针刺对大鼠脊髓损伤后脊髓前角运动神经元功能的影响

目的探讨针刺对脊髓损伤(SCI)大鼠前角运动神经元功能恢复的影响。方法成年雄性SD大鼠60只,改良Allen法压迫致伤T8、T9,随机分为实验组和对照组,伤后分别给予电针刺激大鼠双下肢足三里和悬钟、伏兔和三阴交穴,取治疗2,4,6周伤段脊髓进行PCR扩增和组织切片。利用RT-PCR技术检测伤区脊髓胶质源性神经营养因子(GDNF)mRNA基因体内表达的变化;应用尼氏染色、酶组织化学染色方法观察大鼠SCI后伤区脊髓前角运动神经元存活的数目和乙酰胆碱酯酶(AChE)的变化;采用斜板试验和BBB评分法观察大鼠后肢运动功能恢复情况。结果实验组较对照组AChE活性显著增加(P<0.01);实验组脊髓前角大、中型神经元的数目较对照组明显增加(P<0.05);实验组GDNF mRNA基因体内表达较对照组明显增加(P<0.01);大鼠SCI 3周后针刺治疗组后肢运动功能评分均明显高于对照组(P<0.05)。结论针刺治疗对脊髓损伤后前角运动神经元的功能恢复有一定的促进作用。     

挤压伤后脊髓腹角运动神经元NGF,BDNF表达的变化

为探讨脊髓挤压伤后早期不同时间腹角运动神经元NGF和BDNF的表达变化，建立脊髓挤压伤模型，取挤压伤位点尾侧段T13节段脊髓制作冰冻切片，运用NGF，BDNF兔抗血清以免疫组化ABC法染片，观察并计数腹角NGF和BNDF的阳性神经元数。结果：NGF主要分布于正常大鼠脊髓腹角运动神经元的胞核及胞浆，损伤后21d，NGF的阳性神经元数较对照、损伤1d及7d组均明显增多（P＜0．01），与NGF比较，对照组脊髓腹角亦见BDNF免疫阳性神经元，胞浆染色、胞核不着色，损伤后24h，BDNF阳性神经元数已较正常者有显著增加（P＜0．05），此后维持该水平至21d，结论：脊髓挤压伤后腹角神经元NGF和BDNF的表达明显增加，提示NGF和BDNF可能在脊髓损伤修复的早期反应中发挥作用。     

大鼠不同类型臂丛根性损伤后脊髓运动神经元NOS的表达

目的 研究成年大鼠不同类型臂丛损伤后脊髓运动神经元一氧化氮合酶（NOS）表达与神经元死亡之间的关系。方法 选用76只健康成年SD大鼠，分别造成臂丛神经根性切断伤与根性撕脱伤，于损伤后不同时间观察脊髓前角运动神经元的存活率，以及NOS在脊髓前角运动神经元中的表达情况。结果 臂丛神经根性切断伤后，损伤侧脊髓前角运动神经元无明显死亡，且未见NOS表达。臂丛神经根性撕脱伤后1周，损伤侧脊髓前角运动神经元数目开始减少，并出现NOS阳性表达。之后随着NOS阳性神经元增多，神经元死亡率也增加，6周后神经元数目基本维持稳定而NOS阳性神经元逐渐减少消失。结论 臂丛神经根性撕脱伤后，NOS参与损伤后脊髓运动神经元死亡，或在运动神经元死亡中起重要作用。     

臂丛神经根性损伤后脊髓运动神经元死亡的实验研究

目的 研究臂丛神经根笥发断伤及根性撕脱后脊的前角运动神经元的死亡情况。方法 选用６０只健康成年ＳＤ大鼠,分别造成臂丛神经根笥切断僵和根性撕脱伤,于手术后不同时间点取髓标本,观察颈髓前角运动神经元数目的变化。结果 臂丛神经根笥切务后,脊髓前角运动神经元数目无明显变化,而根性撕脱伤１周后神经九目开始减少,２周时神经元数自己减少３０％,６周时达７０％,撕脱伤与切断伤之间差异有显著性（Ｐ〈０．０１）。结论     

移植NT-4基因修饰细胞对大鼠前角运动神经元损伤的保护作用

目的：观察神经营养素４（ＮＴ－４）基因修饰细胞对成年大鼠脊髓前角运动神经元损伤的保护作用。方法：应用逆转录病毒介导的体外ＮＴ－４基因转移方法,制备高表达ＮＴ－４的基因修饰细胞。离断大鼠左侧坐骨神经作为外周神经损伤模型,右侧作为对照,在离断外移植ＮＴ－４基因修饰细胞。观察大鼠脊髓前角运动神经元尼氏染色和胆碱酯酶染色的变化。结果：在移植ＮＴ－４基因修饰细胞组和对照组间,尼氏和胆碱酯酶染色有显著性差异。     

