植物血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体介导氧化型低密度脂蛋白对内皮祖细胞存活和功能的影响

目的 研究植物血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体（LOX—1）是否介导氧化型低密度脂蛋白（oxLDL）对内皮祖细胞（EPC）的存活及功能产生影响。方法 分选脐血CD34^＋细胞,培养于内皮细胞生长培养基（EGM-2）中。培养14d后,部分EPC与10、25、50μg/ml的oxLDL孵育48h;部分EPC先与LOX-1单克隆抗体（LOX—1mAb）预处理24h,再与50μg／ml oxLDL孵育48h;对照组不作处理。检测EPC存活率及EPC迁移、黏附和管状结构形成能力,并检测LOX-1的蛋白及mRNA表达。结果oxLDL浓度为25和50μg／ml时,凋亡率分别为（15．8±1．0）％和（18．8±2．0）％,显著高于对照组的（9．0±1．2）％（P〈0．05）;迁移率分别为（5．7±1．0）％和（5．1±0．8）％,显著低于对照组的（9．5±0．8）％,（P〈0．05）;黏附细胞数分别为（33±2）和（30±3）个,显著少于对照组的（37±5）个（P〈0．05）;形成的管状结构分别为（2．9±0．5）和（1．8±0．5）mm,显著短于对照组的（5．0±0．6）mm（P〈0．05）。OxLDL可增加LOX—1mRNA及蛋白的表达,oxLDL浓度为50μg／ml时,LOX—1mRNA表达由100％增加为（174±39）％,蛋白表达由100％增加为（172±8）％。OxLDL的上述作用能被LOX1mAb所阻断。结论OxLDL可降低EPC存活,抑制EPC功能,其作用是由LOX—1介导的。     

巨细胞病毒感染对内皮细胞凝集素样氧化砸低密度脂蛋白受体-1 mRNA表达的影响

目的探讨巨细胞病毒（CMV）感染对人内皮细胞凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体-1 mRNA表达的影响。方法原代培养人脐静脉内皮细胞并传代，CMV感染3-6代细胞，不同时间提取细胞总RNA，采用逆转录多聚酶链反应（RT-PCR）检测凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体-1 mRNA的表达。结果病毒感染6h凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体-1 mRNA表达与对照组相似，病毒感染12、24h与对照组比较明显增强。结论CMV感染上调凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体-1 mRNA表达，可能是CMV参与动脉粥样硬化的机制之一。     

血红素氧化酶-1抑制氧化低密度脂蛋白诱导THP-1单核细胞表达单核细胞趋化蛋白-1 mRNA

目的:探讨血红素氧化酶(HO)-1对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的THP-1单核细胞上单核细胞趋化蛋白(MCP)-1 m RNA表达的影响。方法:不同浓度(0、25、50、100、200 mg/L)ox-LDL,作用不同时间(0、12、18、24、48 h),刺激THP-1单核细胞;实时荧光定量(RT)-PCR检测MCP-1 m RNA表达。用锌原卟啉和钴原卟啉(Co PP)IX(均为10μmol/L)干预THP-1单核细胞12 h后,再用ox-LDL(100 mg/L)刺激24 h;RT-PCR分别检测MCP-1和HO-1 m RNA表达。结果:ox-LDL呈浓度-时间依赖性上调MCP-1 m RNA表达(P<0.01)。与对照组比,Co PP IX组HO-1 m RNA表达明显升高(P<0.01);与100mg/L ox-LDL组比,Co PP IX组MCP-1 m RNA表达明显下降(P<0.01)。结论:ox-LDL可上调THP-1单核细胞MCP-1的表达;诱导HO-1高表达可抑制ox-LDL诱导的THP-1源单核细胞MCP-1 m RNA表达。     

巨细胞病毒感染对内皮细胞凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体-1 mRNA表达的影响

目的探讨巨细胞病毒(CMV)感染对人内皮细胞凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体-1 mRNA表达的影响.方法原代培养人脐静脉内皮细胞并传代,CMV感染3～6代细胞,不同时间提取细胞总RNA,采用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体-1 mRNA的表达.结果病毒感染6h凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体-1 mRNA表达与对照组相似,病毒感染12、24h与对照组比较明显增强.结论CMV感染上调凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体-1 mRNA表达,可能是CMV参与动脉粥样硬化的机制之一.     

