狂犬病病毒分子流行病学研究进展

狂犬病病毒分子流行病学研究是防控狂犬病暴发的前提.已有的研究成果显示,对狂犬病病毒分子流行病学研究以全基因组测序为好,提高犬狂犬病疫苗免疫覆盖率和建立健全狂犬病疫情预警网络平台可能是扭转我国目前狂犬病高发的关键所在.此文综述了基因序列分析和氨基酸序列分析的狂犬病病毒分子流行病学研究进展.     

云南省富源县狂犬病病例临床和流行病学特征分析

[目的]了解富源县狂犬病发病态势，提出综合防治措施，以有效控制狂犬病疫情的蔓延。[方法]使用全国统一的《狂犬病病例个案调查表》对富源县境内狂犬病病例进行流行病学个案调查。[结果]2006年富源县发病20例，死亡20例，发病率为2．76／10万，病死率为100％，其中犬伤占95％，猫咬伤占5％。潜伏期最短3天，最长2年，中位数27．5天；病程最短2天，最长8天，中位数3．5天。病例分布于7个乡镇19个村。临床表现主要以伤口周围蚁走感，患者怕水、怕风、怕光为主。[结论]富源县狂犬病疫情态势严峻。     

贵州及周边省市狂犬病病毒的分群和进化研究

目的 全面掌握贵州及周边省市狂犬病病毒(RABV)的遗传进化特征和分群特点,了解狂犬病疫苗株与流行株的分子遗传差异,为贵州狂犬病疫情的预防和控制提供指导依据.方法 搜索GenBank数据库中贵州及周边5个省市具有明确时间、地区及宿主信息的流行毒株,对其糖蛋白基因(G)全序列进行汇总,并结合本实验室获得的贵州毒株和国内现役疫苗株G序列,利用MEGA和BEAST软件分别进行系统进化和时间进化分析.结果 贵州及周边省市79株RABV均属于基因1型,9个类群的RABV流行株具有明显的地域特征,11株疫苗株分化为2个类群;RABV流行株与疫苗株G基因核苷酸和氨基酸同源性分别为0.827～0.999和0.713～0.998;贵州及周边省市RABV流行毒株的最近共同祖先(TMRCA)可追溯至150年前.结论 贵州及周边省市流行的RABV优势毒株群仍属于基因1型,但毒株经过多年流行已经出现了分化,有必要对流行毒株与疫苗株的遗传变异一致性进行深入研究.     

广西玉林市2005—2012年狂犬病病原学监测及病毒N基因特征分析

目的分析2005—2012年广西玉林市狂犬病病原学监测结果及病毒N基因遗传变异特征,为狂犬病防控提供科学依据。方法 2005—2012年在广西玉林市采集犬脑组织及临床诊断人狂犬病病例的唾液进行病原学检测,检测阳性标本进行N基因核苷酸序列测定、同源性比较和种系发生分析。结果共采集、检测外观健康犬脑组织728份、临床诊断人狂犬病病例唾液33份,RT-PCR检测阳性率分别为0.96%(7/728)和51.52%(17/33)。获得5条犬源、6条人源狂犬病病毒株N基因全序列。该11条序列之间的核苷酸同源性为94.7%~100.0%,与广西以往分离株GX01的核苷酸序列的同源性为94.5%~98.4%,与疫苗株CTN株的同源性为94.6%~99.7%。进化树分析显示,犬源株和人源株病毒N基因亲缘进化关系很近,处于同一分支,都属于基因Ⅰ型狂犬病病毒。结论从病原学和病毒分子水平证实玉林市外观健康犬携带狂犬病毒及17例临床诊断病例为确诊病例,其病原为狂犬病病毒基因I型,阳性带毒犬的流动是造成本病传播和扩散的主要因素,也是造成该地区疫情高发的重要原因之一。     

青岛市2008-2012年狂犬病流行特征分析

目的掌握青岛市2008--2012年狂犬病的流行特征。方法收集2008--2012年人间狂犬病疫情资料,采集可疑狂犬的脑组织样品,用直接荧光抗体和lit—PCR方法检测狂犬病病毒感染状况。对全部资料进行描述分析。结果2008—2012年全市共报告狂犬病29例,分布于7个区（市）。2008—2011年发病率连续上升,最高年发病率达0．15／10万。农村病例占96．55％。平度市发病率居各区（市）首位,为0．29／10万。11月病例最多,7—12月病例是1—6月的3．14倍。男女性别比为2．22：1,年龄在27~79岁之间,30~59岁占72．41％,农民占93．10％。Ⅱ、Ⅲ级暴露分别占24．14％和75．86％。86．21％的患者伤口未处理,93．10％的患者未接种狂犬病疫苗,所有患者均未进行狂犬病被动免疫。潜伏期14~413d,中位数为80．5d。被家犬咬伤16例,被流浪犬咬伤12例,因屠宰犬感染1例。5份可疑狂犬脑组织样品中,3份狂犬病病毒阳性。结论2008--2012年青岛市狂犬病疫区不断扩大,病例明显增多,发病以农民为主。暴露后未进行规范处詈县发病的丰要原因．因此．府以暴露后处詈为首点．加强综合防榨。     

