培养人肝细胞用于生物人工肝的初步研究

探讨培养人肝细胞与肝非实质细胞用于体外生物人工肝支持系统及其对暴发性肝衰竭进行支持治疗的可能性。方法：首先将由简易体外两步灌流法分离获取的肝细胞，肝非实质细胞进行限制贴壁条件下的混合培养。然后置空心纤维型生物反应器和辅助循环系统组成的ＥＢＬＳＳ，对无肝模型犬进行人工肝支持结果：分离所得成活率高达９４％以上的肝细胞，肝非实质细胞经定时反复旋转振荡后形成多细胞球形聚集体，浮航天工业部工保持良好的形态特     

生物人工肝系统的生物反应器

目前,生物人工肝系统正在成为急性肝衰竭患者体外有效的肝支持治疗手段,在该系统中,生物反应器起着重要作用.迄今为止,设计和研究的生物反应器已有多种,如平板式反应器、中空纤维型反应器、灌流床式/支架型反应器、肝细胞包裹与悬浮型反应器等.本文介绍了生物反应器的基本作用、功能、条件和要求,并对4类主要生物反应器的研究进展予以综述.     

生物型人工肝肝细胞培养系统的研究进展

作为暴发性肝功能衰竭 (fulminanthepaticfailure,FHF)有效治疗手段 ,生物型人工肝 (Bioartificialliver,BAL)正在不断的发展[1～ 3 ] ,肝细胞作为其生物成分是BAL发展的关键因素 ,肝细胞保持分化特性及生理功能依赖于细胞与细胞、细胞与细胞外基质相互作用及细胞外基质等多种因素 ,长期以来国内外学者不断的进行研究 ,建立各种培养系统以使培养环境最大限度的接近体内生理环境 ,提高培养肝细胞的活性及增殖分化能力 ,本文就BAL细胞培养系统的研究现状综述如下。1　肝细胞来源包括人的肝细胞、异种肝细胞及所谓永生化 (immor taiized)…     

一种新型生物人工肝支持系统

目的构建一套拥有独立知识产权的新型生物人工肝支持系统,用以满足生物型人工肝临床治疗的需要。方法针对肝细胞生长过程中的各种特殊环境要求,设计了以关联控制为核心的控制算法,结合PID技术、预测控制等方法,实现了对各种指标的稳定控制。实验中使用HepG2连续培养60h,用以验证生物反应器的实际效果。结果温度控制在37℃±0.2℃,溶解氧含量控制在95%±10%,酸碱度控制在(7.3±0.2)pH。细胞连续培养60h,经镜检,其效果优于对照组。结论细胞生长过程上的各项主要指标控制稳定,细胞在本系统中生长状态良好,为下一步的实验奠定了坚实的基础。     

以培养肝细胞为基础的体外生物人工肝支持系统

肝脏是人体的重要器官之一 ,具有解毒、生物合成和生物转化等多种功能。由于多种原因所致肝衰竭必然导致机体的代谢紊乱和毒性物质的大量堆积 ,这二者又进一步影响肝细胞功能 ,形成肝衰竭的恶性循环。尽管传统对症支持疗法有了长足进步 ,肝衰竭的病死率仍居高不下。国外报道暴发性肝衰竭 (FHF)病死率在80 %左右 ,为此 ,国内外学者一直致力于人工肝和肝移植治疗的研究。肝移植 (OL Tx)被认为是此类患者最有效的治疗手段 ,但由于受供肝来源限制、价格昂贵及必须长期应用免疫抑制剂等原因 ,多数患者难以通过肝移植而达到长期存活的目的。生…     

生物人工肝的研究概况

近年来对肝衰竭进行了大量的基础和临床研究 ,但在临床治疗方面仍无突破性进展 ,特别是暴发性肝衰竭 ,其病死率仍在 80 %左右[1,4 ] ,肝移植治疗肝衰竭效果最佳 ,病死率可降至 2 0 % [2 ] ;然而肝移植手术复杂、价格昂贵 ,且供肝来源很少 ,使在等待肝移植期间的许多病人病情进一步恶化或并发不可逆的并发症而死亡[3 ] 。当前人工肝支持系统在治疗肝功能衰竭方面成为研究热点。利用人工肝的目的在于暂时部分替代功能衰竭的肝脏 ,消除体内毒物及完成部分生物合成功能 ,使肝损伤有修复的机会 ,恢复其功能 ,或等待肝移植。人工肝研究过程中 ,人…     

