芒柄花苷的体外抗乳腺癌作用及机制研究

目的研究芒柄花苷对乳腺癌细胞MCF-7增殖、凋亡和侵袭的影响及作用机制。方法采用不同浓度芒柄花苷处理乳腺癌细胞MCF-7,噻唑盐(MTS)染色检测细胞活力,Ed U检测细胞增殖能力,Hoechst染色法检测细胞凋亡,Transwell小室实验检测细胞侵袭和迁移能力,Western-blotting检测增殖细胞核抗原(PCNA)、凋亡相关蛋白(Bax和Bcl-2)和基质蛋白酶(MMP)-9的表达。结果芒柄花苷剂量和时间依赖性的抑制MCF-7细胞的生长。MCF-7细胞经芒柄花苷干预后,Ed U阳性细胞数减少、侵袭及迁移细胞数减少和Hoechst阳性细胞数增加。芒柄花苷作用MCF-7细胞,可上调Bax的表达和下调Bcl-2、PCNA和MMP-9的表达。结论芒柄花苷可抑制乳腺癌细胞MCF-7的增殖、诱导凋亡和减少侵袭,其机制可能分别涉及调节PCNA、Bcl-2/Bax和MMP-9的表达。     

扶正消瘤颗粒(含药血清)对乳腺癌耐药细胞体外增殖的研究

目的:探讨扶正消瘤颗粒(TCM of Enhance Resistance for Slaking Neoplasm,TerSN)含药血清对乳腺癌多耐药细胞体外生长、增殖的影响.方法:通过血清药理学方法,制备不同浓度含药血清,作用于乳腺癌多耐药细胞,应用倒置相差显微镜观察细胞生长状况,血球计数法测定细胞生长曲线,MTT...     

解毒胶囊治疗乳腺癌的机制研究

目的观察解毒胶囊有效成分对乳腺癌相关特异性指标的影响,并分析其作用机制。方法解毒胶囊10×溶液对大鼠进行灌胃7次制备含药血清,以5%、10%、20%浓度对MCF-7细胞加药,并运用MTT法测定细胞增殖与抑制,采用Western blot法检测Bax、Bcl-2、ERα和PR蛋白的表达。结果与Serum组比较,5%浓度含药血清干预下的OD值升高,差异无统计学意义; 10%、20%浓度含药血清干预下的OD值均降低,差异有统计学意义(P <0. 05)。与Serum组比较,5%含药血清浓度干预下,ERα蛋白表达下降,差异无统计学意义,PR蛋白的表达量降低,有显著性差异(P <0. 05); 10%、20%含药血清浓度干预下,ERα、PR蛋白表达均明显下降,差异有统计学意义(P <0. 05)。与Serum组比较,Bax蛋白表达量明显升高,有显著性差异(P <0. 05); Bcl-2蛋白表达量显著下降,差异有统计学意义(P <0. 05)。结论解毒胶囊可能是通过诱导病变细胞凋亡、改善性激素紊乱从而达到治疗乳腺癌的目的。     

疏肝舒乳颗粒对人乳腺癌MCF-7细胞的毒杀作用研究

目的研究疏肝舒乳颗粒(SGSR)对人乳腺癌MCF-7细胞的细胞毒性作用。方法应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法,在试管内研究SGSR对MTTOD值的影响,检测SGSR对MCF-7细胞的毒杀作用。结果SGSR各浓度组光密度值均低于对照组,说明不同浓度的SGSR对MCF-7癌细胞均有一定的杀伤作用。特别是4,1,0.25 g/m l浓度组,其对癌细胞的杀伤率分别达到99.9%,99%,95.55%,差异有显著性(P<0.01)和很好的剂量效应曲线,杀伤率明显高于β-胡萝卜素(β-CA)和SGSR加β-CA浓度组。结论研究结果现显示,S6SR在试管内对MCF-7乳腺癌细胞有明显的毒杀作用,起效机制除了对肿瘤细胞的直接杀伤作用外,其抗突变、抗有丝分裂作用也可导致DNA链断裂,达到干扰基因转录而产生抗癌作用。SGSR不仅可作为治疗乳腺增生性疾病的药物,也可作为乳腺癌放、化疗时的辅助用药。     

