器官组织移植

他克莫司联合青藤碱抑制大鼠心脏移植急性排斥反应;大鼠的工作型与非工作型同种异体心脏移植模型比较;心肌内心电图监测和诊断大鼠心脏移植术后的排斥反应;心脏移植术后采用无创分子技术实时监测免疫排斥反应的现状（学术交流）;存活十年以上同种原位心脏移植三例;骨髓间充质干细胞自体移植治疗心肌梗死的实验研究;     

羊膜间充质干细胞对异体外周血淋巴细胞转化的影响

[目的]研究羊膜间充质干细胞（MSCs）对成人外周血淋巴细胞的免疫调节作用。[方法]采用组织块培养法从羊膜分离、培养MSCs,通过细胞形态的均一性和流式细胞术检测细胞表面标志以鉴定其纯度。将分离培养的羊膜MSCs按不同浓度接种于96孔板中,72h待其贴壁后,用丝裂霉素处理。将外周血淋巴细胞接种于羊膜MSCs上,加入植物凝集素（PHA）以刺激淋巴细胞转化。以单纯淋巴细胞（不含MSCs）经PHA刺激转化者为对照组,设单纯淋巴细胞（不加PHA）作空白对照。各组细胞培养72h后,收集各孔悬浮细胞,用CCK-8法测定细胞增殖率,观察羊膜MSCs对异体外周血淋巴细胞转化的影响。[结果]羊膜MSCs的形态和骨髓MSCs类似,具有和骨髓MSCs相似的细胞表型,可以显著抑制异体外周血淋巴细胞转化。羊膜MSCs浓度为2×106/ml、1×106/ml、5×105/ml、2.5×105/ml、1.25×105/ml时的平均转化抑制率分别为88.92%、83.38%、62.10%、32.22%、17.35%。[结论]从羊膜中可以成功分离、培养出MSCs,为MSCs提供了新的来源。羊膜MSCs可以抑制PHA诱导的异体外周血淋巴细胞转化,对同种异体免疫反应具有负调节作用,且该作用具有剂量依赖性。     

骨髓间充质干细胞在全身照射大鼠体内分布实验研究

目的 用荧光定量RT-PCR方法探讨骨髓间充质干细胞在大鼠经过全身照射后其体内分布的状况.为进一步研究骨髓间充质干细胞(MSCs)对正常组织器管放射性损伤的治疗提供理论依据.方法 培养MSCs细胞,用绿色荧光蛋白标记.分别对大鼠行全身照射及全身照射+全脑照射,经尾静脉注入标记的MSCs,荧光显微镜观察MSCs在各器官的分布,荧光定量RT-PCR检测MSCs在不同组织器官的分布.结果 获得绿色荧光标记MSCs,经尾静脉注入各实验组大鼠体内后显示,未行照射时MSCs仅少量分布在肺、骨髓、脾中;6 Gy全身照射后各器官MSCs的分布明显增加,小肠、骨髓等早反应组织增加的更显著;7 Gy全身照射进一步增加了各器官MSCs数量;6 Gy全身照射+全脑照射20 Gy后MSCs在大脑的分布明显增多,在其他器官的发布也明显增加.结论 放射损伤可诱导MSCs产生趋化作用;MSCs在各器官分布随照射剂量及放射损伤程度增加而增多;局部照射可增加局部及其他器官MSCs分布.     

骨髓间充质干细胞在异基因骨髓移植中的研究进展

骨髓间充质干细胞（MSCs）是骨髓基质细胞的前体细胞,分泌多种造血相关因子,表达多种黏附因子,同时具有免疫调节功能,在造血微环境发挥重要作用。因此,利用MSCs做滋养层,体外扩增造血干细胞（HSC）,临床联合移植MSCs和HSC,提高造血重建的能力,减少或减轻移植物抗宿主病（GVHD）的发生,具有很广阔的研究前景。     

