肝细胞癌ASC基因启动子区甲基化及其mRNA表达研究

目的:探讨肝细胞肝癌(HCC)ASC基因启动子区甲基化与mRNA表达及其临床病理特征的关系.方法:运用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)和实时荧光定量PCR技术,检测58例肝细胞癌及其相应癌旁组织、15例肝硬化肝组织、5例慢性病毒性肝炎肝组织和5例正常肝组织中ASC基因启动子区甲基化状态及其mRNA的表达水平.结果:58例肝细胞癌组织中有40例(69.0%)发生ASC基因启动子区甲基化,其相应癌旁组织中有27例(46.6%)发生该基因启动子区甲基化,而在肝硬化、肝炎和正常肝组织中均未检测到该基因启动子区甲基化.ASC基因在肝细胞癌组织中甲基化频率高于其相应癌旁组织(P=0.015).ASC基因启动子区甲基化与肿瘤直径(P=0.001)、生长方式(P=0.003)以及国际抗癌联盟第6版TNM(TNM6)分期(P=0.001)有关.以ASC基因在正常肝组织中的表达量为参照,58例肝细胞癌组织中有33例出现ASC基因mRNA低表达或表达缺失,其相应癌旁组织中有14例出现低表达或表达缺失,而在肝硬化及肝炎肝组织中ASC基因mRNA均呈正常表达.与癌旁组织相比,肝细胞癌组织中ASC基因mRNA表达明显下调(P<0.05).在发生ASC基因启动子区甲基化的40例肝细胞癌组织中有26例出现mRNA低表达.结论:ASC基因启动子区甲基化是肝细胞癌中的频发事件,可能在肝细胞癌的进展中起重要作用.     

p16、p21基因表达缺失在原发性肝癌中的临床意义

背景与目的:P16,P21蛋白是调控细胞周期的抑制蛋白,在调节细胞增殖中起非常重要的作用,其基因缺失,失活与多种肿瘤的发生,发展有关,本研究观察原发性肝癌中P16、P21蛋白表达及其基因缺失情况,探讨p16、p21基因表达缺失的临床意义.方法:采用回顾性分析方法,收集原发性肝癌42例,正常肝组织(距离癌组织≥2 cm)36例,应用Western印迹试验、逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测肝癌和正常肝组织中P16、P21蛋白的表达和相应mRNA扩增情况.结果:在癌组织中,P16蛋白缺失率为24例(24/42,57.1%),正常肝组织中P16蛋白缺失率为13.9%(5/36);而相应组织中P21蛋白缺失率分别为45.2%(19/42)和19.4%(7/36).两者在癌和正常肝组织中缺失差异均有显著性(P＜0.05).14例癌组织(38.9%.14/36)仅p16 mRNA转录而未表达蛋白.P16、P21蛋白的低表达与肝癌大小、分化程度关系密切(P＜0.05),而与是否有包膜、是否肝硬化等无关.结论:P16、P21蛋白的表达缺失与肝癌发生发展密切相关,两者可作为判断肝癌恶性程度的参考指标.     

肝细胞癌p16基因甲基化及其对mRNA表达的影响

目的:探讨肝细胞癌p16基因甲基化状态和对mRNA表达的影响。方法:采用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)法和逆转录聚合酶链反应技术(RT-PCR)分别检测了25例肝细胞癌及其相应的癌旁组织p16基因甲基化和mRNA表达状况。结果:25例肝细胞癌组织中检出13例甲基化,甲基化率为52.0%,相应的癌旁组织有6例甲基化,甲基化率为24.0%;25例肝细胞癌组织中,mRNA表达10例(表达率40.0%),相应的癌旁组织其mRNA表达19例(表达率76.0%),肝细胞癌组织和癌旁组织的甲基化率及mRNA表达,两者之间差异有显著性。结论:p16基因甲基化是肝细胞癌频发事件,p16基因甲基化导致mRNA表达缺失,p16基因甲基化检测可作为肝细胞癌分子诊断标志。     

