

甲基化特异性PCR在原发性肝细胞癌p16INK4A基因甲基化检测中的应用

目的设计一种将亚硫酸氢化测序PCR和甲基化特异性PCR相结合的巢式PCR技术，即BS—MSP技术，对原发性肝细胞癌手术切除组织中p16INK4A甲基化情况进行检测。方法基因组DNA经亚硫酸氢化修饰后，首先通过亚硫酸氢化测序PCR评估模板的质量，然后再分别用甲基化和非甲基化特性PCR分析基因的甲基化状态，并将所得的扩增产物进行测序验证。结果在40例HBV感染的肝细胞癌中，有3例（7．5％）因模板质量原因无法检测，其余37例标本中p16INK4A基因甲基化发生率为78％，测序结果证实了所用方法的可行性。结论BS-MSP技术对于肿瘤发生过程中基因甲基化的研究，以及临床诊断方面都具有一定的应用价值。     

甲基化寡核苷酸诱导灭活RASSFl基因在肝癌发病机制中的应用

目的:甲基化寡核苷酸诱导灭活RASSFl基因并探索其启动子甲基化在肝癌发病机制中的应用.方法:将与RASSF1基因启动子互补的甲基化寡核苷酸转染至肝癌SMMC-7721细胞系内,分别采用BSP和RT-PCR检测转染前后RASSFl基因启动子甲基化状态和mRNA表达状况.结果:正常SMMC-7721细胞系RASSF1基因启动子表现无甲基化状态并表达相应mRNA.转染互补甲基化寡核苷酸后,相应CG位点被诱导成完全甲基化状态.mRNA表达明显受到抑制.结论:互补甲基化寡核苷酸可诱导基因启动子甲基化状态.RASSF1基因启动子甲基化在原发性肝细胞癌发病机制中扮演重要角色.     

结直肠癌中p16基因的甲基化改变与蛋白表达的关系

目的 检测结直肠癌患者肿瘤组织中p16基因启动子区异常甲基化改变及蛋白表达情况,探讨其与结直肠癌发生发展与临床的关系。方法 采用甲基化特异PCR(MSP)和免疫组织化学链霉素过氧化物酶(SP)方法,对32份结直肠癌标本p16基因甲基化改变及蛋白表达情况进行检测分析。结果 p16甲基化阳性率为40.6％;p16蛋白表达阳性率75.0％;在病理分期中,DukesC、D期患者肿瘤组织中p16甲基化发生率63.0％,p16蛋白表达发生率为69.0％;DukesA、B期患者p16甲基化发生率为25.0％,p16蛋白表达阳性率为81.0％;在组织分化程度中,低分化癌中的p16甲基化阳性率为100.0％,p16蛋白表达阳性率为20.0％;在高、中分化癌中,p16甲基化的阳性率为30.0％,p16蛋13表达阳性率为85.0％;淋巴结转移癌患者肿瘤组织中p16基因甲基化阳性率为63.0％,淋巴结未转移的阳性率为25.0％;在肿瘤部位中,直肠癌p16蛋白表达阳性率为65.0％,结肠癌的阳性率为100.0％。结论 p16甲基化的改变可能影响p16蛋白的表达;p16甲基化、蛋白表达与结直肠癌的发生发展密切相关,p16甲基化和蛋白表达是结直肠癌患者诊断及预后的候选标志物之一。     

急性白血病患者p16及p15基因纯合子缺失及甲基化研究

目的　探讨血液系统恶性肿瘤患者ｐ１６ 及ｐ１５ 基因失活的发生率及其临床意义。方法　用聚合酶链反应（ Ｐ Ｃ Ｒ） 方法扩增ｐ１６ 及ｐ１５ 基因外显子１ 及外显子２ ,检测等位基因纯合子缺失;再用限制性内切酶 Ｐ Ｃ Ｒ 方法检测ｐ１６ 及ｐ１５ 基因甲基化; 然后用 Ｔ Ｕ Ｎ Ｅ Ｌ 法（ Ｔｄ Ｔｍｅｄｉａｔｅｄ ｄ Ｕ Ｔ Ｐｄｉｇｏｘｙｇｅｎｉｎ ｅｎｄｌａｂｅｌｉｎｇ） 检测细胞凋亡。结果　５６ 例患者中有ｐ１６ 和（ 或）ｐ１５ 基因失活者共３３ 例,其中急性淋巴细胞白血病（ Ａ Ｌ Ｌ）３８ 例中２３ 例（ 占６０ ．５ ％ , Ｔ Ａ Ｌ Ｌ１２ 例, Ｂ Ａ Ｌ Ｌ１１ 例） , Ａ Ｎ Ｌ Ｌ１８ 例中１０ 例（ 占５５５ ％ ） 。 Ａ Ｌ Ｌ 患者ｐ１６ 及ｐ１５ 基因均以甲基化失活为主。 Ｔ Ａ Ｌ Ｌ 失活的频率比 Ｂ Ａ Ｌ Ｌ 高。有ｐ１６ 和（ 或）ｐ１５ 基因失活者, 细胞的凋亡比例明显减少,病情进展迅速,治疗效果差,缓解率低, 缓解期明显缩短。结论　ｐ１６ 及ｐ１５ 基因失活的检测对于探讨急性白血病的发病机制,判断疾病进程有重要意义。     

