肌酐二点法测定对溶血干扰的排除

Jaffe显色法测定血清肌酐受各种因素影响 ,溶血所致血红蛋白的负干扰现象已有诸多报道。现就苦味酸二点法测定血清肌酐 ,通过适当改变延迟时间和读取吸光度测定时间来排除溶血干扰作一探讨。1　材料和方法1 .1　仪器　 BT2 2 4半自动生化分析仪。1 .2　试剂　肌酐二点法测定试剂盒 ,上海长征公司提供。1 .3　方法　二点法 ,温度 37°C,波长 5 1 0 nm,延迟时间 80s,测定时间 1 5 0 s(原法 :延迟时间 30 s,测定时间 6 0 s)。以蒸馏水调零 ,标准液 5 0μl( 1 32 .6μmol/ L) ,样本为 5 0μl,肌酐应用液 5 0 0μl。2　结果和讨论2 .1　反应时…     

简单的酶法测定胆汁中的胆固醇

测定胆汁中胆固醇对于了解胆石形成情况及一些肝胆功能很有帮助,但胆汁中胆红素对测定干扰较严重。胆汁经胆红素氧化酶作用,使440nm 处有最大吸收的胆红素转化为在320nm 有最大吸收的胆绿素,再与氧化酶偶联法胆固醇试剂反应,在505nm 处可准确测出胆汁中胆固醇含量。材料与方法:样品为猪胆汁,试剂有223ku/l 胆红素氧化酶水溶液、pH7.0,100mmol/l 磷酸盐缓冲液(含10mmol/l 月桂醇硫酸盐)及pH7.0维生素C溶液(在0.5mol/l NaCl 中)。测定时取30μL 胆汁于12×75mm 试管中,加20μl 磷酸盐缓冲液及30μl 胆红素氧化酶,涡旋混合后37℃10分钟。然后在空白管对照中加50μl 维生素C 溶液,各管均加1mL 胆固醇测定酶试剂,混合;37℃10分钟,以水调零,在505nm 处测定并求出样品的净吸光度值。     

血浆中氨基酸的高效液相色谱快速测定法

本文介绍了HPLC测定血浆中氨基酸的方法。原理是将血浆中氨基酸用邻苯二醛(OPA)柱前衍生,衍生物经反相色谱柱分离,荧光检测器检测,内标法定量。空腹静脉抽血,肝素抗凝,离心后取血浆0.5ml加至内含20mg磺基水杨酸(SSA)的小管中,充分混匀,离心3000g,15min,除蛋白,上清液作衍生用。衍生在Gilson自动进样器中进行,向进样器的空瓶中加20μl水,5μl样品,5μl内标(用50mmol/LHCl配制的10mmol/L去甲缬氨酸)和90μlOPA-MPA衍生剂,衍生剂含1.77mmol/L的邻苯二醛(OPA)和2.72mmol/L巯基丁酸(MPA),混匀,室温放3min,加50μl400mmol/L KH_2PO_1和10ml/L三乙胺的中性缓冲液,混匀,取3μl反应液进样。     

血清中红细胞生成素的快速测定法

作者采用单克隆抗体技术建立了一种快速敏感的酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清中红细胞生成素(EPO)浓度.材料与方法:常规制备MC—R—2和MC—R—6单克隆抗体和固相微量反应板、HRP标记MC—R—2单克隆抗体的结合物;用人尿中纯化的EPO以缓冲液稀释为标准液,按WHO第二国际制品单位校正.O—次苯基肼二盐酸盐为显色剂.EPO测定:取血清25μl,加结合物75μl于各池     

酶法测定血清总胆固醇的一点改进

酶法测定血清总胆固醇的优点众所公认,但酶试剂价格昂贵。我们使用东瓯生物工程试剂仪器厂生产的酶法血清总胆固醇药盒,减少了酶试剂用量,结果满意。一、操作方法样品20μl加酶应用液50μl,混     

