人视网膜色素上皮细胞的体外分离培养冻存复苏

目的为研究色素上皮相关疾病的发病机制及探讨中医中药治疗此类疾病的作用机制提供细胞模型。方法用胰蛋白酶消化法获得人视网膜色素上皮细胞,免疫细胞化学法对其进行鉴定。采用超低温冷冻的方法对细胞进行冻存,复苏后观察细胞活性。结果人视网膜色素上皮细胞在体外生长良好,胞浆内充满了棕黑色色素颗粒,随着传代的增加,色素颗粒逐渐减少至消失。冻存后复苏的人视网膜色素上皮细胞生长良好,增生活跃。结论成功建立了人视网膜色素上皮细胞的体外培养模式。冻存的细胞复苏后细胞活性不受影响。     

角膜上皮细胞体外培养的研究进展

作者从角膜上皮细胞的一般体外培养方法、培养基的选择、载体的选择和鉴别方法等方面对角膜上皮细胞培养体系进行了综述。     

人眼结膜吸吮线虫2例

例 1　男 ,9岁 ,双眼疼痛 ,流泪 ,结膜充血半月于 1 996年 1 0月 7日来我院就诊。检查 :双眼球结膜充血 ,结膜囊下穹窿部可见蠕动的白色线虫 ,右眼1条 ,左眼 2条 ,局部结膜下有点状出血。用 1 %地卡因滴眼液点眼 ,无齿镊取出 3条虫体 ,肉眼可见虫体长约 1 2～ 1 8ｍｍ ,宽约 0 5～ 0 8ｍｍ ,乳白色 ,线状 ,两端渐细 ,蠕动活跃 ,取出后半小时虫体死亡。经寄生虫学鉴定 :吸吮线虫 (成虫 )。例 2　女 ,1 5岁 ,近 1个月双眼异物感 ,瘙痒 ,结膜充血于 1 998年 8月 9日来我院就诊。发病以来曾先后从双眼结膜囊下取出 5条白色线虫 ,体检未见异常…     

人子宫内膜干细胞体外分离、培养及鉴定

目的：研究子宫内膜异位症（EMs）患者在位、异位内膜干细胞分离、培养及鉴定方法。方法：采用胶原酶III法进行体外分离、培养子宫内膜异位症患者在位、异位内膜干细胞,倒置显微镜下观察贴壁细胞的生长情况,并运用免疫荧光和RT-PCR技术检测干细胞相关标记物的表达。结果：成功培养出悬浮生长的子宫内膜干细胞球,CD34、CD117抗原及Oct-4因子在子宫内膜细胞中呈持续的阳性表达。结论：EMs患者在位、异位内膜中存在干细胞,对其分离、培养,可作为研究EMs发病机制的体外模型。     

人眼结膜华裔吸吮线虫病1例

华裔吸吮线虫 (ｔｈｅｌａｚｉａｃａｌｌｉｐａｅｄａ)属于旋尾亚目(Ｓｐｉｒｕｒａｔａ)的成虫。Ｒａｉｌｌｉｅｔ和Ｈｅｎｒｙ (1 91 0 )首先在印度发现于狗眼结膜囊内。而后 ,缅甸、菲律宾及日本等国也相继发现 ,我国先后不仅在猫、狗及家兔眼中有所发现 ,而且在人眼结膜囊内也有发现。Ｆｉｓｃｈｅｒ(1 91 7)在重庆首先从狗的结膜囊内发现此虫 ,人眼内寄生结膜吸吮线虫的报告 ,最早见于北京和福建 ,以后 ,国内外陆续见到人眼结膜吸吮线虫病例的报导 ,由于此虫多见于亚洲各国 ,故又称“东方眼虫”。鉴于甘肃省尚未见报告 ,特报道如下。…     

小鼠骨髓间充质干细胞的体外培养及鉴定

目的：建立成年小鼠骨髓间充质干细胞（MSC）的分离和培养方法，并对其表面标志进行鉴定，为其应用提供实验依据。方法：应用体外细胞培养技术将小鼠MSC自股骨、胫骨中分离、纯化和培养，倒置显微镜观察其生长过程，流式细胞仪检测MSC表面抗体的表达。结果：使用全骨髓贴壁分离方法分离、扩增的MSC贴壁后形态较均一，生长良好，细胞表达CD29，CD44，但CD34和CD45表达阴性。结论：可以用全骨髓贴壁法从小鼠骨髓分离培养出MSC，在体外进行有效扩增，为以小鼠为模型研究MSC在组织工程、细胞移植、基因治疗等领域的运用提供实验基础。     

