BMP-4和Ki-67在泌乳素腺瘤中的表达及临床意义

目的探讨骨形态生成蛋白4（BMP-4）和细胞核增殖相关抗原（Ki-67）在泌乳素（PRL）腺瘤中的表达及与腺瘤侵袭性的关系。方法应用免疫组织化学和原位杂交技术检测35例PRL腺瘤及8例正常垂体组织中BMP-4mRNA、BMP-4和Ki-67蛋白的表达水平,并对三者的表达水平的关系进行统计分析。结果8例正常垂体组织的BMP-4和Ki-67表达均阴性;35例PRL腺瘤中,BMP-4mRNA、BMP-4表达水平与PRL腺瘤的侵袭性呈正相关（r=0．885,P〈0．01）;Ki-67在2～3级与0-1级的表达水平有显著性差异（P〈0．05）,但BMP-4mRNA、BMP-4的表达较Ki-67更具灵敏性（P〈0．05）。结论BMP-4在PRL腺瘤中呈特异性高表达,且与PRL腺瘤侵袭性呈正相关。     

BMP-4对甲状腺乳头状癌细胞生物学行为的影响及其分子机制

目的 观察骨形态发生蛋白4(BMP-4)对甲状腺乳头状癌(PTC)细胞增殖、凋亡和侵袭能力的影响,并探讨其与Smad1信号通路的关系.方法 常规培养PTC细胞系B-CPAP、TPC-1、K1细胞,采用qPCR法检测BMP-4 mRNA表达水平.取BMP-4 mRNA表达量较低的B-CPAP细胞,将其分为阴性对照组和过表...     

肿瘤坏死因子α对小鼠胰岛内皮细胞表达胰岛素样生长因子结合蛋白7的影响

目的研究肿瘤坏死因子α(TNF-α)对小鼠胰岛内皮(MS1)细胞胰岛素样生长因子结合蛋白7(IGFBP7)的mRNA和蛋白水平的影响,并探讨其机制。方法采用可溶性TNF受体Ⅰ(sTNFRⅠ)(50ng/ml)和不同浓度TNF-α(0、10、50、100、200、500ng/ml)作用MS1细胞,再收集TNF-α(100ng/ml)作用MS1细胞12h后的培养液,直接或加入sTNFRⅠ(50ng/ml)后培养新鲜的MS1细胞,采用RTPCR和Western blot检测各组MS1细胞中IGFBP7的mRNA和蛋白水平。结果与0ng/ml TNF-α组相比,100、200、500ng/ml TNF-α均可使MS1细胞中IGFBP7mRNA和蛋白水平升高(P0.05),其中500ng/ml TNF-α组最高(P0.05);TNF-α(100ng/ml)作用MS1细胞12h后的培养液可明显提高IGFBP7的mRNA和蛋白水平(P0.05),但该效应可被sTNFRⅠ(50ng/ml)完全抑制(P0.05)。结论TNF-α可能是在转录水平促进MS1细胞IGFBP7表达的。     

BMP-7对油酸诱导肾小管上皮细胞转分化的影响

目的观察骨形态发生蛋白（BMP）-7对油酸（OA）诱导的人肾小管上皮细胞转分化的拮抗作用。方法应用体外细胞培养技术培养人肾小管上皮细胞株HK-2。分别用不同浓度BMP-7（0、1、5、10、50ng／ml）和一定浓度的OA（400μmol／L）共刺激体外培养的HK-2 48h,收集细胞,采用ELISA法和RT-PCR法检测转化生长因子（TGF）-β1蛋白、mRNA的水平和表达变化,采用RT-PCR法检测α-平滑肌动蛋白（SMA）mRNA的表达变化。结果BMP-7可以显著减少OA诱导的HK-2中TGF-β1和α—SMA mRNA的表达（P〈0．01）。结论BMP-7可以拮抗OA诱导的肾小管上皮细胞转分化。     