巴西蜂胶抗大鼠急性放射性肝损伤的实验研究

目的：探讨巴西蜂胶对30Gy高能X线上腹部照射后大鼠急性放射性肝损伤的防护作用。方法：40只SD大鼠随机分为4组：A组（生理盐水＋假放疗组）;B组（蜂胶＋假放疗组）;C组（蜂胶＋放疗组）;D组（生理盐水＋放疗组）。实验大鼠接受高能X线上腹部照射30Gy,并于照射后4天采血、处死,观察大鼠肝细胞凋亡情况、肝脏病理改变,检测血清ALT、AST水平变化,观察肝脏组织的SOD、GSH活性变化。结果：C组与D组比较,大鼠肝细胞凋亡指数、血清ALT、AST水平显著降低,病理损伤减轻,肝脏组织中SOD、GSH均显著增高（P〈0.05）。结论：巴西蜂胶可清除自由基,减少辐射所致肝细胞凋亡,进而对急性放射性肝损伤起一定的防护作用。     

CD11c+细胞特异性敲除TAK1对刀豆蛋白A诱导的免疫性肝损伤的影响

目的：探讨CD11c⁺细胞中敲除TAK1对刀豆蛋白A（Con A）诱导的小鼠免疫性肝损伤的影响。方法：采用体内CD11c⁺细胞中特异性敲除TAK1的C57BL/6小鼠,经鼠尾静脉注射Con A（12 mg/kg）或生理盐水,分别作为Con A敲除组和生理盐水敲除组。另选C57BL/6小鼠,鼠尾静脉注射Con A（12 mg/kg）或生理盐水,作为Con A对照组和生理盐水对照组。给药6 h之后测定血清中丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸转移酶（AST）和乳酸脱氢酶（LDH）水平;检测肝、肾、胸腺等脏器系数并进行肝组织病理学观察和评分;测定血清中免疫反应相关细胞因子肿瘤坏死因子α（TNF-α）、干扰素γ（IFN-γ）、白细胞介素（IL-4/5/6/12）及肝组织中TNF-α和IFN-γ的表达水平。结果：与生理盐水对照组相比,Con A对照组ALT和LDH显著升高（P均 < 0.05）,肝脏病理损伤明显加重,病理评分显著升高（P < 0.05）,血清中TNF-α、IFN-γ、IL-4/5/6水平和肝中TNF-α和IFN-γ均显著升高（P均 < 0.05）;生理盐水敲除组肝中TNF-α水平显著降低（P < 0.05）。与Con A对照组相比,Con A敲除组小鼠血清ALT、AST和LDH水平均显著升高（P < 0.05）,肝脏病理损伤明显加重,病理评分显著升高（P < 0.05）,肝组织IFN-γ水平,血清中TNF-α、IL-4和IL-6水平均显著升高（P均 < 0.05）。结论：在本实验条件下,CD11c⁺细胞中敲除TAK1无明显肝损伤作用,但可加重Con A诱导的肝脏损伤,该作用可能与进一步激活免疫反应有关。     

催化性抗氧化剂AEOL-10150对氮芥诱导小鼠急性肝损伤的保护作用

目的： 探讨催化性抗氧化剂AEOL-10150对氮芥诱导小鼠肝损伤的保护作用及其机制。方法： 实验对象为C57BL/6小鼠,采用腹腔单次注射盐酸氮芥（2 mg/kg）构建急性肝损伤模型,染毒后0.5和6 h分别给予AEOL-10150（5 mg/kg）进行治疗干预,染毒3 d后处死小鼠,收集眼球血液和肝组织,观察肝组织大体改变和HE染色后进行组织病理学检测;检测血清谷丙转氨酶（ALT）和谷草转氨酶（AST）活性,肝组织活性氧（ROS）水平、丙二醛（MDA）含量和还原型谷胱甘肽（GSH）含量,肝组织氧化还原调控分子Nrf-2的mRNA表达水平,肝组织髓过氧化物酶（MPO）活性,血清炎症因子TNF-α、IL-1β含量。结果： 2 mg/kg的氮芥单次腹腔注射3 d后可以成功诱导小鼠肝组织氧化损伤和炎症反应。与氮芥染毒组小鼠相比,AEOL-10150治疗组动物肝组织病理损伤程度减轻,血清ALT和AST活性降低,同时肝组织ROS水平和MDA含量显著减少,伴有GSH含量增加和Nrf-2的mRNA和蛋白表达水平降低（均为P<0.05）。此外,AEOL-10150治疗组小鼠的肝组织MPO活性及血清TNF-α、IL-1β浓度较氮芥染毒组显著降低（均为P<0.05）。结论： AEOL-10150能够有效减轻氮芥诱导的小鼠急性肝损伤,其机制可能与直接抗氧化作用及抗炎效应有关。     

