前列腺特异性膜抗原和前列腺特异性抗原在前列腺癌组织中的表达

目的：观察并比较前列腺特异性膜抗原（PSMA）和前列腺特异性抗原（PSA）在不同前列腺为组织中的表达差异；比较组织PSMA与PSA对前列腺癌诊断和鉴别诊断的意义。方法：采用ABC三步法免疫组织化学染色方法，用PSMA和PSA单克隆抗体对70例前列腺癌（PCA）、21例前列腺上皮内瘤（PIN）、20例前列腺良性增生（BPH）组织进行染色。结果：PSMA在前列腺癌组织中明显高表达，PSA则在前列腺良性增生组织中高表达；组织PSMA对前列腺癌的阳性检出率明显高于PSA。结论：PSMA是较PSA更具特异性的前列腺癌瘤标，可望取代PSA成为诊断前列腺癌的新型瘤标，并在前列腺癌免疫治疗方面具有良好的应用前景。     

前列腺特异性膜抗原表达的临床意义

目的 探讨前列腺特异性膜抗原(PSMA)在前列腺癌(PCa)组织中的表达及与肿瘤病理分级之间的关系。方法 采用免疫组化ABC法，用PSMA单克隆抗体对前列腺不同病变组织及非前列腺肿瘤组织石蜡包埋切片进行染色。其中PCa 70例，前列腺上皮肉瘤21例，良性前列腺增生20例．其他肿瘤组织标本30例。结果 PSMA在97％前列腺癌、100％前列腺上皮内瘤、80％BPH组织中呈不同程度的阳性表达，且在PCa组织中呈明显高表达，非前列腺肿瘤组织染色均呈阴性。组织 PSMA表达与PCa组织学分级之间存在负相关性。结论 PSMA具有良好的组织器官特异性，能够判断PCa顶后，在PCa的免疫治疗方面具有应用前景。     

前列腺特异性膜抗原的研究现状

继PAP、PSA等血清标记物被发现并广泛应用于前列腺癌(PCa)的诊治之后,一种存在于LNCaP系PCa细胞膜中的糖蛋白--前列腺特异性膜抗原(PSM),越来越引起人们的关注,并在PCa诊治、免疫显像、术后随诊及估计预后等方面具有良好的应用前景,现将其综述如下.     

前列腺特异性膜抗原的研究进展

继ＰＳＡ被发现并广泛应用于临床之后 ,一种存在于ＰＣ细胞系 (ＬＮＣａＰ)细胞膜中能被 7Ｅ1 1 Ｃ5单抗识别、较ＰＳＡ更具特异性的糖蛋白 -前列腺特异性膜抗原 (Ｐｒｏｓｔａｔｅ ｓｐｅｃｉｆｉｃｍｅｍｂｒａｎｅａｎｔｉｇｅｎ ,ＰＳＭＡ)引起人们关注。近年来 ,随着对ＰＳＭＡ研究的深入 ,人们还研制了除 7Ｅ1 1 Ｃ5之外的四种特异性抗体 ,认为ＰＳＭＡ的作用不仅限于前列腺癌的诊断与治疗 ,在多种不同恶性肿瘤中 ,可选择性地与肿瘤相关性血管系统发生反应 ,是多种癌症诊断与治疗措施中首选的理想靶因子 ,已成为一个倍受关注的肿瘤…     

前列腺特异性膜抗原PSMA研究进展

前列腺癌是欧美国家最常见的恶性肿瘤之一,它位居于欧美男性肿瘤发病率的第二位.在美国,前列腺癌的发病率占所有恶性肿瘤的第一位,死亡率仅次于肺癌.在亚洲,在中国,前列腺癌的发病率明显偏低,但近年来,随着人们生活质量的提高,饮食结构的改变,人口平均寿命的延长及诊疗技术的日益进步,前列腺癌发病率呈逐渐上升趋势.     

人源性抗前列腺特异性膜抗原单链抗体的基因构建、表达及鉴定

目的:分别构建人源性抗前列腺特异性膜抗原(PSMA)单链抗体(sc Fv)/鱼精蛋白截短体(tp)、sc Fv/弗林蛋白酶识别位点(Fdt)/流感病毒融合肽结构域(HA2)/tp融合蛋白基因。利用原核表达体系表达、纯化并检测sc Fv、sc Fv-tp、sc Fv-Fdt-HA2-tp融合蛋白的活性。方法:采用PCR的方法,扩增融合基因sc Fv、sc Fv-tp、sc Fv-Fdt-HA2-tp,将获得的基因克隆入原核表达载体p ET28,在大肠杆菌BL21中表达,表达产物经SDS-PAGE和Western印迹鉴定,通过Ni2+-NTA螯合层析纯化。ELISA分析融合蛋白抗原亲和活性。结果:成功构建了人源性抗PSMA融合基因,经IPTG诱导后在M15中以包涵体形式表达。表达的目的蛋白均能与PSMA抗原结合。结论:融合蛋白具有结合抗原的活性,为靶向递送siRNA的研究奠定了基础。     

