大鼠肾小球和系膜细胞产生转化生长因子β的研究

用标准的生物学方法检测了肾小球和系膜细胞培养上清中转化生长因子(TGF_s)的水平。结果显示:肾小球和系膜细胞均可产生一定量的TGF_s;肾小球产生的THF_s无活性,而系膜细胞产生的TGF_s大约10％有活性。鉴于TGF_s在调节细胞生长和细胞外基质代谢中的独特作用,肾小球和系膜细胞来源的rGF_s可能在维持正常肾小球结构和功能中起重要作用。     

高糖对大鼠肾小球系膜细胞ERK转导通路的影响

目的： 探讨高糖环境下系膜细胞中ERK转导途径的活性变化及其对TGF-β1 mRNA表达的影响。方法： 分离培养大鼠肾脏系膜细胞，调整培养液浓度为以下3组，即正常糖组、高糖组、甘露醇组。分别于干预24 h、48 h、72 h后用免疫细胞化学法和Western blotting法对系膜细胞中磷酸化ERK1/2（pERK1/2）的表达进行定位、定性及半定量分析，用RT-PCR法检测细胞中TGF-β1 mRNA的表达。结果： 高糖组系膜细胞中pERK1/2蛋白的表达明显高于正常糖组，并由胞浆向胞核内转移，随培养时间延长其表达上升(P<0.01)，高糖组TGF-β1mRNA的含量也明显高于正常糖组(P<0.01)，甘露醇组上述指标与正常糖组差异不显著(P>0.05)。结论： 高糖环境下系膜细胞中ERK信号转导通路可被激活，进而使TGF-β1 mRNA表达上调，这可能是糖尿病肾病系膜细胞受损、肾小球硬化的机制之一。     

肾小球系膜细胞与单核细胞趋化蛋白-1的关系

肾小球系膜细胞是最活跃的细胞固有成分,单核细胞趋化蛋白-1（monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1）是一种对单核细胞具有特异趋化功能的细胞因子,系膜细胞可表达MCP-1及其特异性受体,两者相互作用对多种肾小球病理生理过程发挥重要影响。本文简要地叙述了肾小球系膜细胞及MCP-1的生物学作用,重点分析介绍影响系膜细胞MCP-1表达的因素以及干预治疗对MCP-1表达的影响。     

ERK 1/2介导结缔组织生长因子刺激系膜细胞产生MCP-1

目的检测结缔组织生长因子（CTGF）是否刺激大鼠肾小球系膜细胞分泌单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）,并探讨其作用机制。方法应用CTGF刺激静息的培养的系膜细胞,在刺激后不同时间点应用RT-PCR方法测定MCP-1的mRNA表达,应用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定上清液中MCP-1,应用趋化试验测定上清液对单核细胞（THP-1）的趋化作用。应用Western blot测定CTGF对细胞外信号调节激酶（ERK）1／2磷酸化的作用。应用ERK1／2抑制剂PD98059预处理,观察CTGF对上清液中MCP-1分泌的影响。结果应用CTGF刺激后,系膜细胞的MCP-1的mRNA表达上升,上清液中分泌量增加。MCP-1抗体可部分阻止上清液对单核细胞的趋化作用。CTGF诱导ERK1／2磷酸化,而PD98059可抑制这一作用,并部分抑制CTGF诱导的上清液中MCP-1的分泌。结论CTGF可引起系膜细胞分泌MCP-1,其作用机制部分依赖于ERK1／2的磷酸化。     