兔BMSCs体外培养及诱导为成骨细胞的研究

骨髓间充质干细胞的特性表现为较强的增殖能力和向多种间充质细胞分化的潜能。成骨细胞是骨组织形成过程中的一种重要细胞,在骨缺损的修复过程中起关键作用,特别对构建用于修复骨缺损的组织工程化骨组织来说尤其重要,但成骨分化的调控机制和应用值得进一步研究。     

大鼠毛囊干细胞体外培养及基因转染方法

目的：探讨大鼠毛囊干细胞体外培养和基因转染的方法.方法：采用组织块法分离、培养大鼠触须隆突部毛囊干细胞,经Ⅳ型胶原差速贴壁法纯化后,采用碱性磷酸酶染色和细胞免疫荧光染色进行细胞鉴定,测定细胞生长曲线,并分别采用脂质体和慢病毒质粒进行毛囊干细胞基因转染.结果：经两次Ⅳ型胶原贴壁筛选后,毛囊干细胞呈克隆性生长,具有典型的干细胞生物学特征,碱性磷酸酶染色阳性,角蛋白-15、整合素-α6和整合素-β1表达均为阳性.细胞生长曲线显示毛囊干细胞在接种后第3天时出现干细胞克隆;第5天和第6天时细胞处于对数生长期.脂质体介导的毛囊干细胞基因转染率为1.55％～17.21％,中位数9.63％;慢病毒介导的毛囊干细胞基因转染率为62.14％ ～79.42％,中位数71.52％.结论：采用组织块法分离、培养大鼠触须隆突部毛囊干细胞,经Ⅳ型胶原差速贴壁法纯化后,毛囊干细胞可保持较好的生长状态和较强的克隆形成能力,且慢病毒介导毛囊干细胞基因转染比脂质体转染更高效、稳定.     

兔骨髓间充质干细胞体外培养及生物学特性研究

目的:进一步研究兔骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)分离和培养方法及其生物学特性,为利用MSCs作为种子细胞治疗多种疾病提供实验基础。方法:通过密度梯度离心、贴壁筛选法分离培养兔MSCs。测定其接种贴壁率,在倒置显微镜下连续观察细胞的形态变化,利用甲基噻唑基四唑(methyl thiazdyl tetrazolium,MTT)法测定MSCs生长曲线,并应用流式细胞术测定细胞表面标记物。结果:MSCs接种12h后贴壁率为95%以上,细胞倍增时间约为30.8h,平均传代时间约5～7d;培养的MSCs阳性表达CD29、CD44、CD105,阴性表达CD34。结论:在适宜的实验条件下,体外培养的MSCs能够稳定生存增殖并保持多向分化潜能,可作为组织工程的种子细胞。     

眼结膜子宫内膜异位症1例

患者李某，16岁，因眼结膜充血3个月于2005年3月18日于门诊求诊。该患于2004年9月月经初潮，连续3个月均出现月经期眼结膜充血，伴明显痛经，每次持续4～5天，症状于月经干净后消失。曾多次于眼科治疗，疗效不佳，于2005年3月18日转入妇科治疗。体检：眼位居中，双眼球结膜充血，双眼睑结膜均见多个紫蓝色小突起，未见破溃。心肺、腹部未见异常。妇科检查；肛诊盆腔无阳性体征。处置：切除紫蓝色突起，送病理检查。病理回报：病灶中见子宫内膜上皮。辅检：CA125值测定40U／ml。由此诊断为眼结膜子宫内膜异位症。     

