白细胞介素-1β与地塞米松对成纤维细胞分泌角质细胞生长因子的影响

目的 检测在体外培养的人正常口腔黏膜及口腔扁平苔藓(OLP)黏膜成纤维细胞中加入不同浓度的人白细胞介素-1β(IL-1β)和地塞米松(DEX)后,对成纤维细胞分泌和表达角质细胞生长因子(KGF)的影响.方法 将IL-1β和DEX配制成3个浓度梯度,分别加入到体外培养的人正常口腔黏膜和OLP黏膜成纤维细胞中,收集培养72...     

白细胞介素-1β（IL-1β）和地塞米松对成纤维细胞增殖的影响

目的：检测白细胞介素-1β（IL-1β）和地塞米松（DEX）对体外培养的口腔正常黏膜与口腔扁平苔藓（OLP）黏膜成纤维细胞增殖的影响。方法：应用MTT法检测3种浓度梯度的IL-1β和DEX对体外培养的14例OLP黏膜成纤维细胞和11例正常口腔黏膜成纤维细胞增殖活性的影响。结果：MTT测定结果显示,IL-1β对OLP黏膜成纤维细胞和正常口腔黏膜成纤维细胞的增殖均有促进作用,且随浓度增加促进作用增强;相反,DEX却抑制两种成纤维细胞的增殖,浓度越高抑制作用越强。结论：白细胞介素-1β可促进成纤维细胞的增殖,地塞米松则抑制成纤维细胞的增殖。     

口腔扁平苔藓黏膜成纤维细胞KGF的表达水平检测

目的 检测体外培养的正常口腔黏膜与口腔扁平苔藓黏膜成纤维细胞表达和分泌的角质细胞生长因子(KGF)的量。方法 应用酶联免疫吸附剂测定(enzyme-linked immunosorbnent assay,ELISA)技术检测体外培养的14例口腔扁平苔藓黏膜成纤维细胞和11例正常口腔黏膜成纤维细胞分泌的角质细胞生长因子蛋白的情况。提取各组细胞RNA,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测KGF mRNA表达量的变化。结果 ELISA测定结果显示,扁平苔藓黏膜成纤维细胞分泌角质细胞生长因子蛋白量低于正常口腔黏膜,经检验差异有统计学意义(P0.05)。结论 与正常口腔黏膜相比,口腔扁平苔藓黏膜成纤维细胞分泌的角质细胞生长因子蛋白水平降低,而在基因水平上没有变化。     

甘草甜素对人颊黏膜成纤维细胞炎症反应的初步研究

目的：观察甘草甜素对经脂多糖刺激后体外培养的人颊黏膜成纤维细胞炎症反应的作用。方法：取正常人颊黏膜,组织块法体外培养颊黏膜成纤维细胞,加入不同浓度的甘草甜素,培养24h、48h、72h后,经MTT法检测每孔的光密度值（OD）。用脂多糖（LPS）对细胞进行干预,用来模拟口腔扁平苔藓（0LP）的炎症状态。以第4代成纤维细胞为对照组、加入脂多糖为炎症组、同时加入脂多糖和甘草甜素为实验组,用ELISA法分别检测三组白细胞介素-6（IL-6）的浓度。结果：MTT法测出甘草甜素在一定范围内浓度越高、时间越长,抑制细胞的增殖作用就越强;ELISA法检测出炎症组较对照组上清液中IL-6浓度明显升高,实验组较炎症组上清液中IL-6浓度明显降低。结论：甘草甜素可明显抑制由脂多糖刺激的人颊黏膜成纤维细胞分泌IL-6。甘草甜素在治疗OLP的炎症反应中有重要作用。     