珊瑚菌总萜提取工艺研究

目的研究水浴提取珊瑚菌总萜的最佳工艺。方法以总萜含量为指标,利用单因素和正交实验设计考察水浴提取工艺的最佳组合。结果最佳工艺为以80%乙醇为提取剂,在液料比25∶1(ml∶g),70℃下提取60 min,总萜含量为1.45%。结论在以上最佳条件下,珊瑚菌总萜提取率高;该方法重复性好,稳定性高,加样回收率在95.1%～104.0%范围内,结果可信,操作简单,方法可行。     

评价中药寒热药性的实验方法研究

目的通过考察寒凉药与温热药对人乳腺癌细胞MCF-7体外生长增殖的影响来建立评价中药寒热药性的实验方法。方法用噻唑蓝比色法(MTT法)考察4种寒凉药和5种温热药对人乳腺癌细胞MCF-7体外生长增殖的影响,倒置显微镜观察寒凉药、温热药对细胞形态特征的影响,台盼蓝染色法分析所选寒凉药和温热药的细胞毒性作用。结果寒凉药(50～800μg/mL黄连、虎杖、竹叶、夏枯草)抑制MCF-7生长增殖,随质量浓度增大抑制作用增强。温热药干姜和白胡椒(50～800μg/mL)促进MCF-7生长增殖,干姜的促进作用随质量浓度增大而增强,白胡椒的促进作用先增大后减小。其余温热药低质量浓度(肉桂与花椒50～200μg/mL、仙茅50～400μg/mL)促进MCF-7生长增殖,促进作用随质量浓度增大而增强;高质量浓度(肉桂与花椒400～800μg/mL、仙茅600～800μg/mL)抑制MCF-7生长增殖,抑制作用随质量浓度增大而增强。形态学观察表明寒凉药(黄连、虎杖、竹叶、夏枯草)在所选质量浓度范围内使MCF-7密度减小,细胞固缩变圆;温热药(干姜、白胡椒、肉桂、仙茅、花椒)在各自起促进作用的质量浓度范围内使MCF-7密度增大,生长旺盛。台盼蓝染色表明各寒凉药与温热药对MCF-7没有细胞毒性作用。结论本方法有可能用于中药寒热药性的实验评价。     

苦瓜皂苷对人乳腺癌MCF-7细胞增殖作用的影响

目的 研究苦瓜皂苷抑制乳腺癌MCF-7细胞的作用及其诱导凋亡的机制.方法 采用MTT法观察苦瓜皂苷对MCF-7细胞的生长抑制作用;HE染色观察皂苷作用后癌细胞的形态学变化;免疫荧光染色检测Bcl-2的阳性表达率变化;流式细胞术分析细胞周期及细胞凋亡率.结果 MTT法得到苦瓜皂苷与MCF-7细胞生长抑制率之间存在浓度依赖关系,半数致死量IC50为159.02 mg/L;HE染色观察到经苦瓜皂苷作用24h后的MCF-7细胞出现典型的凋亡形态学特征;免疫荧光检测到苦瓜皂苷作用细胞24h后,Bcl-2的阳性表达率为22.35％,远小于对照组75.61％;流式细胞术表明苦瓜皂苷处理细胞后,S期细胞数明显增加,细胞周期被阻滞在S期,随着皂苷作用时间的延长细胞凋亡率增加.结论 苦瓜皂苷可抑制体外培养MCF-7细胞乳腺癌细胞的增殖,其抑制作用与细胞凋亡机制有关.     