Flt-3L、SCF在食管癌患者外周血细胞的诱导及树突细胞的培养

目的探讨从食管癌患者外周血分离、诱导与扩增树突细胞(DC)的有效方法。方法采用密度梯度离心法从食管癌患者外周血分离单个核细胞,分别加入GM-CSF(100 ng/ml)+IL-4(50 ng/ml)(作为对照组);GM-CSF(100 ng/ml)+IL-4(50 ng/ml)+Flt-3L(40 ng/ml)(作为实验1组);加入GM-CSF(100 ng/ml)+IL-4(50 ng/ml)+Flt-3L(40 ng/ml)+SCF(100 ng/ml)(作为实验2组)。于37℃、5%CO2环境下进行培养,动态观察细胞生长情况,流式细胞仪检测培养第6天时DC表面分子CD1a、CD83、CD80、CD86的表达水平。结果上述不同刺激物均能从外周血单个核细胞成功诱导出DC,与对照组相比,实验组诱导出更多数量的DC,其中以实验2组最多;培养至第6天时,两实验组DC细胞表型CD1a表达率与对照组无明显差别(P>0.05),CD83、CD80、CD86表达水平明显高于对照组(P<0.01),其中以实验2组表达水平最高(P<0.01)。结论联合应用GM-CSF、IL-4、flt-3L和SCF能有效地从食管癌患者外周血诱导培养出大量具有活性的DC,为进一步的临床研究奠定基础。     

肾小管上皮细胞白细胞介素13和白细胞介素4受体的表达及其在肾小管损伤中的作用

目的:研究肾小管上皮细胞IL-4受体和IL-13受体的表达及IL-4和IL-13对肾小管上皮细胞形态和功能的影响,并探讨其作用机制. 方法:借助人近端肾小管上皮细胞系(HK2),采用RT-PCR,免疫荧光方法检测HK2上IL-4受体和IL-13受体的表达.免疫荧光方法观察不同浓度IL-4和IL-13干预HK2细胞12～48h后HK2损伤标志物RANTES的变化情况.Western blot方法检测IL-4和IL-13干预HK2细胞后,JAK-STAT 6信号通路的活化以及JAK-STAT 6信号通路特异性抑制剂来氟米特对IL-4和IL-13作用HK2细胞的影响. 结果:(1)RT-PCR和免疫荧光结果显示HK2有IL-4 II型受体和IL-13 I型受体mRNA和蛋白质表达.(2)IL-4和IL-13呈时间-剂量依赖性影响上皮细胞RANTES的表达.100 ng/ml IL-4、50 ng/ml IL-13作用48h对HK2的损伤作用最为明显.正常HK2细胞RANTES呈阴性,100 ng/ml IL-4和50 ng/ml IL-13干预48h后,阳性细胞显著增多.(3)Western blot方法结果显示JAK-STAT6磷酸化水平均在IL-4和IL-13 50 ng/ml作用10 min时开始升高,IL-4 100 ng/ml作用20 min达高峰,IL-13 50 ng/ml 20 min达高峰.JAK-STAT 6信号通路特异性抑制剂来氟米特可阻断JAK-STAT 6信号通路的活化,拮抗IL-4和IL-13诱导的HK2细胞RANTES表达. 结论:(1)本研究首次证实人近端肾小管上皮细胞存在IL-4和IL-13受体的表达.(2)IL-4和IL-13可通过人近端肾小管上皮细胞上的相应受体造成细胞损伤,表现为RANTES表达增加.(3)IL-4和IL-13的上述作用与细胞内JAK-STAT 6信号通路活化密切相关.     