HGF在人牙周膜成纤维细胞中的表达

目的：观察HGF在人牙周膜成纤维细胞中的表达及探讨转化生长因子-β1（TGF-β1）、白细胞介素-1β（IL-1β）与HGF之间的关系。方法：分别采用IL-1β梯度浓度、最佳干预浓度和TGF-β1梯度浓度干预第5代人牙周膜成纤维细胞,并运用酶联免疫技术检测人牙周膜成纤维细胞的上清液中HGF的表达。结果：经IL-1β单独作用,人牙周膜成纤维细胞的上清液中HGF的含量较空白对照组高,并优选出IL-1β的最佳干预浓度为10 ng/mL。当一定浓度的TGF-β1和10 ng/mL的IL-1β联合干预人牙周膜成纤维细胞,该细胞上清液中HGF的含量较单独IL-1β作用组低。结论：TGF-β1能够抑制IL-1β诱导的人牙周膜成纤维细胞分泌HGF。     

Smad蛋白在口腔黏膜肌成纤维细胞转分化中的作用

目的:探索口腔黏膜成纤维细胞向肌成纤维细胞分化的机制。方法:利用免疫组织化学方法检测成纤维细胞表达α平滑肌肌动蛋白之前表达Smad蛋白的改变。结果:口腔黏膜成纤维细胞(FB)组核阳性率为(17.38±10.36)%;FB与口腔黏膜角质形成细胞(KC)共同培养24hSmad2/3蛋白核表达为(35.33±7.68)%,与FB组相比p=0.015结论:口腔黏膜FB向肌成纤维细胞(MFB)分化的机制与TGFβ-Smad信号途径有关。。     

IP-10和IL-6在口腔扁平苔藓中表达的研究

目的:检测正常口腔黏膜与口腔扁平苔藓(OLP)黏膜的上皮和固有层结缔组织中干扰素诱导蛋白10(IP-10)、细胞因子白细胞介素-6(IL-6)mRNA的表达,探讨其在OLP中的作用。方法:应用荧光实时定量RT-PCR技术检测10例OLP黏膜和6例正常口腔黏膜的上皮和固有层结缔组织中IP-10、IL-6mRNA的表达量。结果:OLP黏膜上皮和固有层结缔组织中IP-10、IL-6mRNA的表达均较正常口腔黏膜明显升高(P<0.05),但IP-10、IL-6mRNA的表达量没有明显差异(P>0.05)。结论:OLP组织中趋化因子IP-10、细胞因子IL-6表达量改变可能与其发生发展有一定关系。     

TNF-α和槟榔碱对口腔黏膜成纤维细胞增殖和羟脯氨酸蛋白表达的影响及姜黄素对其影响的作用

目的:探讨TNF-α和槟榔碱对口腔黏膜成纤维细胞增殖和羟脯氨酸蛋白表达的影响及姜黄素对其影响的作用。方法:体外培养口腔黏膜成纤维细胞,分别用100～10 000 U/mL TNF-α和10～40μg/mL槟榔碱作用于细胞24～72 h, CCK-8实验检测细胞增殖,ELISA测定细胞中羟脯氨酸的表达。用5～40μmol/L的姜黄素作用于2种处理的细胞,检测细胞增殖和羟脯氨酸蛋白的表达。结果:TNF-α促进细胞增殖和羟脯氨酸蛋白表达(P<0.05),槟榔碱抑制细胞增殖和羟脯氨酸蛋白表达(P<0.05)。40μmol/L的姜黄素作用于TNF-α和槟榔碱刺激的口腔黏膜成纤维细胞,在24 h和48 h时抑制细胞增殖(P<0.05)。不同浓度的姜黄素作用于TNF-α和槟榔碱刺激的口腔黏膜成纤维细胞,均能抑制羟脯氨酸合成(P<0.05)。结论:TNF-α可促进口腔黏膜成纤维细胞增殖和羟脯氨酸蛋白表达,槟榔碱能抑制口腔黏膜成纤维细胞增殖和羟脯氨酸蛋白表达,较高浓度姜黄素能减弱TNF-α的刺激作用,增强槟榔碱的抑制作用。     

IL-lra对IL-1β诱导人牙龈成纤维细胞分泌IL-6的拮抗作用

目的:研究白细胞介素-1受体拮抗剂对IL-1β所介导生物学功能的影响,为进一步临床应用提供理论依据.方法:采用细胞培养技术和ELISA夹心法.结果:经IL-1β单独作用,牙龈成纤维细胞培养上清液中IL-6含量明显增高,当一定浓度的IL-lra与1ug/L IL-1β共同作用人牙龈成纤维细胞后,培养上清液中IL-6的含量比单独IL-1β作用组低.结论:IL-lra能够抑制IL-l诱导的人牙龈成纤维细胞分泌IL-6.     