用猪肝细胞型混合生物人工肝支持系统治疗肝衰竭的初步研究

目的 对培养猪肝细胞型混合生物人工肝支持系统治疗肝衰竭的可行性进行初步评价。方法 采用自行研制的以新生实验小型猪肝细胞为基础的混合生物人工肝支持系统，对5例慢性重型肝炎患者进行体外人工肝支持，综合评价其临床疗效和安全性。结果 5例患者经混合人工肝支持后，肝衰竭均得到不同程度的控制，表现为临床症状和肝衰竭相关指标好转，肝性脑病改善。最终2例好转出院，1例经肝移植存活，2例 死亡，死亡原因与不良反应无关。结论 猪肝细胞型混合生物人工肝系统可用作重型肝炎肝衰竭的辅助支持和治疗。     

生物人工肝的研究进展

近年来杂化型生物人工肝在治疗急性肝功能衰竭中发挥了很大的治疗作用，是研究最多、最有希望的人工肝。随着细胞培养技术和细胞工程技术的发展，肝细胞培养系统配合生物反应器提供肝功能的研究取得了重大进展。本就人工肝的发展历程，特别是杂化型生物人工肝研究中的核心问题肝细胞来源、培养方法及生物反应器的发展做了详尽的综述。     

生物型人工肝支持系统研究若干进展

暂时性人工肝支持 ,可清除因肝脏衰竭产生的各种有害物质 ,使肝的代谢功能部分恢复 ,病变的肝脏可望通过再生而回复其原有的结构和功能。目前所谓的人工肝多数只能部分取代肝脏的功能 ,故应称人工肝支持系统 (为叙述方便 ,以下仍称人工肝 )。肝脏能分泌 6 0 0多种酶 ,担负着机体十分复杂的生物合成、转化代谢和分泌、排泄功能。肝脏可对内源性代谢产物或外源性毒素、药物灭活、解毒 ,起到保护机体的作用。肝脏合成糖原、各种血浆蛋白 (除免疫球蛋白外 )、甘油三酯和其他酯类以及一些目前尚不十分清楚的重要物质。一旦肝细胞大量坏死 ,出现肝…     

猪肝细胞在聚砜膜生物界面生长的初步研究

目的初步了解中国实验乳猪肝细胞在聚砜膜生物界面生长的情况,探索聚砜膜作为生物人工肝中空纤维反应器膜材料的可行性.方法将分离的新生实验小型猪肝细胞接种到聚砜膜和聚苯乙烯界面,进行形态学观察及生物学功能测定,观察培养猪肝细胞的酶漏出量.结果乳猪肝细胞在聚砜膜界面培养呈球型黏附、铺展,形成多细胞聚集体.与聚苯乙烯组相比较,聚砜膜组的尿素合成和蛋白分泌能力更强,氨转化率也明显提高,LDH和AST的漏出量无显著差异.结论聚砜膜是良好的乳猪肝细胞生长的生物界面,可以作为生物人工肝中空纤维反应器的膜材料.     

冷冻猪肝细胞在生物型人工肝系统中的生存状态研究

目的研究冷冻复温后猪肝细胞在生物型人工肝支持系统(BALSS)中的生存状态.方法用酶法从中国实验用小型猪肝脏分离出猪肝细胞;将1×1010猪肝细胞冷冻保存在-196 ℃液氮中;1个月后复温,将等量的冷冻和新鲜猪肝细胞分别培养在BALSS中,比较其形态、存活率和白蛋白、尿素、葡萄糖合成功能及对利多卡因的转化功能.结果冷冻保存的猪肝细胞,复温后其存活率较高;在培养于BALSS时其生化功能、利多卡因转化功能及超微结构与新鲜肝细胞类似.结论用该冻存方法保存的猪肝细胞可试用于BALSS系统.     

