电针夹脊穴的抗炎镇痛和免疫调节作用

背景:临床观察证实,针灸具有确切的抗炎和免疫调节的作用,这是针灸防治各类免疫失调和急慢性炎症的基础。目的:观察电针夹脊(对佐剂性关节炎大鼠的抗炎镇痛作用及对其T细胞亚群的影响。设计:完全随机分组设计,对照实验。单位:山东中医药大学针灸基础实验室。材料:选用纯种Wistar大鼠30只。适应性饲养5d后,随机将大鼠分为3组:正常对照组,模型组,电针夹脊(组,每组10只。方法:①实验于2005-01/2005-05在山东中医药大学针灸基础实验室完成。模型组和电针夹脊(组用弗氏完全佐剂造成佐剂性关节炎模型。于造模当天,电针夹脊(组针刺双侧第3,5腰椎夹脊(,用28号0.5寸(约1.65cm)不锈钢毫针在大鼠第3,5腰椎棘突下旁开约0.3cm直刺进针,接G6805-2A型多功能电针治疗仪给予疏密波(频率约4Hz,密波频率约60Hz),强度约为1mA,30min/次,1次/d,连续治疗7d。正常对照组及模型组以相同的方式捆绑固定(用粗布绳将大鼠捆绑固定于大鼠固定器)7d。②于造模前,造模后1,7d进行痛阈测定:采用热痛刺激仪的强光照射大鼠足垫部,将大鼠的缩爪潜伏期作为痛阈值。③造模前,造模后1,7d采用鼠足容积测定器测定大鼠右后爪足容积(容积排水法),计算肿胀率(%)=(造模后鼠足容积-造模前鼠足容积)/造模前鼠足容积×100%。④于造模后8d,采用FACSCalibur流式细胞仪检测血清CD4 ,CD8 细胞表达率并计算CD4 /CD8 。⑤多个样本均数比较采用单因素方差分析和t检验。主要观察指标:电针夹脊(对佐剂性关节炎大鼠痛阈、足肿胀率及血清T细胞亚群的影响。结果:大鼠30只均进入结果分析。①造模后1d,模型组、电针夹脊(组大鼠右后足足容积明显高于正常对照组和造模前(P<0.01);肿胀率明显高于正常对照组(P<0.01)。造模后7d,模型组右后足容积及足爪肿胀率明显高于正常对照组(P<0.01),足容积明显高于造模前(P<0.01);电针夹脊(组右后足足容积和肿胀率明显低于模型组(P<0.05)。②正常大鼠造模前双后足痛阈无明显差异,造模后1d模型组和电针夹脊(组大鼠致炎侧足痛阈较致炎前显著降低(P<0.01),明显低于正常对照组(P<0.01);造模后7d模型组大鼠致炎侧足痛阈仍明显底于致炎前(P<0.05);电针夹脊(组痛阈明显高于模型组(P<0.05)。③模型组大鼠CD4 T淋巴细胞及CD8 T淋巴细胞百分率明显低于正常对照组显著降低(P<0.01),CD4 /CD8 的比值明显高于正常对照组(P<0.05)。电针夹脊(组CD4 细胞百分率高于模型组,但差异不明显,CD8 细胞百分率明显高于模型组(P<0.01),CD4 与CD8 比值明显低于模型组(P<0.05)。结论:电针夹脊(有明显的抗炎镇痛作用,并能调整佐剂性关节炎大鼠的细胞免疫。     

溃疡性结肠炎大鼠C04^＋CD25^＋T细胞的改变

目的 探讨CD4＋CD25^＋T细胞的异常在大鼠溃疡性结肠炎动物模型发病机制中的作用。方法 40只Wistar大鼠分为正常对照组和溃疡性结肠炎模型组，应用三硝基苯磺酸／乙醇法建立溃疡性结肠炎的大鼠模型，进行粪便细菌培养，流式细胞仪分析其外周血单个核细胞（PBMC）和肠系膜淋巴结（MLN）中的CD4^＋CD25^＋T细胞和CD4^＋T细胞的比例，实时荧光PCR测定Foxp3 mRNA的含量。结果 （1）溃疡性结肠炎模型组大鼠PBMC中CD4^＋CD25^＋T细胞的比例明显高于正常（P〈0．05），CD4^＋T细胞的比例明显下降（P〈0．05），MLN中CD4^＋CD25^＋T细胞的比例明显低于正常（P〈0．05），CD4^＋T细胞的比例明显增高（P〈0．05）；（2）模型组大鼠PBMC中Foxp3 mRNA的含量明显增高（P〈0．05）；而MLN中Foxp3 mRNA的含量明显下降（P〈0.05）；（3）模型纽大鼠肠道菌群较正常对照有显著改变（P〈0．05）。结论 CD4^＋CD25^＋T细胞的异常在溃疡性结肠炎的发病机制中起重要作用，其异常可能与肠道菌群的改变有关。     