醛固酮对肾小球系膜细胞合成分泌纤维连接蛋白和TGF-β1表达的影响

目的：研究醛固酮（ALD）及其受体拮抗剂螺内酯（SPI）对大鼠肾小球系膜细胞合成分泌纤维连接蛋白（FN），以及对转化生长因子B1（TGF-β1）基因表达的影响。方法：（1）以不同浓度的ALD（10^-11、10^-9、10^-7mol／L）及／或10^-7mol／L SPI刺激肾小球系膜细胞48h后，用ELISA法测定培养上清中FN的浓度。用半定量RT-PCR法检测该细胞中FNmRNA和TGF-β1mRNA的表达。（2）以10^-9mol／L的ALD刺激系膜细胞不同时间（24、48、72h）后，分别用上述方法测定培养上清中FN的浓度和细胞中FNmRNA和TGF-β1mRNA的表达。结果：（1）ELISA的结果显示，ALD可促进系膜细胞合成分泌FN，且呈剂量和时间依赖性，SPI能拮抗ALD的作用。（2）半定量RT-PCR的结果显示，ALD可促进系膜细胞FNmRNA和TGF-β1mRNA的表达，也呈剂量和时间依赖性，SPI也能拮抗ALD的作用。结论：ALD在蛋白和基因水平上均可促进大鼠肾小球系膜细胞合成分泌FN，及TGF-β1mRNA的表达，SPI能拮抗ALD的作用，具有一定的肾脏保护作用，从而有益于延缓肾小球硬化的进展。     

转化生长因子β介导高糖对系膜细胞生长的抑制作用

转化生长因子β介导高糖对系膜细胞生长的抑制作用南京金陵医院全军肾脏病研究所（南京２１０００２）姚建，黎磊石近来的研究表明：高糖抑制体外系膜细胞的增殖、刺激细胞外基质的产生。高糖的这些作用与转化生长因子β（ＴＧＦβ）对体外系膜细胞的作用相仿，因而推测Ｔ...     

p42/44 MAPK介导结缔组织生长因子刺激系膜细胞合成分形素

目的检测结缔组织生长因子(CTGF)是否可诱导大鼠肾小球系膜细胞分泌趋化因子分形素(fractalkine,FLK)并探讨其作用机制。方法应用CTGF刺激培养的静息系膜细胞,在刺激后不同时间点,应用RT-PCR方法测定FLKmR-NA的表达,应用ELISA法测定系膜细胞培养上清液中FLK的水平。应用趋化试验测定系膜细胞的培养上清液对单核细胞THP-1的趋化作用。应用Western blot测定CTGF对系膜细胞中磷酸化的蛋白激酶(p42/44MAPK)表达的作用。应用p42/44MAPK抑制剂PD98059或UO126预处理,观察CTGF对该上清液中FLK分泌的影响。结果应用CTGF刺激后,系膜细胞中FLK mRNA的表达上升,其培养上清液中FLK的含量增加。抗FLK抗体可部分地阻止系膜细胞的培养上清液对单核细胞的趋化作用。CTGF可诱导p42/p44MAPK磷酸化,PD98059或UO126可抑制这一作用,并部分抑制CTGF诱导的系膜细胞培养上清液中FLK的分泌。结论CTGF可刺激系膜细胞分泌FLK,其作用机制与p42/p44MAPK的磷酸化有关。     

金雀异黄素对氧化低密度脂蛋白刺激大鼠系膜细胞的保护作用

探讨金雀异黄素(Gen)作为抗氧化剂对氧化低密度脂蛋白(OX-LDL)刺激SD大鼠肾小球系膜细胞(MC)的保护作用.以体外培养的SD大鼠MC为研究对象,分为对照组、OX-LDL组和Gen组.检测胞浆内活性氧物质(ROS)、抗氧化酶(AOEs)活力和丙二醛(MDA)水平,以及核转录因子-kB(NF-kB)亚基P65核转位的表现,并明确量效关系.结果表明:OX-LDL刺激的MC与对照组相比胞浆内ROS明显增多,AOEs活力显著下降,MDA显著增加,p65发生了核转位,而Gen则能抑制上述效应,且具有时间和浓度依赖性.说明在体外培养条件下,OX-LDL刺激的MC呈现氧化应激状态.Gen能够减少实验组ROS和MDA生成,升高AOEs活力,抑制NF-kB的活化,且具有时间和浓度依赖性,其机制可能均与Gen灭活氧化应激有关,提示Gen对OX-LDL刺激下的MC具有保护作用.     