浙江省不同宿主来源狂犬病病毒N基因分子特征分析

目的 测定浙江省不同宿主（人、鼬獾、犬）来源的狂犬病病毒街毒株N基因序列, 分析病毒遗传变异特征及其与流行的关系。方法 采用直接免疫荧光试验和反转录聚合酶链式反应检测狂犬病病毒阳性标本N基因核苷酸序列, 利用生物信息学软件分析基因序列和编码蛋白。结果 共获得浙江省2 个人源、5 个鼬獾源和11 个犬源狂犬病病毒街毒株N基因核苷酸序列, 18 个核苷酸和氨基酸序列同源性在89.7%～100.0%和98.4%～100.0%, N蛋白一级结构上绝大部分为稳定区域, 编码基因的核苷酸变异多为无义突变, 系统发育分析显示18 个街毒株均属于传统的基因1 型。结论 浙江省不同宿主来源狂犬病病毒的流行具有地域性特征, 同类宿主动物病毒株或来自同一县域/相邻县域的毒株在地理位置上最为近缘, 但人源株病毒更具有复杂性。浙江省狂犬病病毒街毒株的流行具有通过犬向鼬獾和人传播, 并在犬、鼬獾中跨区域循环传播的特点。     

狂犬病病毒分子生物学研究进展

1888年Roux首次分离出狂犬病病毒,但其结构和形态一直到1962年应用感染鼠的肾细胞培养的粗制品及负染技术首次在电镜下才被弄清,随后病毒在鸡胚组织、神经组织中增殖成功,从而促进了对狂犬病病毒分子生物学进一步认识.     

2007～2008年高州市人狂犬病暴露与犬携带狂犬病病毒情况调查

[目的]了解高州市外观健康犬只狂犬病病毒携带情况和人群狂犬病暴露与处置情况,为提出狂犬病防制对策提供依据。[方法]收集2007年高州市犬只饲养与动物伤人资料,对2008年高州市某乡小学205名学生家长进行狂犬病知识与犬伤情况问卷调查,2008年7～9月在市场采集健康犬脑和及唾液腺检测狂犬病病毒。[结果]高州市2007年动物伤人12029例,其中被犬所伤者占80.46%。调查205人,85.37%听说过狂犬病,其中66.34%知道狂犬病是被动物伤所致;61.46%的家里养犬。检测200只犬的标本,均为狂犬病病毒阴性。[结论]高州市家养犬只数量多,犬伤暴露状况严峻,居民狂犬病相关知识知晓率不高,尚未发现携带狂犬病病毒的犬只。     

句容市2003～2007年人狂犬病流行特征分析

目的总结分析句容市疾病预防控制中心预防医学门诊近5 a狂犬病暴露特征和发病情况,进一步探讨狂犬病防治对策。方法收集整理统计分析句容市2003～2007年被动物致伤后进行狂犬病预防的人群资料和人狂犬病发病资料。结果近5 a规范处置的21 596例人狂犬病暴露患者无一例发病,男女性别比为1.47∶1,以10岁以下幼托儿童暴露概率最高,全年各月都有发生,7、9月有明显高峰;犬类伤人占狂犬病暴露的86.85%,家犬伤人达74.60%,又以无反常表现外观健康动物伤人为主。同期报告9例人狂犬病病例均为暴露后未进行伤口处理和接种疫苗而发病。结论加强家犬等动物饲养管理,加大狂犬病防治知识普及力度,及时、规范、彻底处置暴露伤口、全程接种狂犬疫苗、积极选用狂犬免疫球蛋白是预防狂犬病的有效措施。     