雌二醇对小鼠T淋巴细胞IL-2 IL-4 mRNA表达的影响及其对自身免疫病调节机制初探

目的观察生理水平(100 pg/ml)和妊娠水平(50 ng/ml)的雌二醇(E_2)对体外培养的小鼠T淋巴细胞白细胞介素(IL)-2、IL-4 mRNA表达的影响,并进一步探讨E_2对自身免疫性疾病的调节机制。方法Balb/c小鼠断颈处死后,制备脾T淋巴细胞并分3组,分别为ConA 5μg/ml(对照组),ConA 5μg/ml E_2：100 pg/ml,ConA 5μg/ml E_2 50 ng/ml。每组6个样本。并将各组T细胞置于37℃,5％CO_2条件下分别孵育0、24、48 h。采用半定量反转录一聚合酶链反应(QRT-PCR)法检测0、24、48 h IL-2、IL-4 mRNA表达。结果生理水平和妊娠水平E_2可下调活化48 h的T细胞IL-2基因的转录水平,与对照组相比具有统计学意义。E_2对活化后24、48 h的T细胞IL-4基因转录的调节作用呈剂量选择性。生理水平E_2使活化T细胞IL-4 mRNA水平显著降低,而妊娠水平E_2使活化T细胞IL-4 mRNA水平显著升高。结论①生理水平E_2下调IL-2、IL-4基因的转录。②妊娠水平E_2下调IL-2基因的转录、上调IL-4基因的转录。③E_2对自身免疫病发病机制过程中起重要的调节作用。     

垂体转录活化物-1基因在人垂体腺瘤中的表达

目的　用RT PCR方法 ,定量研究垂体转录活化物 (Pit) 1mRNA在不同类型的垂体腺瘤中的表达。方法　 3 5例垂体腺瘤患者根据血清激素水平和临床表现确定腺瘤类型 ,根据影像学和术中所见对肿瘤分级和分期。用RT PCR方法检测垂体腺瘤组织中Pit 1mRNA的表达。结果　 3 5例垂体腺瘤患者有PRL腺瘤 13例 ,GH腺瘤 6例 ,GH/PRL腺瘤 2例 ,无功能瘤 11例以及ACTH腺瘤 3例。Pit 1mRNA在所有PRL瘤、GH/PRL瘤、GH瘤和 81.8% (9/ 11)无功能腺瘤中有表达。在ACTH腺瘤组中无表达。Pit 1mRNA在PRL、GH和GH/PRL 3组腺瘤中的表达量差异无显著性 ,均显著高于无功能瘤组(均P <0 .0 5)。Pit 1表达量与肿瘤分级分期无明显相关性。PRL瘤术前血清PRL值与腺瘤组织Pit 1表达量呈显著的正相关 (r=0 .92 ,P <0 .0 1) ,GH腺瘤术前血清GH值与腺瘤组织Pit 1表达量呈显著的正相关 (r =0 .98,P <0 .0 1)。结论　Pit 1mRNA在PRL、GH、GH/PRL瘤以及大部分无功能腺瘤中有表达 ,其中在PRL、GH以及GH/PRL瘤的表达量较高 ,Pit 1对垂体GH和PRL腺瘤的细胞特异分化以及分泌功能是否具有作用 ,尚待进一步研究     

基于AKT信号通路探讨替吉奥对大肠癌细胞株增殖、迁移和侵袭的影响

目的 基于蛋白激酶B(AKT)信号通路探讨替吉奥对大肠癌细胞株增殖、迁移和侵袭的影响。方法 体外培养大肠癌细胞株HT-29细胞,设置对照组(HT-29细胞)、20μg/ml替吉奥组(HT-29细胞+20μg/ml替吉奥)、50μg/ml替吉奥组(HT-29细胞+50μg/ml替吉奥)和100μg/ml替吉奥组(HT-29细胞+100μg/ml替吉奥)。CCK-8法检测HT-29细胞增殖情况;Transwell法检测HT-29细胞迁移、侵袭情况;Western印迹法检测HT-29细胞中AKT、磷酸化(p)-AKT、磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)、p-PI3K、增殖细胞核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶(MMP)-9蛋白表达情况。结果 与对照组相比,20、50、100μg/ml替吉奥组HT-29细胞OD450值、迁移细胞数、侵袭细胞数、p-AKT/AKT、p-PI3K/PI3K、PCNA、MMP-9蛋白表达水平均显著降低(P<0.05);随着替吉奥浓度升高,HT-29细胞OD450值、迁移细胞数、侵袭细胞数、p-AKT/AKT、p-PI3K/PI3K、PCNA、MMP-9蛋白表达水平...     

