~(188)Re标记反基因肽核酸的方法学研究

目的研究^188Re标记反基因肽核酸（AGPNA）的方法及标记物与胰腺癌Patu8988细胞结合内化的特性。方法用^188Re直接标记经修饰的AGPNA,改变标记条件摸索标记方法,在不同时间点（15min-6h）测定标记率;测定标记物加入人血清和生理盐水后不同时间点（15min-24h）的放化纯度;进行胰腺癌Patu8988细胞摄取^188Re-AGPNA的内化实验。结果当标记条件为100μlSnCl2·2H2O（20mg/ml）和20μlAGPNA（2mg/ml）时,^188Re-AGPNA的标记率最高可达（89.99±0.15）%,放射性胶体含量为（9.40±0.55）%。标记物加入血清24h后放化纯度为（89.14±0.63）%。^188Re-AGPNA转染胰腺癌Patu8988细胞的最高细胞结合率为（38.16±2.17）%,最高核内化率为（22.41±0.86）%。结论^188Re直接标记经修饰的反基因肽核酸方法简便、标记率较高,能与胰腺癌细胞结合并转染入细胞核。     

肿瘤靶向治疗用白蛋白磁性纳米粒子的~(188)铼(~(188)Re)标记

目的188铼(188Re)标记用于肿瘤靶向治疗的白蛋白磁纳米体的实验室条件.方法 188Re标记白蛋白磁性纳米体的最佳实验室条件是SnCl2·H2O8 mg/ml,柠檬酸20 mg/ml,维生素C 8 mg/ml,反应容积为500μl,反应时间为3 h.结果188Re总的标记率大于90%,标记稳定性7 h为98%、24 h为95%.结论188R-0白蛋白磁性纳米体的标记率及标记稳定性适于用于肿瘤靶向治疗的体内研究.     

^188Re血管内照射对新西兰白兔损伤血管内膜增生的影响

目的研究^188Re血管内照射对新西兰白兔损伤血管内膜增生的影响，探讨^188Re血管内照射对预防再狭窄的可行性及作用。方法60只新西兰白兔随机分为对照组（n=30）和照射组（n=30），均行腹主动脉球囊内皮拉伤术。照射组球囊损伤内膜后行^188Re照射治疗。管腔下0．5mm处累计吸收剂量为15Gy；对照组则不行血管内照射。分别于术后1、3、6周处死动物，取病理组织学标本进行分析。结果与对照组对比，照射组第3、6周的新生内膜面积明显减小（2．11±0．17mm^2VS3．02±0．71mm^2，P=0．003；2．63±0．84mm^2 vs 3．80±0．99mm^2，P=0．023），管腔面积明显增加（5．87±0．57mm^2 vs 4．96±0．64mm^2，P=0．009；4．74±0．59mm^2 vs 4．16±0．40mm^2，P=0．037），管腔周径明显增大（4．61±0．78mmVS3．64±0．93mm，P=0，040；3．85±0．65mm vs 3．12±0．56mm，P=0．031），管腔狭窄程度明显降低（23．04±4．85mm^2 vs 33．44±6．47mm^2，P=0．003；30．82±7．18mm2 vs 41．46±10．95mm^2，P=0．038）。结论^188Re血管腔内照射能有效抑制损伤血管的新生内膜增生，改善血管重构，为预防临床PTCA术后再狭窄提供了有力的实验依据。     

^188Re标记丙氧鸟苷白蛋白纳米微球的制备

目的制备188Re标记丙氧鸟苷（GCV）白蛋白纳米微球（^188Re-GCV-BSA-NP）。方法通过蛋白交联固化的方法制备GCV-BSA-NP,并测定GCV-BSA-NP的体外释药特性;采用预锡化直接标记法对GCV-BSA-NP进行188Re标记,同时观察188Re-GCV-BSA-NP体外稳定性。结果GCV-BSA-NP为大小不等的规则性微球,微球直径不等,但多集中在250-290nm。GCV-BSA-NP总的标记率〉90%,放化纯〉95%,放射性比活度1.85×105MBq/μmol。标记物放置于37℃的PBS（pH7.4）溶液中,在24h时放化纯为95%。结论预锡化直接标记法简便快速,能够得到较高的标记物放化纯度,稳定性好,GCV-BSA-NP具有明显的缓释功能。     

