哮喘小鼠CD4+CD25+调节性T细胞数量及功能的改变

目的观察哮喘小鼠脾脏CD^4＋CD2^4＋5’调节性T细胞（简称Treg细胞）数量及功能的改变。方法以屋尘螨提取液复制小鼠哮喘模型后，分离小鼠脾脏CIM’T细胞，采用流式细胞仪检测Treg细胞占CD^4＋T细胞的比例；分离Treg细胞，与屋尘螨提取液共同培养后测定上清液中白细胞介素-4（IL-4）及IL-10的含量；将Treg细胞与CD^4＋T细胞共同培养，观察其对CD^4＋T细胞增殖及IL4、IL-5、γ-干扰素（IFN-γ）分泌的影响。结果哮喘小鼠脾脏Treg细胞占CD^4＋T细胞比例明显下降；与正常组相比，哮喘小鼠脾脏Treg细胞IL-4、IL-10的分泌无明显差异；Treg细胞可显著抑制哮喘小鼠CD^4＋T细胞的增殖，并降低其IL-4的分泌，对IFN-γ的合成分泌无明显作用；使用anti—CD25mAb后，哮喘和正常小鼠Treg细胞的作用均被显著抑制。结论哮喘小鼠Treg细胞功能与正常对照组小鼠无明显区别，但数量显著下降。哮喘发病过程中Th2型反应占优势，与Treg细胞数量减少，对Th2型反应的抑制作用降低有一定关系。     

褪黑素对哮喘大鼠CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的影响及抗炎作用

目的:研究褪黑素对哮喘大鼠CD4 CD25 调节性T细胞的影响及抗炎作用。方法:32只SPF级SD大鼠随机分成4组造模,哮喘组、MT组、地塞米松组、正常组,每组8只。各组于最后一次雾化激发后取外周血涂片染色,计数外周血中嗜酸性粒细胞(EOS)百分比;收集肺泡灌洗液(BALF),计数炎症细胞总数;制作肺组织石蜡切片,HE染色计数气道周围EOS数目;用免疫增强浊度法检测血清中IgE水平;用流式细胞术检测外周血中CD4 CD25 Tr数目变化。结果:①哮喘组外周血中CD4 CD25 Tr/CD4 T细胞比值与气道周围EOS细胞数呈现高度负相关(r=-0.73,P<0.05),与BALF细胞总数亦高度负相关(r=-0.78,P<0.05),与血清IgE水平未见显著相关;②CD4 CD25 Tr/CD4 T细胞比值哮喘组显著高于其他各组(均为P<0.01),其他三组差异无统计学意义;③MT组气道周围EOS计数、外周血EOS比例、BALF细胞总数及IgE水平明显低于哮喘组(均为P<0.01)。结论:CD4 CD25 Tr参与了哮喘的发病。褪黑素能显著降低哮喘大鼠CD4 CD25 Tr的数目,有效减轻哮喘大鼠气道炎症和血清IgE上升水平。     

CD4~+CD25~+调节性T细胞对哮喘大鼠免疫功能影响

目的:观察CD4+CD25+调节性T细胞(CD4+CD25+Treg)对CD4+CD25-T细胞增殖和Th1/Th2细胞因子分泌的影响,探讨其在哮喘气道炎症中的作用机制。方法:将哮喘大鼠CD4+CD25-T细胞分别与卵白蛋白(OVA)免疫耐受大鼠CD4+CD25+Treg细胞和哮喘大鼠CD4+CD25+Treg细胞联合培养,3H胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)掺入法测量细胞增殖情况,ELISA检测细胞IL-4、IL-5和IFN-γ含量。结果:OVA耐受大鼠CD4+CD25+Treg细胞能抑制CD4+CD25-T细胞增殖和Th2细胞因子分泌(P<0.05);哮喘大鼠CD4+CD25+Treg细胞可明显抑制IFN-γ的分泌(P<0.05)。结论:OVA免疫耐受大鼠CD4+CD25+Treg细胞可能通过抑制哮喘大鼠CD4+CD25-T细胞增殖和影响Th1/Th2平衡发挥作用,哮喘大鼠CD4+CD25+Treg细胞存在功能异常,可能与哮喘的发病有关。     