介绍一种接种环容量简易标定法

尿液定量细菌培养 ,接种环的容量直接影响检验结果的准确性 ,我们利用高密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒中酶试剂标定接种环容量 ,在实际检验中 ,效果满意。1　方法　取小试管 5支各加高密度脂蛋白胆固醇测定酶试剂 1 .0 ml,用已校正的 1 0 μl微量注射器加胆固醇标准液 (5.2 mmol/ L,用正常尿液做基质配制 ) 5μl,充分混匀 ,即为标准管 (S) ,另取小试管 5支各加酶试剂 1 .0 ml,用待标定的接种环沾取标准液 ,轻轻从中间提出 (不能靠到管壁 )插入试剂中充分混匀 ,此为测定管 (U) ,放置 3 7°C1 0min,在 V2 1半自动生化仪上测其含量 ,取平均值。…     

用亲和素-生物素-免疫酶法(NABA)检测溶菌酶

本法可用于测定正常人和急性髓样白血病患者血清中的溶菌酶,步骤如下:用抗溶菌酶抗体(15μg/ml)包被微孔板,置4℃过夜后洗涤。加样品(100μl),置37℃1小时。经洗涤后加生物素化抗溶菌酶抗体(100μl,1:500),同法温育并洗涤。加酶标亲和素(1mg/ml 原液经1:2000稀释,每孔加100μl),置室温10分钟。洗涤,加底物,置室温10分钟终止反应。若采用快速法,加样品、生物素化抗体、酶标亲和素及底物后的温育时间应分别缩短为20分钟、20分钟、5分钟和5分钟。同时以竞争性亲和素-生物素-免疫酶测定法作对比。竞争     

国产METIS 150全自动血型仪参数优化与性能验证

目的对国产METIS 150全自动血型仪进行试验参数优化和性能验证。方法用已知血型标本,分别对标本红细胞稀释法、红细胞悬液加量、试剂红细胞加量、抗-A/抗-B/抗-D稀释倍数及加量、标本血浆加量等可选参数进行预选,以结果正确率最高为依据确定优化参数;优化血型仪参数后,用已知标本对ABO定型和Rh(D)筛查结果的准确性、重复性和方法敏感性进行验证。结果离心条件、反应温度、振荡方式、吸液、注液、洗针等六项厂家推荐参数适当;标本红细胞12μl+300μl盐水制备悬液,25μl/孔红细胞悬液+25μl抗-A、抗-B原液,正定型结果正确率可达100%;25μl/孔红细胞悬液和1∶10稀释抗-D 25μl/孔,Rh(D)筛查结果正确率可达100%;血浆70μl/孔+试剂红细胞25μl/孔,反定型结果正确率可达100%。参数优化后,ABO定型和Rh(D)筛查结果准确率达100%,4份A2B亚型定型正确,4份疑难血型提示结果疑问,1年时间检测全部献血者标本30 694份血型结果无错误。结论参数优化后,METIS 150血型仪检测血型的结果准确可靠,可用于临床供血标本的血型检测。     

台湾中国人的血小板特异性抗原频率

本文报告100例台湾中国人的六种血小板特异性抗原[HPA—1a(Pl~(A1))、HPA—2b(KO~a,Sib~a)、HPA—3a(Bak~a)、HPA—4a(Yuk~b和Nak~a)频率。方法:(1)混合被动血凝试验(MPHA) 血小板单层的制备将ACD—A抗凝的富血小板血浆离心,用生理盐水洗涤血小板沉淀物2次,在U形微量加样板的各孔内加25μl血小板悬液(1×10~5/μl)并离心。为使吸附更牢固,每孔内加50μl7%甲醛磷酸盐缓冲液(pH7.2),固定20分钟,再用生     

HPLC法在小儿尿液新蝶呤和生物蝶呤检测中的应用

目的 建立HPLC法测定小儿高苯丙氨酸血症(HPA)患者尿液中新蝶呤(N)和生物蝶呤(B)含量的方法,以帮助临床对经典型苯丙酮尿症(PKU)和四氢生物蝶呤(BH4)缺乏症的诊断和鉴别诊断.方法 选用Cosmosil 5C18-AR-Ⅱ色谱柱(4.6 I.D.×250 mm),甲醇-水(8∶92)为流动相,用三维荧光检测器检测.结果 新蝶呤线性范围为1.60～40.0 ng/μl,生物蝶呤线性范围为1.73～43.2 ng/μl;最小检测限为0.16 ng/μl和0.1728 ng/μl.样品测定的变异系数(CV)值分别为2.18%和1.70%;原尿样品前处理时氧化的最佳时间为30 min;原尿样品不便于保存,氧化后可于室温或4℃冰箱保存3 d.结论 本方法准确、可靠、简便易行,灵敏度高,方法学实验结果满意,适用于临床HPA患儿的鉴别诊断.     

