转染干扰素-γ诱导蛋白-10基因构建树突状细胞前列腺癌瘤苗及其抗肿瘤免疫作用的检测

目的 将小鼠前列腺癌细胞株RM-1裂解产物加载树突状细胞(DC)后，转染干扰素-γ诱导蛋白-10(IP-10)基因构建DC瘤苗，探讨该瘤苗对小鼠抗肿瘤免疫反应的诱导作用。方法 将RM-1细胞的裂解产物作为肿瘤抗原加载小鼠骨髓来源的DC，并通过脂质体法转染IP-10基因，构建DC瘤苗；检测DC瘤苗的抗前列腺癌免疫治疗作用和免疫保护作用。结果 转染DC强表达IP-10，其上清对淋巴细胞有较强的趋化作用；构建的DC瘤苗能诱导特异性抗前列腺癌免疫反应，经瘤苗处理的荷瘤小鼠瘤体生长减慢，存活期延长；瘤苗还具有明显的免疫保护作用。结论 构建的前列腺癌DC瘤苗在体内能有效诱导抗肿瘤免疫反应和免疫保护功能。     

干扰素γ诱导蛋白10基因修饰小鼠树突状细胞的抗前列腺癌作用研究

目的　探讨转染干扰素γ诱导蛋白 10 (IP 10 )基因构建的加载树突状细胞 (DC)瘤苗 ,对特异性细胞毒T淋巴细胞 (CTL)的诱导作用。　方法　将RM 1细胞的裂解产物作为肿瘤抗原加载小鼠骨髓来源的DC(Tuly DC) ,将IP 10DNA插入真核表达质粒 ,通过脂质体法将IP 10基因转染至Tuly DC ,构建DC瘤苗 ;RT PCR法检测IP 10基因转染成功 ,趋化实验检测对淋巴细胞的趋化作用 ,混合淋巴细胞反应 (MLR)检测瘤苗刺激T细胞的增殖能力 ,MTT法检测瘤苗诱导的特异性CTL的杀伤活性。　结果　转染DC的IP 10表达明显增强 ,其上清对淋巴细胞有较强的趋化作用 ;DC瘤苗刺激T细胞增殖能力增强 ,每分钟闪烁计数值分别为 18913.0 9± 2 735 .33(1∶10 )和 17736 .6 7± 2 5 31.70 (1∶2 0 ) ,与各对照组相比差异有显著性意义 (P <0 .0 1) ;DC瘤苗诱导的CTL对RM 1细胞的特异性杀伤率分别为 (37.95± 5 .2 6 ) % (效靶比 2 0∶1)和 (43.87± 7.6 3) % (效靶比 4 0∶1) ,均高于各对照组 ,差异有显著性意义 (P <0 .0 1)。　结论　所构建的前列腺癌DC瘤苗能有效提高其抗原提呈功能和特异性CTL的诱导。     

异体大鼠骨肉瘤细胞RNA电转染树突状细胞瘤苗诱导的特异性抗骨肉瘤免疫学效应

目的 本研究旨在探讨异体大鼠骨肉瘤细胞RNA电转染树突状细胞(dendritic cells,DC)瘤苗在大鼠肿瘤动物模型诱导的抗骨肉瘤免疫学效应.方法 本研究采用UMR108细胞RNA通过电穿孔的方法 转染至SD大鼠骨髓来源的DCs制备瘤苗.将该瘤苗应用于骨肉瘤荷瘤大鼠,观察其特异性抗肿瘤效应,并对瘤苗诱导的细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocytes,CTLs)杀瘤效应加以评估.结果 异体骨肉瘤RNA转染DC瘤苗可诱导UMR106特异性的CTLs效应,其杀瘤效果显著.在体内实验中,80%的异体RNA-DC瘤苗接种大鼠可以有效地抵抗肿瘤细胞攻击,而得以长期存活,存活大鼠产生了长效免疫效应,可以抵抗同一肿瘤的二次攻击,但是对其他肿瘤细胞不具有免疫性.结论 该研究为异体骨肉瘤细胞RNA转染DCs瘤苗可以有效地刺激T淋巴细胞增殖及诱导显著的细胞毒T淋巴杀瘤活性提供了证据,并通过动物实验证实了该瘤苗良好的主动免疫治疗效应,从而表明异体瘤苗为以树突状细胞为基础的免疫治疗领域提供了新的策略,针对临床骨肉瘤患者具有广阔的应用前景.     