低分子肝素对口腔黏膜成纤维细胞释放IL-8的影响

目的：探讨低分子肝素对脂多糖诱导的人颊黏膜成纤维细胞分泌IL-8的影响。方法：原代培养正常人颊黏膜成纤维细胞,脂多糖刺激诱发炎症。不同浓度低分子肝素作用于炎症模型。采用ELISA方法检测细胞上清液中IL-8的变化。结果：脂多糖刺激后人颊黏膜成纤维细胞IL-8的表达高于正常对照组3 h（410.55 pg/mL与221.88pg/mL,P〈0.05）;低分子肝素组（1 U/mL）IL-8分泌量在6 h（552.85 pg/mL与885.81 pg/mL,P〈0.05）、12 h（532.94 pg/mL与891.24 pg/mL,P〈0.05）、24 h（405.96 pg/mL与887.88 pg/mL,P〈0.05）较炎症组显著降低。结论：低分子肝素能显著抑制脂多糖刺激后人颊黏膜成纤维细胞IL-8的释放。     

槟榔碱对口腔黏膜肌成纤维细胞分化的影响

目的探讨口腔黏膜下纤维性变组织中肌成纤维细胞的来源。方法通过体外口腔黏膜角质形成细胞和成纤维细胞共培养，用免疫组化、反转录聚合酶链反应等方法观察α-平滑肌肌动蛋白的表达。结果体外培养的口腔黏膜下纤维性变成纤维细胞中α-平滑肌肌动蛋白的阳性率为（85.80±3.56）％，正常口腔黏膜成纤维细胞中阳性率为（3.82±0.76）％。槟榔碱直接干预成纤维细胞后α-平滑肌肌动蛋白的表达与对照组相比差异无统计学意义（P〉0.05）；角质形成细胞与成纤维细胞共同培养组成纤维细胞中α-平滑肌肌动蛋白的表达增强；角质形成细胞经槟榔碱预处理后与成纤维细胞共同培养组α-平滑肌肌动蛋白的表达强于无干预共同培养组。结论口腔黏膜下纤维性变组织中成纤维细胞向肌成纤维细胞分化可能是槟榔成分与角质形成细胞共同作用的结果。     

口腔黏膜扁平苔藓患者口腔黏膜组织中cyclin D1,ki-67及凋亡的表达研究

目的　检测口腔黏膜扁平苔藓 (OLP)患者口腔黏膜上皮凋亡增殖状况及细胞周期调控蛋白表达水平的变化 ,探讨OLP发病机制。方法　采用甲基绿 -派诺宁法及免疫组化SABC法分别检测 30例OLP患者及 2 0例正常对照者口腔黏膜组织的凋亡情况及细胞周期蛋白 (cyclinD1)、增殖细胞核抗原 (ki 6 7)的表达并进行细胞计数及统计学分析。结果　OLP组与对照组凋亡、ki 6 7、cyclinD1表达阳性率差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ;与凋亡呈正相关。结论　OLP病变中 ,部分细胞受损进入凋亡性细胞死亡 ,同时发生了细胞周期紊乱、细胞增殖     

Survivin在口腔扁平苔藓癌变过程中的表达

目的 探讨凋亡抑制因子Survivin在口腔扁平苔藓(OLP)、口腔鳞状细胞癌(OSCC)中的表达及意义。方法采用免疫组织化学SP法检测40例糜烂型OLP组织、40例OSCC组织以及26例正常口腔黏膜组织中Survivin蛋白的表达,并分析其意义。结果Survivin蛋白在正常口腔黏膜、糜烂型OLP及OSCC中的表达率...     