Src激酶参与肿瘤坏死因子α诱导的心房肌细胞超快速延迟整流钾电流下调

目的 探讨肿瘤坏死因子α(TNF-α)是否通过调控超快速延迟整流钾电流(Ikur)参与心房肌细胞的电重塑,以及Src激酶是否参与其中。方法 将大鼠胚胎心肌细胞株H9c2细胞置于DMEM培养基中,将小鼠心房肌细胞株HL-1细胞置于Claycomb培养基中,于37 ℃ 5% CO2培养箱中培养。以正常培养的细胞为对照组。予以不同浓度TNF-α干预细胞24 h,分别为TNF-α 25 ng/ml组、TNF-α 50 ng/ml组和TNF-α 100 ng/ml组。为观察Src抑制剂PP1能否逆转TNF-α作用,设置PP1+TNF-α组：先予10 μmol/L的PP1预处理1 h后再加入100 ng/ml TNF-α干预细胞24 h。采用Western blot检测各组细胞中形成Ikur的主要钾通道蛋白Kv1.5、Src的表达水平。采用全细胞膜片钳检测各组细胞的Ikur密度。结果 (1)H9c2细胞中,TNF-α 100 ng/ml组细胞的Kv1.5蛋白表达水平低于对照组及TNF-α 25 ng/ml组(P均<0.05)。各组细胞间Src蛋白表达水平差异无统计学意义(P>0.05)...     

雌激素受体在人类垂体腺瘤中的表达

目的检测雌激素受体(estrogen receptor,ER)在人类不同类型激素垂体腺瘤中的表达,探讨垂体腺瘤中分泌不同类型激素的腺瘤细胞与ER免疫组化阳性细胞之间的关系.方法采用免疫组化S-P法对53例垂体腺瘤标本进行激素分型,检测垂体腺瘤中ER蛋白的表达.采用免疫组化双标法检测多激素分泌型垂体腺瘤中垂体激素合并ER表达的情况.结果53例垂体腺瘤标本中,部分PRL(5/7)、FSH(2/3)、LH(1/1)单激素腺瘤及部分多激素腺瘤有ER蛋白表达,而全部GH、ACTH、TSH单激素腺瘤均无ER蛋白表达,4例无功能腺瘤无ER蛋白表达.在33例多激素型垂体腺瘤标本中,22例有ER蛋白表达,其中PRL ER双标染色阳性标本10例、LH ER双标染色阳性标本9例、FSH ER双标染色阳性标本7例、GH ER双标染色阳性标本2例,33例标本的ACTH ER和TSH ER的双标染色均为阴性.结论垂体腺瘤患者的性别不影响肿瘤组织中ER蛋白的表达.垂体腺瘤中,分泌PRL、LH或FSH的垂体腺瘤细胞可表达ER;分泌ACTH或TSH的垂体腺瘤细胞不表达ER;分泌GH的垂体腺瘤细胞是否表达ER可能与该垂体腺瘤是否同时分泌PRL有关.ER在PRL、LH及FSH垂体腺瘤细胞的发生、发展中发挥作用.     

骨髓间充质干细胞对改良Kessler建模后大鼠跟腱纤维化粘连、腱细胞活性及p38、ERK蛋白表达的影响

目的 探究骨髓间充质干细胞(BMSCs)对改良Kessler建模后大鼠跟腱纤维化粘连、腱细胞活性及p38、细胞外信号调节激酶(ERK)蛋白表达的影响。方法 选取健康雄性大鼠40只,分为健康组、模型组、研究组、药物对照组,10只/组。健康组每日常规腹腔注射生理盐水;模型组用蘸有100μl生理盐水的明胶海绵包裹损伤跟腱断端周围,缝合皮肤;研究组将BMSCs 0.25 ml(1×10⁹/L)1次/w,注射入大鼠跟腱周围;药物对照组用蘸有浓度为2.5 mg/ml维拉帕米药物100μl的明胶海绵包裹损伤部位,缝合皮肤。对跟腱粘连结果进行评分,采用苏木素-伊红(HE)染色观察病理形态,TUNEL检测腱细胞凋亡,Western印迹检测p38、ERK、p-ERK蛋白表达,聚合酶链反应(PCR)检测跟腱组织中骨形态发生蛋白(BMP)-12、BMP-13、BMP-14 mRNA。结果 与健康组比较,模型组跟腱粘连评分、跟腱细胞凋亡、跟腱组织中BMP-12、BMP-13、BMP-14 mRNA、p38、ERK、p-ERK蛋白表达明显升高(P<0.05);与模型组比较,研究组以上指...     

