脐带血清在骨髓造血祖细胞培养中的效应

目的:探讨人脐带血清(CBS)在骨髓造血祖细胞培养中的效应,为脐血的应用提供实验依据.方法:用人骨髓单个核细胞,分别加入CBS或混合脐带血清(MCBS)和细胞因子,进行造血祖细胞(CFU-GM、CFU-E、BFU-E、CFU-GEMM)培养,观察集落数.结果:10?S能直接刺激骨髓细胞CFU-GM的形成.CBS的刺激活性和骨髓细胞血型相同与否无关.4人份以上的MCBS,刺激产生的CFU-GM显著高于单人份、双人份混合者,活性稳定.在CFU-GM培养时,20%MCBS与100ng/mlGM-CSF、20%马血清具有相同的效果.MCBS可提高CFU-GM、CFU-E、BFU-E、CFU-GEMM常规体系的集落产率.10%MCBS相当于65.6ng/ml GM-CSF、0.23U/ml、0.3U/ml 0.46U/ml Epo对CFU-GM、CFU-E、BFU-E、CFU-GEMM所起的作用.20%MCBS可直接刺激CFU-E形成.如培养体系内无BpA(爆式集落活性)存在时,形成 BFU-E、CFU-GEMM较少或几乎为零,当含BpA时,可形成一定量的BFU-E、CFU-GEMM集落.结论:CBS(MCBS)内含有能刺激CFU-GM、CFU-E、BFU-E、CFU-GEMM的生长活性;同血型或不同血型4人份以上混合,其刺激活性高,且稳定.具有良好的应用前景.     

速率降温仪在骨髓造血细胞冷冻过程中的应用

速率降温仪在骨髓造血细胞冷冻过程中的应用１０００３６北京空军总医院高玉民，谢艳中图法分类号Ｒ３１８．６ＷＫＬ９１型速率降温仪是一种用于骨髓（ＢＭ）低温冷冻的程序降温仪器。我们在用该仪器进行ＢＭ造血细胞低温冷冻过程中，探索出一套既能消除融合热释放对ＢＭ...     

人骨髓间充质干细胞体外不同分离与培养方法的比较

目的探讨骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)理想的分离、培养方法。方法采用密度梯度离心法和全骨髓贴壁法分离培养人骨髓干细胞,并将其分别置于普通培养瓶6、0Co培养瓶中培养,应用倒置显微镜和免疫组化法观察和鉴定骨髓间充质干细胞;流式细胞术检测细胞表面标志。结果人骨髓干细胞呈均一梭形、成纤维细胞样,形成集落样生长。60Co培养瓶细胞贴壁情况明显好于普通培养瓶,且费用低;免疫组化及流式细胞术显示CD34、CD45表达为阴性,CD29、CD44表达为阳性。60Co照射处理的培养瓶结合采用全骨髓贴壁法分离培养法获得的骨髓干细胞活性高,增殖力强,克隆形成早,传代时间短。结论全骨髓贴壁法和密度梯度离心法均可获得高纯度贴壁生长的骨髓干细胞,其中60Co照射处理的培养瓶结合采用全骨髓贴壁法分离培养简单易行,骨髓干细胞增殖快,活性好,传代力持久。可以收获大量、高纯度的MSCs;本实验为MSCs进一步的研究与临床应用提供了实验方法及依据。     

细胞因子在急性辐射损伤治疗中的作用

急性辐射损伤以及肿瘤患者在放疗或化疗后,均可发生程度不等的骨髓功能抑制。一些细胞因子通过刺激不同分化时期、不同类型的靶细胞影响其增殖和分化,从而对骨髓造血细胞起辐射防护和促进骨髓造血恢复的作用。随着基因工程的发展,人们可以获得越来越多的高纯度重组造血因子,这些因子在急性辐射损伤的实验研究和临床救治中发挥了极其重要的作用。同时,细胞因子治疗也存在一些问题,有待进一步研究和解决。     