131I-1H12的制备及对非小细胞肺癌细胞A549的结合及生物学效应研究

目的：研究放射性核素碘（131I）标记表皮生长因子受体单克隆抗体（McAb）1H12的实验条件,观察标记产物131I-1H12与人肺癌细胞A549的免疫结合及生物学效应。方法：131I以Iodogen法标记1H12,经体外细胞结合试验分析检测标记抗体的免疫活性;通过流式细胞仪检测不同剂量131I-1H12（148、74、37kBq）、游离131I（148kBq）及1H12（80nmol·ml-1）对A549细胞的作用。结果：131I-1H12标记率为50.14%,比活度为4.63MBq·μg-1,放射性浓度为77.31MBq·ml-1,放射性化学纯度为96.92%。131I-1H12与A549细胞结合率为61.12%;131I-1H12诱导A549细胞凋亡和周期阻滞呈剂量-效应关系,以148kBq131I-1H12作用效应最大,凋亡率达到（44.35±3.31）%,G2/M期细胞阻滞率达（51.17±2.98）%。结论：131I-1H12能够与A549细胞发生免疫结合,并调控细胞周期和诱导细胞凋亡。     

188Re-血管抑素的制备及其在小鼠体内分布

目的: 探索用铼( 188Re)直接标记血管抑素(Angiostatin,AS)的方法,并研究标记产物的体外稳定性及其在小鼠体内的生物分布.方法: 制备的AS经鉴定后,用氯化亚锡(SnCl2)还原法进行 188Re标记AS;对标记产物用纸层析法测标记率;产物中分别加入牛血清白蛋白(BSA)、生理盐水及不同摩尔比的半胱氨酸(Cys)以观察其体外稳定性.结果: AS 100 μg,20 g/L SnCl2(溶于1 mol/L的HCl中)200 μL,以0.1 mol/L酒石酸钠(溶于0.05 mol/L的HCl中)1 mL为络合剂,加入188ReO4 37 MBq,标记率可达76.3%.产物在体外较为稳定;标记物在肝、肾、脾中有较高的放射性摄取,放射性在24 h内大部分排出体外.结论: 用188Re直接法标记AS简单易行,稳定性较好.     

186铼标记单克隆抗体在荷人肺腺癌裸鼠体内的放射免疫显像研究

目的：建立^186铼（^186Re)标记单克隆抗体(McAb）方法，研究标记物的生物学特性，方法：用氯化亚硒（SnCl2)还原的^186Re与经抗坏血酸还原的McAb(Sc3A)直接标记制备成^186Re－Sc3A示踪剂，并在荷人肺腺癌裸鼠体内进行放射免疫显像和生物学分布研究。结果：此方法标记率＞96％，与250倍摩尔浓度的二乙烯三胺五乙酸和人血清白蛋白在37℃下共有24h，未见^186Re－Sc3A明显解离。用过量肿瘤细胞抗原结合法测定，标记物的抗体活性＞90％，经荷瘤鼠尾静脉注射示踪剂后24－48h均可获得肿瘤部位的清晰显像，以48h为佳，生物学分布在48h时示踪剂在肿瘤内呈性浓聚。结论：^186Re－Sc3A示踪剂使临床肿瘤的放射免疫诊断和放射免疫治疗成为可能。     

~(188)Re标记VEGF多肽片段的荷瘤裸鼠体内分布及显像研究

目的 探讨188Re标记VEGF189外显子6编码的多肽(QKRKRKKSRYKS)的方法、标记物在荷瘤裸鼠体内的分布及显像.方法 以S-acetyl-MAG3为双功能螯合剂,正交设计法寻找188Re标记多肽QKRKRKKSRYKS的最佳条件;研究标记物在荷卵巢癌SKOV3裸鼠的体内分布,并在不同时间行SPECT平面显像.结果 采用SPSS 13.0进行分析.结果 188Re标记QKRKRKKSRYKS在最佳标记条件下的标记率为(73.1±5.5)%,HPLC纯化后放射化学纯度>95%,且受体结合活性良好;标记物室温下放置24 h,其放射化学纯度为(91.76±1.36)%;尾静脉注射标记物后,0.5 h荷瘤裸鼠肿瘤部位开始出现放射性浓聚,1 h浓聚更为明显,肿瘤放射性摄取为(1.846±0.511)%ID/g,肿瘤/对侧肌肉组织比值达(2.43±0.30).此外,肝脏、小肠、肾脏及膀胱等部位也可见明显的放射性浓聚,但3 h后肿瘤部位的放射性浓聚影基本消退.结论 188Re-MAG3-QKRKRKKSRYKS能明显聚集于肿瘤组织.     