银杏黄酮苷元对内皮细胞植物血凝素样低密度脂蛋白受体-1表达的影响

目的：探讨银杏黄酮苷元对氧化低密度脂蛋白（oxidized low density lipoprotein,ox-LDL）诱导脐静脉内皮细胞株ECV304植物血凝素样低密度脂蛋白受体-1（Lectin-like oxidized low density lipoprotein receptor-1,LOX-1）表达的调节作用。方法：应用逆转录聚合酶链式反应、SP免疫组织化学法,探讨ox-LDL诱导下内皮细胞表达LOX-1及银杏黄酮苷元的干预作用。结果：6.25~25 mg/L银杏黄酮苷元与脐静脉内皮细胞株ECV304共同培养6~48 h可显著抑制ox-LDL诱导的内皮细胞LOX-1mRNA和蛋白表达（P〈0.05）,具有浓度、时间效应关系（P〈0.05）;LOX-1拮抗剂聚肌苷酸可抑制ox-LDL诱导的内皮细胞LOX-1mRNA和蛋白表达（P〈0.05）。结论：ox-LDL可能通过LOX-1导致内皮功能障碍,银杏黄酮苷元可显著抑制ox-LDL诱导的内皮细胞LOX-1表达,这可能是其抗动脉粥样硬化的机制之一。     

橙皮甙抗LDL氧化及对MCP-1 mRNA转录的影响

目的研究橙皮甙体内外抗脂质氧化作用及其对兔食饵性动脉斑块中单核细胞趋化蛋白-1 mRNA转录的影响.方法①采用一次性密度梯度超速离心法制备正常人低密度脂蛋白,Cu2 诱导其氧化,测定不同药物浓度和作用时间体系中丙二醛含量.②采用高脂饮食加免疫损伤的方法建立家兔动脉粥样硬化模型:将18只家兔随机化分为正常对照组、模型组、橙皮甙组.每组6只,分别给予普通饲料(正常对照组)和高脂饲料(模型组)喂养,橙皮甙组在喂高脂饲料的同时,加橙皮甙(2g/d)一同喂养.建模10周末耳缘静脉采血,检测各组动物血清中丙二醛和一氧化氮的含量.而后处死动物,取胸主动脉,用逆转录聚合酶链反应技术检测动脉壁细胞中单核细胞趋化蛋白-1 mRNA的转录水平.结果体外实验中,橙皮甙显著抑制丙二醛的生成,并呈一定浓度依赖关系(P＜0.05,P＜O.01,P＜0.001).体内实验中,橙皮甙明显降低血浆丙二醛的含量(P＜0.01)和一氧化氮的水平(P＜0.001);并对胸主动脉壁细胞单核细胞趋化蛋白-1 mRNA的转录有明显抑制作用(P＜0.05).结论橙皮甙在体内外均有抗氧化作用,其下调单核细胞趋化蛋白-1 mRNA转录的机制可能部份与此有关.     