广西狂犬病病毒分子流行病学研究

目的分析广西狂犬病毒的分布和来源,从病原学角度分析广西狂犬病疫情高发的原因。方法2005年9月~2006年4月在广西玉林、贵港、柳州、来宾、南宁和河池等6市共收集健康犬脑标本1 352份,用直接免疫荧光法(DFA)和RT-PCR法检测狂犬病毒,其中22份标本完成狂犬病毒N基因编码区下游720bp核苷酸序列的测定。结果用DFA法检测出阳性标本160份,阳性率为11.83%,RT-PCR检测出阳性标本26份,阳性率1.9%,对其中22份标本完成N基因编码区下游720bp核苷酸序列的测定,核苷酸序列同源性为87.8%~100%,推导氨基酸序列的同源性为97.5%~99.6%,表明广西病毒标本N基因核苷酸序列的变异主要是同义突变。种系发生分析显示,广西病毒标本分为A、B、C群,各群分布范围不同,具有明显地域性特征;中国存在的3群狂犬病毒(CHINA-1、CHINA-2和CHINA-3群)目前在广西均有分布。广西流行的3群病毒来源各不相同:A群可能来源于与广西相邻的湖南、贵州;B群可能由广西北部省区传入;C群是在广西境内循环的毒株。结论广西境内普遍存在狂犬病毒感染犬只,并有外省狂犬病毒的传入,可能是近年广西狂犬病疫情上升的重要原因。     

Complex genetic structure of the rabies virus in Bangkok and its surrounding provinces, Thailand: implications for canine rabies control

Dog vaccination and population management have been suggested as priorities in attempts at disease control in canine rabies-endemic countries. Budget limitations and the complexity of social, cultural and religious variables have complicated progress in the developing world. In Bangkok, Thailand, an intensive canine vaccination and sterilization programme has been in place since November 2002. Our objective was to determine if the rabies virus could be mapped according to its genetic variations and geographical location on the small localized scale of Bangkok and its surrounding provinces. Phylogenetic characterization of 69 samples from Bangkok and five neighbouring and two remote provinces, by limited sequence analysis of the rabies virus nucleoprotein gene, distinguished six different clades. Rabies viruses of four clades were intermixed in Bangkok and in the surrounding highly populated regions whereas the other two clades were confined to rural and less populated provinces. Such a complex pattern of gene flow, particularly in Bangkok, may affect the outcome of canine control programmes.     

云南省楚雄州汉坦病毒宿主动物及分子流行病学研究

目的 掌握汉坦病毒(HV)在云南省啮齿动物中的流行情况及其遗传特征.方法 采用笼夜法捕鼠,鼠肺标本用直接免疫荧光法检测HV抗原,用RT-PCR法检测HV核酸及分型,对产物进行序列测定,用PHYLIP软件包进行系统发生分析.结果 2005-2006年在云南省楚雄州10个县(市)居民区共捕获鼠类4属8种1421只,其中褐家鼠1056只,构成比高达74.31%,其次为黄胸鼠(19.70%).检测鼠肺组织1029份,HV抗原阳性53份,总带病毒率为5.15%,带病毒鼠种为褐家鼠(5.08%,38/748))、黄胸鼠(5.97%,12/201)、大足鼠(7.69%,2/26)和斯氏家鼠(6.25%,1/16).HV汉城型(SEO)核酸检测阳性21份(褐家鼠15份,黄胸鼠4份,大足鼠2份).获得的12个病毒S片段核苷酸序列与GenBank中国SEO型病毒R22、L99和HLD65株同源性较高,为87.1%～99.7%;与汉滩型(HTN)76-118株同源性仅为64.4%～69.1%.系统进化分析显示,楚雄州12个病毒S片段核苷酸序列与SEO型亲缘关系较近,与HTN型及其他型HV相距较远,证实这12份病毒标本均为SEO型病毒,并可分S1和S3两个亚型.结论 首次证实楚雄州10个县(市)广泛存在以褐家鼠为主要传染源的HFRS家鼠型疫源地及SEO型病毒的流行.分析发现SEO型不同亚型病毒的分布有其地域特点和独立性.     

浙江省慈溪市犬类狂犬病病毒携带状况调查及变异研究

目的研究犬类狂犬病病毒的携带状况及变异,为正确有效控制狂犬病疫情提供依据。方法根据狂犬病疫情分布,用分层采样法,采集相关地区犬脑51只,用免疫荧光法、夹心酶联吸附法、小鼠颅内接种试验法及RT-PCR进行检测。分离狂犬病病毒并进行N基因测序。结果在流浪犬只中发现狂犬病毒株(命名CXs)。流浪犬带毒率7.69%,CXs与疫苗株和固定毒株的NJ进化树比较,发现与WZO(H)株100%同源,与狂犬病毒固定毒株相比更接近CTN株(该地区使用的疫苗株)。结论当前使用的狂犬疫苗用于预防狂犬病是可靠的。经狂犬病流行特征和暴露后免疫预防处理分析,加强犬只的管理、免疫,暴露后采用规范清创,正确使用狂犬疫苗,合理使用狂犬免疫球蛋白(或血清)仍是当前防治狂犬病需遵循的原则。     

