表皮生长因子受体单抗MAb225对舌癌细胞DNA放射后损伤修复的影响

目的 研究表皮生长因子受体(EGFR)单克隆抗体MAb225对放射所致舌癌细胞DNA损伤修复的影响及其作用机制.方法 应用单细胞凝胶电泳的方法检测MAb225对舌鳞癌细胞Tca8113放射后DNA双链断裂所致的尾矩,半定量逆转录多聚酶链反应和Western blot检测MAb225对DNA蛋白激酶Ku70、Ku80表达...     

MAb225影响Tca8113细胞放射敏感性的机制探讨

目的：探讨表皮生长因子受体单抗调控Tca8113细胞放射敏感性的作用机制.方法：以不同浓度的MAb225处理Tca8113细胞,采用流式细胞术和双荧光染色分析法,观察细胞放射后凋亡的变化;以碱性单细胞凝胶电泳法检测细胞在放射后DNA损伤修复的变化,应用流式细胞法分析细胞周期的变化,分光光度法检测细胞内GSH水平的变化.结果：应用0.5μg/ml MAb225或6Gy放射处理Tca8113细胞,可使细胞的凋亡提高1倍左右,而联合应用可使凋亡比例上升至5～6倍（F检验）;MAb225处理的细胞放射后DNA损伤的修复慢于未处理组,两者的慧尾长度在放射后的30min内均有显著性差异（t检验,P＜0.05）;流式细胞分析显示,G1期细胞比例上升而S期细胞比例下降;MAb225处理的细胞,其GSH水平明显低于未处理的细胞,两者间有显著性差异（t检验,P＜0.05）.结论：MAb225影响细胞放射敏感性的机制与MAb225诱导放射后凋亡、抑制DNA修复、改变细胞周期再分配和影响GSH水平有关.     

POLQ表达降低对SACC-83细胞DNA损伤敏感性的影响

目的 ：探讨DNA损伤环境中抑制POLQ对唾液腺腺样囊性癌（salivary adenoid cystic carcinoma,SACC）细胞SACC-83增殖及克隆形成能力、细胞周期及DNA损伤修复通路的影响。方法：应用shRNA(short hairpin RNA)瞬时转染方法构建POLQ敲减的SACC-83细胞模型，利用qRT-PCR及Western免疫印迹实验检测POLQ干扰效率。应用不同浓度DNA损伤剂依托泊苷（etoposide,ETP/VP-16-213）诱导SACC-83细胞发生DNA损伤，利用Western免疫印迹实验检测γH2AX的表达水平，评价DNA双链断裂水平。在不同浓度依托泊苷诱导形成的DNA损伤环境中，通过CCK-8细胞增殖实验检测抑制POLQ对SACC-83细胞增殖能力的影响。采用平板克隆实验观察抑制POLQ对SACC-83细胞克隆形成能力的影响，应用流式细胞仪分析抑制POLQ对SACC-83细胞周期的影响，应用Western免疫印迹实验检测抑制POLQ对SACC-83细胞γH2AX、RAD51及PARP1表达水平的影响。采用SPSS 20.0软件包对数据...     

靶向抑制 Rad50提高头颈部鳞癌细胞放疗敏感性的初步研究

目的：探讨靶向抑制 Rad50对头颈部鳞癌细胞系放疗敏感性的影响。方法：用 siRNA 技术建立并筛选 Rad50靶向抑制的 Tca8113和 OSCC-15稳转细胞系,联合应用单次小剂量放疗（2 Gy）处理细胞,Western blot 检测 Rad50的表达变化;通过Comet assay 检测细胞核 DNA 的双链断裂情况,细胞克隆形成实验检测细胞存活分数的变化;Telomere FISH 检测细胞端粒长度的变化。结果：与单次小剂量放疗（2 Gy）处理组相比较,Rad50靶向抑制联合放疗处理的 Tca8113和 OSCC-15稳转细胞系, Rad50蛋白表达显著降低,细胞核 DNA 的双链断裂损伤明显加重,细胞增殖速率明显减慢,细胞核内染色体端粒的长度均明显变短。结论：靶向抑制 Rad50可以显著增强 Tca8113和 OSCC-15细胞的放疗敏感性。     