转染4-1BBL的前列腺癌细胞瘤苗体外诱导抗肿瘤免疫作用

目的:观察转染4-1BBL重组腺病毒载体的小鼠前列腺癌细胞瘤苗体外诱导抗肿瘤免疫作用及机制。方法:利用复制缺陷型腺病毒AdEasy-1系统,通过基因重组技术构建Ad-m4-1BBL及Ad-eGFP。将Ad-m4-1BBL和Ad-eGFP感染小鼠前列腺癌细胞RM-1,以丝裂霉素C(MMC)处理,制成肿瘤细胞疫苗(TCV,TCV-Ad-eG-FP,TCV-Ad-m4-1BBL),经体外与同系小鼠脾淋巴细胞共同培养,ELISA法检测脾细胞分泌细胞因子(IL-2,INF-γ)的影响,CCK-8试剂检测脾淋巴细胞特异性杀伤活性。结果:转染4-1BBL基因的小鼠前列腺癌细胞瘤苗TCV-Ad-m4-1BBL高表达4-1BBL蛋白,培养上清中细胞因子IL-2[(180.24±2.22)pg/ml]和INF-γ[(1 512.46±23.64)pg/ml]表达水平均明显高于TCV和TCV-Ad-eGFP组(P<0.05),TCV-Ad-m4-1BBL瘤苗诱导RM-1细胞特异性杀伤率[(34.24±2.64)%],相比TCV-Ad-eGFP[(14.65±3.21)%]和TCV[(9.82±1.48)%],差异有显著性(P<0.05)。但针对Hepal-6细胞,3种瘤苗均无效。结论:表达4-1BBL的小鼠前列腺癌细胞瘤苗能诱导有效的抗肿瘤免疫反应。     

4-1BBL基因修饰前列腺癌细胞的体内抗肿瘤作用

目的 观察转染4-1BBL的小鼠前列腺癌细胞株RM-1体内抗肿瘤效应及对免疫功能的影响.方法 用脂质体法将重组质粒pcDNA3和pcDNA3-4-1BBL分别导入小鼠前列腺癌细胞RM-1中,经G418筛选,建立高表达的细胞株.逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和间接免疫荧光法检测4-1BBL的表达.将转染前后的肿瘤细胞,分别接种于C57BL/6小鼠的左肋腹侧皮下观察其致瘤性.CCK-8检测其细胞毒性T淋巴细胞(CTL)杀伤活性.结果 成功建立高表达4-1BBL的RM-1/4-1BBL细胞株.25 d后,RM-1/4-1BBL组小鼠致瘤体积为(730.0±23.6)mm3较RM-1/pcDNA3组(1490.0±36.4)mm3和RM-1组(1510.0±26.8)mm3均小(P＜0.05).接种RM-1/4-1BBL细胞小鼠的CTL细胞杀伤活性为(35.4±1.6)%,较RM-1/pcDNA3组(12.8土2.0)%和RM-1组(13.7±3.6)%均增强(P＜0.05).结论 4-1BBL基因修饰的小鼠前列腺癌细胞能显著增强小鼠的免疫功能,抑制肿瘤的发展.     

Gp96多肽复合物激活树突状细胞诱导抗肝癌免疫的研究

目的 研究热休克蛋白Gp96肽复合物修饰树突状细胞(DC)后的体内外特异性抗瘤作用。方法 从小鼠肝癌细胞株H22细胞中提取Gp96肽复合物,采用细胞培养方法,从小鼠骨髓中获得DC,体外大量培养。用Gp96肽复合物修饰DC,刺激小鼠脾淋巴细胞,以51Cr释放法测定细胞毒性T淋巴细胞(CTL)杀伤活性。制作小鼠肝癌模型,分别予以修饰后的DC、Gp96蛋白、灭活的H22肝癌细胞治疗,检测血清中自细胞介素(IL)-10、干扰素(IFN)-γ水平;CD_4、CD_8和IFN-γ、IL-10双阳性细胞比例。观察其抑制肿瘤的效果。结果 Gp96肽复合物修饰的DC可激活小鼠脾淋巴细胞;后者能对H22瘤细胞进行特异性杀伤,而对艾氏腹水瘤细胞无效;经修饰的DC可明显改善机体的免疫状态,使Th1细胞比例上升,抑制体内肿瘤的生长。结论 Gp96肽复合物能够很好的修饰体外诱导获取的DC,使后者成为一种有效的瘤苗。     