红花等10种中药的植物雌激素活性研究

目的：评价红花、川牛膝、丹参、女贞子、枸杞、甘草、肉苁蓉、淫羊藿、补骨脂、菟丝子等10味中药的植物雌激素活性。方法：选用昆明种雌性乳鼠,随机分为A,B二组：A组又分为12组（溶剂对照组、己烯雌酚组和10个中药组）；B组也分为12组（溶剂对照组、己烯雌酚组和10个中药拮抗组）,其中中药拮抗组每天同时灌胃中药和己烯雌酚；各组给药4 d后分离血清。利用雌激素受体（ER）阳性MCF-7细胞,以MTT法检测中药含药血清对细胞增殖的影响。结果：A组中,红花、川牛膝、丹参、枸杞、肉苁蓉、淫羊藿、补骨脂和菟丝子等中药含药血清可显著促进MCF-7细胞增殖；而女贞子组可见细胞增殖受到明显抑制。B组中,红花、川牛膝、丹参、甘草、淫羊藿、补骨脂和菟丝子组可见己烯雌酚促细胞增殖的作用受到了显著抑制；而肉苁蓉可协同并显著增强己烯雌酚促细胞增殖的作用。结论：红花、川牛膝、丹参、淫羊藿、补骨脂、菟丝子等6种中药在单独用药时具有拟雌激素作用,在与雌激素同时用药时具有抗雌激素作用,其双向调节效应依赖于体内雌激素水平的高低。     

MCF-7乳腺癌细胞的国内研究进展

通过综合近五年国内对MCF-7乳腺癌细胞研究的情况,总结近期研究成果,从而为未来乳腺癌的研究和治疗的提供参考。     

粉防己碱逆转耐阿霉素的人乳腺癌MCF-7细胞的抗凋亡作用

肿瘤细胞的多药耐药性与抗细胞凋亡作用关系密切。本研究用抗肿瘤药物阿霉素 (5μmol·L-1 )处理人乳腺癌敏感和耐药的MCF 7细胞 2 4hr后 ,观察到在敏感细胞中 ,有较多的漂浮细胞 ,阿霉素主要分布在细胞核中 ;而在耐药细胞中 ,细胞形态未发生变化 ,阿霉素主要分布在细胞质中 ,其含量明显减少。阿霉素诱导MCF 7细胞的凋亡作用进一步用AnnexinV FITC染色法证实。此外 ,用高效逆转耐药性的药物粉防己碱 (2 0 μmol·L-1 )与阿霉素合用外理敏感和耐药的细胞 ,用线粒体荧光染料MitosensorTM 染色 ,证明合用组凋亡细胞明显增多。通过流式细胞术分析显示 :细胞凋亡的发生与细胞周期无关。本研究表明 :粉防己碱能逆转耐阿霉素的人乳腺癌MCF 7细胞的抗凋亡作用。     

粉防己碱逆转人乳腺癌MCF-7多药耐药细胞的抗凋亡作用

目的 :研究粉防己碱与长春新碱合用能否逆转人乳腺癌MCF-7多药耐药细胞的抗凋亡作用。方法 :用荧光染料Hoechst 33342和碘化丙锭联染观察染色质凝集 ,流式细胞术检测G₁亚峰 ,TUNEL法检测凋亡细胞 ,Fluo-3染色法测定细胞内游离钙。结果 :抗肿瘤药物长春新碱处理MCF 7敏感和耐药细胞后 24h ,可观察到2种类型的染色质凝集 ;但在耐药细胞中 ,相同浓度处理下染色质凝集的细胞明显减少。无明显细胞毒性的粉防己碱(20μmol·L^-1)与长春新碱合用 ,荧光显示法和TUNEL法均证实敏感和耐药的凋亡细胞明显增多。粉防己碱与长春新碱合用明显升高细胞内的游离钙含量。结论 :粉防己碱能有效地逆转人乳腺癌MCF-7细胞的抗凋亡作用。     

中药虎杖中抗癌活性物质研究

目的:为虎杖药用价值的开发利用提供科学据依。方法:在生物活性测定指导下,从虎杖中分离得到一种较高抗癌活性的物质,并且用液质联用、红外光谱、紫外全扫描等方法鉴定其结构。MTT法测定它对L-02、HepG2、SHZ-888、MCF-7、MCF-7/ADM等细胞的抑制作用并用HE染色法观察其作用MCF-7/ADM细胞48 h、72 h后的肿瘤细胞形态学变化。结果:分离得到的物质为顺、反式-白藜芦醇,它能特异性抑制多种肿瘤细胞的生长,而对正常肝细胞毒性很小。同时,首次发现其对耐阿霉素的MCF-7乳腺癌细胞有直接的细胞毒性。结论:白藜芦醇是虎杖中一种活性强、低毒的抗癌物质。     