转化生长因子β受体在口腔扁平苔藓CD8+T细胞中的表达

目的 研究转化生长因子β受体(transforming growth factor-β receptor,TGF-βR)在口腔扁平苔藓(oral lichen planus,OLP)组织中CD8+T细胞中的表达,探讨TGF-βR在OLP发病中的作用.方法 采用免疫组化双标记法检测28例OLP组织中CD8+T细胞TGF-βR Ⅰ和TGF-βR Ⅱ蛋白的表达.以10例临床正常口腔黏膜(normal oral mucosa,NOM)为对照组.结果 OLP组织中CD8+及TGF-βR Ⅰ、CD8+及TGF-βR Ⅱ双标记细胞的阳性率分别为(8.82±9.98)%、(1.11±2.94)%.NOM组织中双标记细胞均为零.OLP组CD8+T细胞中TGF-βRⅡ表达与NOM组相比差异无统计学意义(P＞0.05),TGF-βR Ⅰ与NOM组相比表达增强.结论 提示OLP组织CD8+T细胞存在TGF-β信号传导异常.这可能是CD8+T细胞缺乏有效抑制、致使OLP慢性炎性反应长期持续的因素之一.     

慢病毒载体感染人口腔黏膜成纤维细胞稳定表达绿色荧光蛋白的研究

目的：确立慢病毒载体高效感染人口腔黏膜成纤维细胞的感染条件,为进一步应用基因工程技术研究人口腔黏膜成纤维细胞奠定基础。方法：采用组织块法培养原代人口腔黏膜成纤维细胞,免疫组化SP法鉴定细胞类型,将携带绿色荧光蛋白基因的慢病毒载体以不同感染复数（multiplicity of infection,MOI）感染纯化细胞,并设置不同感染条件,感染4 d后于荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达情况。结果：成功分离纯化得到人口腔黏膜成纤维细胞,当慢病毒感染复数为30,polybrene浓度为8μg/mL,并加入感染增强液时,可达到较高的感染效率,满足后续实验需要。结论：慢病毒载体可高效感染人口腔黏膜成纤维细胞,携带的绿色荧光蛋白基因可在成纤维细胞内稳定表达。     

The expression and significance of interleukin-35 receptor in oral lichen planus

目的 通过检测白细胞介素35受体（IL-35R）两亚基糖蛋白130（gp130）、白细胞介素12受体β2（IL-12Rβ2）及信号转导和转录激活因子（STAT）1、STAT4在口腔扁平苔藓（OLP）组织中的表达,探讨IL-35R在OLP病损形成和发展中的作用及意义。方法 收集41例OLP组织（OLP组）和15例正常口腔黏膜组织（对照组）为研究对象。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测组织中gp130、IL-12Rβ2、STAT1、STAT4 mRNA的表达水平,免疫组织化学（IHC）检测组织中gp130、IL-12Rβ2蛋白的表达及分布,并分析gp130、IL-12Rβ2蛋白表达与OLP临床特征的关系。结果 1）OLP组gp130、IL-12Rβ2、STAT1、STAT4 mRNA的相对表达量均高于对照组（P<0.05）。2）OLP组gp130、IL-12Rβ2蛋白的阳性表达率均高于对照组（P<0.05）,且gp130、IL-12Rβ2蛋白在OLP组织中的表达呈正相关（r=0.984,P<0.001）。3）糜烂型OLP组织gp130、IL-12Rβ2蛋白的阳性表达率高于非糜烂型（P<0.05）。结论 IL-35R及STAT在OLP组织中表达上调,且IL-35R的表达与OLP的临床分型有关,提示IL-35R可能在OLP病损形成及发展中起重要作用。     

角质细胞生长因子对口腔黏膜上皮细胞凋亡的作用研究

目的 研究不同浓度角质细胞生长因子（KGF）对口腔黏膜上皮细胞凋亡的作用,为探讨KGF在口腔黏膜病发生发展中的作用提供依据。方法 将不同浓度的KGF（对照组0 ng·mL-1,实验1组5 ng·mL-1,实验2组25 ng·mL-1,实验3组50 ng·mL-1）分别加入体外培养的口腔黏膜上皮细胞,培养12、24、48 h后,倒置显微镜下观察其对细胞形态的影响,并用流式细胞仪检测细胞凋亡情况,荧光实时定量检测细胞凋亡相关基因Bcl-2、Bax mRNA的表达水平。结果 1）实验组较对照组细胞贴壁明显,且48 h时实验3组细胞核仁明显。2）培养48 h时,4组之间的细胞凋亡率、Bcl-2 mRNA、Bax mRNA表达均有统计学差异,随着KGF浓度的增加,细胞凋亡率和Bax mRNA表达逐渐降低,Bcl-2 mRNA表达逐渐升高（P<0.05）。结论 KGF可通过上调Bcl-2 mRNA和下调Bax mRNA的表达抑制上皮细胞的凋亡。     