微板速率法检测ALT的参数选择

目的优化微板速率法检测ALT的参数。方法采用动力学法,利用全自动加样器,结合微板、酶标仪以及局域网实现自动化检测。结果微板速率法检测ALT的标本量为50μl,基质液为200μl;RSP分配样品离孔底3mm距离同时以240μl/s速度分配,RSP吸液和分配基质液速度依次为100、220μl/s,附加体积为70μl;基质液预热温度为33℃±1℃,酶标仪测定温度设定30℃,室温控制在25℃±3℃;检测主波长340nm,参比波长无;延迟时间为120s,测定时间120-360s,每隔60s读1次板;校正因数为2100;初始吸光度值下限OD值为0.700;中值血清加液时差前后ALT相差3U/L,批内和批间变异系数依次为1.77%、3.24%,卫生部临检中心PT得分100%。结论优化参数后,实现ALT速率法自动化检测,而且加样加液不产生气泡,同时降低了加样时差、边缘效应对结果的影响以及测定温度较易控制等优点。     

全自动加样仪加液精密度测试结果分析

目的　了解全自动加样仪加液精密度。方法　利用特制的分析天平采用重量法进行校验。结果　RSP8 根针测试蒸馏水10mg(10μl)的CV<3%,100mg(100μl)的CV<0.5%,均通过精密度试验测试。较粘稠的液 体100mg(89μl)的CV>0.5%,8根针精密度都没有通过测试。结论　测试蒸馏水时,加液精密度符合要求。较 粘稠的液体不能使用常规“Water”吸液加液模式,需建立新的吸液加液模式。     

简单抗PBP_(2a)玻片乳胶凝集试剂盒快速检测MRSA的评价

由于表型表达的异质性可影响甲氧西林耐药性检测的准确性 ,因此作者介绍一种检测 PBP2 a(penicillin-binding protein 2 a)以快速筛选 MRSA的商业化试剂盒。用 PCR检测临床分离的金黄色葡萄球菌 mec A基因以确定其为MRSA或 MSSA。抗 PBP2 a玻片乳胶凝集 MRSA筛选试验按下述方法操作 :挑取 10～ 2 0个金葡菌落悬浮于含 4滴 (2 0 0μl) 0 .1mol/L Na OH的微量离心管中 ,悬液煮沸 3min,加 1滴 (5 0μl) 0 .5 mol/L KH2 PO4,混匀 ,室温 15 0 0× g离心 5 min,取 5 0μl上清液置于玻片上 ,与 2 5μl的抗PβP2 a单抗致敏的乳胶颗粒…     