胶质源性神经营养因子对脊髓损伤后前角运动神经元的保护作用

目的 :探讨胶质细胞源性神经营养因子 (GDNF)对脊髓损伤后运动神经元的保护作用。 方法 :大鼠分为假手术组、生理盐水 (NS)组和 GDNF组 ,改良 Allen法撞击致伤 T1 2 脊髓 ,蛛网膜下腔分别给予 NS和 GDNF,分别取不同时间的伤段脊髓进行切片 ,应用酶组织化学染色方法显示脊髓前角外侧核运动神经元中胆碱酯酶 (Ch E)和酸性磷酸酶 (ACP)活性 ,并结合计算机进行图像分析。结果 :GDNF组较 NS组 Ch E活性显著增加 ,ACP活性显著降低 ;2 1d时 NS组的 ACP及 Ch E活性均高于及低于假手术组 ;GDNF组与假手术组 Ch E和 ACP活性差别不显著。 结论 :GDNF对脊髓损伤后的前角外侧核运动神经元有一定的保护作用     

神经生长因子对大鼠脊髓损伤后神经元N-甲基-D-天门冬氨酸受体的影响

目的 :探讨神经生长因子 (NGF)对损伤脊髓保护作用的分子机制。方法 :采用Allen′s法以 10g× 2 .5cm力致伤大鼠T8脊髓 ,插蛛网膜下隙导管于术后即刻、2h、4h、8h、12h、2 4h ,各注入NGF溶液 ,并与生理盐水组和正常对照组作对照。采用原位杂交法检测N 甲基 D 天门冬氨酸受体 1(NMDAR1)mRNA在脊髓中的表达。结果 :应用原位杂交法检测 ,正常组大鼠脊髓中几乎无NMDAR1mRNA表达 ,生理盐水组NMDR1mRNA表达明显增多 ,NGF组与生理盐水组相比较 ,NMDAR1mRNA表达明显减少 (P <0 .0 1)。结论 :NGF能通过抑制脊髓中N 甲基 D 天门冬氨酸受体 (NMDAR)的生成 ,抑制钙内流 ,抑制NO的生成 ,从而保护损伤的神经组织。     

高压氧预处理对脊髓损伤后后角神经元的保护作用

 目的 探讨高压氧预处理是否可以通过抑制早期的细胞凋亡来保护脊髓后角神经元。方法 随机将24只雄性Wistar大鼠分成对照组与高压氧预处理组。高压氧预处理组在给予高压氧5 d后与对照组同时制作脊髓（T8~T10）全横断模型。术后8 h、1 d和3 d取脊髓做冠状冰冻切片,行Nissl及TUNEL染色,光镜下观察。结果 Nissl染色显示,术后8 h及1 d时脊髓后角内浓染的细胞多见,高压氧预处理组与对照组比较浓染的细胞较少,3 d后两组无明显差异;TUNEL染色显示,术后8 h及1 d时阳性细胞多见, 8 h时两组差异明显（P<0.05）,1 d时差异最显著（P<0.01）。结论 高压氧预处理对脊髓损伤术后后角神经元起保护作用,术后1 d内保护效果明显。     

挤压伤脊髓腹角神经元NT-3表达的变化

运用免疫组化ＡＢＣ法探讨了脊髓挤压伤后不同时间腹角ＮＴ－３的表达变化。结果：对照组可见ＮＴ－３免疫反应阳性细胞分布于腹角的大神经元和少量小神经元,胞核、胞浆均染色。此外,亦见少量阳性胶质细胞。     

脊髓爆震伤后早期脊髓前角运动神经元的形态学变化

目的:建立脊髓爆震伤动物实验模型,探讨脊髓爆震伤后早期脊髓前角运动神经元形态学变化. 方法:将36只家兔随机分为对照组(A组,n=12) ,6 h实验组(B组,n=12)及24 h实验组(C组,n=12),采用0.9 g单质金属炸药黑索金(RDX)将B,C组家兔炸伤,分别于伤后6 h及24 h两个时间点取材,进行HE染色、甲苯胺蓝染色及银浸染色,观察脊髓神经元形态学改变. 结果:脊髓爆震伤后6 h脊髓运动神经元发生可逆性改变,部分神经元坏死,死亡均数为12.58±2.23,而伤后24 h脊髓运动神经元大量坏死,死亡均数达到了31.52±2.69,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01). 结论:脊髓爆震伤后6 h内脊髓运动神经元以可逆性改变为主,提出早期发现和治疗的重要性.     