胶质瘤干细胞疫苗治疗恶性脑胶质瘤

利用自体树突状细胞(DC)诱导特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)抗肿瘤的主动免疫治疗方法 前景广阔[1].我们以胶质瘤干细胞抗原负载树突状细胞(DC),诱导特异性T细胞,并检测其对胶质瘤细胞杀伤能力,探讨其作用机制.     

小鼠端粒酶蛋白亚单位转染树突状细胞体外诱导特异性抗肝癌细胞免疫应答

目的 观察携带小鼠端粒酶蛋白亚单位(mTERT)基因蕈组腺病毒载体(AdmTERT)转染树突状细胞(DC)后诱发免疫效应细胞产生特异性抗肝癌细胞免疫应答的研究.方法 用流式细胞仪分析及电镜观察培养6 d DC的细胞表型及形态,Ad-mTERT重组腺病毒转染体外培养的小鼠DC,Western blot检测mTERT融合蛋白表达;用负载mTERT的DC刺激同型淋巴细胞,免疫磁珠分选CD8~+T细胞做为效应细胞,小鼠肝癌细胞株(H22)及小鼠结肠癌细胞(CT26)作为靶细胞,用酶联免疫吸附试验(ELISA)及酶联免疫斑点法(ELISPOT)检测干扰索(IFN)-γ分泌量和释放抗原特异性IFN-γ的T细胞数,~(51)Cr释放法检测细胞毒性T淋巴细胞(CTL)对肝癌细胞的杀伤活性.结果 细胞表型及形态观察证实小鼠骨髓来源的DC为成熟的树突状细胞;AdmTERT转染DC后能正确表达mTERT融合蛋白,用AdmTERT转染DC致敏的淋巴细胞IFN-γ分泌量(208.6μg/L)和分泌IFN-γ的特异性T细胞的数量(341/10~6脾细胞)都高于Ad-GFP转染的DC组(14.2μg/L,33/10~6脾细胞)和单纯DC组(12.1μg/L,19/10~6脾细胞,P＜0.05).AdmTERT修饰DC刺激产生的效应T细胞在效靶比为90:1时,对H22细胞的杀伤率(54.2%)明显高于AdGFP致敏组(8.2%)和未致敏DC组(4.5%,P＜0.05),而对CT26细胞无明显杀伤作用.结论 AdmTERT修饰的DC体外能够诱导出针对mTERT抗原特异性的CTL效应,可特异性杀伤mTERT阳性的肝癌细胞.     

肿瘤细胞RNA转染活化的B细胞诱导的CTL抗肿瘤效应

目的探讨小鼠B淋巴细胞诱导特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的抗肿瘤免疫作用。方法分离、纯化B淋巴细胞,并在CD40配体(CD40L)和重组小鼠白介素4(rmIL-4)联合作用下活化;将活化B细胞与T细胞共同培养,检测T细胞增殖情况。提取肝癌细胞Hepa1-6总RNA转染B淋巴细胞作为实验组,并以小鼠肝细胞RNA,脂质体,1640培养基转染作为对照组。检测转染后各组B细胞表面抗原呈递细胞标记(CD40,CD80,CD86)及主要组织相容性抗原(MHC)的表达情况。转染的B淋巴细胞与T淋巴细胞混合培养,诱导、扩增CTL;以CTL作为效应细胞,Hepa1-6为靶细胞,检测CTL杀伤活性。检测转染后刺激T细胞分泌IFN-γ的水平。结果转染Hepa1-6总RNA的B淋巴细胞刺激T细胞增殖能力高于RNA对照组(P0.05)、脂质体对照组及空白对照组(P0.01)。经肝癌细胞Hepa1-6总RNA转染的B淋巴细胞,其组织相容性分子及共刺激分子表达明显高于其他对照组。将肝癌细胞Hepa1-6总RNA转染的B淋巴细胞与对照组B细胞诱导的特异性杀伤率进行比较,两者差异具有统计学意义(P0.05)。CD40L活化的B淋巴细胞刺激的T细胞,分泌INF-γ的水平显著高于对照组(P0.05)。结论以肝癌细胞Hepa1-6总RNA转染的B淋巴细胞,可有效诱导CTL杀伤肝癌细胞,为肝癌的免疫治疗提供了一种可能的新思路。     