突变型Nbs1基因转染对头颈癌放疗敏感性影响的实验研究

目的探讨突变型Nbs1基因转染对头颈癌细胞放射敏感性的影响。方法用突变型Nbs1腺病毒载体转染头颈癌细胞株JHU006,同时给予2 Gy Co^60γ射线照射,24h后用MTF法测定细胞生长曲线,以及中性彗星法检测癌细胞DNA双链断裂程度。结果JHU006细胞株转染突变型Nbs1基因并配合放射治疗后,癌细胞处于生长停滞状态：中性彗星实验显示,该组癌细胞平均尾力矩值明显增大。结论突变型Nbs1基因转染可以抑制头颈部DNA双链断裂癌细胞的损伤修复功能．因而显著增加了癌细胞放疗敏感性。     

枸杞多糖和原花青素对小鼠成釉细胞DNA损伤作用的研究

目的：探讨枸杞多糖和原花青素对小鼠成釉细胞DNA损伤的保护作用。方法：小鼠成釉细胞以100．00、200．00、400．00mg／L枸杞多糖作为枸杞多糖作用组,以10．00、25．00、50．00mg／L原花青素作为原花青素作用组。细胞染毒24h后,采用单细胞凝胶电泳技术（SCGE）检测DNA单链断裂情况。结果：与对照组比较,100．00、200．00和400．00mg／L枸杞多糖作用组小鼠成釉细胞尾长、Olive尾距和尾长／头长值均明显下降,差异具有统计学意义（P〈0．05）。100．00、400．00mg／L枸杞多糖作用组尾DNA％较对照组明显下降（P〈0．05）。与对照组比较,10．0HD、25．00、50．00mg／L原花青素作用组小鼠成釉细胞DNA损伤的尾长、Olive尾矩、尾DNA％、尾长／头长值均较对照组均显著性下降,差异具有统计学意义∽〈0．05）。以Olive尾矩为观察指标,100．00mg／L枸杞多糖作用组的Olive尾矩明显低于200．00mg／L和400．00mg／L枸杞多糖作用组（尸〈0．05）,10．00mg／L原花青素作用组的Olive尾矩明显低于25．00mg／L和50．00mg／L原花青素作用组（尸〈0．05）。结论：100．00～400．00mg／L枸杞多糖和10．00～50．00mg／L原花青素对小鼠成釉细胞DNA损伤具有较好的保护作用,以100．00mg／L枸杞多糖、10．00mg／L原花青素的保护作用相对较好。     

抑制MRN复合体功能增强头颈癌放疗敏感性研究

目的：测定突变型Nbs1基因转染头颈癌细胞后对放射敏感性的影响。方法：用突变型Nbs1腺病毒载体转染头颈癌细胞株JHU006,同时给予Co^60γ射线照射2Gy,于24h后,分别用MTT法测定细胞生长曲线,以及中性彗星法检测癌细胞DNA双链断裂程度。结果：JHU006细胞株在转染突变型Nbs1基因后,再配合放射治疗,癌细胞生长处于停滞状态。中性彗星实验显示,该组癌细胞平均尾力矩值明显增大。结论：突变型Nbs1基因转染可以抑制头颈癌细胞DNA双链断裂损伤的修复功能,因而显著增加了癌细胞放疗敏感性。     

突变型Nbs1基因转染对头颈癌化疗敏感性的影响

目的:探讨突变型Nbs1基因转染对头颈癌细胞化疗敏感性的影响。方法:用突变型Nbs1腺病毒载体转染头颈癌细胞株JHU006,同时给予顺铂处理,24 h后,用MTT法测定癌细胞生长曲线,中性彗星法检测癌细胞DNA双链断裂程度。结果:JHU006细胞株在转染突变型Nbs1基因加顺铂治疗后,细胞生长处于停滞状态,至第6天大部分细胞死亡;中性彗星实验显示,该组癌细胞平均尾力矩值明显增高。结论:突变型Nbs1基因转染可显著抑制头颈癌细胞生长,并阻断了DNA双链断裂损伤的修复,因而增加了头颈癌细胞的化疗敏感性。     