大鼠脂肪间充质干细胞移植治疗急性放射病的安全性

目的： 探讨急性放射性大鼠经静脉输注异体脂肪间充质干细胞 (adipose-derived mesenchymal stem cells,ADSCs)后的安全性。方法：SPF级雄性SD大鼠45只,随机分为空白对照组,照射对照组和照射移植组,每组15只。体外分离培养大鼠脂肪间充质干细胞,照射对照组与照射移植组大鼠经60Co治疗机一次性7 Gy剂量全身照射后,照射移植组大鼠按10 mL/kg尾静脉注射脂肪间充质干细胞,细胞浓度为1×106/mL;空白对照组和照射对照组注射等体积的无菌生理盐水。分别于照射后16和34 d进行血液学、血液生化学和组织病理学检查。结果：移植组大鼠体质量、血常规、血液生化与照射对照组相比差异无统计学意义(P>0.05);移植组大鼠脏器病理学观察与照射组、空白对照组相比无明显差别;未见移植组大鼠出现急慢性移植物抗宿主病反应。结论：急性放射性大鼠异体静脉输注脂肪间充质干细胞是安全可行的,对受者无不良影响。     

骨髓间充质干细胞多向分化潜能和微环境关系的研究

目的：深入研究骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSCs）多向分化的潜能与微环境的关系,从而为促进MSCs向目标组织细胞诱导分化创建新的实验方法。方法：大鼠MSCs进行分离,体外培养、扩增、鉴定。将MSCs向脂肪细胞和胰岛细胞方向诱导分化,并深入研究在不同的微环境下,其分化能力的差别,对照组诱导剂为含有角朊细胞生长因子（KGF）、胰岛素-转铁蛋白-硒（ITS）、尼克酰胺的无血清DMEM／F12培养基,实验组在对照组基础上添加胰腺条件培养液;对诱导的胰岛细胞进行观察、双硫腙染色,并进行葡萄糖刺激实验,测定细胞分泌胰岛素及C-肽功能。结果：培养的MSCs表现为非造血干细胞特性。其可向脂肪细胞,胰岛细胞等不同组织细胞分化。对照组和实验组均可分化为胰岛细胞,但实验组分化而成的胰岛细胞在数量和功能上均高于对照组。结论：MSCs具有多向分化潜能,其分化能力在特定的微环境下更强。     

肝细胞移植治疗大鼠急性肝衰竭的疗效观察

目的观察肝细胞移植治疗大鼠急性肝衰竭的疗效, 探讨原代肝细胞提取方法, 观察体外培养的大鼠肝细胞生存情况。方法 利用胶原酶消化法分离大鼠肝细胞, 用D-氨基半乳糖(D-GalactosamineN, D-GalN)制作大鼠急性肝功能衰竭模型, 并以此模型为基础行大鼠同种异体肝细胞移植实验。结果 分离的肝脏实质细胞(Hepatocyte)的存活率在87%-95%。平均每只大鼠肝脏可分离出7.8×10⁷个肝脏实质细胞。肝细胞移植组大鼠7天的存活率为54.2%(13/24), 对照组8.3%(2/24), 移植组大鼠存活率与非移植组大鼠存活率之间具有显著性差异(P＜0.005)。结论 经腹腔移植同种异体肝细胞可明显改善D-GalN诱导的急性肝衰竭大鼠的存活率, 腹腔肝细胞移植是治疗急性肝衰竭安全有效的方法。     