兔角膜缘上皮细胞培养与移植的实验研究

目的 观察以明胶为裁体培养的角膜缘上皮细胞移植治疗兔角膜缘干细胞缺乏症的疗效.方法 切除实验兔角膜缘组织并用NaOH处理制作角膜缘干细胞缺乏动物模型,切除的角膜缘上皮细胞在铺有明胶裁体的细胞培养板上培养5d后(角膜上皮细胞移植术前24 h)用3H胸腺嘧啶核苷标记,于模型动物上行角膜缘上皮细胞移植术,术后观察角膜修复情况,并做病理学检查及同位素检测.结果 1.细胞培养:兔角膜缘上皮细胞可以在明胶载体上培养,增殖、分化为密集的角膜上皮细胞层.2.移植眼情况:行角膜缘上皮细胞移植术后,模型兔眼角膜上皮完整,新生血管减少;病理检查显示移植眼角膜缘及周边部上皮细胞为多层结构,角膜新生血管消失,基质内炎性细胞浸润减轻;角膜缘上皮细胞移植术后4周移植眼角膜仍可测到3H胸腺嘧啶核苷.结论 角膜缘上皮细胞移植治疗角膜缘干细胞缺乏症可恢复角膜缘干细胞缺乏病变角膜上皮结构的完整性,减少角膜新生血管的形成,维持角膜缘干细胞的屏障功能,为角膜移值提供更好的条件.     

视网膜血管内皮细胞的体外培养

综述了视网膜微血内皮细胞的体外培养过程和影响因素,对明确某些视网膜病的发病原因、预防和治疗具有重要意义。     

猪的冠状动脉内皮细胞体外培养方法

目的:建立实验小型猪的冠状动脉内皮细胞体外培养方法。方法:冠状动脉血管块短暂酶消化后采用植块法进行培养。结果:植块培养2日细胞从植块中移出;培养6日植块周围细胞呈铺路石样特征,传代/纯化一次后5日细胞单层贴壁生长,融合成片。细胞因子Ⅷ免疫荧光检测内皮细胞表达阳性,纯度100%。结论:成功建立猪冠状动脉内皮细胞体外培养方法,此方法操作简单、快速,得到细胞纯度高。     

白内障术前清洁结膜囊方法的比较

目的探讨两种白内障术前清洁结膜囊方法的疗效.方法将未患睑缘炎、结膜炎和泪道阻塞的白内障住院患者94例随机分为观察组和常规组.观察组术前1天用0.3%氟哌酸眼液点眼,每小时1次,连续8次;常规组术前3天用0.3%氟哌酸眼液点眼,每天3次,共3天.每组均于入院后使用抗生素前和手术消毒前分别进行结膜囊细菌培养.结果清洁结膜囊前细菌阳性率观察组为60%,常规组为53.1%,分别使用两种清洁结膜囊的不同方法后,结膜囊细菌均为阴性.结论白内障术前用0.3%氟哌酸眼液点眼,无论是术前1天,每小时1次,连续8次,还是术前3天,每天3次,共3天都能达到清洁结膜囊的目的.     

LASIK术前用药时间与清洁结膜囊效果比较

目的观察LASIK术前用药的最低安全时间及清洁结膜囊的临床效果.方法连续的LASIK术前病例135例(270只眼),按术前用药时间分为0、1、2、3、4天组,分别于用药前、用药后及洗眼后进行结膜囊细菌培养.结果各组病例用药前结膜囊细菌培养阳性率为50.37%;用药后2天组结膜囊细菌培养阳性率为2.86%,0、1、3、4天组均为0.洗眼后各组结膜囊细菌培养阳性率均为0.结论 LASIK术前有必要局部滴用抗生素滴眼液;手术当日每小时1次,连续4次或更长时间用药可达到清洁结膜囊的目的.     

药用植物干细胞培养技术及其应用

着重介绍了药用植物干细胞培养技术的建立方法及其在长期培养、悬浮培养、扩大培养及低温储藏方面较传统植物细胞培养技术的优势,同时综述了药用植物干细胞培养技术在生产天然产物,开发药品、功能性食品和化妆品,建立主细胞库及基础研究等方面的应用,并对其未来的发展方向进行了展望。     

黄精多糖滴眼液对实验性干眼症结膜的影响

目的观察0.8%黄精多糖滴眼液对实验性干眼症模型结膜的影响.方法将实验性干眼症日本大耳白兔随机分为空白对照组、治疗组和药物对照组,分别用溶煤、0.8%黄精多糖滴眼液和泪然滴眼液治疗,5周后观察结膜杯状细胞数目及上皮改变并进行对比.结果治疗组结膜上皮无明显鳞状化生,杯状细胞数目恢复优于对照组.结论 0.8%黄精多糖滴眼液对实验性干眼症结膜有明显改善作用.