冷冻消融治疗前列腺癌诱导肿瘤特异性免疫反应

目的:评价经皮冷冻消融治疗局限性前列腺癌前后机体抗肿瘤免疫反应。方法:10例局限性前列腺癌患者行经皮冷冻消融治疗。分别于冷冻治疗前1d、治疗后2周采取外周血,分离外周血单个核细胞(PBMCs)。穿刺活检制备前列腺自身肿瘤和非肿瘤组织溶解物。酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测血清TNF-α、IFN-γ、IL-4、IL-10水平,以IFN-γ/IL-4计算Th1/Th2比值。酶联免疫斑点(ELISPOT)试验检测不同组织溶解物刺激下分泌IFN-γ的T细胞数。以人前列腺癌LNCaP细胞和肾癌GRC-1细胞为靶细胞,乳酸脱氢酶(LDH)释放试验检测细胞毒T淋巴细胞(CTL)特异性杀伤活性。结果:与术前比较,冷冻治疗后TNF-α、IFN-γ明显升高,IL-4、IL-10轻度下降,Th1/Th2比值明显升高(P<0.01)。肿瘤组织溶解物刺激后IFN-γ+T细胞数明显增多(P<0.01)。非肿瘤组织溶解物刺激后,IFN-γ+T细胞数无明显变化。冷冻治疗后细胞毒CTL对人前列腺癌细胞株LNCaP特异杀伤活性明显增强,而对人肾癌细胞株GRC-1无明显杀伤活性。随访3～6个月,仅1例患者肿瘤复发。结论:经皮冷冻治疗前列腺癌可诱导机体产生肿瘤特异性免疫反应。     

轴向叩击联合支具外固定治疗指骨骨不连

目的:报告轴向叩击联合支具外固定治疗指骨骨不连的临床疗效。方法:自2015年1月至2019年8月我科治疗指骨骨不连患者22例,其中18例为骨折内固定术后骨不连,4例为骨折外固定治疗术后骨不连。18例内固定患者,拔除内固定物,骨折段予支具节段固定,并予规律轴向叩击治疗,刺激骨折端骨痂生长,促进骨折愈合,4例外固定治疗患者...     

Treatment of hypertension with valsartan combined with spironolactone

Preliminary observations were made to assess theantihypertensive efficacy and safety of treatmentwith valsartan plus spironolactone. Thirteenhypertensive patients were studied, 7 were males(54%), and 6 females (46%) with an age range from 61years to 83 years (mean: 74±7.1 years). Patients had amean daytime SBP / DBP of 164±9.2 / 99±9.5 mmHg.Echocardiography showed cardiac hypertrophy and mildcavity enlargement in all patients. After baselinemeasurements of HR, serum creatinine and electrolytes(potassium and sodium), patients received valsartan80 mg/day plus spironolactone 100 mg/day forconcomitant chronic heart failure due tohypertension. Study parameters were measured at the 30, 60, and 90 day of therapy. Mean ambulatory SBP/DBP monitoring, mean Holter heart rate, mean serumcreatinine, and mean serum electrolytes (sodium andpotassium) were recorded. These parameters did notshow statistically significant changes after 90 daysof follow up, except in one patient who had anincrease in serum potassium concentration from 4.3mmol/l to 5.8 mmol/l after 30 days of therapy. MeanBP was reduced up a maximum of 7%. No side effectwas seen in the study patients. Combination therapyvalsartan and spironolactone seemed to be aneffective and safe approach for older hypertensivepatients with mild concomitant chronic heart failure. This revised version was published online in August 2006 with corrections to the Cover Date.     

