噬菌体展示体内筛选技术及其应用进展

噬菌体展示技术是将高度多样性的多肽或蛋白展示于噬菌体衣壳蛋白表面的一项技术。这一技术将展示分子的基因型和表型联系在一起,极大地方便了多肽或蛋白分子的功能性筛选。从噬菌体展示文库中筛选出的多肽或蛋白具有高度的特异性和极强的亲和力,在生物医学基础研究和临床诊断治疗中具有重要的应用价值。随着噬菌体展示技术的不断发展,已将其用于活体的体内筛选。体内筛选技术发挥了高通量筛选的特点,能够在活体水平研究血管表面的分子表达状况,分析不同器官血管表面分子的表达差异,从而为临床靶向性诊断和治疗提供实验依据。     

抗体分子在噬菌体表面蛋白Ⅷ上的展示

目的 观察抗体分子通过丝状噬菌体主要外壳蛋白Ⅷ和次要外壳蛋白Ⅲ在噬菌体表面呈现效果的差异。方法 分别构建通过次要外壳蛋白Ⅲ或主要外壳蛋白Ⅷ展示抗乙肝表面抗原Fab,ScFv和角蛋白Fab的表达载体，制备噬菌体抗体，比较其抗原结合活性和Fab呈现水平，用多种方法尝试提高主要外壳蛋白Ⅷ介导的噬菌体展示效果。结果 主要外壳蛋白Ⅷ对不同特异性抗体Fab段和不同形式的小分子抗体（Fab和ScFv)的展示效果均低于次要外壳蛋白Ⅲ的展示，增加主要外壳蛋白Ⅷ－Fab对野生型和主要外壳蛋白Ⅷ的表达比例、试用不同菌株、在Fab和主要外壳蛋白Ⅷ之间插入间隔序列、换用控制更为严密的启动子等措施，均未能改善主要外壳蛋白Ⅷ介导的噬菌体展示。结论 以前所报道的通过主要外壳蛋白Ⅷ多价展示Fab段不是普遍存在的现象，对有些抗体基因不能达到多价展示。     

噬菌体表面展示技术的新发展及在病毒性肝炎研究中的应用

噬菌体展示技术是一种目的基因在噬菌体表面的表达产物与亲和选择相结合的技术。噬菌体结构蛋白pⅢ和pⅧ均可作为载体来展示外源多肽或蛋白质。初期阶段,噬菌体展示技术主要是用于单链可变区抗体、随机多肽库等的筛选,但近年来随着噬菌体cDNA表达型文库的构建,噬菌体展示技术的用途逐渐扩大。目前噬菌体展示技术不仅可以用于研究蛋白结合蛋白,而且还可以用来研究DNA／RNA结合蛋白,以及非蛋白小分子物质的结合蛋白等。因为蛋白-蛋白之间的结合是许多生物学效应的基础,因而噬菌体展示技术的应用范围进一步得到拓展。噬菌体展示技术在研究自身抗体结合与识别的自身抗原、信号转导过程中蛋白之间的相互作用以及肝炎病毒基因表达调节方面都有十分重要的应用前景。     

VEGF受体3高亲和噬菌体融合肽的筛选及亲和功能研究

目的:利用噬菌体展示技术,筛选VEGF受体3(VEGFR3)胞外区蛋白高亲和噬菌体融合肽,并测量其亲和常数。方法:用噬菌体展示固相结合法,经过4个循环的筛选,ELISA法鉴定噬菌体单克隆的亲和性,测定亲和力高的阳性噬菌体融合蛋白的DNA序列,竞争法ELISA检测优势克隆与靶蛋白的特异性,并通过非竞争性ELISA固项法,得到融合肽与VEGFR3的抗原抗体结合反应曲线,计算融合肽的亲和常数。结果:4轮亲和筛选,噬菌体出现良好的富集,8个阳性克隆中,经测序有4个克隆序列相同(phage-WHGSLKQNLWWY);竞争性ELISA显示噬菌体融合肽与VEGFR3具有良好的亲合性,并能被VEGF-D分子抑制,融合肽的亲和常数为(1.505±0.184)×107M-1。结论:噬菌体12肽库筛选的VEGFR3高亲和融合肽(phage-WHGSLKQNLWWY)可为多肽分子的改造及靶向药物的开发提供依据。     