三七总皂苷部分逆转黏附诱导的骨髓瘤细胞耐药性

目的：研究三七总皂苷（PNS）对骨髓瘤细胞RPMI8226黏附及黏附诱导耐药的影响．方法：采用MTT法检测PNS和／或阿霉素（Adr）对RPMI8226细胞的毒性作用；荧光染料二醋酸盐琥珀酰亚胺酯（CFSE）标记并流式细胞术检测RPMI8226细胞与纤连蛋白（FN）黏附率．结果：RPMI8226细胞与FN黏附2，12h，其黏附率分别为（55．63±1．56）％，（65．42±2．46）％；经亚细胞毒浓度PNS（50mg／L）预处理后，其黏附率分别降为（33．24±1．29）％，（34．16±1．59）％，处理前后差异有统计学意义（P〈0．05）；FN黏附12h后，瘤细胞对Adr的IC50值为（2．70±0．24）μmol／L，高于BSA对照组（2．03±0．13）μmol／L（P〈0．05），经PNS处理后FN组Adr IC50值降至（1．08±0．09）μmol／L，与BSA对照组（0．82±0．07）μmol／L相比无统计学差异（P〉0．05）．结论：PNS可降低RPMI8226细胞与FN的黏附率，并能部分逆转黏附介导的骨髓瘤耐药．     

无生长追赶出生低体重幼鼠生长激素/胰岛素样生长因子1轴抵抗与胰岛素抵抗的相关研究

目的探讨生后无生长追赶的出生低体重（NCU—SGA）幼鼠的胰岛素抵抗对生长激素（GH）抵抗的影响及其受体后信号转导机制。方法以母鼠孕期限制饮食法建立雄性NCU．SGA模型研究：（1）GH和胰岛素抵抗的关系：测定4周龄时24h尿GH排泄率（24hU—GH）,血胰岛素样生长因子（IGF）-1、空腹胰岛素（FINS）、血糖以及肝组织IGF-1mRNA和STATS信号表达;（2）胰岛素抵抗对生长轴的影响：3周龄时注射P13K阻断剂1周后（设溶剂对照组）,测定大鼠体格生长,血IGF-1、FINS水平及肝IGF-1mRNA和STATS信号表达。结果（1）NCU—SGA鼠血清IGF-1浓度、肝IGF-1mRNA表达以及磷酸化与总STAT蛋白表达水平的比率均显著低于健康对照组（C组）,分别为（248±58）ng／ml,（6．1±0．3）拷贝和（61±22）％;C组为（383±62）ng／ml,（6．6±0．4）拷贝和（91±29）％（均P〈0．01）;NCU—SGA组与C组的24hU-GH差异无统计学意义（P〉0．05）;NCU—SGA组FINS及空腹血糖为（24．7±9．6）mU／ml和（5．4±0．3）mmol／L显著高于C组的（9．8±2．8）mmol／L和（4．5±1．7）mmol／L（均P〈0．05）。24hU—GH与FINS显著正相关（r=0．680,P=0．000）。（2）PBK阻断后NCU．SGA鼠胰岛素抵抗加重,体重下降,血清IGF-1及肝IGF-1mRNA为（218±60）ng／ml及（6．1±0．3）拷贝,显著低于溶剂对照组的（286±45）ng／ml及（6．3±0．3）拷贝,均P〈0．05。但两组间肝组织总的及磷酸化STATS信号表达水平差异无统计学意义。结论NCU—SGA幼鼠的胰岛素抵抗与GH抵抗密切相关。生后无追赶与GH受体后JAK2-STATS通路受损所致的GH抵抗有关。胰岛素抵抗可能经非STATS依赖途径加重了GH抵抗及生长障碍。