哮喘小鼠CD4~ CD25~ 调节性T细胞数量及功能的改变

目的观察哮喘小鼠脾脏CD4 CD25 调节性T细胞(简称Treg细胞)数量及功能的改变。方法以屋尘螨提取液复制小鼠哮喘模型后,分离小鼠脾脏CD4 T细胞,采用流式细胞仪检测Treg细胞占CD4 T细胞的比例;分离Treg细胞,与屋尘螨提取液共同培养后测定上清液中白细胞介素-4(IL-4)及IL-10的含量;将Treg细胞与CD4 T细胞共同培养,观察其对CD4 T细胞增殖及IL-4、IL-5、γ-干扰素(IFN-γ)分泌的影响。结果哮喘小鼠脾脏Treg细胞占CD4 T细胞比例明显下降;与正常组相比,哮喘小鼠脾脏Treg细胞IL-4、IL-10的分泌无明显差异;Treg细胞可显著抑制哮喘小鼠CD4 T细胞的增殖,并降低其IL-4的分泌,对IFN-γ的合成分泌无明显作用;使用anti-CD25 mAb后,哮喘和正常小鼠Treg细胞的作用均被显著抑制。结论哮喘小鼠Treg细胞功能与正常对照组小鼠无明显区别,但数量显著下降。哮喘发病过程中Th2型反应占优势,与Treg细胞数量减少,对Th2型反应的抑制作用降低有一定关系。     

CD4+CD25+Treg细胞对角膜移植免疫排斥反应的影响

角膜移植排斥反应是由多种免疫细胞和免疫分子参与的复杂的免疫反应过程。CD4~+CD25~+Treg细胞介导的移植耐受,利用免疫系统的原始功能诱导供体产生特异性免疫耐受而不影响免疫系统的其它功能,为移植免疫排斥反应的防治提供新的思路。总结CD4~+CD25~+Treg细胞介导的移植耐受对角膜移植免疫排斥反应的影响,为深入了解Treg细胞功能及其相关免疫负调节机制对于角膜移植免疫排斥反应的影响提供理论依据。     

CD4+CD25+Treg细胞调节T细胞的作用机制分析

目的通过检测Treg细胞表达介导抑制性共刺激分子CTLA4和分泌抑制性细胞因子,并设置Treg细胞与效应性T细胞共培养和分隔培养实验模型,分析Treg细胞对效应性T细胞形成抑制作用的可能机制及各机制的主次要关系.方法对比分析Treg细胞与效应性T细胞膜分子CTLA4、CD28表达和细胞因子IL-10、TGF-β1分泌水平;以TransWell Millicell-PCF分隔培养槽分隔培养Treg细胞与不同淋巴细胞组成的反应体系,采用向共培养及分隔培养体系加入与不加入IL-10、TGF-β1抗体的阻断方法,检测Treg细胞对不同组混合淋巴细胞反应的抑制效率.结果 Treg细胞分泌IL-10和TGF-β1的浓度水平明显高于效应性T细胞,Treg细胞培养上清中IL-10和TGF-β1水平分别达到(380±36.3) pg/ml和(790±56.8) pg/ml,Treg细胞分泌IL-10和TGF-β1的浓度水平与效应性T细胞比较,均有显著性差异(P<0.01).共刺激分子CTLA4、CD28在Treg细胞和效应性T细胞膜表面的表达水平存在明显差异,Treg细胞以表达CTLA4为主.Treg细胞对共培养体系混合淋巴细胞反应的抑制效率明显高于分隔培养,通过分泌IL-10对效应性T细胞的抑制作用亦明显强于通过TGF-β1.结论细胞接触机制是Treg细胞抑制效应性T细胞的主要作用机制,而细胞因子机制中,以通过分泌IL-10的方式对效应性T细胞的抑制作用更明显.     

哮喘患儿CD4+CD25+调节性T细胞及FOXP3的表达

目的:研究CD4+CD25+调节性T细胞在哮喘儿童外周血中的比例改变,并探讨其临床意义.方法:采用细胞内染色的流式细胞术检测急性发作期哮喘患儿外周血CD4+CD25+Treg及其调控基因FOXP3的表达,并与健康对照组进行比较.结果:急性发作期哮喘患儿外周血CD4和CD25双阳性细胞所占比例与健康对照组无明显差异(P>0.05),而CD4+CD25+FOXP3调节性T细胞在外周血中的比例明显低于健康对照组(P<0.01).结论:哮喘患儿外周血CD4+CD25+FOXP3调节性T细胞在外周血中的比例明显减少,可能与哮喘的发病机制有关.     