CYP3A4在黄曲霉毒素B1诱发大鼠肝癌过程中的表达及意义

探讨CYP3A4在黄曲霉毒素B1（AFB1）实验诱发大鼠肝癌过程中的活性变化及其在肝癌发生过程中的意义。方法:雄性、4周龄、Wistar大鼠随机分为AFB1组和对照组;AFB1组腹腔注射AFB1,对照组则给与溶媒二甲基亚砜。在诱发肝癌过程中,分别于第13、23、33、43、53、63周对大鼠进行肝活检;实验至第73周处死全部动物取肝组织;利用大鼠肝组织微粒体混合酶体外代谢体系,采用荧光分光光度定量法动态检测肝标本中CYP3A4酶活性。结果:AFB1组肝细胞癌发生率为58.8%（10/17）;对照组肝细胞癌发生率为0（0/16）,两组间肝癌发生率比较,AFB1组显著高于对照组（P=0.001）。两组大鼠肝组织代谢酶CYP3A4活性都有不同程度的变化。肝组织CYP3A4活性从13 w开始逐渐升高,至23 w达顶峰,然后逐渐降低,到43 w又升高,出现双波峰变化;从13 w至53 w不同时段AFB1组肝组织CYP3A4活性显著低于对照组（P<0.01）。但是至63 w时AFB1组肝组织CYP3A4活性基本接近对照组（P=0.5086）。结论:CYP3A4活性在AFB1诱癌过程中受到抑制,可能是由于癌变早期的细胞减少对致癌物质的活化有关;CYP3A4活性在AFB1诱癌过程中的表达起伏变化,是由于基因多态性较大程度上影响蛋白表达水平的结果。      

七氟烷预处理对大鼠骨髓间充质干细胞在缺氧复氧环境下的作用和机制初探

目的:研究七氟烷预处理对大鼠骨髓间充质干细胞（MSCs）在缺氧复氧环境下的作用和机制初探。方法:分离培养SD大鼠骨髓间充质干细胞,通过流式细胞仪和诱导分化培养鉴定其免疫表型和分化潜能。细胞随机分为3组:组1空白对照组;组2缺氧复氧组（缺氧24 h,复氧24 h）;组3七氟烷预处理组（2%七氟烷预处理2 h后,缺氧24 h,复氧24 h）。处理后收集各组细胞,用流式细胞仪测定其凋亡率,线粒体膜电位变化及细胞周期。Western blot测定细胞外调节蛋白激酶（ERK）的蛋白表达。结果:与组2相比,组3 MSCs凋亡率明显下降,处于S期细胞增多,细胞增殖能力增强。Western blot结果显示:与组2相比,组3磷酸化ERK蛋白表达上升。结论:七氟烷预处理能提高缺氧复氧环境下骨髓间充质干细胞存活率,降低MSCs凋亡数量,并能增强MSCs的增殖能力,这一机制与七氟烷促进MSCs细胞p-ERK蛋白表达相关。     

同种异体松质骨移植动物模型的建立和评价

目的建立同种异体松质骨移植动物模型，并对其术后免疫反应进行评价。方法取近交系Lewis大鼠和Fisher344大鼠各15只，切取双侧股骨下端干骺端（松质骨）作为移植骨块。另取Fisher344大鼠30只作为受体，随机分为A组（同基因移植组）、B组（同种异基因移植组），每组15只。移植手术为在受者双侧股后肌袋内植入移植骨块，术后2、4、8周分批取材检测，观察术后受者的淋巴细胞刺激增殖效应、T淋巴细胞亚群CD4／CD8比值变化以及移植块的组织学改变。结果B组的淋巴细胞刺激增殖指数及淋巴细胞亚群CD4／CD8的比值在术后的各个时期均比A组要高（P〈0．05），在术后第4周达到高峰；组织学检查表明B组移植骨块的炎性细胞浸润较多，成骨较少。结论本研究建立的同种异体松质骨移植实验动物模型术后发生了免疫反应并可以检测，可以作为下一步研究降低同种异体松质骨免疫原性方法的实验动物模型。     

