LC3在早期糖尿病大鼠肾脏中的表达及意义

目的 探讨微管相关蛋白1轻链3(LC3)在早期糖尿病大鼠肾脏中表达的意义及其与糖尿病肾病(DN)发生发展的关系.方法 实验分为模型组和正常对照组.采用链脲佐菌素(STZ)诱导大鼠DN模型,分别于造模成功后2、4、6、8周,用免疫组化、原位末端标记法(TUNEL)染色分析和计算机图像分析技术连续多时点观察肾脏LC3的表达变化和细胞凋亡情况,并分析二者之间的关系及其与肾脏病理变化指标的相关性.结果 模型组2、4、6、8周肾脏LC3蛋白表达均弱于对照组(P<0.05);模型组各时点间LC3表达水平比较,差异有统计学意义(P<0.01).模型组LC3的表达量与尿蛋白、肾脏肥大指数(KI)呈负相关(P<     

人自噬相关基因LC3B真核表达载体的构建及鉴定

目的:构建人自噬相关基因微管相关蛋白1轻链3B(microtubule-associated protein 1 light chain 3B,MAP1LC3B)真核表达栽体,并鉴定其生物学功能。方法:通过RT-PCR方法扩增得到人MAP1LC3B cDNA;应用基因重组技术构建pEGFP-N1-LC3B真核表达载体,通过酶切和测序进行鉴定;倒置荧光显微镜下观察EBBS诱导4 h后pEGFP-N1-LC3B表达载体转染的HepG2.2.15细胞质中GFP-LC3B分布的变化。结果:通过测序鉴定,pEGFP-N1-LC3B真核表达载体序列正确,编码框正确;转染后的HepG2.2.15细胞经EBBS诱导4 h后,倒置荧光显微镜检测发现GFP-LC3B由散在分布向点状分布改变。结论:成功构建了人自噬相关基因LC3B真核表达载体,为进一步研究自噬在乙型肝炎病毒中的作用机制奠定了基础。     

带有CFP标签的LC3自噬表达载体的构建

目的构建带有樱桃红色荧光蛋白(cherry fluorescent protein,CFP)标签的微管相关蛋白1轻链3(LC3)自噬真核表达载体,并进行初步表达鉴定。方法采用PCR方法,从质粒载体pCMV-GFP-LC3为模板扩增LC3片段,通过T4 DNA连接酶将纯化后的PCR产物LC3与经过ApaI和BamHI双酶切的pm-cherry-c1载体连接,命名为PM-CFP-LC3。该载体经酶切及测序验证后,在fugene6转染试剂介导下转染293细胞,通过荧光显微镜观察CFP在细胞内的分布来观察LC3表达情况。结果带有CFP标签的LC3表达载体构建成功,在荧光显微镜下可观察到转染细胞中樱桃红色荧光以及细胞自噬现象。结论成功构建了带有CFP标签LC3的重组质粒并成功表达,为深入研究细胞的自噬奠定了实验基础。     

Decorin基因过表达对HEK 293T细胞微管相关蛋白LC3和自噬基因beclinl表达的影响

目的:构建人核心蛋白聚糖(DCN)重组质粒,研究其对微管相关蛋白LC3和自噬基因beclinl表达的影响。方法:从人胚肺二倍体成纤维细胞(2BS)提取总RNA,经RT-PCR获得decorin的全长cDNA,克隆至T-载体pUM-T并测序,亚克隆至真核表达载体pcDNA3.1/V5-His,再次测序正确后以磷酸钙共沉淀法瞬时转染HEK293T细胞,利用RT-PCR、Western Blot方法检测空载体组和重组质粒转染组微管相关蛋白LC3和自噬基因beclinl转录水平及翻译水平的表达。结果:经DNA测序证实人DCN cDNA片段正确插入真核表达载体中。Western Blot结果显示经磷酸钙共沉淀法转染的HEK 293T细胞中目的基因高表达。RT-PCR和Western Blot结果显示,与空载体组相比,重组质粒转染组LC3转录水平显著降低,beclin1和LC3-II的翻译水平均显著降低。结论:成功构建人DCN重组质粒,其在HEK 293T中过表达可以显著降低微管相关蛋白LC3和自噬基因beclinl表达,为进一步研究DCN与自噬的相互作用奠定了基础。     