艾炷灸贴预处理对AA大鼠足肿胀率及应激激素的影响

目的 观察艾炷灸贴预处理对随后佐剂性关节炎（AA）大鼠早期和继发期足肿胀率及下丘脑应激激素的影响。方法 将40只wistar大鼠随机分为正常组、模型早期组和继发组、预灸贴早期组和继发组共5组，于造模前用中药膜剂贴敷大鼠大椎穴后加艾灸，观察其对随后AA大鼠下丘脑促。肾上腺皮质激素释放激素（CRH）、β-内啡肽（β-EP）、神经肽Y（NPY）及足肿胀率的影响。结果 造模后，模型早期组和继发组大鼠的右足肿胀率明显升高（P〈0．01），预灸贴各组较同期模型组降低（P〈0．05～0．01）；下丘脑CRH水平造模后升高（P〈0．05～0．01），但预灸贴早期组较同期模型组有下调趋势，预灸贴继发组下降（P〈0．05）；β-EP水平造模后早期组明显升高（P〈0．01）。继发组变化不大；与同期模型组相比，预灸贴早期组β-EP明显下降，而继发组β-EP却明显升高（均P〈0．01）；下丘脑NPY水平造模后升高（P〈0．05～0．01），预灸贴继发组NPY较同期模型组下降（P〈0．05）。结论 艾炷灸贴预处理可减轻随后AA大鼠足肿胀程度，机理可能与其调节下丘脑CRH、β-EP及NPY水平有关。     

电针夹背穴在佐剂性关节炎大鼠镇痛过程中磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶电针的变化及作用

目的：观察电针夹脊穴对佐剂性关节炎大鼠背根神经节(dorsal root ganglion，DRG)内磷酸化p38MAPK表达的影响，从信号转导的角度研究电针镇痛的机制。方法：以完全福氏佐剂(CFA)佐剂性关节炎大鼠为疼痛模型，采用免疫组化技术，分别检测空白对照组、模型组、及电针治疗组SD大鼠DGG内磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase，MAPK)表达特征。结果：与空白对照组[(7．65&;#177;0．72)s]相比，造模后24，48h及7d后，模型组大鼠痛阚下降分别为(6．67&;#177;0．59)，(6．53&;#177;0．73)，(6．64&;#177;0．76)s，同时DRG内p38MAPK磷酸化明显增多(P&;lt;0．05)，尤以48h后增加明显；电针治疗组大鼠在电针夹脊穴治疗后，24，48h及7d后痛阈检测发现其痛阚回升，分别为(7．3&;#177;0．79)，(7．42&;#177;0．93)，和(7．44&;#177;0．89)s，DRG内p38MAPK磷酸化水平下降(P&;lt;0．05)。结论：p38MAPK可能为电针镇痛中一个重要的信号转导分子，其磷酸化在疼痛及电针镇痛过程中其重要作用。     

大鼠实验性变态反应性脑脊髓炎CD4^＋,CD8^＋的改变及意义

目的：观察实验性变态反应性脑脊髓炎模型大鼠外周血CD4^＋，CD8^＋的改变及免疫调节剂左旋咪唑的作用。方法：实验于2005—05／07在遵义医学院附属医院神经科实验室和贵州省细胞工程重点实验室完成。取Wistar大鼠23只单纯随机分为4组：①正常组（n=5）：不干预。②模型组（n=8）：每只大鼠一次性注入0．5mL豚鼠脊髓匀浆（相当髓鞘碱性蛋白3．5mg）和完全福氏佐剂混合乳剂，其中0．4mL注入双后足掌皮下，0．1mL注入尾近端。在注入抗原乳剂后即刻、24，48h共3次腹腔注射左旋咪唑10mg／kg。③完全福氏佐剂组（n=5）：注射无豚鼠脊髓匀浆生理盐水＋完全福氏佐剂混合液0、5mL，用法同模型组，不注射左旋咪唑。④左旋咪唑组（n=5）：每间隔24h腹腔注射左旋咪唑，用法同模型组。将注射日规定为第0天，每日观察2次记录大鼠神经体征变化，所有大鼠于注射第16天取材，流式细胞仪检测外周血CD4^＋，CD8^＋的变化，苏木精一伊红染色观察病理变化，Loyez氏髓鞘染色法观察髓鞘改变。结果：23只大鼠全部进入结果分析。①神经体征变化：正常组、完全福氏佐剂组和左旋咪唑组均未出现症状，模型组8只大鼠中有7只于第14天出现症状，发病率为87．5％。②CD8^＋的变化：左旋咪唑组和模型组低于正常组[（31．24&;#177;7、01）％，（20．64&;#177;5．52）％，（41、73&;#177;7．28）％，P〈0．05，0．01]，且模型组低于左旋咪唑组（P〈0、05）。③CD4^＋的变化：左旋咪唑组和模型组高于正常组[（45、21&;#177;5．35）％，（43、30&;#177;5．47）％，（34．44&;#177;7．01）％，P〈0．05]，但前2组比较差异不显著。④CD4＇／CD8^＋：左旋咪唑组和模型组高于正常组（1．53&;#177;0、49，2．33&;#177;1．04，0．86&;#177;0．32，P〈0．05．0、01）。⑤模型组苏木精-伊红染色见大脑自质及脊髓血管周围有大量炎性细胞浸润；Loyez氏染色见部分脱髓鞘改变。结论：①大鼠实验性变态反应性脑脊髓炎是通过降低CD8^＋、增高CD4^＋及CD4^＋／CD8^＋介导的免疫性疾病。②左旋咪唑破坏了机体的免疫平衡，是诱导实验性变态反应性脑脊髓炎发生的重要免疫凋节剂。     