瘦素对人脐静脉内皮细胞的ICAM-1、LOX-1及MCP-1表达的影响

目的：探讨瘦素对血管内皮细胞ICAM—1、LOX—1、MCP—1表达的影响，以揭示瘦素致动脉粥样硬化的可能机制。方法：运用逆转录聚合酶链反应测定在不同浓度瘦素作用下，内皮细胞ICAM—1、LOX—1及MCP-1 mRNA的表达。结果：空白对照组无瘦素刺激时，ICAM—1、LOX—1及MCP—1的mRNA表达低于瘦素刺激组，加入低剂量瘦素对于ICAM—1、LOX—1及MCP—1的mRNA表达影响不大（P〉0．03），而随着瘦素剂量的升高，ICAM-1、LOX—1及MCP—1的mRNA表达明显增加，与对照组相比有明显统计学差异（P〈0．05），且呈剂量依赖性。结论：中等浓度以上的瘦素（〉12mg／L）可以促进血管内皮细胞ICAM—1、LOX—1及MCP—1的mRNA表达     

HPLC测定银杏黄酮苷元固体分散体胶囊剂的含量

目的 建立高效液相色谱法(HPLC)测定银杏黄酮苷元固体分散体胶囊中有效成分的含量。方法 以Hypersil ODS (4.6 mm×150 mm,5 μm)为色谱柱;甲醇-4‰醋酸水溶液(48∶52)为流动相;流速为0.8 mL·min^-1,检测波长360 nm,柱温45 ℃。结果 槲皮素和山奈素5~100 μg·mL^-1浓度内线性关系良好,异鼠李素在3.4~68.0 μg·mL^-1浓度内线性关系良好,平均加样回收率分别为99.31%,99.35%和98.18%,RSD分别为2.12%,2.28%和1.65%(n=6),精密度良好。结论 本方法灵敏、准确、专属性强,可作为该制剂的含量测定方法。     

氧化低密度脂蛋白诱导心肌细胞LOX-1表达的研究

目的探讨氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）对心肌细胞血凝素样氧化低密度脂蛋白受体1（LOX-1）表达的影响。方法原代培养乳鼠心肌细胞,分别用不同浓度的ox-LDL（0,10,20,50,100μg/ml）与心肌细胞作用不同时间（0,6,12,24,36h）。用RT-PCR测定LOX-1mRNA表达水平,Western blot测定LOX-1蛋白表达水平。结果不同浓度的ox-LDL均可诱导心肌细胞LOX-1mRNA和蛋白表达,与对照组比较有显著性差异（P〈0.05）,在10-50μg/ml的剂量范围内存在明显的剂量-效应关系,各组间比较有显著性差异（P〈0.05）。随着ox-LDL与心肌细胞作用时间的延长,心肌细胞LOX-1mRNA和蛋白表达增加,与对照组比较差异具有显著性（P〈0.05）,在6～24h内呈明显的时间-效应关系,各组间比较有显著性差异（P〈0.05）。结论 ox-LDL可诱导心肌细胞LOX-1表达,并在一定范围内随ox-LDL浓度增加和作用时间延长而表达增强。     

IL-10对急性冠脉综合征患者外周血单核细胞LOX-1表达的影响

目的:检测急性冠脉综合征(acute coronary syndromes,ACS)患者外周血单核细胞血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1(1ectin-like oxidized low-density lipoprotein receptor-1,LOX-1)的表达水平,以及抗炎因子白介素-10(intedeuidn.10,IL-10)对其表达的影响.方法:收集28例健康体检者和28例ACS患者,用酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbnent assay,ELISA)检测血清中IL-10和肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF-α水平.分离外周血单核细胞进行培养,加或不加IL-10(20μg/L)进行体外干预,检测单核细胞LOX-1蛋白和mRNA表达的变化.结果:与健康对照组相比,ACS患者血清中IL-10和TNF-水平明显升高(P＜0.01).ACS患者外周血单核细胞LOX-1蛋白和mRNA表达明显高于对照组(P＜0.01),IL-10(20G/L,3 h)可明显下调单核细胞LOX-1的蛋白和mRNA表达(P＜0.01).结论:抗炎因子IL-10可能通过抑制ACS患者外周血单核细胞LOX-1的表达而起到稳定斑块的作用,这可能是IL-10抗动脉粥样硬化的又一新机制.     