雷公藤内酯醇对胰腺癌PANC1细胞Toll样受体4/核因子-kB信号通路的影响

目的 探讨雷公藤内酯醇(TP)对人胰腺癌PANC1细胞株侵袭能力的影响及其与Toll样受体4/核因子-KB(TLR4/NF-KB)信号通路的关系.方法 将PANC1细胞分为亲本细胞组、TP组、脂多糖(LPS)组和TP+ LPS组.TP组培养液中加入50 ng/ml的TP,LPS组加入1μg/ml的LPS,TP+ LPS组先用50 ng/ml的TP处理2h,再加入1 μg/ml的LPS.各组细胞均常规培养24 h.采用实时定量PCR和蛋白质印迹法检测TLR4、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)mRNA和蛋白的表达,双荧光素酶报告基因系统检测NF-KB活性,Transwell小室检测细胞侵袭能力.结果 亲本组、LPS组、TP组、TP+ LPS组的TLR4mRNA表达量分别为0.41 ±0.06、0.46±0.10、0.20±0.04和0.25±0.06,TLR4蛋白表达量分别为0.55±0.06、0.60±0.03、0.18±0.04和0.13±0.00;NF-KB活性分别为13.0±3.0、31.6±4.3、7.3±1.5和10.8±2.1;穿膜细胞数分别为(56.8±8.6)、(104.5±12.8)、(32.0±5.7)和(46.8±7.0)个;MMP-9mRNA表达量分别为0.36±0.05、0.58 ±0.07、0.18±0.03和0.30±0.004,MMP-9蛋白表达量分别为0.31±0.04、0.53±0.08、0.11±0.02和0.15±0.00.LPS组TLR4 mRNA和蛋白表达量与亲本组差异无统计学意义,但NF-KB活性、穿膜细胞数、MMP-9 mRNA和蛋白表达量显著高于亲本组(t值分别为8.654、7.593、6.655、4.982,P值均＜0.01).TP组TLR4 mRNA和蛋白表达量、NF-KB活性、穿膜细胞数、MMP-9 mRNA和蛋白表达量均显著低于亲本组(t值分别为-7.609、-9.948、-4.176、-5.915、-8.179、-9.948,P值均＜0.01).TP+ LPS组TLR4 mRNA和蛋白表达量、NF-KB活性、穿膜细胞数、MMP-9 mRNA和蛋白表达量均显著低于LPS组(t值分别为-4.437、-14.805、-10.506、-9.700、-9.055、-8.932,P值均＜0.01).结论 TP具有抑制胰腺癌细胞侵袭的作用,其机制与抑制TLR4/NF-kB信号通路、下调MMP-9的表达有关.     