人脐带Wharton胶中间充质干细胞的分离、培养与鉴定

目的研究人脐带Wharton胶中间充质干细胞(MSCs)的生物学特性。方法去除新鲜人脐带动静脉和脐带外膜组织,获得Wharton胶,分别采用酶消化法和组织块培养法获得脐带Wharton胶中的干细胞,通过细胞传代培养、生长曲线测定、活细胞鉴定进行细胞生长动力学研究,流式细胞仪分析细胞表面分子特点,组织化学和免疫组化染色鉴定软骨特征性标志物表达情况。RT-PCR检测Sox-9及Col-2A1mRNA表达情况。结果采用酶消化法可以快速分离Wharton胶中MSCs,且细胞迅速贴壁生长;组织块法培养获得种子细胞时间较长。流式细胞仪检测显示所获得的细胞表达CD44、CD105等MSCs标志物,HLA-ABC表达阳性,HLA-DPDQDR表达阴性。经过冻存复苏后免疫表型无显著变化。组织化学和免疫组化染色显示脐带Wharton胶MSCs弱表达软骨特征性标志。RT-PCR显示Wharton胶MSCs表达Sox-9和Col-2A1。结论人脐带Wharton胶MSCs不向造血系分化,且具有前软骨细胞的特性,有望作为软骨组织工程新型的种子细胞。     

来源于骨髓与脐带血的基质细胞基本特性比较研究

目的 比较骨髓与脐带血细胞体外培养基质细胞的基本特性，为基质细胞的选择应用提供依据。方法 用Dexter长期培养体系培养骨髓和脐带血基质细胞，以细胞增殖、细胞形态、细胞化学染色、细胞表面抗原及基质细胞支持另一骨髓细胞形成的鹅卵石造血区、长期培养起始细胞为指标，比较两者的生长特性、成分及功能。结果 生长特性：出现贴壁细胞时间，骨髓细胞为培养3d，脐带血细胞为培养5-6d；细胞融合成片时间，骨髓细胞为培养10～14d，脐带血细胞为培养12—18d；第21天细胞增殖数，骨髓比脐带血细胞增殖少。细胞成分：21d培养后细胞成分，骨髓来源者以成纤维细胞为主，其次是巨噬细胞与内皮细胞，脂肪细胞最少；而脐带血细胞来源者，以巨噬细胞为主，其次是内皮细胞、成纤维细胞，偶见脂肪细胞；细胞化学与上述结果基本一致；细胞表面抗原检测，CD14、CD45的表达骨髓细胞明显低于脐带血细胞。细胞功能：骨髓来源的基质细胞较脐带血细胞的基质细胞支持另一骨髓细胞形成的鹅卵石造血区和长期培养起始细胞明显多。结论 ①生长特性：形成贴壁细胞时间骨髓较脐带血短，骨髓细胞比脐带血细胞有核细胞数增殖快、持续时间相对短。②细胞成分特性：骨髓来源形成的基质细胞以成纤维细胞为主，脐带血来源者以巨噬细胞为主。③细胞功能特性：骨髓细胞形成的贴壁细胞较脐带血细胞形成的贴壁细胞更利于鹅卵石造血区、长期培养起始细胞生长。     

骨髓基质细胞的体外培养与临床应用

目的　验证骨髓基质细胞 (bonemarrowstromalcells,BMSCs)向成骨细胞转化的能力及其临床应用价值。方法　取健康成年大白兔股骨大转子红骨髓 ,在DMEM标准培养液中原代培养骨髓基质细胞 ,传代细胞分别用DMEM标准培养液和加入地塞米松、β 甘油磷酸钠、L 抗坏血酸的条件培养液培养 ,倒置显微镜观察不同培养条件下细胞的形态学特征 ,进行酶学测定 ,计数传代细胞中成骨样细胞转化率 ,免疫组化法检测Ι型胶原表达。同样方法培养人BMSCs,与同种异体骨基质明胶充分混合 ,应用于临床修复创伤所致的骨缺损、骨不连或骨折延迟愈合。结果　体外培养条件下 ,原代细胞呈长梭形 ,具有成纤维细胞的生长特性 ,条件培养的传代BMSCs变为三角形或锥形 ,呈多层生长 ,无接触抑制现象 ,具有与成骨细胞相似的形态和生长特点。ALP染色阳性率可达 85 %以上 ,Ι型胶原免疫组化染色呈强阳性 ,具有与成骨细胞类似的功能性表现。临床应用 4 2例病人 ,随访 8～ 2 6个月 ,取得了满意疗效。结论　BMSCs能够向成骨细胞分化和增殖 ,是骨组织工程学种子细胞的理想来源 ,并有广阔的临床应用前景     