LOX-1介导苯扎贝特对ox-LDL所引起PAI-1表达的影响

目的 探讨苯扎贝特对ox-LDL所诱导HUVECs表达PAI-1的影响及是否通过LOX-1介导.方法 体外培养HUVECs,RT-PCR检测PAI-1 mRNA表达,ELISA法观察PAI-1蛋白含量表达.结果 ox-LDL组,PAI-1 mKNA和蛋白表达明显增加(P<0.05),poly(Ⅰ)组,PAI-1 mRNA和蛋白表达明显减少(P<0.05);不同浓度苯扎贝特组,PAI-1 mRNA和蛋白表达明显减少(P<0.05),组间比较差异有统计学意义,呈浓度依赖关系(P<0.05);Poly(Ⅰ)+100μmol/L苯扎贝特组,与未加poly(Ⅰ)组比较,PAI-1mR-NA和蛋白表达均明显减少(P<0.05).结论 LOX-1介导了ox-LDL所诱导HUVECs PAI-1的表达;苯扎贝特可以下调ox-LDL所诱导的HUVECs PAI-1的表达,呈浓度依赖关系,部分机制可能通过LOX-1介导.     

LOX-1及凋亡相关基因在绒毛和胎盘组织中表达的研究

目的通过检测血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)及凋亡相关基因caspase-3、Bax和bcl-2在绒毛及胎盘组织中的表达,探讨其意义。方法以免疫组化、RT-PCR和Westen blot方法检测不同孕周正常孕妇绒毛和胎盘组织中LOX-1和凋亡相关基因caspase-3、Bax及bcl-2表达的时空变化。结果LOX-1和Caspase-3蛋白在早孕绒毛组织中表达于合体滋养细胞的细胞膜及细胞浆、细胞滋养细胞的细胞膜上;在妊娠中、晚期的胎盘组织中,主要表达于合体滋养细胞的细胞膜及细胞浆、细胞滋养细胞的细胞膜和血管内皮细胞上。LOX-1、caspase-3和Bax随着孕周增加,表达逐渐增强,而bcl-2则相反;即LOX-1在胎盘组织表达趋势与caspase-3和Bax一致,而与bcl-2表达趋势相反。结论LOX-1可能通过介导滋养细胞凋亡在妊娠建立和维持中起重要作用。     

苯扎贝特对ox-LDL诱导内皮细胞凋亡基因Bcl-2/Bax的影响

目的 观察苯扎贝特对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导人脐静脉内皮细胞凋亡基因Bcl-2/Bax的影响. 方法 体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),根据实验要求分为正常对照组、ox-LDL组、低浓度苯扎贝特(50μmol/L)组、中浓度苯扎贝特(100 μmol/L)组、高浓度苯扎贝特(200μmol/L)组.RT-PCR观察各组凋亡基因Bcl-2、Bax及Bd-2/BaxmRNA的变化. 结果 与正常对照组比较,ox-LDL组凋亡基因Bcl-2表达下降(P<0.05),凋亡基因Bax表达增加(P<0.05),Bcl-2/Bax比值下降(P<0.05);不同浓度苯扎贝特组与ox-LDL组比较,Bcl-2表达增加(P<0.05),Bax表达降低(P<0.05),Bcl-2/Bax上调(P<0.05),且呈浓度效应依赖关系. 结论 ox-LDL可引起内皮细胞抗凋亡基因Bcl-2表达下调,凋亡基因Bax表达上调,Bcl-2和Bax比值下降,从而引起内皮细胞凋亡增加;苯扎贝特可通过上调Bcl-2与Bax的比值抑制ox-LDL引起的内皮细胞凋亡,起到抗动脉粥样硬化作用.     