RhoC基因的过量表达与肝细胞癌的侵袭转移

目的　研究探讨RhoC基因mRNA和蛋白的过量表达与肝细胞癌 (HCC)的发生发展和侵袭转移的关系。方法　采用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)和Western印迹法 ,检测 2 5例HCC及其癌旁肝组织、4例门静脉主干癌栓或肝外转移灶中RhoCmRNA和蛋白的表达 ;同时采用PCR产物单链构象多态性 (PCR SSCP)银染法检测RhoC基因的突变情况。结果　HCC组织和癌旁肝组织中均可检测到RhoC基因mRNA和蛋白的表达 ,RhoCmRNA在HCC组织中的表达较癌旁肝组织高 ,其吸光度(A)比值分别为 1.8± 1.1和 1.0± 0 .7,差异有显著性 (P <0 .0 1) ;RhoC蛋白在HCC组织中的表达同样高于癌旁肝组织 ,其A比值分别为 33992± 10 384和 17342± 9998,差异有显著性 (P <0 .0 1)。 4例门静脉主干癌栓或肝外转移灶中的RhoC基因mRNA和蛋白的表达量分别为 3.3± 0 .5和 6 386 5±9116 ,较HCC肝内病灶高 ,差异有显著性 (P <0 .0 1) ;RhoCmRNA和蛋白在分化较差、结节数较多、有静脉浸润或伴有肝外转移灶的HCC中过量表达 (P <0 .0 5 )。全部HCC经PCR SSCP银染法分析均未发现异常泳动条带。结论　RhoC基因的过量表达与HCC的发生发展和侵袭转移密切相关 ,且可能是通过过量表达而非突变发挥作用。     

人肺癌组织端粒酶活性与p16基因二者相关性探讨

目的:探讨非小细胞肺癌(NSCLC)组织中端粒酶活性与p16基因的相关性及二者与肺癌发生发展的关系.方法:肺癌标本48例,12例癌旁组织,7例非肿瘤病例的正常肺组织.以Telomerase PCR ELISA检测标本端粒酶活性,以RT-PCR的方法检测p16基因mRNA转录情况,以免疫组化方法检测组织标本p16蛋白表达.结果:1)肺癌组织标本36/48(75.00%)和1例癌旁组织检出端粒酶活性.2)48例NSCLC组织中32例进行了p16 mRNA及蛋白表达检测.16/32(50.00%)检测到p16mRNA转录,7例正常组织中均检测到p16 mRNA转录.NSCLC组织标本中17/32(53.13%)未检测到p16蛋白表达,7例正常肺组织中均检测到p16蛋白表达.3)24例端粒酶阳性NSCLC组织中15例p16 mRNA表达缺失,8例端粒酶阴性的NSCLC组织中仅1例p16mRNA表达缺失.相关系数为-0.433,P=0.013,具有显著负相关.结论:端粒酶、p16基因在NSCLC的发生发展中起重要作用,端粒酶活性有望成为预测肿瘤发生、肿瘤诊断的良好指标.端粒、端粒酶与p16基因可能成为抗肿瘤治疗的新靶点.     

肝癌患者p16基因甲基化与DNMTs表达相关性分析

目的:研究p16基因启动子区域异常甲基化所导致的基因表达异常在肝癌形成过程中的作用,探讨p16基因甲基化与DNMTs(DNMT1、DNMT2、DNMT3A和DNMT3B)表达之间的相关性。方法:检测肝癌患者癌组织、癌旁组织和肝硬化组织中p16基因的异常甲基化状态及p16、DNMTs基因mRNA的表达水平;采用甲基化特异性PCR技术检测甲基化状态,荧光定量技术检测mRNA的表达。结果:p16基因在肝癌组织、肝硬化组织和癌旁组织中的甲基化率分别为70.5%(31/44)、37.1%(13/35)和9.1%(4/44),肝癌组织和肝硬化组织中的甲基化改变与癌旁组织比较差异有统计学意义,P<0.01。31例甲基化阳性组织中17例p16基因表达降低或缺失,13例甲基化阴性组织中2例基因表达降低或缺失,甲基化阳性与阴性的p16基因表达水平存在明显差异。癌组织和肝硬化组织中4种DNMT mRNA水平均高于相应癌旁组织。其中DNMT1、DNMT3A和DNMT3BmRNA的表达水平差异有统计学意义,DNMT1:P值分别为0.009和0.020;DNMT3A:P值分别为0.005和0.010;DNMT3B:P值分别为0.039和0.036。DNMT2mRNA的表达水平虽然高于相应癌旁组织,但差异无统计学意义,P值分别为0.120和0.350。DNMT1、DNMT 3A和DNMT3B的表达与p16甲基化有相关性,P值分别为0.013、0.025和0.041。结论:p16基因甲基化是肝癌的早期、频发事件,其改变是其基因表达下降甚至失活的重要原因。DNMTs活性的改变可能促进p16基因的异常甲基化。     

p16和Rb基因在人肝细胞癌中的表达

目的:分析p16基因和视网膜母细胞瘤基因(Rb)在人肝癌细胞中表达的改变.方法:用免疫组织化学方法对40例肝细胞癌和癌旁组织进行检测.结果:肝组织中的p16蛋白和Rb蛋白的异常表达分别为94.44%(34/36)和45.71%(16/35).p16蛋白阴性或弱阳性而Rb呈强阳性者13例(13/34,38.23%),两者的表达呈负相关关系.p16和Rb蛋白均异常者15例(15/34,44.11%),表明Rb蛋白表达的调节除p16外,还有其他途径.二者的异常表达与肝癌的恶性程度无相关关系.结论:细胞调节因子p16和Rb基因的异常表达,均参与肝细胞癌的发生.以p16蛋白表达的改变为主.     