哮喘患者外周血CD4~+和CD25~+调节性T细胞的变化及意义

目的探讨CD4+、CD25+调节性T细胞在哮喘发病机制中的作用,为哮喘的临床治疗提供新方法和新思路。方法分离哮喘患者和正常人外周血单个核细胞(PBMC),用流式细胞仪分析CD4+、CD25+调节性T细胞表型及其在外周血单个核细胞中的比例。结果哮喘组外周血CD4+、CD25+调节性T细胞占T淋巴细胞的百分比为(4.2±1.5)%,对照组(8.5±2.6)%,哮喘组明显低于对照组(P<0.05),两组CD4+、CD25+调节性T细胞表面表达的活化表型CTLA-4和CD69无显著性学差异(P>0.05)。结论CD04+和CD25+调节性T细胞参与了哮喘的发生。     

丹参注射液对哮喘大鼠气道炎症及CD4+CD25+调节性T细胞的影响

目的 观察丹参注射液对支气管哮喘(哮喘)大鼠气道炎症和CD4 CD25 调节性T细胞(CD4 CD25 Tr)的影响,探讨丹参注射液治疗哮喘的新机制.方法 30只Wistar大鼠随机分成正常对照组、哮喘组、丹参治疗组.计数支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞总数并分类,应用苏木精一伊红染色行肺组织病理学检查,流式细胞仪检测外周血单个核细胞(PBMCs)中CD4 CD25 Tr的比例.结果 丹参治疗组BALF细胞总数及淋巴细胞、中性粒细胞和嗜酸性粒细胞(Eos)百分率较哮喘组均明显减少(P<0.05,P<0.01),与正常对照组比较差异无显著性意义(均P>0.05).病理组织学显示:丹参治疗组较哮喘组肺组织炎性细胞浸润明显减少.哮喘组PBMCs中CD4 CD25 Tr的比例较正常对照组明显减少(P<0.05),丹参治疗组CD4 CD25 Tr的比例较哮喘组明显增加(P<0.05).结论 丹参注射液可减轻哮喘大鼠气道炎症反应,其机制可能与促进CD4 CD25 Tr的产生有关.     

支气管哮喘大鼠淋巴液CD4+CD25+Treg及其Th1/Th2失衡的实验研究

目的观察CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞、IL-4和IFN-γ在哮喘大鼠淋巴液与血液中的水平,探讨其与哮喘发病的关系。方法建立大鼠哮喘模型,收集激发后0、24、48 h淋巴液、血液中淋巴细胞,采用流式细胞术(FCM)检测淋巴液及血液中CD4+CD25+Foxp3+T细胞百分率;采用ELISA方法检测血浆及淋巴液中IL-4和IFN-γ水平。结果哮喘组淋巴液和血液的CD4+CD25+Foxp3+T细胞百分率水平、血浆IL-4和IFN-γ浓度在各时间点均低于对照组(P<0.05);哮喘组淋巴液中CD4+CD25+Foxp3+T细胞百分率水平、IL-4和IFN-γ浓度在不同时间点均高于血液水平(P<0.05)。结论哮喘大鼠淋巴液中存在CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞数量失调,且淋巴液中CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞水平显著高于其血液水平;哮喘大鼠淋巴液中存在以Th2亢进为特征的Th1/Th2失衡,淋巴液中细胞因子水平对于反映哮喘炎症程度可能更早和更准确。     

Influence of Danshen Injection on airway inflammation and CD4^＋CD25^＋ regulatory T cells of asthmatic rats

Objective： To investigate the influence of Danshen Injection on airway inflammation and CD4^＋CD25^＋ regulatory T cells（CD4^＋CD25^＋ Tr） of asthmatic rats, and elucidate the possible mechanism of Danshen Injection in treatment of asthma. Methods： 30 Wister rats were randomly divided into control group, asthma group and Danshen Injection treated group. Bronchoalveolar lavage fluids （BALF） were collected, and cytology studies were conducted. Lung tissues were obtained and pathologic analyses were done with hematoxylin and eosin stain （HE）. Flow cytometry was used to detect the CD4^＋CD25^＋ Tr ratio in peripheral blood mononuclear cells （PBMCs）. Results： Total cell, the percentage of lymphocytes, neutrophils and eosinophils （Eos） in BALF of Danshen Injection-treated group were lower than that in asthma group （P〈0.05, P〈0.01）. Compared with asthma group, less infiltration of inflammatory cells in lung tissues was observed in Danshen Injection-treated group. CD4^＋CD25^＋ Tr of asthma group was lower than that of control and Danshen Injection treated group （P〈0.05）. Conclusion： Danshen Injection can suppress airway inflammation of asthmatic rats, probably by increasing the number of CD4^＋CD25^＋ Tr.     

大鼠CD4+CD25+调节性T细胞的分选和提取

目的 分选提取大鼠脾脏和淋巴结CD4+CD25+调节性T细胞并进行纯度和活性检测.方法 用免疫磁珠两步法既阴性选择和阳性选择分选提取大鼠CD4+CD25+调节性T细胞,流式细胞仪检测细胞纯度,台盼蓝染色计算细胞存活率.结果 免疫磁珠分选提取的CD4+CD25+调节性T细胞纯度在86% 以上,并且活性良好,活细胞百分率大于97%.结论 通过免疫磁珠分选能够提取高纯度高活性的CD4+CD25+调节性T细胞.     