自噬相关基因LC3B真核表达载体构建及胃癌细胞自噬的观察

目的:构建人自噬相关基因微管相关蛋白1轻链3B(microtubule associated protein 1 light chain 3B,LC3B)真核表达载体,并鉴定其生物学功能.方法:通过RT-PCR方法扩增得到人LC3B cDNA,应用基因重组技术构建pEGFP-C1-LC3B真核表达载体,通过酶切和测序进行鉴定.将pEGFP-N1-LC3B表达载体转染胃癌细胞MKN1,倒置荧光显微镜观察饥饿诱导后细胞中EGFP-LC3B的表达及分布变化.结果:通过测序鉴定,pEGFP-N1-LC3B真核表达载体序列正确,编码框正确.转染后的MKN1细胞经饥饿诱导后,检测发现EGFP-LC3B由散在分布向点状分布改变,即生成细胞自噬体.结论:成功构建了人自噬相关基因LC3B真核表达载体,并证实饥饿诱导胃癌细胞自噬的发生,为进一步研究自噬在肿瘤中的作用机制奠定了基础.     

Decorin基因过表达对HEK293T细胞微管相关蛋白LC3和自噬基因beclin1表达的影响

目的:构建人核心蛋白聚糖(DCN)重组质粒,研究其对微管相关蛋白LC3和自噬基因beclin1表达的影响.方法:从人胚肺二倍体成纤维细胞(2BS)提取总RNA,经RT-PCR获得decorin的全长cDNA,克隆至T-载体pUM-T并测序,亚克隆至真核表达载体pcDNA3.1/V5-His,再次测序正确后以磷酸钙共沉淀法瞬时转染HEK293T细胞,利用RT-PCR、Western Blot方法检测空载体组和重组质粒转染组微管相关蛋白LC3和自噬基因beclin1转录水平及翻译水平的表达.结果:经DNA测序证实人DCN cDNA片段正确插入真核表达载体中.Western Blot结果显示经磷酸钙共沉淀法转染的HEK 293T细胞中目的基因高表达.RT-PCR和Western Blot结果显示,与空载体组相比,重组质粒转染组LC3转录水平显著降低,beclin1和LC3-Ⅱ的翻译水平均显著降低.结论:成功构建人DCN重组质粒,其在HEK 293T中过表达可以显著降低微管相关蛋白LC3和自噬基因beclin1表达,为进一步研究DCN与自噬的相互作用奠定了基础.     

A型主动脉夹层组织Beclin1及微管相关蛋白1轻链3的表达及意义

目的 探讨自噬相关蛋白Beclin1及微管相关蛋白1轻链3(LC3)在A型主动脉夹层组织中的表达及意义。方法 选取因A型主动脉夹层(AD)而于我院行手术治疗患者术中切除的主动脉壁组织标本20例作为AD组,以尸检者的正常胸主动脉(NA)壁组织标本10例作为对照。采用免疫组化染色及蛋白质印迹技术检测血管组织中Beclin1及LC3蛋白的定位及表达差异。结果 A型主动脉夹层主动脉壁组织中Beclin1及LC3蛋白主要定位表达于血管平滑肌细胞,且含量高于正常对照组织(P<0.05)。结论 A型主动脉夹层主动脉壁中血管平滑肌细胞的自噬活性明显增强,可能与疾病的发生发展相关。     

