分泌抗人甲胎蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

用人甲胎蛋白(AFP)免疫BALB/c小鼠的脾细胞与SP2/O骨髓瘤细胞融合,获得两株分泌抗人AFP单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株(G2和G10)。用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养上清液和小鼠腹水的特异性抗体效价,分别为2～4×10~(-3)和10~(-6)～10~(-7)。两株杂交瘤细胞染色体的众数为104～108条。经体外连续传代及冻存半年复苏后,仍具有分泌抗体能力,说明其性能稳定。两株所分泌的抗体,均属IgGl型。     

鼠抗粒细胞集落刺激因子单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

建立鼠粒细胞集落刺激因子单克隆抗体的杂交瘤细胞系。方法将ＳＰ２／０小鼠骨央瘤细胞和用Ｇ－ＣＳＦ免疫的Ｂａｌｂ／ｃＩＨ ＶＮＵＮＥＲＴＦＸＬＥＱＤ 宜５００ＷＴ 进行融合，用ＥＬＩＳＡ进行克隆化筛选并对杂交瘤细胞分泌的单抗滴度进行检测。     

分泌抗人IgMμ链McAb杂交瘤细胞株的建立

本文从正常人（HBSAg阴性）血清中分离纯化人IgM，以此作为抗原免疫BALB／C小鼠，根据kohler和Milstein杂交瘤细胞建株原理，采用本室建立的常规方法，将免疫脾细胞和小鼠SP2／0骨髓瘤细胞进行融合，建立了分泌抗人IgMμ链单克隆抗体杂交瘤细胞株。经过间接ELISA双向琼脂扩散试验及封闭试验等方法证实，所分泌的抗体为抗人IgMμ链McAb，其中3A4、3D32株杂交瘤细胞经反复冻存、复苏及多次传代，均能分泌高效价抗体，且为IgG1亚类。本实验结果为抗人IgM鼠队嵌合抗体基因的构建奠定了基础。     

分泌抗人促甲状腺激素（hTSH）单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

用ＳＰ２／０骨髓瘤细胞与经人促甲状腺激素（ｈＴＳＨ）免疫的ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠的脾细胞融合，融合率６０．４％，抗体阳性率４．３％，经３－４次克隆化，筛出３株稳定分泌ＴＳＨＭｃＡｂ的杂交瘤细胞株。用放射免疫分析法（ＲＩＡ）检测小鼠腹水，抗体效价为１０＾－４时，抗体结合率为４５．５％。用ＥＬＩＳＡ方法检测小鼠腹水，抗体效价达１０＾－５。其中３株细胞做琼脂糖免疫双扩散试验，均显示为ＩｇＧ１，亚类。染色体计数     

霍乱弧菌单克隆抗体杂交瘤细胞株建立

本法获得了841C71、841C72两个分泌抗霍乱弧菌菌体抗原单克隆抗体(MAb)的杂交瘤细胞株。其培养上清抗体滴度为1∶8～1∶64,小鼠腹水抗体滴度为1∶1280～1∶5120。与霍乱弧菌小川型的反应滴度在1∶80～1∶160之间,但不与水弧菌及大肠杆菌等肠道杆菌发生交叉反应。此二株细胞产生的MAb为IgG类。     

人促甲状腺激素单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

以进口纯人促甲状腺激素（ｈ—ＴＳＨ）作免疫原，经用Ｇａｌｆｒｅ等杂交瘤制备法，分别制备成１３Ｂ４、１３Ｃ４、８Ｈ１０、３Ｅ４四株具有抗ｈ—ＴＳＨ特异性，与促黄体素、促卵泡素、绒毛膜促性腺素无明显交叉反应。具有稳定分泌功能的杂交细胞株。经亚型鉴定均为ＩｇＧ１。液相中与１２５Ｉ—ｈＴＳＨ的最大结合率依次为１３Ｂ４、３Ｅ４、８Ｈ１０和１３Ｃ４，分别为６１％、５９％、５６％和３４％。表位分析表明，４株单抗主要针对两个不同表位。在此基础上已成功地建立ｈ—ＴＳＨ固相免放和酶免吸附超敏测定法。     

分泌抗人精子单克隆抗体的杂交瘤细胞株(6B_4、7C_4)的建立

将经正常人的精子细胞免疫的 BALB/c 鼠脾脏取出,使此细胞与 NS1小鼠骨髓瘤细胞融合。用间接免疫荧光法等方法检测抗体,得到12个孔抗人精子阳性的杂交瘤。经过2～3次有限稀释法克隆化后建立了分泌抗人精子单克隆抗体的杂交瘤细胞株6B_4及7C_4。其染色体数目为86～88对,它对人精子有制动、凝集作用并有种间交叉反应,对人 LDH 活力有明显的消耗作用。证明该抗体有特异性。这些生物学特性对男性避孕有一定的实用价值。     