双向电泳-质谱法分析人CD4+CD25+T细胞与CD4+CD25-T细胞蛋白质组差异

目的 用双向凝胶电泳-质谱法(2．DE／MS)分析人CD4^ CD25^ T细胞和CD4^ CD25^-T细胞表达的蛋白质组，建立二者之问的差异表达谱。方法 提取人脾脏源CD4^ CD25^ T细胞和CD4^ CD25^-T细胞总蛋白质，双向电泳分离蛋白，比较两种细胞的蛋白质组表达差异，对差异蛋白质点用基质辅助激光解析电离飞行时间问质谱(Matrix-assisted laser des-orpfion／ionization time of flying maass spectrometry，MAIDI-TOF-MS)进行鉴定。结果 胶图差异分析发现25个表达水平存在明显差异的蛋白质点，其中17个点在CD4^ CD25^-T细胞上调，8个点在CD4^ CD25^ T细胞上调。质谱初步鉴定出15个差异蛋白质点。结论 CD4^ CD25^ T细胞和CD4^ CD25^-T细胞表达蛋白质组存在差异，这种蛋白质组的差异分析有助于进一步研究调节性T细胞功能相关蛋白质。     

哮喘患者外周血Rho激酶及CD4+CD25+调节性T细胞测定

目的：比较不同研究对象外周血Rho激酶及CD4+CD25+调节性T细胞的表达规律,探讨Rho激酶和CD4+CD25+调节性T细胞在哮喘患者中的变化和相关性。方法：选取中、重度哮喘患者16例,健康对照组14例,通过年龄、性别配对,ELISA测定所有研究对象血清Rho激酶水平,流式细胞仪测定CD4+CD25+调节性T细胞水平,所有研究对象经肺功能仪测定肺功能。结果：哮喘组外周血Rho激酶表达水平高于对照组(P<0.05),外周血CD4+CD25+调节性T细胞水平低于对照组(P<0.05);两组外周血Rho激酶与肺功能第1秒用力呼气容积(forced expiratory volume in one second,FEV1)占预计值百分比(FEV1%)无相关关系(r=-0.491,P>0.05);两组外周血CD4+CD25+调节性T细胞水平与肺功能FEV1%呈轻度正相关关系(r=0.380,P=0.038);两组外周血Rho激酶与CD4+CD25+调节性T细胞水平无相关关系(r=-0.438,P>0.05)。结论：哮喘患者外周血Rho激酶水平升高,CD4+CD25+调节性T细胞水平降低,可能在哮喘发病过程中起一定的作用。     

人CD4+CD25+T细胞和CD4+CD25-T细胞蛋白质组的双向电泳分析

目的 用双向电泳技术分析人CD4^ CD25^ T细胞和CD4^ CD25^-T细胞表达的蛋白质组，建立二者之间的差异表达谱。方法 从人脾脏分选CD4^ CD25^ T细胞和CD4^ CD25^-T细胞，用双向电泳技术分析两种细胞蛋白质组的表达差异。结果 分选细胞纯度分别为CD4^ CD25^ T细胞82.3%,CD4^ CD25^-T细胞96.5%，双向电泳分析发现有4个蛋白点明显仅于CD4^ CD25^ T细胞检测到表达，有9个蛋白点明显仅于CD4^ CD25^-T细胞检测到表达。结论 CD4^ CD25^-T细胞和CD4^ CD25^-T细胞表达蛋白质组有明显差异。     