载LOX-1-siRNA靶向超声微泡的制备及其对大鼠动脉粥样硬化斑块的生物学作用

目的 构建载血凝素样氧化低密度脂蛋白受体1 (lectin-like oxidized low density lipoprotein receptor-1,LOX-1)-siRNA靶向超声微泡,研究其对大鼠动脉粥样硬化斑块的生物学作用.方法 薄膜-水化-超声乳化法构建载LOX1-siRNA纳米级超声微泡(nanobubbles,NBs-siRNA).从Wistar大鼠体内分离、培养动脉平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs).通过凝胶迁移阻滞实验与siRNA细胞内化实验验证超声微泡可运载siRNA进入靶细胞内;qRT-PCR及Western blot检测LOX1的mRNA和蛋白表达水平;油红O染色观察细胞内脂质聚集情况.构建Wistar大鼠动脉硬化模型,实验组经鼠尾静脉注射含有LOX-1-siRNA的NBs-siRNA微泡100 μg,并使用超声仪照射.治疗15 d后,取标本HE染色后与对照组对比动脉硬化斑块病变程度;免疫组化法检测斑块组织中LOX-1表达情况.结果 凝胶迁移阻滞实验结果显示,证实NBs与siRNA结合成功.激光共聚焦显微镜观察证实NBs可通过超声照射介导siRNA内化入VSMCs之中.qRT-PCR及Western blot实验结果显示实验组VSMCs LOX-1 mRNA及蛋白表达水平降低(P＜0.01).油红O染色显示实验组细胞泡沫化较oxLDL组减弱.组织标本HE染色表明实验组大鼠动脉斑块病变中内膜增厚、中膜萎缩及炎细胞浸润情况较对照组减轻;免疫组化实验结果显示,实验组动脉斑块中LOX-1表达水平较各对照组降低(P＜0.01).结论 成功制备能够有效运载LOX-1-siRNA的超声微泡,体内外实验证实该微泡可以在超声辐照下内化入靶细胞内部,下调LOX-1表达,减少泡沫细胞形成,降低动脉硬化斑块病变的严重程度.     

P21在单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化中的表达及依那普利对其表达的调节

目的：观察黄花倒水莲皂苷C抑制氧化型低密度脂蛋白（oxidized low density lipopprotein，ox-LDL）诱导的人脐静脉内皮细胞血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体（oxidized low desity lipoprotein receptor-1，LOX-1）表达的作用。方法：培养人脐静脉内皮细胞株（HUVEC-12），随机分为：对照组、ox-LDL（50mg／L）组和氧化型低密度脂蛋白（50mg／L）＋黄花倒水莲皂苷C（1，3，10μmol／L）组，通过RTPCR和Western blot蛋白印迹分析检测LOX-1 mRNA和蛋白的表达。结果：ox-LDL上调LOX-1 mRNA和蛋白的表达，黄花倒水莲皂苷C明显抑制ox-LDL诱导的LOX-1 mRNA和蛋白的表达，且呈浓度依赖性。结论：黄花倒水莲皂苷C明显抑制ox-LDL诱导的内皮细胞LOX-1 mRNA和蛋白的表达。     

参七合剂对不同类型高脂血症患者血管保护作用的研究

目的：观察参七合剂对不同类型高脂血症患者血浆凝集素样氧化低密度脂蛋白受体‐1（sLOX‐1）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、一氧化氮（NO）、内皮素（ET）及血脂水平的影响,探讨其血管保护机制。方法将64例高脂血症患者按血脂检测结果分为高总胆固醇（TC）组（20例）、高三酰甘油（TG）组（12例）、混合型高脂血症组（23例）、低高密度脂蛋白（HDL）组（9例）,给予参七合剂10 g／d ,疗程为6周。另选25例血脂水平正常的健康人群作为对照组。治疗前后分别检测sLOX‐1、SOD、MDA、NO、ET及血脂水平。结果高TC、混合型高脂血症患者sLOX‐1升高（P＜0．01）,sLOX‐1与 TC、低密度脂蛋白胆固醇（LDL‐C）呈正相关（r＝0．616、P＜0．05,r＝0．537、P＜0．05）;各型高脂血症均能使SOD、NO降低（P＜0．01）,MDA、ET升高（P＜0．01）,但影响存在差异（P＜0．01）;参七合剂能降低高脂血症患者的 sLOX‐1、TC、LDL‐C、MDA、ET 水平（P＜0．01）,升高SOD、NO、HDL‐C水平（P＜0．01）,对TG没有影响（P＞0．05）。结论参七合剂可能通过降低LOX‐1的表达、调节脂质氧化与过氧化水平的平衡、保护血管内皮细胞,从而对高脂血症患者的血管起到保护作用。     