姜黄素对脂多糖刺激的肾小管近端上皮细胞分泌的相关炎症因子的影响

目的:本研究旨在观察姜黄素对脂多糖(LPS)刺激下的人肾小管近端上皮细胞分泌的单核细胞趋化因子(MCP-1)及白细胞介素8(IL-8)的表达水平变化,并初步探讨其作用机制. 方法:将肾小管上皮细胞(HK-2细胞)培养于KSF培养液中,设正常对照组给予正常培养液,LPS刺激组(1 ng/ml,100 ng/ml和10μg/ml),姜黄素干预组(LPS 100 ng/ml+姜黄素5 μM或50μM),分别培养4～24h后收集细胞,应用Real-time PCR检测各组细胞MCP.-及IL-8的表达.ELISA检测细胞培养上清液中MCP-1及IL-8的表达. 结果:在不同浓度的LPS刺激HK-2细胞24h后即可明显升高MCP-1及IL-8的mRNA表达水平,随着LPS浓度(1 ng/ml,100 ng/ml和10 μg/ml)增加,MCP-1 mRNA表达分别上升为对照组的1.74、2.15和14.7倍(P<0.01);IL-8 mRNA表达上升为对照组的2.74、5.4和16.45倍(P<0.01).而以100 ng/ml的LPS刺激HK-2细胞4～24h,观察姜黄素的干预作用,可见不同浓度的姜黄素(5μM和50 μM)均可显著抑制LPS所诱导的HK-2细胞MCP-1及IL-8 mRNA的表达,且以50μM姜黄素干预组为明显.同时ELISA检测细胞上清液中MCP-1蛋白水平,可见5μM姜黄素组在24h时较相应对照组下降9.5%(P<0.05),而50 μM姜黄素组在8h时即较相应对照组下降19.5%(P<0.01).而在4h和12h时,5μM的姜黄素干预组较相应对照组IL-8的表达下降的11..2%(P<0.05)和7.58%(P<0.01),在50 μM姜黄素干预组则为32.90%和18.79%(P<0.01). 结论:姜黄素可抑制LPS所诱导的肾小管上皮细胞MCP-1及IL-8的表达,提示姜黄素在肾脏炎症过程中具有抑制肾小管上皮细胞炎症因子分泌及潜在抗纤维化作用.     

匹伐他汀对血管平滑肌细胞金属基质蛋白酶9表达的影响

目的 观察金属基质蛋白酶9(MMP-9)在动脉粥样硬化组织中的分布及匹伐他汀对TNF-α刺激血管平滑肌细胞MMP-9 蛋白和mRNA 表达的影响.方法 病理标本取自外科择期手术病例,行常规病理和免疫组织化学检查;对照组动脉标本取自非正常死亡健康成人尸体及非血管病变切除标本;血管平滑肌细胞取自开放手术切除的主动脉中膜.实验为5 组,对照组和4 个实验组.实验各组平滑肌细胞在给予TNF-α刺激前预先加入不同浓度的匹伐他汀(分别为1 ng/ml、10 ng/ml、100 ng/ml、500 ng/ml),测定其MMP-9 蛋白和mRNA 表达.结果 免疫组化检测显示,实验组动脉硬化组织TNF-α和MMP-9 蛋白分布明显增加,主要集中在炎性细胞聚集处,与对照组比较差异有统计学意义;MMP-9 的分布与TNF-α明显相关.匹伐他汀呈浓度依赖方式抑制TNF-α诱导平滑肌细胞MMP-9 蛋白和mRNA 表达;MMP-9 蛋白表达分别减少10.5%、24.1%、46.0%和61.0%,mRNA 表达分别减少9%、21%、35%和46%,差异有统计学意义.结论 动脉硬化组织中MMP-9 分布与TNF-α明显相关,提示动脉粥样硬化组织中MMP-9 增加与其他细胞因子相互影响有关.预先给予匹伐他汀可以呈现浓度依赖方式显示抑制TNF-α诱导的血管平滑肌细胞MMP-9 蛋白和mRNA 表达,提示他汀类药物可以通过抑制MMP-9 表达,延缓、稳定动脉粥样硬化病变,早期干预效果更好.     