前列腺特异性膜抗原在前列腺癌诊治中的研究进展

近年来，前列腺癌特异性的分子标志物—前列腺特异性膜抗原（PSMA）已成为前列腺癌临床研究中的热点之一。PSMA在前列腺癌的早期诊断、基因治疗、预后评估中所起的作用变得越来越重要。本文就PSMA蛋白的结构、功能、表达特点、基因表达以及基于PSMA的前列腺癌放射免疫显像、DNA疫苗、自杀基因治疗的相关研究进展及其在前列腺癌诊治中的作用进行了综述。     

装载超抗原SEA基因的由前列腺特异性抗原和端粒酶逆转录酶启动子双调控靶向前列腺癌的溶瘤腺病毒载体的构建

目的 构建表达超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素(SEA)基因的由前列腺特异性抗原(PSA)启动子及端粒酶逆转录酶(hTERT)启动子双调控的特异性增殖溶瘤腺病毒SG504-SEA.方法 从前列腺癌组织基因组DNA中获得522 bp大小的PSA启动子序列,将PSA启动子克隆到由hTERT启动子调控的特异性增殖溶瘤腺病毒载体SG502中.得到靶向前列腺癌细胞的双调控溶瘤腺病毒载体SG504.将已构建好的含有771 bp大小SEA基因片段的病毒骨架质粒PPE3-cdb-SEA与SG504用Lipofectamine 2000共转染至293细胞.共转染后9～14 d出现病毒空斑,经过3次病毒空斑纯化,经鉴定正确的腺病毒命名为SG504.SEA,即携带SEA基因的双调控靶向前列腺癌的特异性溶瘤腺病毒.结果 经聚合酶链反应(PCR)及酶切鉴定,SEA基因成功克隆到病毒载体中,可以表达SEA基因,且病毒滴度为2.0×10~(10)pfu/ml.结论 成功构建表达超抗原SEA基因的双调控选择增殖型溶瘤腺病毒SG504-SEA.     

人前列腺特异性膜抗原cDNA的克隆、原核表达、鉴定和抗原初步纯化

目的　克隆中国人前列腺特异性膜抗原 (PSMA)cDNA全长 ,构建PSMA原核表达重组子。诱导PSMA原核表达 ,并对表达产物进行初步纯化。　方法　从前列腺癌患者组织中提取总RNA ,利用PSMAcDNA中的EcoRⅠ位点 ,将PSMA分为两段分别作RT PCR ,分别连接到pET 30a中 ,从而得到完整PSMAcDNA的原核表达重组子pET 30a PSMA ,并进行酶切鉴定与序列测定。确定序列正确后 ,利用IPTG诱导重组子表达 ,采用Ni NTAAgarose螯合层析柱对表达产物初步纯化 ,SDS PAGE和Western Blotting对表达产物和纯化产物进行鉴定。　结果　成功克隆到序列完全正确的人源PSMAcDNA ,诱导表达并初步纯化出PSMA蛋白 ,该蛋白具有较好的抗原性和特异性。　结论　此项研究为PSMA功能的研究及前列腺癌噬菌体抗体库的筛选提供了实验依据     

前列腺特异性膜抗原的研究进展（文献综述）

前列腺特异性膜抗原（PSMA）比前列腺特异性抗原（PSA）和前列腺酸性磷酸酶（PAS）更具有优越性。通过对前列腺组织的免疫组化实验发现：PSMA的含量与前列腺上皮细胞的恶变程度相关,且PSMA在前列腺组织中具有较高的特异性,可用于早期诊断前列腺癌及其转移癌。最近,PSMA更作为免疫因子的一部分,参与前列腺癌的免疫治疗。     