消渴颗粒剂对大鼠系膜细胞TGF-β1表达的影响

目的 :观察高糖和消渴颗粒剂含药血清对大鼠系膜细胞增殖及TGF - β1表达的影响 ,探讨消渴颗粒剂治疗糖尿病肾病的机制。方法 :采用系列筛网法分离肾小球 ,经胶原酶消化后 ,分装至塑料培养瓶中 ,在 5 %CO2 ,37℃恒温恒湿培养箱内孵育培养。 2 - 3周后进行转种。经相差显微镜、扫描电镜观察 (scaningelectronmicroscope,SEM) ,免疫细胞化学染色actin和desmin染色均为阳性 ,证实为系膜细胞后 ,进行以下实验。用 2 0mmol/L葡萄糖刺激系膜细胞 12h、2 4h、4 8h、72h和 96h ,以 5mmol/L葡萄糖为正常对照 ,MTT比色法观察系膜细胞的增殖情况…     

Leflunomide对实验性IgA肾病大鼠肾脏TGF -β1、MCP-1表达的影响

目的:分别从基因和蛋白水平研究leflunomide对实验性IgA肾病(IgAN)大鼠肾组织转化生长因子(TGF-β1)、单核细胞趋化因子(MCP-1)水平的影响,了解其作用机制。方法:建立IgAN大鼠模型,随机分成leflunomide组、强的松组、模型对照组,并同时设立正常对照组。用免疫组化、RT-PCR的方法分别检测和比较各组肾组织TGF-β1、MCP-1蛋白和基因的表达水平。结果:Leflunomide组TGF-β1、MCP-1表达均明显低于模型对照组(P<0.05);leflunomide组与激素组相比,TGF-β1、MCP-1表达无明显差异。结论:Leflunomide可通过下调TGF-β1、MCP-1在肾脏的表达,减少局部炎症反应,延缓肾脏纤维化的进程,从而保护肾脏。     

Leflunomide对实验性IgA肾病大鼠肾脏TGF-β1、MCP-1表达的影响

目的： 分别从基因和蛋白水平研究leflunomide对实验性IgA肾病（IgAN）大鼠肾组织转化生长因子（TGF-β1）、单核细胞趋化因子（MCP-1）水平的影响，了解其作用机制。 方法：建立IgAN大鼠模型，随机分成leflunomide组、强的松组、模型对照组，并同时设立正常对照组。用免疫组化、RT-PCR的方法分别检测和比较各组肾组织TGF-β1、MCP-1蛋白和基因的表达水平。 结果：Leflunomide组TGF-β1、MCP-1表达均明显低于模型对照组（P<0.05）；leflunomide组与激素组相比，TGF-β1、MCP-1表达无明显差异。 结论：Leflunomide可通过下调TGF－β1、MCP-1 在肾脏的表达，减少局部炎症反应，延缓肾脏纤维化的进程，从而保护肾脏。     

氯沙坦钾对2型糖尿病肾病大鼠肾脏TGF-β1、CD68和MCP-1 表达的影响

目的: 探讨氯沙坦钾对2型糖尿病肾病大鼠转化生长因子β₁ (transforming growth factor beta 1, TGF-β₁)、CD68(巨噬细胞标记物)和单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)表达的影响,进一步说明氯沙坦钾对2型糖尿病大鼠肾脏的保护作用。方法: 雄性SD大鼠30只,按随机数字表法分为正常对照组、模型组和治疗组,每组10只。15周后, 观测肾组织形态学、肾功能和24 h尿蛋白定量等指标的变化, 用免疫组化法检测肾脏TGF-β₁、CD68和MCP-1表达水平的变化。结果: (1)与正常对照组相比,模型组及治疗组大鼠体重均降低,血糖、甘油三酯、胆固醇及MCP-1、CD68、TGF-β₁的阳性细胞数升高,模型组24 h尿蛋白和肌酐升高;(2)与模型组相比,治疗组血肌酐、24 h尿蛋白、甘油三酯及MCP-1、CD68、TGF-β₁的阳性细胞数明显降低。结论: 在2型糖尿病肾病大鼠中氯沙坦钾可以通过减少肾组织MCP-1表达,阻止巨噬细胞的浸润,下调TGF-β₁表达,对糖尿病肾病病变起到保护作用。     