淫羊藿苷对人乳腺癌MCF-7细胞增殖、凋亡作用的实验研究

目的:研究淫羊藿苷(icariin,ICA)对MCF-7细胞增殖/凋亡作用的影响及其作用机制。方法:采用MTT比色分析法及Annexin V/PI标记流式细胞仪检测ICA对MCF-7细胞的增殖与凋亡作用的影响,采用Western blot检测蛋白表达,研究ICA是否通过ERK/MAPK信号转导通路起作用。结果:与对照组比较,MCF-7细胞培养24 h后,ICA各组OD值均降低,差异有统计学意义(P<0.05);培养48 h后,各组差异均有统计学意义(P<0.05);培养72 h后,各组差异均有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,培养24 h后,10 m M ES单独作用后对MCF-7细胞无明显的增殖作用,ES加ICA组有明显的抑制作用。20 m M ES诱导结果与10 m M的结果一致。不同浓度的ICA作用48 h后,总ERK1/2和MEK蛋白表达均无明显变化,MEK磷酸化水平同样无明显变化,ERK1/2磷酸化水平增高。结论:淫羊藿苷对雌激素阳性人乳腺癌细胞有明显的抑制增殖与诱导凋亡的作用,同时可拮抗雌激素对乳腺癌细胞的增殖作用,但是其作用机制尚不清楚。     

莪术油对乳腺癌MCF-7细胞端粒酶活性及DNA损伤反应的调控作用

目的研究莪术油通过hTert作为下游靶基因对乳腺癌MCF-7细胞端粒酶活性及DNA损伤反应的调控作用。方法以300μg/mL莪术油处理MCF-7细胞,采用MTT法测定细胞增殖活性,绘制生长曲线,筛选最佳药物处理时间。于加药后48 h,实时定量RT-PCR检测端粒酶催化亚单位hTert表达水平、TRAP Assay检测端粒酶活性变化;收集加药前以及加药后24,48,72 h细胞,采用免疫荧光及Western Blot检测DNA损伤反应相关53BP1蛋白水平。结果莪术油处理的MCF-7细胞24 h后增殖活力开始降低,至48 h生长明显减缓,实时定量RT-PCR结果表明,加药后48 h,hTert表达水平降低为对照细胞的2.43倍(2-△△Ct),TRAP Assay结果显示端粒酶活性降低为对照细胞的2.27倍,免疫荧光及Western Blot结果显示莪术油处理的细胞53BP1蛋白磷酸化水平自转染24 h后开始升高,至48 h左右达到高峰,至72 h时仍保持在较高水平。结论莪术油可以hTert作为下游靶分子,通过调控端粒酶活性及DNA损伤反应,抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖。     

平盖灵芝提取物对乳腺癌MCF-7细胞增殖抑制实验研究

目的：探讨平盖灵芝不同极性部位提取物对乳腺癌MCF-7细胞增殖的抑制作用。方法：采用噻唑蓝（MTT）法测定各部位提取物对肿瘤细胞增殖的抑制率。结果：平盖灵芝石油醚部位提取物（100μg／mL）和氯仿部位提取物（100μg／mL）对乳腺癌MCF-7细胞的增殖抑制率分别为27．56％和23．41％,与空白组比较均具有统计学意义（P〈0．05）。结论：平盖灵芝石油醚部位提取物和氯仿部位提取物对乳腺癌MCF-7细胞增殖有一定抑制作用。     

姜黄素抑制乳腺癌细胞株Survivin表达及其增殖的影响

目的:探讨姜黄素对乳腺癌细胞株MCF-7中Survivin表达及其增殖的影响。方法:采用CCK-8法检测姜黄素对MCF-7细胞增殖的影响;real-time PCR、Western blot检测姜黄素作用于MCF-7细胞前后,Survivin在m RNA和蛋白水平的表达。结果:姜黄素可显著抑制乳腺癌细胞株MCF-7的增殖,并呈浓度依赖性,姜黄素处理48小时的IC50值为6.4μM。同时Survivine在基因及蛋白的水平表达均显著降低(P0.05),20μM组较10μM组下降明显(P0.05)。结论:姜黄素可以抑制乳腺癌细胞株MCF-7的增殖,其机制可能与下调Survivin表达相关。     