生物人工肝细胞材料研究进展

生物人工肝是治疗肝功能衰竭的有效方法。肝细胞是生物人工肝系统的核心,生物人工肝的肝支持作用完全依赖于所用肝细胞的特异性生物学功能。生物人工肝中使用的肝细胞来源主要有人源性肝细胞、异种肝细胞、肝细胞株等。近20年来,虽然对各种来源的肝细胞进行了广泛和深入研究,但是生物人工肝细胞材料的来源问题至今未能得到满意解决。文章综述此方面的最新研究进展。     

Metabolic effects of a novel bioartificial liver on serum from severe hepatitis patients: an in vitro study

Theextracorporealbioartificialliversupportsystem(EBLSS)hasbeenestablishedtocompensateforhepaticfunctionin patientswithseverehepatopathy ,andtoprovidesupportivetherapyforthesepatients EBLSShasanimportantstatusintheresearchofartificialorgans Atpresent,thestudyofartificiallivershasprogressedtothestageofthehybridbioartificialliver (BAL)consistingofmammalianhepatocytesinartificialsyntheticmaterials 1Thistype ofartificiallivercannotonlyprovidethebiologicalfunctionsoflivinghepatocytes,butcanalso…     

体外培养树鼠句肝细胞的初步观察

目的 探讨体外培养的树Qu肝细胞形态结构与生物合成功能。方法 采用体外两步灌流法分离肝细胞,以L15培养基予以培养,光电镜下动态观察细胞形态结构,同时检测不同时相点培养上清中蛋白及甲胎蛋白含量。结果 采用简易体外两步灌流法分离的肝细胞,经台盼蓝拒染试验证实肝细胞的存活率为90％,体外培养的肝细胞在第3－10天具有良好的增殖分化功能,维持此形态和功能至培养第18天。结论 体外培养的树Qu肝细胞具有良好的形态结构和生物合成能力,能够满足肝炎病毒体外研究培养的需要。     

大鼠肝细胞的分离及原代长期培养

目的 :研究大鼠肝细胞分离的简易方法及长期培养过程中肝细胞形态变化过程。方法 :采用体外胶原酶二步灌注法分离大鼠肝细胞 ,TB染色法计算细胞数及细胞活率。 MTT法观测新生牛血清对大鼠肝细胞增殖的影响。在含 1 0 %新生牛血清及其他附助因子的 Williams′E条件培养基中原代长期培养 ,并进行形态学的动态观察。结果 :平均每只大鼠可获取 2 .2 6× 1 0 8个肝细胞 ,平均活力为 95.6%。新生牛血清浓度与大鼠肝细胞增殖有明显的量效关系 (P<0 .0 1 )。在 Williams′E培养基中可存活 5～ 6周并保持正常形态。结论 :本方法分离的肝细胞有较高的获取率和活力 ,适合体外长期原代培养     

内皮细胞生物反应器构建的初步研究

 目的 采用培养液循环式人工毛细管培养系统构建血管内皮细胞生物反应器,并对其形态和功能进行鉴定。方法 将内皮细胞种植于无纺布中空纤维生物反应器的外腔,用培养液循环式人工毛细管培养系统进行培养,定期检测培养液中乳酸、葡萄糖、一氧化氮（nitrogen oxide,NO）和血管性血友病因子（von Willebrand Factor,vWf）的浓度。根据乳酸的浓度变化计算反应器内细胞的数量,通过葡萄糖的消耗和NO、vWf的产生反映内皮细胞的活力和功能。对其中的无纺布进行电镜、DAPI染色荧光显微镜检查,观察内皮细胞在生物反应器外腔无纺布上的生长情况。结果 随着时间变化,培养液中的乳酸浓度进行性升高,升高的速度逐渐增大;葡萄糖浓度则逐渐降低,降低的速度逐渐增大;反映内皮细胞功能的NO在最初数小时轻度降低后也逐渐升高;在培养液中检测出内皮细胞的特异性标志物vWf;荧光显微镜和电镜下观察细胞在无纺布上生长良好,并具有内皮细胞的形态。结论 血管内皮细胞能在无纺布中空纤维生物反应器外腔的无纺布上生长,并具有良好的形态和功能,提示未来在治疗脓毒症中的潜在价值。     

组织工程—体外重建人体组织

全部或部分重建皮肤、肝、骨髓、神经等组织一直是基础研究、临床医学和生物工程领域的科学家们所追求的目标，动物细胞与组织体外培养技术的发展使之成为可能。本文主要综述组织工程的研究现状，应用及存在的问题。