叶酸降低高同型半胱氨酸血症大鼠主动脉单核细胞趋化蛋白-1的表达

目的： 探讨补充叶酸对高蛋氨酸(Met)喂养所致的高同型半胱氨酸（Hcy）血症大鼠主动脉单核细胞趋化蛋白（MCP-1）表达的影响。方法: SD大鼠30只随机分3组:即正常对照组(control)、高蛋氨酸组(Met)、蛋氨酸＋叶酸组(Met＋folate)，每组10只，分别给予普通饲料、普通饲料加1.7%蛋氨酸、普通饲料加1.7%蛋氨酸和0.006%的叶酸，饲养45 d，测定血浆总同型半胱氨酸浓度(thcy)，用免疫组织化学染色法及蛋白免疫印迹（Western blotting）法检测大鼠的主动脉单核细胞趋化蛋白MCP-1表达。结果: 高Met组血浆总同型半胱氨酸浓度明显高于control组(P<0.01)，Met＋folate组血浆总同型半胱氨酸浓度明显低于Hhcy组(P<0.01)； 高Met组大鼠主动脉表达的MCP-1明显多于control组(46.41±4.23 vs 15.73±2.74； P<0.05)，而Met＋folate组能抑制高同型半胱氨酸血症所致的主动脉MCP-1的表达(23.12±4.40 vs 46.41±4.23; P<0.05)。结论: 大鼠喂以高Met饲料45 d，可充分诱导高Hcy血症。而叶酸补充治疗，在显著降低血浆tHcy水平的同时，也降低了高同型半胱氨酸大鼠主动脉单核细胞趋化蛋白MCP-1的表达。     

ROS介导TGF-β1诱导的大鼠系膜细胞纤维蛋白溶酶活性变化

目的:观察转化生长因子-β1(TGF-β1)对系膜细胞纤维蛋白溶解酶原激活物抑制物-1(PAI-1)表达和纤维蛋白溶酶活性的影响,并探讨反应性氧自由基(ROS)的作用。方法:以体外培养的大鼠系膜细胞为对象,应用TGF-β1刺激,部分实验中应用还原型谷胱甘肽消耗剂BSO或抗氧化剂NAC(N-acetylcysteine)进行干预处理。应用荧光素法测定细胞产生ROS量;应用Westernblot法检测PAI-1蛋白表达;应用RT-PCR和Northernblot检测PAI-1mRNA表达;应用合成的荧光素纤维蛋白溶解酶底物测定纤维蛋白溶解酶活性。结果:外源性TGF-β1可显著增加大鼠系膜细胞产生ROS,并上调细胞PAI-1蛋白和mRNA的表达以及降低纤维蛋白溶解酶活性;BSO可增强TGF-β1诱导的系膜细胞PAI-1mRNA的表达;而NAC可显著地逆转由TGF-β1诱导的PAI-1mRNA表达的上调和纤维蛋白溶解酶活性的下降。结论:TGF-β1可促使系膜细胞产生ROS,ROS作为信号传递分子介导了由TGF-β1诱导的系膜细胞PAI-1表达的上调和纤维蛋白溶解酶活性的下降。     

体外三维血管生成模型的建立及肿瘤细胞分泌的MCP-1/VEGF对该模型的影响

目的：建立体外三维血管生成模型,观察肿瘤细胞分泌的单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)/血管内皮生长因子(VEGF)对该模型血管生成的影响。方法：分别将人脐静脉内皮细胞(HUVECs)及小鼠内皮细胞SVEC4-10EE2包被于磁珠表面,与纤维蛋白原混合后接种于含有凝血酶的细胞培养板中进行培养,包被在磁珠上的内皮细胞在含有纤维蛋白凝聚物的三维空间中生长成脉管样结构,以建立体外血管生成的三维模型。在模型中分别加入肿瘤细胞(人乳腺癌细胞MDA-MB-231和小鼠髓样乳腺癌细胞E0771)共培养,观察肿瘤细胞在体外对血管生成的影响。用酶联免疫吸附法(ELISA)分别检测肿瘤细胞培养上清液中影响血管生成的MCP-1和VEGF的浓度,并在内皮细胞-肿瘤细胞共培养体系中加入MCP-1受体C-C趋化因子受体2(CCR2)的拮抗剂以及VEGF受体的抑制剂司马沙尼(SU5416),观察其对血管生成的影响。收集肿瘤细胞刺激后的肿瘤细胞培养上清液作为条件培养液,加入到内皮细胞HUVECs或SVEC4-10EE2单独培养的血管生成系统中,在加入或不加入CCR2的拮抗剂以及SU5416的情况下分别观察其对血管生成的影响。结果：在不加入任何影响血管生成的物质时,内皮细胞HUVECs和SVEC4-10EE2均能在体外培养基中形成多细胞组成的脉管样结构,即建立起体外三维血管生成模型;加入肿瘤细胞(MDA-MB-231和E0771)共培养,可显著促进脉管样结构形成(P<0.05)。ELISA检测结果显示,肿瘤细胞上清液中MCP-1和VEGF水平显著增高(P<0.05),MCP-1具有体外促进三维培养体系中脉管生成作用,而在加入MCP-1受体CCR2的拮抗剂以及VEGF受体的抑制剂SU5416之后,可显著抑制血管形成(P<0.05)。条件培养液可促进内皮细胞体外脉管生成,而这一作用可以被CCR2的拮抗剂以及SU5416阻断(P<0.05)。结论：成功建立了体外三维血管生成模型,肿瘤细胞共培养可以显著促进内皮细胞脉管形成,机制可能与其分泌的MCP-1和VEGF有关。     