NT-3在挤压伤脊髓背角表达的时相变化

目的：了解NT-3在挤压伤脊髓背角表达的变化。方法：制作成年SD大鼠T13-L1节段脊髓挤压伤模型并设正常对照组。分别于术后24h，7d，21d处死动物。取L3节段脊髓制作20胛厚冰冻连续切片，用抗NT-3抗体行免疫组织化学ABC法染色，观察NT-3在背角的表达，记录其免疫反应强度，计数其免疫阳性神经元数和胶质细胞数。结果：NT-3的阳性反应物主要分布于脊髓背角的神经元和胶质细胞，挤压伤后NT-3的表达从术后24h至术后7d进行性减少，而术后21d时则增加并高过正常者水平。结论：NT-3不仅参与脊髓的正常生理活动，而且可能与脊髓挤压伤的早期修复有关并具有双向效应。     

脊髓挤压伤后BDNF mRNA表达的RT-PCR研究

目的探讨实验性脊髓挤压伤后内源性神经营养素BDNF mRNA在不同时段的表达变化.方法采用成年SD大鼠简易脊髓挤压伤模型.一步法抽提脊髓组织总RNA,分光光度计测OD260,OD280值.β-actin作内参照,RT-PCR技术检测内源性神经营养素BDNF mRNA在不同时段的表达.结果(1)用RT-PCR技术检测到BDNF mRNA在正常大鼠脊髓表达.(2)脊髓挤压伤后BDNF mRNA在不同时段表达变化趋势不一.术后24h组、5d组、21d组BDNF mRNA的表达水平较正常组显著增高(P<0.05),而术后14d组虽高于正常组水平,但与正常组及损伤后除24h组外各组相比均无显著性差异(P>0.05).此外,除伤后24h组与14d组,伤后各组间比较亦均无显著性差异,表明脊髓挤压伤后24h,5d BDNF-mRNA表达明显增加,而14d略有下降,21d又有回升.结论(1)在正常大鼠脊髓有BDNF mRNA表达,提示BDNF可能与脊髓的生理功能有关.(2)cSCI后24h,5d,21d BDNF mRNA表达增高,可能有利于BDNF的合成,进而BDNF可能参与神经损伤修复.(3)BDNF mRNA于术后24h,5d明显升高,14d又回复近正常水平,而21d又明显回升,表明BDNF的表达在挤压伤脊髓内经历了双向变化.     

针刺对备用背根节和脊髓NT-4表达的影响

目的 观察NT-4在针刺部分去背根猫的L6背根节（手术侧和非手术侧）和脊髓表达的时空变化,以了解NT-4与针刺促进脊髓可塑性的关系。方法 25只成年健康雄猫随机分为5组：即正常组,备用根术（动物行单侧部分去背根手术,即切除一侧L1-L5、L7-S2背根节,保留L6为备用根）后7d组与14d组、针刺备用根术（动物行单侧部分去背根术后针刺）后7d组与14d组。动物处死后,取L6背根节及L3、L5、L6节段脊髓,用兔抗NT-4（1：200）抗体行免疫组化ABC法染色。观察、计数并比较各组背根节、脊髓实验侧Ⅱ板层（L3、L5、L6）和背核（L3）中NT-4的分布及含量。结果 针刺备用根7d组,针刺侧DRG内NT-4阳性神经元数较正常组和术后7d组减少（P＜0．05）,较相应非针刺侧多（P＜0．05）;针刺14d组,针刺侧DRG阳性神经元数比针刺7d组术后14d和同组非针刺侧增高（P＜0．05）,且恢复至正常水平。针刺7d,针刺侧脊髓L6Ⅱ板层NT-4阳性神经元数较术后7d组及正常组增加（P＜0．01）。针刺14d时,L5、L6Ⅱ板层阳性神经元数较正常组及术后14d组相应节段均增加（P＜0．01）。针刺后L3背核NT-4阳性神经元数无明显变化（P＞0．05）。L5Ⅱ板层NT-4阳性神经元在针刺后14d时比针刺后7d时增多（P＜0．05）。结论 以上结果提示NT-4与针刺促进脊髓可塑性有关;针刺备用背根对非针刺侧DRG NT-4的表达亦有影响,提示非针刺侧背根节NT-4亦可能参与了脊髓可塑性和针刺促进脊髓可塑性。     