电针夹背穴在佐剂性关节炎大鼠镇痛过程中磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶电针的变化及作用

目的观察电针夹脊穴对佐剂性关节炎大鼠背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)内磷酸化 p38MAPK表达的影响,从信号转导的角度研究电针镇痛的机制.方法以完全福氏佐剂(CFA)佐剂性关节炎大鼠为疼痛模型,采用免疫组化技术,分别检测空白对照组、模型组、及电针治疗组 SD大鼠 DGG内磷酸化 p38丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)表达特征.结果与空白对照组 [(7.65± 0.72) s]相比,造模后 24,48 h及 7 d后,模型组大鼠痛阈下降分别为 (6.67± 0.59),(6.53± 0.73), (6.64± 0.76) s,同时 DRG内 p38MAPK磷酸化明显增多(P< 0.05),尤以 48 h后增加明显;电针治疗组大鼠在电针夹脊穴治疗后, 24, 48 h及 7 d后痛阈检测发现其痛阈回升,分别为 (7.31± 0.79),(7.42± 0.93),和 (7.44± 0.89) s , DRG内 p38MAPK磷酸化水平下降(P< 0.05).结论 p38MAPK可能为电针镇痛中一个重要的信号转导分子,其磷酸化在疼痛及电针镇痛过程中其重要作用.     

电针夹脊穴在佐剂性关节炎大鼠镇痛过程中磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶的变化及作用

目的:观察电针夹脊穴对佐剂性关节炎大鼠背根神经节(dorsalrootganglion,DRG)内磷酸化p38MAPK表达的影响,从信号转导的角度研究电针镇痛的机制。方法:以完全福氏佐剂(CFA)佐剂性关节炎大鼠为疼痛模型,采用免疫组化技术,分别检测空白对照组、模型组、及电针治疗组SD大鼠DGG内磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activatedproteinki-nase,MAPK)表达特征。结果:与空白对照组犤(7.65±0.72)s犦相比,造模后24,48h及7d后,模型组大鼠痛阈下降分别为(6.67±0.59),(6.53±0.73),(6.64±0.76)s,同时DRG内p38MAPK磷酸化明显增多(P<0.05),尤以48h后增加明显;电针治疗组大鼠在电针夹脊穴治疗后,24,48h及7d后痛阈检测发现其痛阈回升,分别为(7.31±0.79),(7.42±0.93),和(7.44±0.89)s,DRG内p38MAPK磷酸化水平下降(P<0.05)。结论:p38MAPK可能为电针镇痛中一个重要的信号转导分子,其磷酸化在疼痛及电针镇痛过程中其重要作用。     

外源性磷酸肌酸对力竭运动小鼠的影响

目的：观察电针丰隆穴对高脂血症大鼠炎症因子细胞间粘附分子（ICAM-1）、单核细胞趋化因子（MCP-1）含量的影响。方法：SD大鼠50只,随机分为空白对照组（A组）、模型对照组（B组）、模型饮控组（C组）、模型电针组（D组）、模型饮控＋电针组（E组）各10只。干预60d后,测定血脂含量及ICAM1、MCP-1的含量。结果：与A组比较,B组大鼠血浆胆固醇（TC）、低密度脂蛋白（LDL-C）含量明显上升（均P％0．01）,高密度脂蛋白（HDI．C）明显下降（均P％0．01）;C、D组大鼠血浆TC、LDL-C与B组比较均明显下降（P〈0．05,0．01）,但较A组均明显升高（均P〈0．01）;E组大鼠血浆中TC、LDL-C含量均较B、C组明显降低（均P〈0．01）。除E组外,其余各组大鼠腹腔巨噬细胞及ICAM1、MCP-1含量与A组比较均明显增加（P〈0．05,0．01）,且B、C组增加更为显著（均P〈0．01）;与B、C组比较,E组巨噬细胞及ICAM-1、MCP-1含量显著下降（均P〈0．01）。结论：电针丰隆穴能够明显下调高脂血症大鼠血浆中的TC、LDL-C、巨噬细胞及ICAM、MCP-1的含量,从而达到对高脂血症的治疗作用。     