IgA肾病患者血清IgA1对人肾小球系膜细胞转化生长因子β1/Smads信号通路的影响

目的 研究IgA肾病(IgAN)患者血清IgA1对人肾小球系膜细胞(HMC)转化生长因子β1(TGF-β1)、磷酸化Smad3(p-Smad3)和纤连蛋白(FN)的刺激作用,探讨IgA1对TGF-β1/Smads信号通路的影响.方法 体外培养HMC,分5组.即健康对照组、健康人IgA1(NIgA1)刺激组、健康人聚合IgA1(aNIgA1)刺激组、IgAN患者IgA1(PIgA1)刺激组和IgAN患者聚合IgA1(aPIgA1)刺激组.RT-PCR检测各组细胞TGF-β1、p-Smad3和FNmRNA的表达.Western免疫印迹检测HMC p-Smad3蛋白水平.ELISA检测HMC培养上清液中TGF-β1、FN蛋白水平.结果 PIgA1和aPIgA1能显著上调TGF-β1,P-Smad3、FN mRNA和蛋白的表达(P<0.05).aPIgA1上调三者mRNA表达的能力分别为PIgA1的1.5倍、1.3倍和1.5倍(均P<0.05).aPIgA1上调TGF-β1和p-Smad3蛋白表达的能力分别为PIgA1的2.1倍和1.6倍(均P<0.01).在aPIgA1刺激不同时间,TGF-β1和p-Smad3 mRNA表达于12 h达高峰(0.866±0.055和0.891±0.251),于24h回到基线水平.FNmRNA表达于24 h达高峰(0.968±0.031).TGF-β1和p-Smad3蛋白表达逐渐升高,TGF-β1于12 h达高峰[(246.960±1.270)ng/L],p-Smad3于6 h达高峰(0.490±0.046)后开始下降.FN蛋白表达逐渐升高,24 h达高峰[(1.804±0.038)mg/L](均P<0.01).结论 PIgA1和aPIgA1能显著上调HMC TGF-β1、p-smad3、和FNmRNA表达和蛋白水平.且aPIgA1的作用强于PIgA1,提示IgAN患者血清的IgA1,主要是aIgA1可通过TGF-β1/Smads信号通路在IgAN进展中起作用.     

腹膜间皮细胞在小鼠子宫内膜细胞刺激腹腔微环境中作用

目的：探讨腹腔微环境受子宫内膜细胞刺激改变中腹膜间皮细胞的作用及其对子宫内膜异位症发病机制的意义。方法： 注射小鼠子宫内膜上皮和间质细胞入小鼠腹腔，酶联免疫吸附法（ELISA）检测注射后4、24和72 h时点腹腔冲洗液细胞因子MCP-1/JE、IL-1α和IL-6蛋白表达，同步逆转录-聚合酶链式反应技术 (Real-Time RT-PCR) 检测腹膜组织 (主要含腹膜间皮细胞) 和腹腔巨噬细胞的细胞因子MCP-1/JE、IL-1 α和IL-6 mRNA表达。结果: 子宫内膜细胞刺激腹腔细胞因子蛋白含量迅速一过性升高，4 h时点为表达高峰，腹膜细胞因子基因表达与腹腔液蛋白表达同步，腹腔巨噬细胞基因表达高峰滞后于腹腔液蛋白表达。子宫内膜上皮细胞刺激腹腔炎症反应作用强于间质细胞。结论: 子宫内膜细胞刺激腹腔发生非特异性炎症反应，腹膜间皮细胞可能是其细胞因子效应的主要来源，提示腹膜在子宫内膜异位症中除作为病灶依附体外，还可能在腹腔微环境无菌性炎症反应中起重要作用。     