Survivin启动子驱动腺病毒介导LRIG1基因治疗前列腺癌的体外实验

目的 由于去势抵抗性前列腺癌（CRPC）缺乏有效治疗方法,因此催生了探索新治疗模式的需求,其中靶向基因治疗可能是治疗CRPC的较理想模式;但是CRPC的靶向性基因治疗尚没有受到应有的关注.本课题拟研究Survivin启动子驱动的重组腺病毒Ad-Surp-LRIGl对前列腺癌细胞株的体外治疗效果.方法 用Ad-Surp-LRIGl和Ad-LRIGl分别感染人前列腺癌细胞PC-3M及人前列腺上皮细胞CRL-11609 RWPE-1,根据报告基因EGFR表达的不同计算病毒的细胞转染率.MTT法评估Ad-Surp-LRIGl和Ad-LRIGl对PC-3M细胞生长的抑制作用.结果 当MOI=25时,Ad-Surp-LRIGl在PC-3M细胞中的转染效率为81.24%,在CRL-11609 RWPE-1细胞中转染率为0,在两种细胞内的转染率比较差异有显著性意义（χ2=65.18,P=0.000）;Ad-LRIGl在PC-3M细胞中的转染效率为77.22%,在CRL-11609 RWPE-1细胞中转染率为71.68%,转染率比较差异无显著性意义（χ2=0.051,P=0.802）.Ad-Surp-LRIGl和Ad-LRIGl在PC-3M细胞中的转染率相比,差异无显著性意义（χ2=0.013,P=0.796）.在常规培养1d 后PBS组的细胞生长速度即开始超过Ad-Surp-LRIGl组和Ad-LRIGl组细胞,4 d 后细胞生长速度差异显著（χ2=15.37,P=0.001）,而Ad-Surp-LRIGl组和Ad-LRIGl组细胞生长速度无明显差异.结论 Ad-Surp-LRIGl能选择性转染人前列腺癌细胞PC-3M,能明显抑制体外前列腺癌细胞的生长.     

HLA-E�������������幹�������ڸΰ�HepG2ϸ���еı��

目的 构建表达人类白细胞抗原-E(HLA-E)基因慢病毒载体,探讨慢病毒介导HLA-E基因在肿瘤免疫中的意义.方法 2006年10月至2007年11月在中山大学附属第三医院肝移植中心应用pGC-El-GFP-HLA-E慢病毒载体转导肝癌HepG2细胞,检测慢病毒载体的转导效率、细胞内HLA-E信使核糖核酸(mRNA)及蛋白质水平的表达.结果 pGC-El-GFP-HLA-E慢病毒载体转导肝癌HepG2细胞72h的转导效率为(95.0±1.3)%;通过RT-PCR检测24h后细胞内HLA-E mRNA水平是肝癌HepG2细胞的(8.73±1.05)倍,72h后为(293.48±42.01)倍,差异具有统计学意义(P<0.01).细胞免疫组化显示转导HLA-E后细胞内的蛋白水平明显增强.结论 慢病毒栽体系统能够使转导的基因在靶细胞中得到稳定表达,是基因治疗中的理想载体.     

Wnt-1重组腺病毒的构建及其对人表皮干细胞分化的影响

目的 构建Wnt-1重组腺病毒,并观察Wnt-1对人表皮干细胞分化相关蛋白表达的影响.方法 连接穿梭质粒与骨架质粒,构建重组腺病毒;扩增后感染人表皮干细胞,检测其3种角蛋白和基质金属蛋白酶(MMP)-2的表达.结果 重组质粒酶切后可得到30 kb和4.5 kb两条特异性条带;人表皮干细胞感染重组腺病毒后,聚合酶链反应(PCR)与绿色荧光蛋白均指示Wnt-1基因的表达,且角蛋白10表达变为阳性;角蛋白18表达增强;角蛋白19表达减弱;细胞培养基中MMP-2浓度由(-16.25±2.40)μg/L升高至(714.88±30.45)μg/L(t=58.45,P<0.01).结论 Wnt-1具有促使人表皮干细胞向腺样上皮细胞分化的趋势.     

携带大鼠白细胞介素-10基因重组腺病毒载体的构建及其在肝星状细胞中的表达

目的　构建载有白细胞介素 10 (IL 10 )基因的 ,能在肝星状细胞 (HSC)稳定表达的重组腺病毒载体 ,为将来的肝纤维化基因治疗提供基础。方法　将IL 10cDNA克隆于腺病毒穿梭质粒PAdTrack CMV ,得到重组质粒PadTrack CMV IL 10。采用电穿孔法将质粒PadTrack CMV IL 10与腺病毒骨架质粒PadEasy 1共转化E .coliBJ5 183细胞 ,通过在细胞内同源重组 ,生成带有IL 10基因的重组腺病毒载体。重组腺病毒质粒经过 2 93细胞的扩增及CsCl的纯化 ,感染HSC细胞。结果　经形态学、病毒DNA酶切、聚合酶链反应 (PCR)和逆转录 (RT ) PCR等方法的鉴定 ,证实了载体构建的正确性 ,经测定 ,病毒滴度为 2 .5× 10 10 efu/ml。结论　成功构建带有IL 10cDNA的重组腺病毒载体 ,所携带的IL 10载体能够转染大鼠HSC并在HSC中稳定表达 ,为进一步的研究打下了基础。     