高原地区Hp相关性胃癌前病变患者血清6种细胞因子水平的变化

目的:观察青海高原地区幽门螺杆菌(Hp)相关性胃癌前病变患者血清Th1/Th2细胞因子(IL-1β、IL-2、IL-4、IL-6、IL-8、TNF)水平变化,以探讨其在发病中的可能免疫致病机制。方法:应用放免法(RIA)测定25例慢性萎缩性胃炎(CAG)、17例肠化生(IM)、15例异型增生(Dys)患者血清IL-1β、IL-2、IL-4、IL-6、IL-8、TNF的含量。比较Hp感染与非感染胃癌前病变患者之间;Hp感染CAG炎症活动与非活动患者之间;Hp感染CAG、IM、Dys患者之间血清6种细胞因子含量的差别。结果:Hp感染与非感染胃癌前病变患者之间6种细胞因子含量均无显著性差别(P>0.05);Hp感染CAG炎症活动者血清IL-4含量显著低于非活动者(P<0.05);IM和Dys者均非常显著低于CAG(P<0.01),IL-2在Dys组显著高于CAG(P<0.05)。结论:本地区Hp相关性胃癌前病变中存在血清Th1/Th2失衡,表现为随着胃癌前病变的逐级加重,T淋巴细胞高表达IL-2伴随IL-4低表达现象。     

细胞因子在急性放射病治疗中的应用

随着分子生物学技术的应用,近3～5年来细胞因子从基础研究到临床应用,取得不少进展．     

细胞因子在放射医学及辐射防护中的应用

细胞因子在放射医学及辐射防护中的应用贺福初，宫锋细胞团子的研究已持续十几年。近年来ｄ于分于生物学尤其是基因重组技术的应用，３基础和临床方面的研究取得了长足的进展。Ｅ前一般将细胞因子分成三类：（１）造血生长Ｂ子：如ＧＭ－ＣＳＦ（ｓｒａｎｕｌｏｃｖｔｅ－...     

低温冻存脐血树突状细胞的生物特性研究

目的 考察经低温保存的脐血树突状细胞所表现的生物特性，为树突状细胞的应用提供保存方法。方法 取新鲜脐血细胞和脐血细胞培养产生的树突状细胞，加5％二甲基亚砜－6％羟乙基淀粉的保存剂，－80℃冰箱降温，－196℃保存，40℃复温（前者称“冻存脐血”，后者称“树突状细胞”），再用树状突细胞培养增殖法培养，检测；细胞增殖量，台盼蓝拒染回收率，不染色和染色观察，表面抗原，树状突细胞的混合淋巴细胞刺激指数、抗毒－杀灭效应处理率，比较其变化。结果 形成树突状细胞的时间冻存脐血培养比新鲜脐血迟，细胞增殖量低，冻存脐血台盼蓝拒染为95.8%。冻存树突状细胞形成贴壁树突样细胞比新鲜树突状细胞迟，细胞数增殖量低，冻存树突状细胞的台盼蓝拒染为88.7%。冻存脐血与新鲜脐血比，冻存树突状细胞与新鲜树突状细胞比，其树突样细胞量、CD1a、CD83、HLA-DR表达低；冻存脐血与新鲜脐血比，冻存树突状细胞与新鲜树突状细胞比，刺激指数、效应处理率均低。结论 用5％二甲基亚砜－6％羟乙基淀粉低温保存脐血细胞或经培养增殖的脐血树突状细胞，复温后培养，树突状细胞的生物特性受到了损伤，但仍完整，回收率＞85％。     