胃癌相关基因启动子甲基化的研究进展

随着人类基因组"序列图"的绘制成功,以测序为主的"结构基因组学"研究已趋于尾声,基因组学进入了后基因组学(也称"功能基因组学")时代。人类基因组约由数亿个     

低剂量螺旋CT联合血清p16基因甲基化检测筛查早期肺癌的研究

目的:研究胸部低剂量螺旋CT联合血清p16基因甲基化检测筛查早期肺癌的可行性.方法:本院体检的无症状肺癌高危人群共2 332例按2:1随机分为2组,低剂量螺旋CT-p16组1 555例,首先给予低剂量螺旋CT扫描,发现肺非钙化结节者行常规剂量CT及血清p16基因甲基化检测;标准剂量CT-p16组777例,给予标准剂量CT扫描,发现肺非钙化结节者行血清p16基因甲基化检测.结果:低剂量螺旋CT-p16组中11.4%及标准剂量CT-p16组12.1%患者可疑肺癌,其中低剂量螺旋CT-p16组中108例及标准剂量CT-p16组中50例确诊为肺癌.2组肺癌检出率比较差异无统计学意义(P>0.05).结论:低剂量CT联合血清p16基因甲基化检测是一种敏感、安全、可行的筛查早期肺癌的方法.     

银屑病患者外周血中p16基因甲基化的检测

目的检测斑块型银屑病患者外周血单个核细胞（PMBCs）中p16基因启动子甲基化的状态，探讨p16基因甲基化的检测在斑块型银屑病发病中的作用和机制。方法收集2011年4月至2012年5月该院门诊和住院48例宽块型银屑病患者（实验组）和18例健康者（对照组）的外周血单个核细胞（PBMCs），采用甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）检测PBMCs中p16基因甲基化的状态，并分析p16基因甲基化与患者病程和银屑病皮损面积和严重程度指数（PASI）评分的关系。结果斑块型银屑病患者PBMCs中p16基因甲基化状态（31．3％）明显高于对照组（5．6％），差异具有统计学意义（Y。=4．71，P〈0．05），且与PASI评分之间差异具有统计学意义（t=2．63，P〈0．05），而与患病病程之间差异无统计学意义（t=0．55，P〉0．05）。结论斑块状银屑病患者PBMCs中p16基因呈高甲基化比例明显增高状态，可能参与斑块状银屑病的发病机制。     

血管平滑肌细胞增殖与p21基因启动子甲基化的影响

背景：血管平滑肌细胞增殖、迁移及表型改变是动脉粥样硬化发生的中心环节,一系列相关基因的甲基化参与该过程。目的：观察血管平滑肌细胞p21基因启动子甲基化对其增殖活性的影响。方法：采用组织贴块法培养人脐血管平滑肌细胞,给予不同质量浓度氧化低密度脂蛋白（0,10,20,40 mg/L）孵育24 h,甲基化特异PCR检测p21基因启动子区CpG岛甲基化程度,反转录PCR检测p21 mRNA表达,MTT比色法测定血管平滑肌细胞增殖活性。结果与结论：氧化低密度脂蛋白呈浓度依赖性促进p21启动子甲基化和降低p21 mRNA表达,同时平滑细胞增殖活性增高。提示氧化低密度脂蛋白可以通过p21基因甲基化促进血管平滑肌细胞增殖,p21基因甲基化可能在动脉粥样硬化发生中起到一定作用。     

p53基因异常与胃癌发生发展的关系

p53基因在恶性肿瘤发生发展中的作用已被许多研究证实，胃癌发生过程中伴有p53基因突变。为探讨p53基因异常与胃癌发生发展的关系，应用免疫组化技术检测58例胃癌和相应癌旁组织中P53蛋白表达．聚合酶链反应-单链构象多态分析(PCR—SSCP)结合DNA测序检测p53基因exon5-8突变情况。