甲状腺癌组织端粒酶激活与p16基因失活的研究

目的：探讨甲状腺癌细胞增殖、分化与端粒酶激活及抑癌基因p16失活（缺失突变）之间可能存在的联系。方法：应用TRAP、多重PCR、免疫组化法检测42例甲状腺癌与16例癌旁组织端粒酶活性、p16基因外显子2缺失、p16蛋白表达。结果：甲状腺癌组端粒酶活性90．48％，高于癌旁组织（P（0．01）；甲状腺癌p16基因外显子2纯合缺失率28．57％。相应癌旁组未检出（P〈0．01）；甲状腺癌p16蛋白表达缺失率40．48％，高于癌旁组（P〈0．05）；甲状腺癌p16蛋白表达缺失率高于p16基因外显子2缺失率。结论：端粒酶激活与p16基因失活以及p16蛋白表达下调可能是甲状腺癌变过程中的重要分子事件．甲状腺癌中p16基因失活可能是端粒酶激活的一种途径。     

突变型p53基因与肝细胞癌组织学分级、转移、肿块大小和包膜形成的相关性研究

目的:探讨突变型p53基因与肝细胞癌组织学分级、转移、肿块大小和包膜形成的相关性.方法:随机选择41例肝细胞肝癌患者的癌和癌旁肝组织标本,SP法检测其p53蛋白表达,分析突变型p53基因与肝细胞癌组织学分级、转移、肿块大小和包膜形成的相关性. 结果:p53在癌和癌旁肝组织中阳性表达率分别为43.9%和6.67%, 两者比较,差异显著(P＜0.01);p53蛋白阳性表达率,Ⅲ～Ⅳ级肝癌明显高于Ⅰ～Ⅱ级肝癌,发生转移(血道或淋巴道转移)肝癌明显高于未发生转移(血道或淋巴道转移)肝癌,两者之间比较,差异有显著性意义(P＜0.05);但p53蛋白阳性表达率与肝癌组织大小和其是否有包膜无关(P＞0.05).结论: 突变型p53基因与肝细胞癌组织学分级、转移密切相关, 但与肝癌组织大小和包膜形成无关.     

大肠腺癌组织中p57kip2蛋白和基因的表达及 其与临床病理的关系

 目的　探讨细胞周期调控抑制因子p57kip2 蛋白和基因在大肠腺癌发生发展中的作用。方法　 采用免疫组化技术SP 法,检测p57kip2 蛋白在37 例大肠腺癌和26 例正常大肠黏膜组织中的表达;采用 RT2PCR 技术,检测p57kip2 基因mRNA 在32 例大肠腺癌和癌旁组织中的表达。结果　p57kip2 蛋白阳性 表达率在大肠腺癌组织中为40. 5 % , 显著低于正常大肠黏膜组织(χ2 = 5. 039 , P < 0. 05) ,并与大肠腺癌 组织分化程度和淋巴结转移均有关(χ2 = 8. 914 ,χ2 = 4. 416 , P < 0. 05) ;p57kip2 基因mRNA 阳性表达率在 大肠腺癌组织中为34. 4 % , 显著低于癌旁大肠黏膜组织(χ2 = 4. 016 , P < 0. 05) ,并与大肠腺癌组织分化 程度、淋巴结转移无关; 大肠腺癌组织p57kip2 基因mRNA 表达水平显著低于癌旁组织( P < 0. 05) 。 结论　p57kip2 蛋白的低表达与大肠腺癌的发生发展有关,p57kip2 基因mRNA 的低表达与大肠腺癌的发 生有关,且p57kip2 基因mRNA 的低表达可能是p57kip2 蛋白低表达的原因之一。     

p16和Rb基因在人肝细胞癌中的表达

目的：分析p16基因和视网膜母细胞瘤基因（Rb）在人肝癌细胞中表达的改变。方法：用免疫组织化学方法40例肝细胞癌和癌旁组织进行检测。结果：肝组织中的p16蛋白和Rb蛋白的异常表达分别为94．44％（34／36）和45．71％（16／35）。p16蛋白阴性或弱阳性而Rb呈强阳性者13例（13／34,38．23％）,两者的表达呈负相关关系。p16和Rb蛋白均异常者15例（15／34,44．11％）,表明Rb蛋白表达的调节除p16外,还有其他途径。二者的异常表达与肝癌的恶性程度无相关关系。结论：细胞调节因子p16和Rb基因的异常表达,均参与肝细胞癌的发生。以p16蛋白表达的改变为主。     