裂解血球全血与健康动物血清在牛多杀性巴士杆菌病灭活疫苗生产中使用效果对比试验

兽用生物制品制造及检验规程中规定:牛多杀性巴氏杆菌病灭活疫苗在通气培养过程中,需添加0.1%裂解血球全血。本试验通过在合成培养基中添加裂解血球全血与健康动物血清培养对比,发现在牛多杀性巴士杆菌病灭活疫苗生产中添加一定量健康动物血清,其生长菌数、效力检验、安全检验均与添加0.1%裂解血球全血生产检验指标相一致,且有降低污染率、降低生产成本的效果,值得生产中推广使用。     

粒细胞集落刺激因子对骨髓移植及外周血祖细胞保护的骨髓造血重建

１１ 例急性白血病及中－ 高恶性度非何杰金氏淋巴瘤患者，采用自体／异基因骨髓移植和外周血造血祖细胞保护的大剂量化疗。骨髓或外周血造血祖细胞回输后，开始使用Ｇ－ ＣＳＦ ２．５－ ５ μｇ／ｋｇ，１／日。Ｇ－ＣＳＦ使用天数分别为：外周血造血祖细胞保护组１１±２ ｄ；自体骨髓移植组１８±２ ｄ；异基因骨髓移植组２０±２ ｄ。骨髓涂片显示：骨髓增生活跃。外周血象恢复时间缩短，骨髓及外周血ＣＦＵ－ＧＭ ，ＢＦＵ－Ｅ， ＣＦＵ －ｍ ｉｘ 培养和ＣＤ３４＋ ＣＤ３８＋ 、ＣＤ３４＋ ＣＤ３８－ 细胞检测表明造血祖细胞恢复良好。Ｇ－ＣＳＦ能促进骨髓造血重建，缩短骨髓空虚期，减少严重感染的发生     

小鼠骨髓细胞及骨髓基质细胞混合输注对骨髓移植后造血重建的影响

观察小鼠骨髓细胞及骨髓基质细胞混合输注对骨髓移植后造血重建的影响。给予受致死剂量照射的Ｂａｌｂ／ｃ小鼠输注同基因骨髓细胞１×１０７ 个及经体外扩增的同基因原代骨髓基质细胞 ２×１０５ 个,与单纯骨髓移植组比较,移植后第１４ 天外周血白细胞、血小板回升较快,第１５ 天、第２０ 天ＢＦＵ－ＧＭ、ＢＦＵ－Ｅ、ＣＦＵ－Ｅ、ＣＦＵ－Ｓ明显高于后者,第２０ 天已达正常。　结论：原代骨髓基质细胞不仅是可以移植的,而且能够加快造血重建,提高移植效果。     

人骨髓细胞长期低温保存的研究

目的:探讨人骨髓在液氮长期保存下造血细胞活力.方法:以10%二甲基亚砜、“二步”冻存法在液氮液相中冻存人骨髓细胞,用造血细胞培养的集落形成为指标,定期观察造血细胞活力.结果:20份人骨髓,1～15年CFU-GM回收率由(72.4±10.3)%下降至(40.5±13.2)%,CFU-GM回收率相关公式为:Y=0.7822-0.02573X.15年后BFU-E、CFU-GEMM、LTC-IC形成能力良好.结论:在液氮液相中冻存入骨髓,15年后仍有较好的造血细胞活力.     