分泌抗SPA单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立与鉴定

以 SPA 作基础免疫 BALB/C 小鼠后,融合前三天直接脾内免疫,取脾细胞与 SP_2/O 瘤细胞常规融合,融合率100%;以快速 ELISA 法检测抗体,阳性率60%。5次有限稀释法克隆化后获得7株杂交瘤细胞,作中和抑制试验,证实为 SPA 特异性抗体。经鉴定属 IgG2a 及 IgG2b 亚类。电镜观察细胞融合,发现其细胞内含逆转录病毒。杂交瘤细胞液氮保存与体外连续传代一年,仍保持原有各种特性。     

抗小鼠T淋巴细胞单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

用C3H小鼠胸腺细胞免疫的Wistar大鼠脾细胞分别与两株小鼠骨髓瘤细胞(SP2/O和NS-1)融合,选择两个具有分泌抗小鼠T细胞单克隆抗体(McAb)阳性孔的杂交瘤细胞,用有限稀释法连续进行3次克隆化,获得50个分泌阳性McAb的亚克隆杂交瘤细胞。对其中两个亚克隆细胞培养上清液的生物学特性进行分析。结果表明:(1)它能在补体参与下杀伤多种品系小鼠的胸腺细胞(>90％)、淋巴结细胞(约60％)和脾细胞(约30％);(2)用间接荧光法证实它与多种品系小鼠胸腺细胞、淋巴结细胞和脾细胞结合的百分率与上述补体依赖细胞毒试验的结果一致;(3)用细胞培养上清液加补体共同处理小鼠淋巴结和脾脏细胞后,受处理的细胞失去对刀豆素A(ConA)的应答反应而保留对脂多糖(LPS)的应答能力。初步认为这两个亚克隆杂交细胞培养物所分泌的McAb是针对小鼠T淋巴细胞表面抗原的。     

分泌抗人精子单克隆抗体杂交瘤细胞的建立

用人精子免疫BALB/C小鼠,用杂交瘤技术制备出9株抗人精子单克隆抗体。经酶联免疫吸附试验和间接免疫荧光实验证明,9株抗人精子单克隆抗体均能与人精子产生特异性免疫反应。连续传代及液氮中保存的杂交瘤细胞分泌抗人精子单克隆抗体的滴度持续稳定。     

抗-HBs单克隆抗体细胞系与酶联免疫吸附试验“一步法”检测HBsAg

本文利用杂交瘤技术,经脾内直接注射免疫BALB/c小鼠,与骨髓瘤细胞(Sp 2/0)进行融合,建立了6株抗HEsMcAb,其中5株已能稳定地分泌单克隆抗体,并已得到腹水;5据中4株为抗a,1株为抗d,利用其中2株分别作为包被、酶标抗体,建立了酶联免疫吸附试验(ELISA)“一步法”检测HBsAg技术,经验证,该方法简便、快速、灵敏、特异、稳定。     

人脑肌酸激酶单克隆抗体的制备及鉴定

用事故死亡者脑组织中提纯的人脑肌酸激酶（ＣＫ－ＢＢ）对ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠进行免疫，应用杂交瘤技术将免疫小鼠脾细胞分别与２种骨髓瘤细胞（ＮＳ－１，６５３）融合，筛选得到８株能稳定分泌ＩｇＭ抗体的杂交瘤细胞。对分泌抗体经酶联免疫电泳转移试验（Ｗｅｓｔ－Ｂｌｏｔ）进行了鉴定，其中４种抗体能特异地与ＣＫ－ＢＢ的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳带结合。提示这些单克隆抗体有可能应用于肌酸激酶的结构功能研究和临床检验中。     

分泌抗巨细胞病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株的建立

用CMV-AD_(169)病毒株免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP_(2/0)细胞融合,获得5株分泌抗CMV单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株,其细胞培养上清液效价(ELISA)为1∶32～1∶128,腹水效价为10~4～10~5,经证实McAb为IgG2a或IgM,均具有HCMV种特异性,可作为特异、敏感的免疫试剂,用于巨细胞病毒感染的早期快速诊断。     

分泌抗B型肉毒毒素单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立

我国由肉毒毒素引起的食物中毒以A、B型最常见。但用常规法制备的抗血清在两型间常有交叉反应,不适于分型鉴定之用。即使应用亲和层析交叉吸收纯化,仍难以获得B型特异性抗体。为获得高效价的型特异性抗体,本研究以B型肉毒类毒素免疫纯系BALB/c小鼠,注射3次后,血清抗体琼脂双