抑癌基因p16蛋白在肺癌组织中的表达及意义

目的：检测抑癌基因ｐ１６蛋白在７５例肺癌组织中的表达,并与癌旁组织和正常肺组织对比。结合肺癌的病理特征及预后进行分析,探讨ｐ１６基因与肺癌发生、发展的关系。方法：应用免疫组化ＳＡＢＣ法。结果：正常肺组织、癌旁组织和肺癌组织中ｐ１６蛋白阳性表达率分别为９１．７％、７５．０％和４９．３％,不同类型肺癌组织中ｐ１６蛋白的表达不同（Ｐ〈０．０５）;随着肿瘤分化程度的降低,ｐ１６蛋白的表达下降（Ｐ〈０．０５     

原发性肝细胞癌组织中乙肝病毒整合与p53基因突变关系研究

应用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交方法检测１５例原发性肝细胞癌及癌旁组织乙肝病毒（ＨＢＶ）存在状态，采用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ（Ｐｏｌｙ－ｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ－ｓｉｎｇｌｅｓｔｒａｎｄｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ）银染技术研究其ｐ５３基因突变。结果癌组织中１３例（８６．７％）有ＨＢＶＤＮＡ整合，同时３例伴游离ＨＢＶＤＮＡ；癌旁４例（２６．７％）有ＨＢＶＤＮＡ整合，而游离的ＨＢＶＤＮＡ却有６例。癌组织中ｐ５３基因变异８例（５３．３％），１例位于第５外显子，各有２例位于第６、第７外显子，３例位于第８外显子，癌旁组织未见ｐ５３基因异常，ｐ５３基因异常的癌组织中均有ＨＢＶＤＮＡ整合。研究结果表明，ＨＢＶＤＮＡ整合与ｐ５３基因突变密切相关，ＨＢＶＤＮＡ可能通过整合基因组后导致抑癌基因突变失去抑癌作用而引发肝癌。     

Integration of the hepatitis B virus X fragment in hepatocellular carcinoma and its effects on the expression of multiple molecules: a key to the cell cycle and apoptosis

We investigated hepatitis B virus (HBV) DNA integration and expression of several proteins involved in the cell cycle and apoptosis, including cyclin A, retinoblastoma protein (pRB), Fas-associated death domain protein (FADD), tumor necrosis factor receptor-associated death domain protein (TRADD), and nuclear factor kappaB (NF-kappaB) in HBV-associated hepatocellular carcinoma (HCC) and liver cirrhosis (LC). Archival HCC and LC specimens were obtained from 35 patients each with HBV infection; 5 normal liver specimens used as controls were also obtained. Polymerase chain reaction and Southern blot hybridization were used to detect the integration of HBV DNA in the HCC and LC specimens. The protein levels were determined by Western blot assay. The difference in HBV DNA integration between HCC and LC and correlation between HBV-encoded X protein (Hbx) integration and protein expression were analyzed statistically. HBV DNA was detected in 33 (94%) of the HCC and LC specimens. HBx integration differed in the HCC [24 (69%)] and LC [14 (40%)] specimens (p=0.015). Sixty percent of the HCC specimens and 6% of the LC specimens had increased cyclin A expression. Also, 34, 37, 69, and 77% of the HCC specimens were positive for pRB, FADD, TRADD, and NF-kappaB expression, whereas 80, 60, 100, and 100% of the LC specimens were positive for pRB, FADD, TRADD, and NF-kappaB expression. Significant correlations between HBx integration and the level of expression of cyclin A (r=0.452; p=0.006), pRB (r=-0.419; p=0.012), and TRADD (r=0.470; p=0.004) were discovered. Therefore, integration of HBV DNA occurred frequently in HCC and LC cases with chronic HBV infection, whereas HBx integration occurred more often in HCC than in LC cases (p=0.015). HBx integration and altered expression of genes is a key to apoptosis and may play important roles in HBV-induced hepatocarcinogenesis.     