苦豆子总碱对大鼠实验性结肠炎CD4^＋CD25^＋,CD8^＋CD28^-表达的影响

目的：观察苦豆子总碱对实验性结肠炎大鼠的外周血和结肠组织中调节性T细胞CD4^＋CD25^＋，CD8^＋CD28^-表达的影响。方法：实验于2006—03／08在南方医科大学实验室进行。①分组：将72只SD大鼠数字表法随机分成正常对照组，模型组，5-氨基水杨酸组，苦豆子15，30，60mg／kg组共6组，每组12只。②造模：除正常对照组外，其他5组采用三硝基苯磺酸灌肠法制备结肠炎大鼠模型，正常对照组给予等量生理盐水灌肠。③给药：造模第2天开始灌胃给药，2mL／只，1次／d。5-氨基水杨酸组灌胃5-氨基水杨酸400mg／kg，苦豆子15，30，60mg／kg组灌胃酸苦豆子总碱15，30，60mg／kg，其他2组灌等量生理盐水。④取材：在第1周和第3周各组分别取6只大鼠处死，测定结肠黏膜组织和外周血中CD4^＋CD25^＋，CD8^＋CD28^-的表达水平，观察苦豆子总碱对模型大鼠急慢性期T细胞亚群的影响。结果：72只大鼠进入结果分析。①建模第1周：模型组结肠内T细胞亚群CD4^＋CD25^＋，CD4^＋CD25＋／CD25^-，CD8^＋CD28^-及CD8^＋CD28^-／CD28^＋高于正常对照组（P〈0．05，0．01），苦豆子各剂量组数据虽低于模型组，但经统计学处理后差异不显著（P〉0．05）。②建模第3周：模型组大鼠外周血中的CD8^＋CD28和CD8^＋CD28^-／CD28^＋的表达高于正常对照组和苦豆子30，60mg／kg组[CD8^＋CD28：（11.3&;#177;1．3）％，（5．4&;#177;2．2）％，（5．8&;#177;3．2）％，（6．0&;#177;4．2）％；CD8^＋CD28^＋／CD28^＋：（1．2&;#177;0．8）％．（0．4&;#177;0．1）％，（0．5&;#177;0．2）％，（0．5&;#177;0．4）％；P〈0．05，0．01]；结肠组织中的CD8^＋CD28^-和CD8^＋CD28^-／CD28^＋的表达也高于正常对照组和苦豆子30，60mg／kg组[CD8^＋CD28^-：（17．4&;#177;4．2）％，，（3．8&;#177;4．5）％，（3．9&;#177;4．0）％．（4．2&;#177;3．6）％；CD8^＋CD28^-／CD28^＋：（1．8&;#177;0．3）％，（0．7＋0．3）％．（0．7＋0．2）％，（0．7&;#177;0．3）％：P〈0．05，0．01]。结论：苦豆子总碱30，60mrg／kg能下调实验性结肠炎大鼠慢性期高表达的CD8^＋CD28-T细胞。     

夹脊电针对自体髓核移植大鼠神经功能及痛阈的影响

目的：探讨在大鼠自体髓核移植致腰神经根性疼痛模型中,夹脊电针对大鼠运动功能评分（BBB）及机械刺激缩爪反射潜伏期值（PWT）、热辐射缩爪反射潜伏期值（PWL）的影响。方法：将32只SD大鼠随机分成电针组、腰痛宁组、假手术组、空白对照组,建立大鼠自体髓核移植致腰神经根性疼痛模型,电针组给予夹脊电针治疗,腰痛宁组给予腰痛宁灌胃,假手术组及空白对照组不予治疗,分别于造模前、造模后7d（治疗前）、造模后21d（治疗后）观察大鼠BBB、PwT及PwL评分的变化。结果：治疗前空白组BBB、PWT及PWL评分均显著高于电针组、腰痛宁组及假手术组（P〈0．05）,电针组、腰痛宁组及假手术组组间比较差异无统计学意义。治疗后电针组、腰痛宁组、假手术组大鼠BBB、PWT及PWL评分均明显高于治疗前（P〈0．05）;电针组与假手术组治疗后组间差异无统计学意义,且均明显高于腰痛宁组（P〈0．05）。结论：髓核是腰椎间盘突出症引起腰腿疼痛及神经功能障碍的重要原因,夹脊电针可改善腰椎间盘突出症神经功能障碍,减轻疼痛。