简易测定补体效价及抗补体活性的微板法

自身免疫疾病、胶原病及其他疾患,其症状的进展与免疫机制有关。补体效价及免疫复合物的探索在临床上的重要性已日渐明确。目前广泛使用Mayer改良法测定补体效价,但所需器材多,操作繁锁。本文提出了使用微板的补体效价简易测定法,全部测定用微量操作,稀释定量准确,羊红细胞的均方根差少,和Mayer改良法有良好的相关(r=0.79,P<0.01),正常值也与原法一致。补体效价的测定取U型微板二排,一排加原血清50μl,另一排加70%稀释血清50μl,各孔内加明胶巴比妥钠缓冲液(GVB)作等倍稀释(2~(-1)～2~(-2)),加GVB 50μl,充分混和后,再加1%致敏羊红细胞25μl,37℃保温30分钟。然后将板用1000rpm离心5分钟。根据上清液有无溶血及管底血球的残余量自身免疫疾病、胶原病及其他疾患,其症状的进展与免疫机制有关。补体效价及免疫复合物的探索在临床上的重要性已日渐明确。目前广泛使用Mayer改良法测定补体效价,但所需器材多,操作繁锁。本文提出了使用微板的补体效价简易测定法,全部测定用微量操作,稀释定量准确,羊红细胞的均方根差少,和Mayer改良法有良好的相关(r=0.79,P<0.01),正常值也与原法一致。补体效价的测定取U型微板二排,一排加原血清50μl,另一排加70%稀释血清50μl,各孔内加明胶巴比妥钠缓冲液(GVB)作等倍稀释(2~(-1)～2~(-2));加GVB 50μl,充分混和后,再加1%致敏羊红细胞25μl,37℃保温30分钟。然后将板用1000rpm离心5分钟。根据上清液有无溶血及管底血球的残余量     

单孔反向血凝法检测HBsAg

按常法于20孔聚乙烯反应板上操作。孔内加生理盐水75μl,被测血清25μl,混匀后加入HBsAg 诊断血球悬液5滴(125μl),来回振摇10～20次,充分混匀.室温静置1.5～2小时后观察结果。设已知阳性和阴性     

双抗体夹心法微量ELISA测定人血小板因子4

测定血小板因子4(PF_4)有多种方法,但是都有一定的局限性。本文介绍一种敏感性强、特异性高、重复性好的方法,即双抗体夹心微量酶联免疫吸附试验(ELISA)。测定过程如下:(1)包被:聚苯乙烯微板的每个孔加150μl缓冲液稀释的抗人PF_4抗体,置37℃孵育20小时,用PBST(磷酸盐缓冲盐水-吐温20溶液)洗4次。(2)抗原孵育:加200μl/孔含1％牛血清白蛋白的PBS,37℃1小时,板用PBST洗1次,再加入50μl/孔含已知量抗原的抗原标准液及血浆标本,37℃1小时,板用PBST洗3次。(3)标记抗体孵育:加100μl/孔用PBST稀释的辣根过氧化物酶标记     

γ计数法校正微量加液器

微量加液器(简称加液器)已广泛应用于临应检验工作中,而新购或使用过程中常须校正.根据一定容量的稳定γ放射源溶液每分钟脉冲数(Count Per min-ute,cpm)一定的原理,我们自行设计了γ计数法校正微量加液器.结果满意,精确度高.现将20μl 微量     

全自动样品处理机微量加样漏加分析

近年来全自动样品处理机在血站和医院检验科得到广泛应用，其快速、高效、精确等特性得到大家公认。但笔者在使用迈克雷AT增强型全自动样品处理机进行微量(5～10μl)加样时，有漏加现象．现报告如下。     

尿中WBC的尿液分析仪法与镜检比较及WBC质控液制备初探

泰利特100型尿液分析仪以下称尿分析仪在国内已得到了广泛的应用,为了充分了解其结果与镜检法的相关性,对164例标本分别同时进行尿分析仪测定和镜检测定尿WBC对照试验,并根据试验结果制备不同浓度WBC质控液,现报告如下： 1 方法与结果 1．1 制备WBC质控液：收集泌尿系感染尿液,离心,吸取上清液,沉淀物用0．45％NaCl溶液洗涤以溶解RBC,离心,吸取上清液,反复洗涤离心五次后,沉淀物加入0．9％NaCl溶液,分别制备成20个／μl、30个／μl、35个／μl、70个／μl、140个／μl、350个／μl不同浓度WBC质控液,并分别加入氯…     

微量稀释棒的简易筛查法

新购或长期使用的稀释棒,吸液量是否准确,要进行筛查.作者用滤纸色斑法,极为简便、实用.方法如下:取混合人血清一份,加适量醋纤膜蛋白电泳染料,用微量进样器准确取样10μl、15μl、20μl、25μl、30μl,分别滴于定性滤纸上,各加样10个,干后量取色斑直径、计算均值,得出色斑面积(πr~2),作为横座标;以吸液量为纵座标,绘制标准曲线.检查