修复蛋白Ku与口腔肿瘤相关性研究进展

口腔颌面部是肿瘤的好发部位之一,发病率呈现逐年递增的趋势,严重影响患者的生存质量。以往研究表明,DNA损伤与肿瘤的发生发展密切相关。DNA损伤发生后,机体识别损伤类型并启动相应的修复机制以维持机体的正常状态,其中修复蛋白Ku以复合体形式由Ku70和Ku80两个子单位组成,在保持真核生物的基因稳定性和遗传完整性中扮演重要角色。近年来诸多研究发现,Ku在癌组织和癌旁组织中呈现明显的差异性表达。文章就Ku在口腔肿瘤中的表达情况、作用机制、对肿瘤进展速度及预后的影响等做一综述。     

脂多糖诱导牙髓细胞DNA双链断裂的研究

目的:探讨低剂量条件下脂多糖诱导牙髓细胞DNA损伤方法,为研究脂多糖诱导牙髓细胞DNA双链断裂及DNA修复提供实验模型。方法:10 μg/L脂多糖连续刺激牙髓细胞1、3、6次后,采取MTT及TUNEL分别检测其对牙髓细胞增殖及凋亡的作用;采用q-PCR及免疫印迹检测γ-H2A.X的mRNA及蛋白水平的表达;使用免疫荧光及免疫组化法观测γ-H2A.X在体内、外牙髓细胞的表达。结果:与对照组相比,10 μg/L脂多糖连续刺激对牙髓细胞增殖及凋亡均无显著性差异;脂多糖连续刺激6次后细胞免疫荧光显示在细胞核检测到γ-H2A.X的阳性表达,且蛋白及mRNA水平的表达较对照组有显著性增加(P<0.05);免疫组化结果表明在脂多糖诱导4、6、8 d后,γ-H2A.X在大鼠牙髓组织较对照组表达水平显著升高(P<0.05)。结论:低剂量脂多糖连续刺激可诱导牙髓细胞产生DNA双链断裂。     

Effect of MAb225 on radiosensitivity of Tca8113 tongue squamous cell carcinoma]

OBJECTIVE: The purpose of this study was to invest the effect of epidermal growth factor receptor monoclonal antibody MAb225 on radiosensitivity of tongue squamous cell carcinoma cell Tca8113. METHODS: Tca8113 cells were treated with different concentrations of MAb225. Radiation dose survival curve was generated from clonogenic survival assay. SERPD0 and survival faction (SF2) was analysed by single hit multi-target (SHMT) radiobiological model using RADMEDIC software. Nude mice with Tca8113 tumor xenografts were treated with MAb225, radiation treatment or both of them. Tumor responses were assessed by tumor growth delay, and t test was used for statistical analysis. RESULTS: MAb225 enhanced the radiosensitivity of Tca8113 cells. SERD0 of Tca8113 cells treated with 0.5 mg/L MAb225 was 1.23. The survival fraction of cells treated with MAb225 was significantly decreased. Tumor radioresponse could be enhanced by MAb225 (P < 0.05). CONCLUSION: MAb225 could enhance radiosensitivity of tongue squamous cell carcinoma cell.     