应用噬菌体展示技术筛选细胞周期素B2启动子DNA的结合蛋白

目的筛选细胞周期素B2（cyclin B2）启动子DNA结合蛋白,探索cyclin B2的表达调节机制.方法应用噬菌体展示技术,以cyclin B2启动子DNA片段作为固相筛选分子,对噬菌体人肝细胞cDNA文库进行4轮“吸附-洗脱-扩增”富集过程,噬斑裂解液PCR扩增后,进行DNA序列分析和同源性生物信息学搜索.结果噬菌体经富集后,筛选出20个阳性克隆,成功构建了克隆载体.序列测定后经过同源性搜索,确定了和cyclin B2启动子特异结合的肝细胞蛋白,共编码6种已知蛋白.结论用噬菌体人肝cDNA文库筛选得到cyclin B2启动子DNA结合蛋白,分析了这些蛋白的功能,为研究cyclin B2基因的转录调节机制奠定了基础.     

应用噬菌体表面展示技术筛选丙型肝炎病毒核心蛋白抗原模拟表位

为筛选丙型肝炎病毒（HCV）核心蛋白（core)特异性噬菌体12肽模拟表位，应用噬菌体表面展示技术，以抗－HCV核心蛋白抗原的单克隆抗体作为固相筛选分子，对人工化学合成的噬菌体随机12肽库进行5轮“吸附－洗脱－扩增”的筛选过程，随机挑取50个克隆，经噬菌体酶联免疫吸附法（ELISA）鉴定，并进行交叉反应实验以及竞争抑制性结合实验，最后对所选克隆进行DNA序列分析，以确定HCV核心抗原的模拟表位。经免疫学鉴定后，从随机筛选的50个克隆中确定10个阳性克隆，进行DNA序列测定，确定氨基酸序列XRQXXPXXXHXX为HCV核心的模拟表位。本实验为开展用HCV模拟表位探索HCV的防治研究创造了条件。     

噬菌体展示技术在分子核医学中的应用

噬菌体展示技术是研究分子间多种作用的技术,它能够在机理尚未明确的情况下研究蛋白质与蛋白质、蛋白质与多肽、蛋白质与核酸的相互作用,这种技术的一个关键优势是,它可以研究分子间的直接联系,得到不同亲和力的分子,一次性实现高效筛选多肽的目的。近年来随着噬菌体展示技术的成熟,该技术被广泛应用于生命科学研究的不同领域,如：单克隆抗体制备、多肽筛选、疫苗研制、基因治疗及细胞信号转导研究等。该文综述了噬菌体展示技术在分子核医学相关研究中的运用。     

噬菌体展示肽库技术在肿瘤诊治研究中的应用

噬菌体展示肽库技术是将高度多样性的多肽与噬菌体衣壳蛋白融合表达,呈现于噬菌体表面的多肽具有相对独立的空间结构,能与配体结合,从而筛选特异性分子表位,其已成为肿瘤诊治研究的重要手段和有力工具.筛选与肿瘤细胞或血管表面细胞特异结合的多肽作为核素载体,制成探针,可以对肿瘤进行早期诊断和转移灶的定位,还可以进行核素治疗;以多肽...     