NGF在挤压伤脊髓背角表达的时相变化

目的　了解神经生长因子 (NGF)在挤压伤脊髓背角表达的变化。方法　采用成年 SD大鼠 (T1 3-L1 )脊髓挤压伤模型并设正常对照组 ,分别于术后 2 4小时、7天、2 1天处死动物。取 L3节段脊髓制作 2 0μm厚冰冻连续切片 ,用抗 NGF抗体按 ABC法行免疫组织化学染色 ,观察 NGF阳性反应物在正常及挤压伤位点尾侧端 (L3)背角的分布 ,记录其免疫反应强度 ,计数其免疫阳性神经元和胶质细胞数。结果　 NGF阳性反应物主要分布于正常脊髓背角的神经元和胶质细胞。挤压伤后 2 4小时至 2 1天 ,背角中 NGF的免疫阳性细胞数及免疫反应强度均进行性升高 (P<0 .0 1)。结论　脊髓挤压伤后早期 ,背角 NGF的免疫阳性细胞数及免疫反应强度均进行性增加 ,提示NGF可能在脊髓挤压伤的早期修复中发挥作用     

部分背根切断对备用背根节和脊髓NT-4表达的影响

目的探讨NT-4在正常猫和部分去背根猫的L6背根节(手术侧和非手术侧)和脊髓Ⅱ板层与背核表达的变化。方法成年健康雄猫15只分为正常组、备用根术后7d组和14d组(动物行单侧部分去背根手术,即切除一侧L1-L5、L7-S2背根节,保留L6为备用根),采用免疫组化ABC法,观察、计数各组背根节、脊髓实验侧Ⅱ板层(L3、L5、L6)和背核(L3)中NT-4的分布及含量。结果①去部分背根后7d,备用背根节(术侧)中NT-4阳性神经元数比正常组显著减少（P＜0．05),但较非术侧明显增多(P＜0．05);至术后14d,术侧备用背根节NT-4阳性神经元比正常组、7d组和非术侧均减少(P＜0．05)。②正常组、术后两时相L3、L5、L6术侧脊髓Ⅱ板层和L3背核内NT-4阳性神经元数均无明显变化。结论去部分背根主要导致备用背根节NT-4的表达发生变化。     

神经营养素—4（NT—4）在昆虫杆状病毒表达系统中的克隆与表达

目的 通过昆虫杆状病毒表达系统的优势,表达出具有生物学活性的神经营养系－4（hNT－4）蛋白。方法 通过PCR方法获得hNT－4成熟肽的基因。将其连接到昆虫表达载体pAcgp67B上,在昆虫细胞Sf9中进行表达。对表达产物进行免疫原性和生物学活性测定。结果 获得hNT－4蛋白的表达产物,SDS－PAGE电泳显示表达产物相对分子质量为15000。经Western-blot验证,表达上清及细胞全蛋白均有一条能与抗人NT－4抗体发生特异性免疫反应的条带。经PC12细胞测定。表达上清中的rNT－4蛋白具有明确的生物学活性。结论 hNT－4在昆虫杆状病毒表达系统中的表达为今后进一步深入研究hNT－4的功能及其在临床中的应用提供了条件。     

大鼠脊髓半切损伤后突触分化诱导基因产物SynDIG1的表达增强

目的 探讨大鼠脊髓半切损伤后(spinal cord injury, SCI) 突触分化诱导基因产物(synapse differentiation induced gene 1,SynDIG1)的表达变化及意义.方法 SD大鼠随机分成对照组和脊髓损伤组(n=75),切断大鼠脊髓一半作为实验模型,只咬除椎板而不损伤大鼠脊髓作为对照模型.在手术后7、14、21、28、35天采集损伤区域的脊髓组织,用免疫荧光和免疫印迹技术检测各组各时间点SynDIG1的蛋白表达,并且与半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)、神经生长蛋白43(GAP-43)等神经元特异性标志物做免疫荧光双标技术检测.结果 在脊髓损伤后第7天就发现神经元有SynDIG1表达,在第28天达到高峰,随后维持在较高水平.通过免疫荧光双标技术发现脊髓损伤后SynDIG1与GAP-43存在共表达.结论 脊髓损伤后中期神经元大量表达SynDIG1,激活了神经生长因子,促进神经元再生,有利于神经系统的修复.     

脑缺血后大脑皮质神经元NT-3的表达变化

为探讨NT－3与局灶性脑缺血后大脑皮质神经元损伤修复的关系。采用免疫组织化学ABC法观察了缺血1h后大鼠大脑皮质NT－3的变化。结果：NT－3样免疫阳性反应物主要分布于大脑皮质第3，5层的神经元，脑缺血1h后，NT－3在皮质神经元的表达明显减少（P＜0．05），提示NT－3可能通过不同于其它生长因子的调节方式参与脑缺血后大脑皮层神经细胞的损伤修复。