MAb225对Tca8113舌鳞癌细胞放射敏感性的影响

目的　探索表皮生长因子受体(EGFR)单克隆抗体MAb225对舌鳞癌细胞Tca8113的放射敏感性的调控作 用。方法　不同浓度的MAb225处理Tca8113舌鳞癌细胞,通过集落形成实验单靶多击模型拟合放射生存曲线,分 析细胞的增敏比(SERD0)和存活分数(SF2)的变化。同时,建立裸鼠移植瘤模型,单独及联合应用MAb225和放射处 理裸鼠移植瘤,通过生长延缓实验观察肿瘤生长变化,并进行统计学分析。结果　MAb225有明显的放射增敏作 用,0·5 mg/LMAb225作用后的SERD0为1·23,在一定的范围内,其增敏作用与剂量存在正相关;MAb225明显提高放 射对裸鼠移植瘤的杀伤作用(P<0·05)。结论　MAb225可以提高舌鳞癌细胞Tca8113的放射敏感性。     

线粒体肿瘤抑制基因1在舌鳞状细胞癌组织中的表达及意义

目的 探讨线粒体肿瘤抑制基因1（MTUS1）在舌鳞状细胞癌（TSCC）中的表达及其临床意义。方法 应用免疫组织化学检测80例TSCC、27例舌白斑和13例正常舌黏膜中MTUS1的表达,并对其表达水平进行统计学分析。定量反转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测正常舌黏膜与TSCC中MTUS1亚型的表达水平并进行统计学分析。Kapalan-Meier法分析TSCC患者生存率,并统计分析MTUS1在TSCC中的表达与生存率之间的关系。SPSS 13.0统计软件分析数据。结果 在正常舌黏膜上皮中MTUS1主要表达于棘层细胞胞浆内,部分位于胞核。正常舌黏膜中MTUS1的表达水平明显高于舌白斑（t = 5.876,P=0.037）和TSCC（t = 7.638,P=0.000 83）;舌白斑中MTUS1的表达明显高于TSCC,其差异有统计学意义（t = 5.281,P=0.0042）。MTUS1在高分化TSCC组织中的表达高于中分化和低分化者,但表达差异无统计学意义（F = 1.873,P=0.071）。定量RT-PCR检测显示,ATIP1、ATIP3a和ATIP3b是舌黏膜组织中MTUS1/ATIP的主要亚型;与正常舌黏膜相比,TSCC组织中MTUS1/ATIP亚型的表达明显降低,差异有统计学意义（t = 5.627,P=0.0153）。高表达MTUS1的TSCC患者生存率明显高于低表达者（F = 5.876,P=0.0286）。结论 MTUS1在TSCC的发生、发展中起着重要作用。     

在口腔鳞状细胞癌中Pokemon、Ku70的表达及临床病理学意义的研究

目的：研究口腔鳞状细胞癌组织中Pokemon、Ku70的表达及其临床病理学意义。方法：采用免疫组化En-vision二步法检测Pokemon、Ku70在47例口腔鳞状细胞癌组、20例正常口腔黏膜组中的表达。结果：1）Pokemon在口腔鳞状细胞癌组及正常口腔黏膜组中阳性表达率分别为：68.1%（32/47）、25.0%（5/20）,P〈0.05。高分化组与中低分化组Pokemon的阳性表达率分别为45.0%、85.2%（P〈0.05）。不同TNM的口腔鳞状细胞癌组织中,Ⅰ期＋Ⅱ期组、Ⅲ期＋Ⅳ期组Pokemon的阳性表达率分别为88.0%、45.5%（P〈0.05）。有淋巴结转移组、无淋巴结转移组Pokemon的阳性表达率分别为86.7%、35.5%（P〈0.05）。2）Ku70在口腔鳞状细胞癌组及正常口腔黏膜组中阳性表达率分别为：61.7%（29/47）、30.0%（6/20）,P〈0.05。高分化组与中低分化组Ku70的阳性表达率分别为55.0%、66.7%（P〉0.05）。不同TNM分期的口腔鳞状细胞癌组织中,Ⅰ期＋Ⅱ期组、Ⅲ期＋Ⅳ期组Ku70的阳性表达率分别为72.0%、50.0%（P〉0.05）。有淋巴结转移组、无淋巴结转移组Ku70的阳性表达率分别为73.3%、35.5%（P〈0.05）。结论：提示Pokemon及Ku70在口腔鳞状细胞癌发生发展中起重要作用;Pokemon与Ku70可能成为判定口腔鳞状细胞癌预后的生物标志物。     