应用噬菌体展示技术筛选乙型肝炎病毒核心启动子结合蛋白

目的 通过筛选乙型肝炎病毒(HBV)核心启动子(core promoter)结合蛋白,为HBV复制机制的研究探索新的途径。方法 应用噬菌体表面展示技术,以HBV核心启动子的聚合酶链反应产物作为固相筛选分子,对噬菌体人肝细胞cDNA文库进行5轮“吸附-洗脱-扩增”的筛选过程,经噬斑的PCR扩增后,构建克隆载体,最后对所筛选克隆进行DNA序列分析和同源性搜索。结果 噬菌体经富集后,从随机筛选的20个克隆中得到6个阳性克隆,成功构建了克隆载体。序列测定后经过同源性搜索,确定了和HBV核心启动子结合的肝细胞蛋白——羧肽酶N(CPN)。结论 用噬菌体人肝cDNA文库筛选得到HBV核心启动子的结合蛋白,分析了该蛋白的编码基因,为进一步研究HBV的复制机制创造了新的途径。     

基于骨架蛋白的噬菌体肽库研究

噬菌体展示肽库技术是研究蛋白质分子进化的理想工具，从选择合适的蛋白骨架入手，构建在此结构基础上的构象型肽库，结合高通量大规模的筛选技术，可以方便地获得具有新功能的蛋白质，这些新功能蛋白因具有高亲和力和高特异性，将有可能在许多生物技术领域中替代天然抗体。     

肿块深度对乳腺超声弹性成像检查结果的影响分析

目的 探究超声弹性成像(UE)中肿瘤深度对于判断乳腺肿物的良、恶性影响.方法 选取本院2017年1月～2018年10月间收治的178例因乳腺肿块行手术切除患者为观察对象,纳入病灶200个.依据肿瘤深度不同分4组.对所有的患者在术前均予以常规超声检查以及超声弹性成像检查,对比不同深度肿瘤的UE成像情况、分析诊断效能(准确...     

空勤人员高尿酸血症人员的分析

目的了解空勤人员高尿酸血症与心血管疾病危险因素相关性。方法选取东航上海公司的空勤人员795人,收集每人的血尿酸,空腹血糖,血脂等,分成高尿酸组和非高尿酸组,统计高尿酸组与心血管危险因素的关系。结果高尿酸组的年龄,TC,TG,及心血管疾病的患病率均高于非高尿酸组。结论高尿酸血症与心血管疾病密切相关,是心血管疾病的危险因素之一。     

Evaluation of the usefulness of the limited cone-beam CT (3DX) in the assessment of the thickness of the roof of the glenoid fossa of the temporomandibular joint

OBJECTIVES: The purpose of this study was to evaluate the usefulness of the limited cone-beam X-ray CT (3DX) (Morita Co., Japan) in measuring the thickness of the roof of the glenoid fossa (RGF) of the temporomandibular joint (TMJ). MATERIALS AND METHODS: Twenty-one TMJs removed at autopsy from 21 cadavers were investigated macroscopically using dissection and 3DX imaging. A Digimatic Outside Micrometer and a 3DX-image tool were used to measure the minimum thickness of the RGF. Multiple measurements were made to identify the thinnest area. Once the thinnest areas had been identified, three linear measurements were made and the average value was used for statistical analysis. RESULTS: The average macroscopic examination measurement was 1.37 mm (range 0.55-3.6 mm) and the average 3DX image measurement was 1.22 mm (range: 0.51-3.0 mm). There was no significant difference between these two groups using the Mann-Whitney U-test (P < 0.05). The Spearman's correlation coefficient by rank between these two groups was r = 0.93(P < 0.001). CONCLUSION: These results suggest that bone thickness measurements of the RGF by 3DX imaging was effective.     

Tendinopathy of the tendon of the long head of the biceps

Pathologies of tendon of the long head of the biceps (LHB) are an important cause of shoulder pain. They include tendinopathy, rupture, superior labrum anterior and posterior lesions, pulley tears, and tendon instability. Conservative management of symptomatic LHB tendinopathy is commonly accepted as the first-line treatment. It consists of rest, nonsteroidal anti-inflammatory drugs, corticosteroid injections, and physical therapy. Biceps tenotomy and tenodesis are the most common surgical procedures to manage both isolated LHB pathology and biceps-glenoid complex tears combined with rotator cuff tears. However, controversy persists about the superiority of one of them because there is no evidence of significant differences in functional scores or patient satisfaction between the 2 techniques. This article provides an overview on biomechanical function of the LHB and current strategies for treatment of LHB disorders.