自噬相关基因Atg12和LC3-Ⅱ在脑缺血再灌注大脑表达的实验研究

目的：探讨局灶性脑缺血再灌注损伤（cerebral ischemia reperfusion injury,CIR）时大脑皮质自噬相关蛋白-12（autophagy related protein-12,Atg12）和自噬微管相关蛋白轻链3抗体Ⅱ（autophagy microtubule-associated protein light chain 3 antibodyⅡ,LC3-Ⅱ）的激活规律,在此基础上探讨其对脑组织自噬的影响。方法：实验分为假手术组（sham组）和缺血再灌注组（CIR组）,且CIR组下设CIR 0、6、12、24、48、72h共6个亚组。除sham组和CIR 24h组为每组20只外（其中10只用于模型鉴定）,其余为每组10只。采用大脑中动脉栓塞术制备局灶性脑缺血再灌注模型,再灌注24 h后采用神经功能评分、2,3,5-三苯基氯化四氮唑（2,3,5-Triphenyltetrazolium chloride,TTC）染色、脑组织含水量来鉴定脑缺血模型是否成功。采用免疫组化和免疫印迹方法检测大脑皮质Atg12和LC3-Ⅱ的表达规律。结果：与sham组比较,CIR 24h组可见明显的神经功能缺损、脑梗死和明显的脑水肿。免疫组化结果显示,Atg12和LC3-Ⅱ在大鼠脑缺血再灌注6 h开始表达[阳性率分别为（15.49±4.18）%、（18.54±3.62）%],在24~48 h达高峰[（33.63±3.26）%、（29.62±1.73）%],72 h之后逐渐减弱[（24.90±3.96）%、（20.36±3.51）%]。免疫印迹结果显示,Atg12和LC3-Ⅱ在大鼠脑缺血再灌注6 h开始表达[表达量为（0.372 3±0.076 5）、（0.148 4±0.011 5）],在24~48 h达高峰[（0.741 7±0.071 8）、（0.451 3±0.019 0）],72 h之后逐渐减弱[（0.365 0±0.042 0）、（0.245 1±0.030 3）]。结论：脑缺血时Atg12和LC3-Ⅱ在调节脑缺血的脑组织自噬方式中具有重要的作用。     

自噬相关基因Beclin1和LC3与子宫内膜异位症的研究进展

子宫内膜异位症(EMs)是具有类似恶性肿瘤临床行为学特征的常见妇科良性病变,治疗较困难,复发率高。目前,EMs的发病机制尚不清楚,可能与机体自噬异常以及多种疾病的发生发展相关。自噬相关基因Beclin1和微管相关蛋白1轻链3(LC3)可对哺乳动物细胞自噬的调节发挥重要作用,EMs中存在自噬异常,异位子宫内膜可能存在自噬活性改变或特定自噬基因的减少、缺失、变异以及蛋白质表达异常,但目前关于EMs中Beclin1和LC3表达的研究较少,且研究结果尚不统一。     

正加速度暴露后大鼠心室肌LC3发生高表达变化

目的探讨正加速度（＋Gz）暴露后大鼠心室肌自噬相关基因微管相关蛋白轻链3（LC3）的表达变化。方法雄性SD大鼠18只,随机分为对照组和＋10Gz／5min暴露组。分别于＋Gz暴露后6h、24h取心室肌组织,采用RT—PCR和Westernblot方法测定LC3mRNA及蛋白表达的变化。结果与对照组相比,＋Gz暴露后6h心室肌LC3mRNA及蛋白表达均显著增强（P〈0．05）,暴露后24h其表达量仍显著增加（P〈0．05）。结论＋10Gz／5min暴露可诱导大鼠心室肌自噬相关基因LC3的高表达,提示高＋Gz可能引起了心室肌自噬的激活。     

c-met在喉鳞状细胞癌中的表达及意义

目的:探讨原癌基因c-met在喉癌组织中的表达及其与喉癌临床病理的相关性。方法:采用免疫组织化学染色方法检测了42例喉癌组织,25例非癌组织(癌旁组织及声带息肉)中c-met蛋白的表达情况。结果:免疫组织化学检测结果显示c-met蛋白在喉癌组织中的阳性表达率为64.3%,显著高于癌旁组织及声带息肉(P<0.05)。c-met蛋白表达与肿瘤的病理分级、临床分期、淋巴结转移有关(P<0.05),而与患者年龄无关(P>0.05)。结论:c-met在喉癌组织中异常高表达,提示在喉癌的发生、发展中可能起重要作用。     