舌鳞癌SENP5的表达及其临床意义

目的：探讨小泛素样修饰物特异的蛋白酶5（SUMO specific protease5,SENP5）在舌鳞状细胞癌中的表达及意义。方法：采用免疫组化方法对33例原发舌鳞癌及癌旁上皮中SENP5的表达进行检测。应用SPSS11．0软件包对免疫组化半定量检测结果与有关临床特征和病理指标间的关系进行Wilcoxon检验和Spearman等级相关检验。另使用钙离子对人舌癌细胞系Tca8113进行诱导分化,实时定量PCR和细胞免疫化学检测SENP5的表达改变。结果：舌鳞癌中SENP5的表达高于癌旁上皮（P=0．000）,表达水平与鳞癌的分化程度相关（P=0．022）;钙离子诱导分化可使人舌癌细胞系Tca8113中SENP5的表达增加。结论：SENP5的表达水平与舌鳞癌的分化相关,提示其与肿瘤的发生、发展具有一定关系．     

舌鳞状细胞癌中锰超氧化物歧化酶的表达及意义

目的探讨锰超氧化物歧化酶（SOD2）在舌鳞癌中的表达及意义。方法对19例正常舌黏膜、80例舌鳞癌的石蜡切片用免疫组化检测SOD2的表达,同时对其表达水平进行统计学分析。结果在正常舌黏膜上皮中SOD2主要表达于基底层和棘层细胞胞浆。与正常舌黏膜比较,舌鳞癌组织中SOD2的表达明显升高,但其差异无统计学意义（P〉0.05）,发生淋巴结转移患者SOD2的表达高于未转移者（P〈0.05）;分化程度不同的患者间SOD2的表达水平差异有统计学意义（P〈0.001）,高分化组织中SOD2表达水平最高,低分化表达水平最低;不同年龄、不同性别及不同T分期患者SOD2的表达水平差异没有统计学差异。结论舌鳞癌的发生发展与SOD2表达的升高密切相关。     

mAb225与放射对舌鳞癌细胞凋亡的研究

目的:观察表皮生长因子受体单克隆抗体mAb225对肿瘤细胞放射后凋亡的影响。方法:用流式细胞、双荧光染色、电镜3种方法分析单独应用mAb225或放射,以及两者联合应用所致肿瘤细胞的凋亡,并观察其时效和量效关系。结果:0.5μg/mL mAb225和6 Gy放射都能提高肿瘤细胞1倍左右的凋亡,两者联合可以提高5～6倍,在一定范围内,凋亡比例随作用时间和剂量的增加而增加。结论:mAb225可以明显提高肿瘤细胞的放射后凋亡。     

MTUS1／ATIP1对舌鳞癌细胞增殖及凋亡的影响

目的：探讨过表达MTUS1/ATIP1对舌鳞癌细胞增殖及凋亡的影响。方法检测人舌鳞癌系UM1、SCC鄄9、SCC鄄15、Tca8113细胞株中MTUS1的表达水平。应用含ATIP1片段的质粒转染舌鳞癌细胞,48 h后MTT检测舌鳞癌细胞的增殖能力;应用流式细胞仪技术和细胞免疫荧光技术检测细胞周期和细胞凋亡率;Western blot检测舌鳞癌细胞中MTUS1、p53、ERK1/2的表达情况。结果转染MTUS1/ATIP1后细胞的增殖明显受到抑制,其抑制率约为40％（t=0.023,P＜0.05）;高表达MTUS1/ATIP1可导致舌鳞癌细胞株G1期阻滞（G1期：t=0.032,G2期：t=0.036,S期：t=0.027,P＜0.05）并诱导细胞凋亡率的明显升高,差异具有统计学意义（t=0.005,P＜0.05）。 Western blot检测显示,转染MTUS1/ATIP1后ERK的表达升高,磷酸化的ERK表达下降,p53的表达升高。结论 MTUS1可抑制舌鳞癌细胞的增殖,诱导细胞凋亡。