流式细胞仪在小鼠造血干细胞基因转移效率测定中的应用

目的探讨流式细胞仪在造血干细胞基因转移效率测定中的应用价值。方法以干细胞因子（ＳＣＦ）、白细胞介素（ＩＬ）３、ＩＬ６单独或联合作用（ＳＣＦ／ＩＬ３、ＳＣＦ／ＩＬ６、ＩＬ３／ＩＬ６、ＳＣＦ／ＩＬ３／ＩＬ６）后的Ｂａｌｂ／ｃ小鼠造血干细胞作为靶细胞,应用含有绿色荧光蛋白（ＧＦＰ）基因的逆转录病毒载体ＧＣＧＰＸＳＮ介导的基因转移技术实施基因转移,采用ＦＡＣＳ型流式细胞仪测定基因转移效率。结果病毒上清转染的阳性对照组基因转移率为０．０６％,以不同细胞因子作用后基因转移效率提高至００７％～０．２０％,细胞因子作用前后比较,除ＳＣＦ／ＩＬ６组外,差异均有显著或非常显著意义（Ｐ＜００５或Ｐ＜００１）。其中以ＳＣＦ／ＩＬ３组与ＳＣＦ／ＩＬ３／ＩＬ６组的提高最为明显,均达０２０％,与其他各细胞因子组比较,差异也有非常显著意义（Ｐ＜００１）。结论应用流式细胞仪可测定出ＳＣＦ、ＩＬ３、ＩＬ６单独或联合作用对小鼠造血干细胞基因转移效率的不同影响,具有快速、方便、准确的优点。     

西格列汀对小鼠造血系统辐射损伤的治疗作用

目的 探讨西格列汀对7 Gy γ射线照射后小鼠造血系统损伤的治疗作用。 方法 将15只C57BL/6小鼠按照区组随机法分为对照组、照射组、西格列汀+照射组,每组5只。照射组和西格列汀+照射组小鼠接受7 Gy 137Cs γ射线一次性全身照射,后者于照射后2 h开始灌胃西格列汀,给药剂量为10 mg/kg,连续给药7 d;对照组和照射组给予等量生理盐水。照射后第30天取外周血进行血象测定,颈椎脱位处死小鼠后取骨髓细胞测定有核细胞数、造血干细胞（HSC）和造血祖细胞（HPC）数量及其活性氧水平、粒细胞-巨噬细胞集落形成单位（CFU-GM）。2组间的比较采用独立样本t检验。 结果 与对照组比较,照射组小鼠的骨髓有核细胞、白细胞、红细胞、血小板计数和血红蛋白、红细胞比容水平均明显减少、下降（t=3.476~12.200,均P<0.05）;HSC和HPC的数量及百分比均明显减少、降低（t=3.174~5.287,均P<0.05）;HSC中活性氧水平明显升高（1980.6±309.3对3994.5±1119.0,t=3.904,P<0.05）,骨髓细胞CFU-GM显著减少（66.2±5.3对30.8±3.9,t=13.240,P<0.05）。与照射组相比,西格列汀+照射组小鼠骨髓有核细胞[（8.0±1.0）×106个对（11.0±0.4）×106个,t=4.593,P<0.05]、白细胞数量[（3.0±0.2）×109个/L对（3.9±0.3）×109个/L,t=7.020,P<0.05]均增多;HPC数量[（33 724.4±10 594.9）个对（101 637.6±17 240.5）个,t=5.951,P<0.05]及百分比[（5.6±1.0）%对（11.5±3.0）%,t=4.163,P<0.05]均上升,HSC中活性氧水平降低（3994.5±1119.0对2415.7±122.9,t=2.375,P<0.05）,骨髓细胞CFU-GM增加（30.8±3.9对38.2±4.4,t=2.964,P<0.05）。 结论 西格列汀对7 Gy γ射线照射后小鼠造血系统损伤有一定的治疗作用。     

自体骨髓基质细胞体外扩增促进病人造血功能恢复的研究

２２例骨髓象完全缓解的急性早幼粒白血病（Ｍ３）接受相同的方案化疗，１２例在化疗结束后第２天回输体外扩增的自体骨髓基质细胞。结果：回输基质细胞的实验组化疗后１、２、３周粒、红系祖细胞产率均高于单纯化疗的对照组（Ｐ＜００５），化疗后实验组外周血象较对照组下降缓慢，且下降到最低点的时间提前，而达到最低点的血象值显著高于对照组（Ｐ＜００１），血象恢复至正常的时间也较对照组提前。提示：骨髓基质细胞输注能促进化疗后造血功能的恢复，缩短骨髓抑制期