Beclin1和LC3在膀胱尿路上皮癌中的表达及意义

目的探讨Beclin1和微管相关蛋白1轻链3( LC3)在膀胱尿路上皮癌中的表达及两者的相关性。方法通过免疫组化法检测56例膀胱尿路上皮癌和32例正常膀胱组织的Beclin1和LC3表达,对比表达的差异。结果膀胱尿路上皮组织 Beclin1阳性表达率为66.1%(37/56),显著低于正常膀胱组织的93.8%(30/32),差异有统计学意义(P<0.01),而癌组织中LC3阳性表达率为50%(28/56),亦显著低于正常膀胱组织87.5%(28/32),差异有统计学意义(P<0.01);Beclin1和 LC3表达均与患者临床分期有关( P <0.01),与患者年龄、性别及肿瘤生长方式不具有相关性(P>0.05);Beclin1和LC3在膀胱尿路上皮癌中的表达具有正相关性( P <0.01)。结论膀胱尿路上皮癌中 Beclin1和LC3阳性表达率低于正常膀胱组织,两者可能均与膀胱尿路上皮癌的发生发展有关。     

MDM2蛋白在喉鳞状细胞癌中的表达意义

目的　初步探讨 MDM2在喉癌发生发展中的机制 .方法　采用链霉菌抗生物素蛋白 -过氧化物酶 (S- P)免疫组织化学法 ,检测 1 2例声带息肉 ,1 5例喉癌旁组织 ,1 1例喉不典型性增生及 41例喉鳞状细胞癌组织中 MDM2蛋白的表达 ,并研究蛋白表达与肿瘤病理分级、临床分期、临床分型、淋巴结转移的关系 .MDM2蛋白阳性表达为核着色 .结果　 MDM2蛋白表达阳性率在各个组分别为声带息肉 0 .0 % ,喉癌旁组织40 .0 % ,喉不典型性增生 72 .7% ,喉鳞状细胞癌组织 39.0 % .MDM2蛋白表达在声带息肉组与癌旁组织组、声带息肉组与喉不典型性增生组、声带息肉组与喉鳞状细胞癌组织组、喉不典型性增生组与喉鳞状细胞癌组织组 (P<0 .0 5)均有显著性差异 .喉鳞状细胞癌组 MDM2蛋白表达与临床分期有关 ,与病理分级、临床分型、淋巴结转移无关 .结论　 MDM2基因在喉癌发生、发展中有重要作用 ,其异常表达是喉癌发生中早期分子事件 ,检测 MDM2蛋白有助于喉癌早期诊断     

KAI1/CD82在喉鳞状细胞癌中的表达及其临床意义

目的:探讨喉鳞状细胞癌(laryngeal squamous cell carcinoma,LSCC)中KAI1/CD82的表达及其与临床病理参数的关系.方法:应用免疫组织化学EliVisionTM plus法检测83例LSCC组织和20例正常喉组织中KAI1/CD82的表达情况.结果:KAI1/CD82在正常喉组织和LSCC组织中的阳性率分别为90.0%和41.0%,差异有统计学意义(P<0.01),且LSCC组织分化程度高、无淋巴结转移、临床Ⅰ～Ⅱ期者的KAI1/CD82阳性率均高于组织分化程度低、有淋巴结转移、临床Ⅲ～Ⅳ期者(P<0.05～P<0.01),而不同性别、年龄、肿瘤大小及肿瘤位置的LSCC者阳性率差异均无统计学意义(P>0.05).结论:KAI1/CD82参与了LSCC组织的侵袭及转移,早期检测KAI1/CD82的表达可作为临床判断LSCC组织侵袭、转移的指标之一.     

Smad4 在老年喉鳞癌患者中的表达及其临床意义

目的 探讨Smad4 在老年喉鳞癌患者中的表达及其临床意义。方法 应用免疫组织化学法检测65 对老年喉鳞癌患者及癌旁正常黏膜组织中Smad4 的表达。结果 老年患者喉鳞癌组织中Smad4 蛋白阳性表达率低于癌旁正常黏膜组织（P <0.05）。Smad4 表达水平与喉鳞癌分化程度、淋巴结转移有关（P <0.05）。结论 Smad4 可促进喉癌的发生、发展,可能在喉癌分化、浸润、转移过程中发挥重要作用。     

基质金属蛋白酶-2与喉癌的相关性研究

目的　检测喉鳞癌组织中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)的表达情况，探讨其表达与喉癌临床病理关系。方法　应用免疫组化法，检测43例喉鳞癌组织中MMP 2的表达。结果　 43例喉鳞癌组织中，29例(67．4％)MMP-2表达阳性，其中颈淋巴结转移组明显高于无淋巴结转移组(P<0．05)，深部浸润的癌巢及基底膜附近的肿瘤细胞染色尤为明显。结论　 MMP-2能破坏基底膜，与喉癌浸润转移密切相关。     