外源性转化生长因子β3对HSC-T6细胞内源性转化生长因子β3表达的影响

目的 通过对大鼠肝星状细胞株(HSC-T6)中内源性转化生长因子β3 (TGF- β 3)mRNA和蛋白水平的检测,探讨外源性TGF- β 3对HSC-T6分泌内源性TGF-β3的影响.方法 体外培养HSC-T6,未加入外源性TGF-β 3培养的细胞为对照组,加入外源性TGF-β 3(10 ng/ml)培养的细胞为TGF-β 3组.(1)分别在l、2、4、12h和24h收集细胞,用实时荧光定量PCR法检测内源性TGF-β 3 mRNA表达;(2)分别在0、l、6h和12h收集细胞,用Western blot法检测细胞内TGF-β 3蛋白的表达;(3)分别在0、1、2、4、8、14h和24h收集细胞上清液,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞外总TGF-β 3蛋白的表达;加入外源性TGF-β 3培养HSC-T6 2 h,然后换用无血清的DMEM培养液继续培养细胞至2.25、2.5、3、4、6、10h和14h收集细胞上清液,用ELISA法检测细胞外内源性TGF-β 3蛋白的表达.对数据进行单因素方差分析.结果 (1)TGF-β 3组细胞内TGF-β 3 mRNA表达水平明显增高,于2h达峰值(2.796±0.518),为对照组(1.022±0.038)的2.74倍(P＜0.05);随后缓慢降低,维持在1.45倍水平达10h,24h时表达水平仍为对照组的1.18倍(P＜0.05).(2)不同时间点细胞内TGF-β3表达水平均无明显变化(P＞0.05).(3) TGF-β 3组细胞外总TGF-β 3含量明显增加,于4h时达高峰[(18.931±2.904)ng/ml],约为诱导量[(10.026±0.022) ng/ml]的1.89倍,随后开始下降;内源性TGF-β 3于诱导后3h达高峰[(0.835±0.027) ng/ml],为对照组[(0.026±0.022) ng/ml]的32.12倍,之后开始逐渐降低,直至维持一个弱增长的状态(P＜ 0.05).结论 外源性TGF-β 3可促进HSC-T6细胞分泌大量内源性TGF-β3.     

葡萄糖调节蛋白78对单核巨噬细胞分化的影响

目的:探讨葡萄糖调节蛋白78(GRP78)对单核巨噬细胞分化的影响。方法:利用佛波酯(PMA)诱导形成THP-1单核细胞来源巨噬细胞模型。实验分为4组,分别为对照组(PMA浓度为50 ng/ml)、GRP78 10 ng/ml组(GRP78浓度10 ng/ml+PMA 50 ng/ml)、GRP78 20 ng/ml组(GRP78浓度20 ng/ml+PMA 50 ng/ml)、GRP78 40 ng/ml组(GRP78浓度40 ng/ml+PMA 50 ng/ml),培养72 h。应用流式细胞术检测巨噬细胞M1型特异表面标志物CD86、M2型特异表面标志物CD163的表达;实时荧光定量PCR检测巨噬细胞M1型相关因子iNOS、M2型相关因子FIZZ-1、TGF-β、ARG-1及IL-10的mRNA表达。结果:与对照组比较,其他3组的CD163阳性巨噬细胞百分比显著增加(P0.01);而各实验组CD86阳性巨噬细胞百分比没有明显改变。与对照组相比,GRP78实验组中各组FIZZ-1、TGF-β的mRNA水平均有增加,其中GRP78 40 ng/ml组FIZZ-1、TGF-β的mRNA水平明显增高(P0.01);各组其他因子iNOS、IL-10和ARG-1的mRNA水平则没有明显变化。结论:GRP78可诱导THP-1单核巨噬细胞极化成M2型巨噬细胞。     

结核分枝杆菌优势蛋白ppe37的表达纯化以及对巨噬细胞NF-κB、TNF-α、IL-6m RNA表达的影响

目的 研究在结核分枝杆菌感染过程中,ppe37蛋白引起的巨噬细胞免疫应答反应.方法 利用本实验室已构建好的ppe37原核表达载体,将其转化到大肠杆菌E.col BL21中,用IPTG诱导表达后,经SDS-PAGE与Western blot鉴定后,利用Ni-Agarose His标签蛋白纯化试剂金对重组蛋白进行纯化并复性.利用SDS-PAGE和AlpHaImager 2200软件对纯化蛋白进行鉴定与分析.分别用浓度为100 ng/ mL、500 ng/mL、5 000 ng/mL的重组ppe37蛋白刺激RAW264.7巨噬细胞,24 h、48 h、72 h后,用Real-time PCR检测RAW264.7巨噬细胞NFκB、TNF-α、IL-6 mRNA的表达量的变化.结果 SDSPAGE鉴定显示,重组ppe37蛋白获得了大量表达,其相对分子质量约为50 kDa.经Western Blot验证,重组ppe37蛋白可与抗His单抗发生特异性反应,经AlpHaImager 2200软件薄层扫描分析,重组蛋白的纯度为96.2％,并成功的进行了蛋白复性.浓度分别为100 ng/ mL,500 ng/ mL,5 000 ng/ mL的重组ppe37蛋白刺激巨噬细胞,24 h后Real-Time PCR检测结果显示与空白对照组相比NF-κB、TNF α mRNA的表达没有影响(P＞0.05),而IL-6 mRNA的表达上调(P＜0.05);48 h、72 h后NF κB、TNF-α 、IL-6 mRNA的表达显著上调(P＜0.05).结论 成功地制备并纯化了重组ppe37蛋白,重组ppe37蛋白能够活化巨噬细胞,激活细胞免疫反应,并促使巨噬细胞发生炎性反应.     