铁过载对造血干细胞移植的影响

铁过载与造血干细胞移植（HSCT）预后关系密切。移植前铁过载可能增加患者HSCT后发生感染、肝静脉闭塞病（VOD）及肝损伤的风险,降低患者移植后总生存（OS）率、无事件生存（EFS）率。移植后铁过载可能降低患者的OS率。祛铁治疗有可能使HSCT患者获益。     

鸦胆子油口服乳液抑制肝癌发生的实验研究

  目的   探讨鸦胆子油口服乳液对二乙基亚硝胺（DEN）诱导的大鼠原发性肝癌的抑制作用。   方法   将大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、鸦胆子油口服乳液组。采用自由饮水和灌胃给DEN的方法诱发大鼠肝癌模型,诱发肝癌第5周开始灌胃鸦胆子油口服液,5次/周,14周后处死大鼠,腹主动脉取血,全自动生化分析仪检测血清中ALT、AST、ALP、γ-GT和AFP的含量,观察大鼠肝系数、脾系数、胸腺系数、肝脏表面的癌结节数的变化,并进行影像学检查。   结果   与正常对照组比较,模型对照组肝、脾指数和癌结节数明显增加,胸腺指数明显降低（P < 0.01）,血清中ALT、AFP、AST、ALP、γ-GT的水平显著高于正常对照组（P < 0.01）;与模型组比较,鸦胆子油口服乳液显著降低肝癌大鼠肝指数、脾指数、癌结节数,升高胸腺指数（P < 0.01）,血清中ALT、AFP、AST、ALP、γ-GT的水平得到明显改善（P < 0.01或P < 0.05）。   结论   鸦胆子油口服乳液对原发性肝癌具有显著抑制作用,并且作用机制为多方面。       

静脉注射骨髓基质干细胞对放射性脑损伤模型大鼠认知障碍的影响

目的观察静脉注射骨髓基质干细胞(MSCs)对放射性脑损伤模型大鼠认知功能的影响。方法离体分离、培养、增殖成年大鼠MSCs。采用6 MV X线对8～10周龄雌性SD大鼠做全脑照射,照射剂量20 Gy。照后1周采用尾静脉注射Hoechst33342荧光标记的MSCs(4×10~6),注射后4、8周观察大鼠认知功能变化,应用免疫荧光技术检测大鼠脑内Hoechst33342标记细胞及分化的功能细胞。结果与正常对照组相比,模型组大鼠的学习记忆能力明显受损(P<0.01),静脉注射后4、8周,照射组大鼠认知功能明显改善(P<0.05)。结论静脉注射MSCs可显著改善全脑照射大鼠认知功能,MSCs可在放射性脑损伤大鼠脑组织中存活和分化。     

骨髓间充质干细胞在血液系统疾病中的研究进展

 骨髓间充质干细胞（MSC）是骨髓组织中具有多向分化潜能的一类非造血性干细胞,并可通过多种机制参与骨髓造血微环境调控及免疫功能调节,在组织工程、基因治疗、干细胞移植后移植物抗宿主病（GVHD）中应用前景广泛,是医学研究的热点。现就MSC在造血干细胞移植（HSCT）、再生障碍性贫血（CA）、多发性骨髓瘤（MM）中的研究现况及其潜在应用价值作一简要综述。     