喉鳞状细胞癌组织中血管内皮生长因子和环氧化酶-2 mRNA检测

目的:探讨喉鳞状细胞癌组织中血管内皮生长因子(VEGF)和环氧化酶(COX-2) mRNA的表达情况及与癌组织生长、浸润及转移的关系.方法:应用RT-PCR方法检测62例喉鳞状细胞癌、54例癌旁和9例正常喉黏膜组织中VEGF mRNA及COX-2 mRNA的表达.结果:喉鳞癌组织中VEGF mRNA和COX-2 mRNA的表达量高于癌旁和正常喉黏膜组织(P＜0.01),Ⅰ、Ⅱ期喉鳞癌组织2者的表达量低于Ⅲ、Ⅳ期(P＜0.01).喉鳞癌组织中VEGF mRNA和COX-2 mRNA的表达呈正相关(r＝0.756,P＜0.01).结论:VEGF和COX-2与喉鳞癌的生长、浸润及转移有密切关系,2者有协同作用.     

自噬基因 LC3在卵巢子宫内膜异位症中的表达及意义

目的：研究自噬基因LC3在卵巢子宫内膜异位症患者中的表达情况,探讨其与卵巢子宫内膜异位症发生、发展的相关性及意义。方法用Real-time PCR方法,对正常子宫内膜组织以及卵巢子宫内膜异位症患者的在位内膜组织、异位内膜组织进行LC3 mRNA定量分析,探讨其与临床分期的关系。结果 LC3 mRNA在卵巢子宫内膜异位症患者在位内膜组、异位内膜组和正常子宫内膜组中的表达存在显著差异（ P＜0.05）。异位内膜组表达显著低于正常内膜组,异位内膜组与在位内膜组相比表达明显下调（ P＜0.05） ,在位内膜组和正常内膜组间比较无明显差异（ P＞0.05）。 LC3 mRNA 在卵巢子宫内膜异位症不同临床分期中,异位内膜组Ⅲ～Ⅳ期LC3 mRNA表达显著低于Ⅰ～Ⅱ期（ P＜0.05）。在月经周期不同时相,正常内膜组增殖期的LC3 mRNA表达明显高于分泌期（ P＜0.05） ,卵巢子宫内膜异位症在位内膜组、异位内膜组增殖期与分泌期比较,差异无统计学意义（ P＞0.05）。结论自噬参与了卵巢子宫内膜异位症的发病,自噬活性的改变可能与子宫内膜异位症的发展及病损程度相关。     

喉癌p53蛋白表达的临床意义

采用ＬＳＡＢ免疫组化法，以抗ｐ５３蛋白单克隆抗体ＤＯ－１检测４４例喉鳞癌ｐ５３蛋白表达情况。结果显示：２５例（５６．９％）喉鳞癌中ｐ５３蛋白呈阳性表达，对照组１６例声带息肉全部呈阴性表达。在与临床指标的相关性分析中发现，ｐ５３蛋白表达与喉癌临床分型、分期及淋巴结转移不相关，而与肿瘤分化程度密切相关（Ｐ＜０．０１）。结果表明：ｐ５３蛋白表达与喉癌的发生有关，可作为喉癌诊断和鉴别诊断的辅助依据，并对肿瘤恶性程度的评估及预后判定有一定价值。     

基质金属蛋白酶-2与喉癌的相关性研究

目的检测喉鳞癌组织中基质金属蛋白酶－２（ＭＭＰ－２）的表达情况,探讨其表达与喉癌临床病理关系。方法应用免疫组化法,检测４３例喉鳞癌组织中ＭＭＰ－２的表达。结果４３例喉鳞癌组织中,２９例（６７．４％）ＭＭＰ－２表达阳性,其中颈淋巴结转移组明显高于无淋巴结转移组（Ｐ〈０．０５）,深部浸润的癌巢及基底膜附近的肿瘤细胞染色尤为明显。结论ＭＭＰ－２能破坏基底膜,与喉癌浸润转移密切相关。