前列腺特异性膜抗原启动子增强子调控重组质粒的构建及鉴定

目的探讨前列腺特异性膜抗原(PSMA)启动子和增强子调控目的基因表达的前列腺细胞特异性，了解增强子增强转录效率的能力。方法采用PCR方法从前列腺癌细胞DNA中分别扩增PSMA启动子和增强子序列，先后克隆到含有报告基因绿色荧光蛋白(GFP)的质粒载体，脂质体介导基因转染不同癌细胞并观察GFP在不同细胞的表达情况。结果成功构建质粒pEGFP—PS—MAPro和pEGFP-PSMAEP，转染结果显示PSMA表达阳性的LNCaP细胞中存在GFP的有效表达，且pEGFP—PSMAEP的调控转录能力较pEGFP—PSMAPro强20倍。结论PSMA启动子增强子调控GFP表达的重组质粒的构建证明该调控序列具有前列腺细胞特异性，增强子能够明显增强启动子的转录效率，增加了目的基因的表达水平。PSMA启动子和增强子的共调控可以保证基因表达的强度和细胞特异性，为前列腺癌基因靶向性治疗研究提供实验依据。     

In Vitro andIn Vivo induction of bone formation using a recombinant adenoviral vector carrying the human BMP-2 gene

It has been well established that bone morphogenetic protein-2 (BMP-2) can induce bone formation bothin vivo andin vitro, although high concentrations (up to milligrams) of BMP-2 have been required to achieve this effectin vivo. Further, clinical applications are usually limited to a single dose at the time of implantation. In an attempt to prolong the transforming effect of BMP-2 we used a recombinant adenoviral vector carrying the human BMP-2 gene (Adv-BMP2) to transduce marrow-derived mesenchymal stem cells (MSC) of skeletally mature male New Zealand white rabbits. The pluripotential MSC were incubated with Adv-BMP2 overnight followed by culture in growth medium for 1 week. Assays on tissue cultures demonstrated that these Adv-BMP2 transduced MSC produced BMP-2 protein, differentiated into an osteoprogenitor line, and induced bone formationin vitro. These MSC had increased alkaline phosphatase activity, increased expression of type I collagen, osteopontin, and osteocalcin mRNA, and induced matrix mineralization compared with both nontransduced cells and cells transduced with a control adenoviral construct. To analyze the osteogenic potentialin vivo, Adv-BMP2-transduced MSC were autologously implanted into the intertransverse process space between L5 and L6 of the donor rabbits. The production of new bone was demonstrated by radiographic examination 4 weeks later in areas implanted with cells transduced with Adv-BMP2, whereas no bone was evident at sites implanted with cells transduced with the control adenoviral construct. Histological examination further confirmed the presence of new bone formation. These accumulated data indicate that it is possible to successfully transduce mesenchymal stem cells with a recombinant adenoviral vector carrying the gene for BMP-2 such that these cells will produce BMP-2, differentiate into an osteoprogenitor line, and induce bone formation bothin vitro andin vivo. Moreover, incubation of the Adv-BMP2-transduced cells for an additional 7 days in culture before transplantation enhances the success rate in bone formation (three out of three) as compared with our previous report (one out of five, Calcif Tissue Int 63:357–360, 1998). SLC, JL, and NMW have contributed equally to this work and therefore should be considered first authors.     

人PPFP基因的重组慢病毒载体的构建和表达

目的 构建含人PAX8/PPARγ/融合基因(PPFP)基因重组慢病毒载体并检测其表达性能.方法 从已构建好的含PPFP的质粒克降模板PEGFP-C-PPFP中,利用聚合酶链反应(PCR)方法钓取目的 基因PPFP,将该基因克隆到慢病毒载体表达质粒pGC-FU(含Flag基因)中,得到重组的pGC-FU-PPFP,通过PCR、酶切、测序和分析比对验证PPFP基因后,将pGC-FU-PPFP质粒和包装质粒pHelper1.0、pHelper2.0共同转染人胚胎肾上皮细胞株293T细胞,获得携带PPFP基因和Flag基因的重组慢病毒,收集并浓缩病毒上清液,测定重组病毒的滴度.通过Western blot鉴定PPFP-Flag融合蛋白在靶细胞内的表达进一步验证目的 基因在靶细胞中的表达.结果 经PCR扩增获得2591 bp的目的 基因片段,构建的重组质粒经PCR、酶切及测序和分析比对鉴定正确;该质粒与包装质粒共转染293T细胞获取的慢病毒滴度达3.5×10~7转导单位TU/ml;感染的293T细胞,Western blot结果显示条带大小为90 KDr,可判断目的 基因PPFP在293T细胞中表达.结论 成功构建PPFP基因慢病毒载体质粒pGC-FU-PPFP,并建立慢病毒过表达系统.