肠内营养剂对原发性肝癌术后免疫功能及炎症因子的影响

摘 要：［目的］ 评估肠内营养剂支持治疗对行肝切除术的原发性肝癌患者肝功能、免疫功能及炎症因子的影响。［方法］ 2015年1月至2016年12月在我院接受肝切除手术的肝癌患者91例,观察组（42例）患者给予早期肠内营养,对照组（49例）患者给予传统术后饮食。［结果］ 两组患者术后3d时天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、白蛋白（ALB）、总胆红素（TBIL）及术后7d时AST、ALT水平比较差异均无统计学意义（P>0.05）。观察组术后7d时 ALB、TBIL水平与对照组比较差异均有统计学意义（P<0.05）;两组患者术后3d CD4、CD8、CD4/CD8水平比较差异均无统计学意义（P>0.05）。观察组术后7d CD4、CD8、CD4/CD8水平明显高于对照组（P<0.05）;两组患者术后3d时血清白细胞介素-1（IL-1）、血清白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平比较差异均无统计学意义（P>0.05）。观察组术后7d时 IL-1、IL-6、TNF-α水平明显低于对照组（P<0.05）。观察组的胃肠功能恢复时间、平均住院日及术后并发症均低于对照组（P<0.05）。两组患者术后1年生存率比较无统计学差异（P>0.05）。［结论］ 早期肠内营养支持治疗行肝切除术的原发性肝癌患者可以促进肝功能恢复,改善术后免疫抑制状态,降低体内炎症反应,可促进术后胃肠功能恢复、缩短住院日、减少术后并发症,对预后恢复具有一定的临床意义。     

骨保护素/骨保护素配体（OPG/OPGL）在骨髓基质干细胞复合同种骨修复骨缺损中的表达及意义

目的 探讨OPG/OPGL蛋白在骨髓基质干细胞（BMSCs）复合同种骨移植修复大鼠桡骨缺损中的表达及意义.方法 4周龄SD大鼠BMSCs体外分离培养,取生长状态良好的第3代细胞复合同种骨.同时取8周龄SD大鼠32只,雌雄不限,制备大鼠双侧桡骨中段5mm节段性骨缺损模型.采用自身对照的方法 ,一侧植入BMSCs及同种异体骨颗粒复合物作为实验组;另一侧植入等量单纯同种异体骨颗粒作为对照组.按术后2、4、8、12周4个时间点（每个时间点8只）处死动物并立即于骨缺损部位取材,大体及组织学观察、免疫组织化学（PV法）检测OPG、OPGL蛋白的表达.免疫组化所得数据经计算机图像分析系统计算其平均光密度值（OD值）.结果 术后各时间点大体形态与组织学观察：实验组骨缺损修复速度均明显优于对照组;OPG蛋白免疫组化结果 显示：2、4、8周实验组OPG的表达高于对照组（P＜0.05）,而12周时两组比较差异无统计学意义（P＞0.05）;OPGL蛋白免疫组化结果 显示：2、4周实验组OPGL的表达高于对照组（P＜0.05）,而8、12周时两组比较差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 骨缺损修复区OPG、OPGL蛋白表达水平与骨修复愈合程度密切相关.OPG蛋白表达升高,其成骨作用加强, 而OPGL蛋白表达则相反.提示OPG的高表达可促进骨愈合,减少骨吸收;反之则促进骨吸收.     

间充质干细胞对移植物抗宿主病的免疫调节作用

间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)是骨髓中具有自我更新和多向分化潜能的一种非造血干细胞,其免疫原性很低,在体外能抑制丝裂原或同种异基因抗原刺激的T细胞增殖。移植物抗宿主病(graft versus host disease,GVHD)是异基因造血干细胞移植(allogeneic hematopoietic stem cell transplantation,alloHSCT)后最主要的并发症,主要由供者T细胞所介导,是多种机制共同参与的复杂过程。在动物实验和临床试验中,MSCs具有较强的免疫调节作用,能显著抑制GVHD的发生,缓解其症状,提高受者的存活率;其机制为MSCs通过抑制T细胞的增殖,阻断DCs的分化和成熟,并通过增加CD4+CD25+调节性T细胞的比例来提高干细胞移植的成功率,使GVHD造成的病理损伤明显减轻,从而达到预防和治疗GVHD的目的。相关研究为MSCs有效应用于GVHD等临床免疫性疾病治疗提供了理论指导,并展现出极大的应用前景。