周期蛋白A在原发性肝癌中的表达及意义

目的 探讨周期蛋白A（cyclinA)在原发性肝癌（HCC）中的表达,临床意义及其与乙型肝炎病毒x基因整合之间的关系。方法 分别采用PCR,RT-PCR,Western blot检测HCC及其相邻非肿瘤组织中的cyclinA基因,mRNA和蛋白的表达胃酸用PCR和Southern blot检测HCC标本中HBx基因的整合。结果 35例HCC标本中,cyclinA基因扩增率为2.8%(1/35),mRNA过表达率为45.7%（16/35）,蛋白过表达率为60.0%(21/35)。cyclinA蛋白过表达与患者年龄,肿瘤大小以及HBx基因整合之间存在统计学联系。结论 cyclinA的表达失控在肝细胞癌变的早期发生。可能是乙型肝炎病毒（HBV）影响肝细胞正常细胞周期的重要途径之一。     

广西肝癌高发区原发性肝细胞癌 HBV X 基因的整合及影响因素分析

目的 了解广西肝癌高发区乙型肝炎病毒（hepatitis B virus,HBV）X区基因在肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）染色体中的整合及影响因素。方法 以30例与HBV相关的原发性肝细胞癌患者为研究对象。提取HCC组织及癌旁组织标本DNA作为模板,以HBV X基因上游序列和人类基因组Alu重复序列为引物,应用重复序列-多聚酶链反应（Alu-PCR）扩增整合的HBV X片段及两侧的人类基因组DNA片段。扩增产物进行测序,计算目的片段整合率并分析相关的影响因素。结果 18例HCC组织检测到HBV X基因的整合片段,整合率为60.00%（18/30）;26例癌旁组织检测到HBV X基因的整合片段,整合率为86.67%（26/30）。癌旁组织HBV病毒整合率高于HCC组织,差异有统计学意义（χ²=5.445,P=0.020）。不同性别、年龄、HBeAg、HBV DNA、ALT、AST的HCC癌组织及其癌旁组织HBV X基因整合率比较差异均无统计学意义（P＞0.05）。结论 广西肝癌高发区癌旁组织比HCC组织HBV整合率高,说明HBV整合发生在感染早期。HBV X基因整合与HCC患者性别、年龄、HBeAg、HBV DNA、ALT、AST无明显关系。     

乙肝病毒相关的肝癌p16异常甲基化

Objective： To investigate the potential linkage between high rate of p16 methylation and hepatitis B virus （HBV） infection, methylation status of p16, HBV infection markers in serum and HBV-DNA replication level in cancerous and non-cancerous tissue of 32 cases of hepatocellular carcinomas （HCC） with HBV infection and 12 HCCs without HBV infection were examined. Methods： p16 methylation was detected with methylation-specific polymerase Chain reaction （PCR）, and HBV markers were examined with real-time PCR and immunologic method. Results： Methylation of p16 promoter was found in 31 （70.5%） of 44 cancerous tissues of HCC, 2 （16.7%） of 12 HCC without HBV infection, 29 （90.6%） of 32 HCCs with HBV infection marker, p16 methylation was detected in 5 （83.3%） of 6 HCCs positive for HBsAg and HBeAg, 17 （94.4%） of 18 HCCs positive for HBsAg and negative for HBeAg, 7/8 （87.5%） of HCCs positive for other HBV infection markers, such as HBsAB, HBcAb, HBeAb. p16 methylation products were also found in non-cancerous tissues of 4 cases of HCCs with HBV infection, not detected in non-cancerous tissues without HBV infection. HBV-DNA was detected in cancerous tissues of 29/32 （90%） HCCs with HBV infection. Surprisingly, Methylation product of p16 promoter was found in all cases （29/29） of HCCs with detectable HBV-DNA in neoplastic tissue. Conclusion： Persistent HBV infection may promote p16 hypermethylation, suggesting that HBV, via enhancing the aberrant methylation of p16, indirectly involved in development of HCC.     

MUTATION AND ABNORMAL EXPRESSION OF P16INK4a IN HEPATOCELLULAR CARCINOMA

p16INK4aisarepresentativeelementofCDKIfamily.p16,,,#,proteinbindstoCDK4thusinhibitingcyclinDI-CDK4tophosphorylatingofRb,therebyhaltingcellprogressionatG1.Abnormalexpressionofpl6,,,,'resultsincellprogressionuncontrolledatGI/S,whichmakescellmalignanttransformation.Inmanytumors,alterationofpl6,,,#,geneandabsenceofp16,,,.,proteinhadbeenrepel'ted."]However,therelationshipbetweenpl6,,,,'andprimaryhepatocellularcarcinoma,especiallyhepatitisB-relatedHCC,hasbeenlittleunderstood.Inthisstudy,we…