腹腔镜与胆道镜联合取石术治疗肝内胆管结石的临床研究

目的:探讨腹腔镜联合胆道镜治疗肝内胆管结石的临床价值。方法:随机将80例肝内胆管结石患者分为2组,实验组(n=45)行腹腔镜联合胆道镜取石术,对照组(n=35)行单纯腹腔镜手术。结果:实验组45例手术均获成功,手术时间110～118 min,平均(160±15)min;术中出血量45～280 ml,平均(140±60)ml;住院6～8天,平均(7±2)天;42例结石完全取净,结石清除率93.3%,术后无一例发生胆漏、出血、脓肿等并发症。对照组手术时间130～220 min,平均(150±30)min;术中出血量80～350 ml,平均(180±75)ml;住院8～12天,平均(9±1)天;32例结石完全取净,结石清除率91.4%,术后2例发生胆漏。两组患者手术时间、术中出血量、住院时间差异有统计学意义(P<0.05),结石完全取净率及并发症发生率差异无统计学意义(P>0.05)。术后随访所有患者3～6个月,经胆道镜复查无一例复发。结论:腹腔镜术中联合胆道镜治疗肝内胆管结石安全有效,值得推广应用。     

阿昔洛韦联合纳洛酮治疗小儿病毒性脑炎的临床体会

目的:探讨阿昔洛韦联合纳洛酮在小儿病毒性脑炎治疗中的作用。方法:将在本院入院的108例小儿病毒性脑炎患儿随机分为观察组和对照组,对照组患儿在综合治疗的基础上加服阿昔洛韦,观察组在对照组的基础上再静滴纳洛酮。对两组患儿的疗效及后遗症进行比较。结果:经治疗后,观察组的总有效率为92.6%,对照组的总有效率为72.2%,两组疗效比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:应用阿昔洛韦联合纳洛酮治疗病毒性脑炎,在提高总有效率和减少后遗症的发生率方面,疗效满意,值得在临床推广。     

疗程法注射透明质酸隆鼻的疗效探讨

目的：探讨应用疗程法注射透明质酸隆鼻的效果和持续性。方法：透明质酸注射于鼻部以抬高鼻部,与注射后3个月、9个月、18个月根据实际情况补充注射0．5ml透明质酸。结果：10例首次治疗后跟踪随访3年,临床效果满意,3年内可以维持高鼻梁的外形。结论：疗程法应用透明质酸注射隆鼻使求美者鼻背增高由只注射一次只能保持3～6个月延长到3年,值得临床推广应用。     

Antioxidant therapy with xymedon of patients with chronic osteomyelitis

An investigation of the antioxidant activity of blood plasma allowed a conclusion to be made of an alteration of the free radical processes in patients with chronic osteomyelitis. Experimental data on the influence of the antioxidants Xymedon and Methyluracil on the main free radicals, lipid peroxidation and chemiluminescence of peritoneal macrophages of rats allowed the substantiation of using the medicines in the complex treatment of patients in the pre- and postoperative periods. As a result, in 25 patients Xymedon improved the blood indices, increased antioxidant activity of plasma and reduced the amount of recurrences of the disease as compared with the patients taking Methyluracil.     

Experience with surgical treatment of newborns with necrotizing enterocolitis

At the period from 1984 through 2010 there were 306 patients with necrotizing enterocolitis aged from 1 to 13 days. Conservative therapy in 214 (70%) cases resulted in favorable outcome of the disease. Operative treatment was necessary in 92 (30%) neonates. In 26 of them double entero-, colostomies were performed, in 7 patients ulcer defects were sutured, in 6 patients parts of intestinal necroses were resected with applying primary end-to-end anastomoses, in 15 patients--laparostomas in combination with intestinal stomas, in 13 patients isolated laparostomas, in 8 patients diagnostic laparotomies.     

显微外科技术配合Dynesys系统治疗腰椎椎管狭窄

目的：探讨应用Dynesys腰椎动态固定系统配合显微外科技术单侧入路双侧减压治疗腰椎椎管狭窄症的有效性和临床效果。方法分析2012年1月～2013年6月,21例应用显微外科技术配合Dynesysx系统治疗伴随腰椎不稳的腰椎椎管狭窄症的临床资料。记录术前及术后疼痛视觉模拟量表（visual analogue scale,VAS）评分（10分法）及日本骨科学会（ Japanese Orthopaedic Association ,JOA）评分,评估手术疗效。结果所有患者末次随访VAS及JOA评分较术前均显著改善,所有病例症状无加重或复发。结论显微外科技术配合Dynesys系统治疗伴随腰椎不稳的腰椎椎管狭窄症术中显露充分、减压彻底、安全性高、出血量少,术后腰椎稳定性恢复好、效果佳。