三叶青有效部位抑制肿瘤增殖和迁移的作用研究

目的:观察三叶青有效部位对人乳腺癌细胞MCF-7增殖和迁移的抑制作用及相关机制研究。方法:制备三叶青有效部位,将接种于培养板的MCF-7细胞分为阴性对照组,三叶青有效部位给药组和阳性对照组,观察细胞增殖抑制率、IC50值、乳酸脱氢酶(LDH)活力、迁移距离、细胞周期分布和凋亡率。结果:与阴性对照组相比,三叶青有效部位5~160 g/L各剂量组和阳性对照组对MCF-7细胞增殖有显著抑制作用(P<0.01),且随着浓度的增大,三叶青有效部位对MCF-7细胞的抑制率呈剂量依赖性关系。三叶青对MCF-7细胞增殖的IC50值为(22.35±1.02)g/L。与阴性对照组相比,当给药浓度为160 g/L时,LDH活力明显增加(P<0.05)。与阴性对照组相比,经药物处理48 h后,随着剂量的增大,MCF-7细胞的迁移能力被明显抑制(P<0.05,P<0.01),呈明显的剂量依赖性。与阴性对照组相比,三叶青有效部位作用后,随着给药浓度的增大,G0/G1期细胞比例降低,S期和G2/M期细胞比例增大,凋亡率升高(P<0.01)。结论:三叶青有效部位可有效地抑制MCF-7细胞的增殖和迁移,其作用机制可能与阻滞细胞周期和诱导细胞凋亡有关。     

柴胡皂苷D对紫杉醇耐药乳腺癌细胞耐药性的逆转作用研究

目的：研究柴胡皂苷D对紫杉醇(paclitaxel, PTX)耐药的乳腺癌细胞(MCF-7/PTX)耐药性的逆转作用及其机制。方法：采用噻唑蓝溴化四唑法(MTT法)测定不同质量分数(0、12.5、25、50、100、200 mg/L)PTX处理MCF-7/PTX细胞和MCF-7细胞48 h的细胞存活率,确定MCF-7/PTX细胞对PTX的耐药程度。采用MTT法测定不同质量分数(0.125、0.25、0.50、1.00 mg/L)柴胡皂苷D处理MCF-7/PTX细胞48 h的细胞增殖抑制率,确定柴胡皂苷D对MCF-7/PTX细胞的安全性。采用MTT法测定确定0.125、0.25和0.5 mg/L柴胡皂苷D能否调节MCF-7/PTX细胞对PTX的敏感性。采用蛋白免疫印迹法(Western Blot)和流式细胞术分别检测不同质量分数的柴胡皂苷D对Yes相关蛋白(YAP)和P糖蛋白(P-gp)表达的影响。进行罗丹明123(Rh123)积累和外流测定。结果：与0 mg/L PTX对比,MCF-7和MCF-7/PTX细胞存活率随PTX质量分数增加而降低,且呈现依赖性(P<0.05);确立10...     

美洲大蠊粉酶解工艺最佳用酶初步筛选

目的:分别用4种蛋白酶对美洲大蠊粉超声提取液基于半仿生环境进行酶解,制备不同类型多肽,并采用MTT法筛选出抑制乳腺癌MCF-7细胞的最佳用酶。方法:分别用胃蛋白酶、弹性蛋白酶、胰蛋白酶及胰凝乳蛋白酶对美洲大蠊粉进行酶解,采用苯并戊三酮显色法和半微量凯氏定氮法测定不同酶解液的水解度;使用MTT法进行体外抗肿瘤实验。以乳腺癌MCF-7细胞的抑制率为指标,水解度为参考,评价4种蛋白酶对美洲大蠊粉的酶解效果并筛选出最佳用酶。结果:胃蛋白酶、弹性蛋白酶、胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶对美洲大蠊粉的水解度分别为3.35%、13.30%、12.89%、7.74%。无酶对照组、胰蛋白酶组、胰凝乳蛋白酶组IC_(50)依次为1.396、0.724、0.402 mg/mL;胃蛋白酶和弹性蛋白酶组因抑制效果不稳定而舍去。结论:在综合酶解能力和抑瘤能力方面,胰蛋白酶为美洲大蠊粉酶解工艺的最佳用酶,胰凝乳蛋白酶次之。