葡萄糖调节蛋白78对单核巨噬细胞分化的影响

目的:探讨葡萄糖调节蛋白78(GRP78)对单核巨噬细胞分化的影响。方法:利用佛波酯(PMA)诱导形成THP-1单核细胞来源巨噬细胞模型。实验分为4组,分别为对照组(PMA浓度为50 ng/ml)、GRP78 10 ng/ml组(GRP78浓度10 ng/ml+PMA 50 ng/ml)、GRP78 20 ng/ml组(GRP78浓度20 ng/ml+PMA 50 ng/ml)、GRP78 40 ng/ml组(GRP78浓度40 ng/ml+PMA 50 ng/ml),培养72 h。应用流式细胞术检测巨噬细胞M1型特异表面标志物CD86、M2型特异表面标志物CD163的表达;实时荧光定量PCR检测巨噬细胞M1型相关因子iNOS、M2型相关因子FIZZ-1、TGF-β、ARG-1及IL-10的mRNA表达。结果:与对照组比较,其他3组的CD163阳性巨噬细胞百分比显著增加(P0.01);而各实验组CD86阳性巨噬细胞百分比没有明显改变。与对照组相比,GRP78实验组中各组FIZZ-1、TGF-β的mRNA水平均有增加,其中GRP78 40 ng/ml组FIZZ-1、TGF-β的mRNA水平明显增高(P0.01);各组其他因子iNOS、IL-10和ARG-1的mRNA水平则没有明显变化。结论:GRP78可诱导THP-1单核巨噬细胞极化成M2型巨噬细胞。     

巨噬细胞表达分泌的抗菌肽在卵巢癌发展中的作用及调控机制

目的探讨巨噬细胞表达分泌的抗菌肽Hcap18/LL37在卵巢癌发展中的作用及调控机制。方法构建卵巢癌细胞株OVCAR-3与巨噬细胞共培养模型,采用Matrigel小室检测巨噬细胞对OVCAR-3侵袭力的影响;Western印迹法和qRT-PCR检测Hcap18/LL37和Versican V1蛋白和mRNA的表达水平。使用干扰质粒抑制OVCAR-3细胞中Versican V1的表达,分析巨噬细胞中Hcap18/LL37表达和OVCAR-3细胞的侵袭力。结果共培养组侵袭穿膜细胞数明显多于OVCAR-3单独培养组(P<0.05);Hcap18/LL37抗体共培养组侵袭穿膜细胞数明显少于对照Ig G共培养组(P<0.05)。共培养后巨噬细胞中Hcap18/LL37蛋白和mRNA相对表达量高于单独培养(P<0.01);OVCAR-3细胞中Hcap18/LL37蛋白和mRNA相对表达量与单独培养之间差异无统计学意义(P>0.05)。Versican V1转染卵巢OVCAR-3细胞与巨噬细胞共培养24 h后,Versican V1蛋白相对表达量高于OVCAR-3细胞单独培养时(P<0.01)。巨噬细胞与Versican V1沉默OVCAR-3细胞共培养组侵袭穿膜细胞数低于Versican V1高表达OVCAR-3细胞共培养组(P<0.01)。结论卵巢癌内环境中巨噬细胞分泌的抗菌肽Hcap18/LL37促进癌细胞侵袭,其表达受肿瘤细胞分泌的Versican V1蛋白调控。