Renoprotective effects of combination of angiotensin converting enzyme inhibitor with mycophenolate mofetil in diabetic rats

Objective and design Previously it was shown that blocking of the renin-angiotensin system (RAS) by angiotensin converting enzyme (ACE) inhibitors, or suppression of inflammatory responses by immunosuppressive drugs such as mycophenolate mofetil (MMF) could attenuate renal injury in diabetic rats. Whether RAS blockade combined with an immunosuppressive drug provides superior renoprotection against diabetic nephropathy has not been clearly delineated. Materials Diabetes was induced by injection of streptozotocin after uninephrectomy. Treatment Rats were randomly separated into five groups: control, diabetes, diabetes treated with enalapril (an ACE inhibitor, 10 mg/kg/d by gastric gavage), diabetes treated with MMF (10 mg/kg/d by gastric gavage), or diabetes treated with a combination of both agents and were followed for 8 weeks. Methods 24 h urinary albumin excretion rate (AER) was determined, renal injury was evaluated, immunohistochemistry for ED-1 macrophage marker, intercellular adhesion molecule-1 (ICAM-1) and monocyte chemoattractant protein-1 (MCP-1) were performed, and expression of transforming growth factor (TGF)-β1 protein was determined by Western blotting analysis. Results Diabetes was associated with a considerable increase in AER. Both enalapril and MMF retarded the increase in albuminuria, which was nearly completely abrogated by combination therapy. Increased glomerular volume and tubulointerstitial injury index in diabetic rats was attenuated by treatment with either enalapril or MMF and further reduced by the combination of the two. Elevated malondialdehyde levels in renal tissue were reduced by enalapril or MMF and, more effectively, by combined enalapril with MMF. Renal overexpression of ICAM-1 was not retarded by enalapril and attenuated by MMF or combined enalapril with MMF. Combination therapy was associated with a superior suppression of diabetes-induced macrophage recruitment and overexpression of MCP-1 and TGFβ1 compared to either monotherapy in renal tissue. Conclusion The combination of enalapril and MMF confers superiority over monotherapy in renoprotection, a mechanism which may be at least partly correlated with synergistic suppression of increased macrophage recruitment and overexpression of MCP-1 and TGF-β1 in renal tissue in diabetic rats. Received 26 July 2005; returned for revision 5 October 2005; returned for final revision 9 January 2006; accepted by M. Katori 23 January 2006     

No association of the MCP-1 promoter A-2518G polymorphism with bipolar disorder in the Korean population

It has been suggested that bipolar disorder is associated with altered immune function. Monocyte chemoattractant protien-1 (MCP-1) is a chemokine that influences both neural and immune functions. We thus hypothesized that MCP-1 may be related to the development or pathophysiology of bipolar disorder. In this case–control study, we investigated the association between the A-2518G single nucleotide polymorphism (SNP) of the MCP-1 promoter and bipolar disorder. Patients with bipolar disorder (n = 183; bipolar I = 145, bipolar II = 38) and healthy controls (350) were recruited for the study. No significant allelic or genotypic association was detected between the A-2518G polymorphism and any sample of bipolar disorder patients. When we pooled the healthy controls and the cases of bipolar I disorder from previous Korean studies and this study, we again found no significant association. No significant difference in either allele frequency or genotype distribution was observed between bipolar I and bipolar II disorders. There was no difference in the age at onset of bipolar disorder among the three genotype groups. Our data suggest that the A-2518G polymorphism of MCP-1 is not a major susceptibility factor for bipolar disorder in the Korean population. However, the physiological role of MCP-1 is highly suggestive of its being associated with bipolar disorder, and further analyses of other SNPs of MCP-1 remain to be performed.