IL-1β作用于人牙周膜成纤维细胞后TRAF6蛋白表达的研究

目的通过研究IL-1β干预下,TRAF6在人牙周膜成纤维细胞中的蛋白表达,为细胞因子网络对细胞功能调控作用的研究提供新资料。方法原代培养人牙周膜成纤维细胞,并进行免疫学鉴定。取5～8代细胞以IL-1β梯度浓度干预,采用免疫组织化学方法检测TRAF6在人牙周膜成纤维细胞中的表达。结果TRAF6在正常的人牙周膜成纤维细胞中呈阴性表达,IL-1β干预后,TRAF6呈阳性表达,并且随IL-1β干预的浓度的升高而增强。结论IL-1β作用后,TRAF6在牙周膜成纤维细胞出现表达,且与IL-1β作用浓度相关。     

KGF对口腔黏膜上皮细胞中增殖相关基因PCNAmRNA的作用

目的：检测不同浓度角质细胞生长因子（KGF）对体外培养的口腔黏膜上皮细胞形态学及对上皮细胞增殖相关基因PCNAmRNA表达的影响。方法：体外培养的口腔黏膜上皮细胞加入含不同浓度KGF（0ng／mL,5ng／rnL,25ng／mL,50ng／mL）的D—KFSM,分别培养12h、24h、48h后观察细胞形态改变并用荧光实时定量检测各组细胞内增殖相关基因PCNAmRNA的表达。结果：①相同时间段实验组较对照组上皮细胞贴壁明显,培养48h实验3组（50ng／mL）较其他组细胞核仁明显;②12h时,实验组较对照组上皮细胞内PCNAmRNA表达增加,但各实验组间PCNAmRNA表达逐渐降低（P〈0．05）;③24h时实验组较对照组PCNAmRNA表达增加,但各实验组间无统计学差异护〉0．05）：④48h时,实验组较对照组PCNAmRNA表达增加,且呈剂量依赖性（P〈0．05）。结论：外源性KGF可上调口腔黏膜上皮细胞增殖相关基因PCNAmRNA的表达,且在不同时间段、不同浓度调控作用存在差异。     

卡介苗多糖核酸对口腔扁平苔藓病损区IL-12p40表达的影响

目的探讨卡介苗多糖核酸(BCG-PSN)对口腔扁平苔藓(OLP)病损区培养角质细胞分泌细胞因子IL-12p40的影响和意义。方法取经病理诊断为口腔扁平苔藓病损组织做细胞培养:分为OLP组、OLP+BCG-PSN组,每组6例,在角质形成细胞长满时加入BCG-PSN,用同等体积生理盐水作为阴性对照,在培养6h、12h、24h、48h分别收集培养细胞上清液,ELISA法检测IL-12p40浓度变化情况。结果 1整个细胞生长期间为单一的角质形成细胞,细胞为椭圆形或多角形,呈现典型的铺路石状,符合上皮角质形成细胞生长形态特征。2在不同的培养时段内,BCG-PSN共同培养刺激角质形成细胞产生IL-12p40的减少量与对照组相比均有显著差异(6h F=7.87 P=0.0186,P<0.05;12h F=10.31 P=0.0093 P<0.05;24h F=16.57 P=0.0022 P<0.05;48h F=17.3 P=0.002 P<0.05)。结论 BCGPSN可能通过对OLP角质形成细胞分泌IL-12p40有直接的抑制效果起到减轻T细胞引起的直接损伤、降低局部自身免疫反应的作用。