前列腺素E1对重症肺炎大鼠CD4＋CD25＋调节性T细胞的调控作用及意义

目的 探讨脂质体前列腺素E1(Lipo-PGE1)对重症肺炎大鼠CD4+CD25+ 调节性T细胞(CD4+CD25+ Treg 细胞)干预作用及意义。方法 54只雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组、PGE1组。模型组及PGE1组经气管注入肺炎克雷伯菌,第6天成功建立重症肺炎模型。自第6天开始PGE1组尾静脉注射Lipo-PGE1(1μg/kg)。对照组、模型组给予等量的生理盐水,各组于接种后第7、9、11天分批处死动物。采用流式细胞仪检测Lipo-PGE1对重症肺炎大鼠肺泡灌洗液(BALF)、外周血中CD4+CD25+ Treg细胞表达的影响。同时动态观察动物外周血和BALF中白细胞(WBC)、中性粒细胞(PMN)计数、血气分析、肺组织湿干比重及肺组织病理改变。结果 第7、9、11天,PGE1组外周血Treg/CD4+ T细胞比值[(27.32±1.26)%、(24.53±1.32)%、(19.24±2.63)%]与模型组[(23.19±2.18)%、(19.80±1.39)%、(15.11±1.73)%]、对照组[(5.35±0.77)%、(5.21±0.61)%、(5.46±0.80)%]比较差异均有统计学意义(P<0.01)。PGE1组BALF中Treg/CD4+ T细胞比值[(61.88±2.83)%、(55.75±4.19)%、(45.61±2.92)%]与模型组[(53.77±4.32)%、(45.69±3.52)%、(39.54±3.99)%]对照组[(20.13±2.47)%、（20.47±2.49%、(22.11±4.60)%]比较差异均有统计学意义(P<0.05、0.01)。结论 重症肺炎大鼠外周血和气道CD4+CD25+ Treg细胞增多,Lipo-PGE1能减轻重症肺炎炎症反应,其机制可能与促进CD4+CD25+ Treg的产生有关。     

CD4+ CD25+调节性T细胞在肺癌中的表达及其临床意义

目的：：探讨CD4+ CD25+调节性T细胞在晚期肺癌中的表达及其临床意义。方法：应用流式细胞术分析42例肺癌患者(肺癌组)外周血CD4+ CD25+调节性T细胞表达水平,与15名健康志愿者作对照。结果：肺癌组患者外周血CD4+ CD25+调节性T细胞数量为(7.17±3.63)%,明显高于对照组的(4.25±2.11)%(P<0.01)。肺癌组患者外周血中调节性T细胞数量在病理类型间差异无统计学意义(P>0.05),晚期肺癌患者外周调节性T细胞数量高于早期患者(P<0.05)。结论：调节性T细胞在肺癌患者中比率明显升高,并与临床进展有关。     

CD4^＋CD25^＋调节性T细胞与肝移植免疫耐受

CD4^＋CD25^＋调节性T细胞因其独特的免疫抑制功能而备受关注,在诱导和维持移植免疫耐受方面具有重要的作用。肝脏具有移植免疫特性．但肝移植术后如何避免排斥反应、诱导免疫耐受、提高存活率这一问题仍尚未解决。CD4^＋CD25^＋调节性T细胞在肝移植免疫耐受中具有重要的作用。本文即从CD4^＋CD25^＋调节性T细胞入手,对其在肝移植排斥反应与免疫耐受中的作用加以综述。     

肿瘤细胞对CD4~+CD25~+Treg细胞数量和功能的影响

目的：探讨肿瘤细胞与免疫细胞相互作用对CD4+CD25+Treg细胞数量和功能的影响。方法：建立Lewis肺癌细胞与小鼠脾淋巴细胞共培养体系。Lewis肺癌细胞与不同浓度小鼠脾淋巴细胞共培养,分为4组：实验组Ⅰ（5×105个Lewis肺癌细胞与1×106个淋巴细胞共培养）、对照组Ⅰ（1×106个淋巴细胞单独培养）、实验组Ⅱ（5×105个Lewis肺癌细胞
与2×106个淋巴细胞共培养）、对照组Ⅱ（2×106个淋巴细胞单独培养）;Lewis肺癌细胞与
淋巴细胞共培养不同时间,采用3个时间点：24、48和72 h;Lewis肺癌细胞培养上清与淋巴细
胞共培养,选择培养上清浓度为20%和50%。采用流式细胞术检测了Lewis肺癌细胞与脾淋巴
细胞共培养系统中CD4+CD25+Treg细胞数量变化,通过RT-PCR方法检测了共培养对Foxp
3 mRNA表达的影响。结果：与对照组比较,实验组Ⅰ 中CD4+CD25+Treg细胞数量和Foxp3 mRN
A表达明显增强（P<0.05）,实验组Ⅱ中CD4+CD25+Treg细胞数量和Foxp3 mRNA表达无明
显变化（P>0.05）;Lewis肺癌细胞与淋巴细胞培养24及48 h可见CD4+CD25+Treg细胞数量及Foxp3
mRNA表达明显升高（P<0.05）,而72 h后变化不明显;20%和50% Lewis肺癌细胞培养上清
均可明显提高CD4+CD25+Treg数量及Foxp3 mRNA表达（P<0.05）。结论：肿瘤细胞及其培养
上清可诱导CD4+CD25+Treg细胞数量增加、功能增强,由肿瘤细胞所引起的CD4+CD25+Treg细
胞产生及功能增强可能是肿瘤逃避免疫监视机制之一。