老年NSTEACS患者PCI术前负荷量瑞舒伐他汀对血清Lox-1、hs-CRP及近期预后的影响

目的:探讨老年非ST段抬高急性冠状动脉综合征(NSTEACS)患者PCI术前负荷剂量瑞舒伐他汀治疗对血清凝集素样氧化低密度脂蛋白受体-1(Lox-1)高敏C反应蛋白(hs-CRP)及近期预后的影响。方法:将72例老年NSTEACS患者随机分为负荷治疗组33例和对照组39例,负荷治疗组PCI术前12 h顿服瑞舒伐他汀20 mg,PCI术前2 h追加瑞舒伐他汀20 mg。所有患者于术前、术后24 h、术后30 d抽取静脉血,检测Lox-1、hs-CRP、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、心肌肌钙蛋白Ⅰ(c TnⅠ)等。随访30 d观察主要不良心脏事件发生率。结果:与术前比较,2组患者PCI术后24 h血清Lox-1、hs-CRP均明显升高(P<0.05),心肌损伤标志物CK-MB、c TnⅠ亦明显升高(P<0.01);但负荷治疗组Lox-1、hs-CRP、CK-MB、c TnⅠ升高幅度均显著低于对照组(P<0.05)。术后30 d负荷治疗组血清Lox-1、hs-CRP仍显著低于对照组(P<0.05)。与术前比较,术后24 h 2组患者血清总胆固醇(TC)及低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平均未见明显变化(P>0.05),术后30 d出现显著下降(P<0.05),但两组之间比较差异无统计学意义。与术前比较,2组患者PCI术后24 h、30 d血清ALT及Scr水平均未见明显升高。负荷治疗组主要不良心脏事件总发生率较对照组低(9.09%vs 28.21%,P<0.05)。结论:老年NSTEACS患者PCI术前负荷剂量瑞舒伐他汀能明显降低PCI术后Lox-1水平,减轻患者的心肌损伤及炎症反应,降低PCI术后近期不良心脏事件的发生率,其独立于他汀类药物调脂作用以外,且应用安全。     

浙东地区汉族人群sLOX-1浓度与LOX-1基因多态性相关性研究

目的 观察血浆中sLOX-1浓度是否和LOX-1基因多态性相关.方法 采用酶联免疫吸附法测定354例接受冠状动脉造影的浙东地区汉族人群住院患者血清中sLOX-1的浓度,并采用Tm-shift基因分型方法对G501C和3'UTR-C/T等位基因型进行检测,其中包括43例急性心肌梗死、86例不稳定型心绞痛、89例稳定型心绞痛和136例经冠状动脉造影排除冠心病的患者.结果 3 'UTR-C/T位点TT,TC,CC基因型分别为5.4％,37.3％,57.3％,501G/C位点CC,GC,GG基因型分别为5.4％,31.9％,62.7％,3'UTR-C/T TT,TC,CC 3组sLOX-1浓度分别为160.0 ±56.1,132.7±52.0,128.9±58.0pg/ml,501G/C CC,GC,GG 3组sLOX-1浓度分别为134.0±55.2,127.2±50.8,134.2士58.7pg/ml.不同基因型患者sLOX-1浓度各组间没有显著性差异,在各亚组间也没有差异.结论 浙东地区汉族人群sLOX-1浓度和LOX-1基因多态性无相关性.