贵州省安龙县21例人狂犬病的流行病学调查

目的 分析2004年2月8日至5月1日在贵州省安龙县发生的21例狂犬病患者,探讨局部地区爆发性流行的因素。方法 对21例狂犬病患者进行个案调查,用间接免疫荧光法检测犬脑组织中的狂犬病毒抗原。结果 在近3个月的时间内,安龙县共发生21例狂犬病,发病率为5.12/10万。在21例狂犬病患者中有20例被犬所伤,1例为猫所伤;全部病例平均潜伏期为36.52天,但潜伏期<15天的病例有6例;21例病例中17例未进行正确的伤口处理,9例接种疫苗,其中仅3例为及时接种。所有21例没有注射抗狂犬病毒血清或人抗狂犬病毒免疫球蛋白。在疫点周围采集的73只犬脑组织中,9只犬脑组织狂犬病病毒抗原为阳性,阳性率13.33％。结论 犬饲养量大,犬的病毒携带率高,伤后处理不及时不规范,疫苗接种率低可能是安龙县狂犬病发病爆发性流行的主要原因。     

湖南省2007年狂犬病病原学监测

目的 了解湖南省狂犬病病毒的分布及来源,从病原学角度分析该省狂犬病疫情高发的原因.方法 采集湖南省人间狂犬病高、中、低疫区市售家犬脑组织及疑似病例、病犬标本,用直接免疫荧光法(DFA)和RT-PCR检测狂犬病病毒,RT-PCR阳性标本进行狂犬病病毒N基因片段核苷酸序列分析. 结果 外观正常犬脑组织狂犬病病毒阳性率为2.78%,23株狂犬病病毒N基因片段核苷酸序列同源性范围为88.8%～100.0%,表明主要足同义突变,病毒株在省内的分布无明显的地域性.系统发生树揭示狂犬病病毒在湖南省省内及与周边省份(贵州、湖北、广西)和其他省份(江苏、河南)间存在扩散循环传播.疑似病例的唾液、尿液、血液标本均未检出狂犬病病毒,皮肤标本检出1例阳性. 结论 湖南省内普遍存在狂犬病病毒感染犬只,省内与外省的病毒分离株有高度的亲缘关系,此为疫情高发的主要原因.     

湖南省2006年狂犬病病原学监测

目的 了解湖南省狂犬病病毒的分布及来源,从病原学角度分析该省狂犬病疫情高发的原因.方法 采集湖南省人间狂犬病高、中、低疫区市售家犬脑组织及疑似病例、病犬标本,用直接免疫荧光法(DFA)和RT-PCR检测狂犬病病毒,RT-PCR阳性标本进行狂犬病病毒N基因片段核苷酸序列分析. 结果 外观正常犬脑组织狂犬病病毒阳性率为2.78%,23株狂犬病病毒N基因片段核苷酸序列同源性范围为88.8%～100.0%,表明主要足同义突变,病毒株在省内的分布无明显的地域性.系统发生树揭示狂犬病病毒在湖南省省内及与周边省份(贵州、湖北、广西)和其他省份(江苏、河南)间存在扩散循环传播.疑似病例的唾液、尿液、血液标本均未检出狂犬病病毒,皮肤标本检出1例阳性. 结论 湖南省内普遍存在狂犬病病毒感染犬只,省内与外省的病毒分离株有高度的亲缘关系,此为疫情高发的主要原因.     

河南省2000-2005年人狂犬病流行特征与病原学分析

为了解河南省2000—2005年人狂犬病流行情况和病原学特征，进行回顾性调查，并对2005年采集的犬脑组织做病原分子生物学及遗传学分析。     

Molecular epidemiology of human rabies viruses in Sri Lanka

Rabies is a lethal zoonotic disease caused by the rabies virus, which is transmitted by rabid animals to humans. Rabies is prevalent in all continents, with over 60% of human deaths occurring in Asia. Sri Lanka is a rabies-endemic country. This study shows that rabies afflicted more older individuals than children in Sri Lanka between 2008 and 2010. This novel finding indicates that older people in Sri Lanka should be more aware of the risk of rabies. Phylogenetic analyses of the rabies N and G genes showed that the Sri Lankan rabies viruses are distinct and probably originated from a single clone. The G–L noncoding region is highly diverse, and is suitable for the analysis of virus evolution within a country. A phylogenetic analysis of this region showed high diversity in the currently circulating Sri Lankan rabies viruses, which can be divided into seven clades. Some clades are unique to a specific geographic region, whereas others occur at multiple locations. This indicates that the movement of dogs, the main rabies-transmitting animal in Sri Lanka, is restricted in some areas but less limited in others. These data may help to formulate a more efficient rabies control program in Sri Lanka.