逆转录－套式－聚合酶链反应检测HCV RNA正链和负链及与肝细胞癌的关系

为了解ＨＣＶ与肝癌的关系，采用ＨＣＶ５－ＮＣＲ正相引物和反相引物逆转录－套式－聚合酶链反应（ＲＴ－Ｎｅｓｔｅｄ－ＰＣＲ）检测了２２例肝癌手术患者血清、癌组织和癌旁组织ＨＣＶＲＮＡ正链和负链；用ＨＢＶＣ保守区引物ＰＣＲ法检测了ＨＢＶＤＮＡ。结果发现：５例抗－ＨＣＶ阳性的肝癌患者中，３例血清、癌组织和癌旁组织ＨＣＶＲＮＡ正链扩增试验均阳性；１例三者均阴性；１例血清和癌旁组织阳性。３例正链扩增试验阳性的癌组织和癌旁组织均检出了ＨＣＶＲＮＡ负链，但血清中未检出负链。在２２例ＨＣＣ中１３例血清、８例癌组织和１５例癌旁组织中检出ＨＢＶＤＮＡ。５例有ＨＣＶＲＮＡ和／或抗－ＨＣＶ阳性的肝癌患者血清、和／或癌组织、和／或癌旁组织中均伴随ＨＢＶＤＮＡ和／或ＨＢ－ＶＭ阳性。提示ＨＣＶ可在癌旁肝细胞或肝癌细胞中感染并复制；ＨＢＶ感染与肝癌发生的关系比ＨＣＶ感染更密切。     

用于HCV RNA逆转录聚合酶链反应测定的血清(浆)样本的质量控制

目的 确定用于丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）ＲＮＡ测定血清（浆）样本的最佳收集贮存条件。方法 采集ＨＣＶ ＲＮＡ阳性的血样按设定的不同条件处理,用荣光定量ＰＣＲ试剂测定ＨＣＶ ＲＮＡ。结果 血凝集后２小时内离心分离血清ＨＣＶ ＲＮＡ含量无明显改变（降低１０．４２％）;４小时变化明显（降低４０．４９％）。采用抗凝剂的血浆管ＨＣＶ ＲＮＡ含量显著高于血清管（枸橼酸钠抗凝管高出４０．９％,ＥＤＴＡ抗凝管高出５３     

逆转录多聚酶链反应检测丙型肝炎病毒RNA的应用

多聚酶链反应（PCI＜）是近年发展起来的检测细菌及病毒等病原体DNA或RN』A的一种方法，敏感性极强。但这一方法也存在假阳性或假阴性。为此，我们分析了用逆转录多聚酶链反应（R”f—PCK）法检测240例丙肝病毒RNA的结果。现报道如下。对象与方法病例选择：240例病人均为本院住院患者，其中男性144例，女性96例，年龄18～63岁，平均年龄41．7土18．6岁。方法：（）主要试剂与仪器：乌骨髓细胞白血病病毒（AMV）逆转录酶、RNA酶抑制剂（RNasin）、脱氧核糖核苦（dNTP）、TaqDNA聚合酶等购自上海夏华公司。引物系列及来源：共三…     

多重和套式聚合酶链反应检测血液、腹膜透析患者血清中HBV DNA和HCV RNA

利用免疫学和聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法，对３５例血液透析（血透）、１４例腹膜透析（腹透）患者的８４份血清进行了检测。血透组抗－ＨＣＶ阳性率８２．９％，ＨＣＶＲＮＡＰＣＲ阳性率５１．４％；腹透组抗－ＨＣＶ阳性率仅７．１％，ＨＣＶＲＮＡＰＣＲ均阴性。ＨＢｓＡｇ和（或）ＨＢｅＡｇ在二组的阳性率分别为２５．７％和２１．４％；ＨＢＶＤＮＡＰＣＲ阳性率分别为４５．７％和６４．２％。透析患者ＨＣＶ和ＨＢＶ感染率显著高于一般人群。血、腹透两组ＨＣＶ感染率相差非常显著，血透患者抗－ＨＣＶ和ＨＣＶＲＮＡＰＣＲ阳性高于腹透患者，表明血透过程在丙型肝炎传播方面起重要作用。作者还采用多重和套式ＰＣＲ方法，将ＨＢＶＤＮＡ和ＨＣＶＲＮＡ在合并的逆转录和ＰＣＲ扩增系统中，连续进行逆转录和第一轮多重ＰＣＲ扩增，再进行第二轮多重ＰＣＲ，具有特异、敏感、简便、快速和经济等特点，适于临床应用。     

聚合酶链反应检测HGV RNA

庚型肝炎病毒(HGV)呈全球性分布。在志愿供血员中 HGV 感染率约为1.7%,职业供血员中为12.9%,在一些不明原因肝病患者中约为9%。HGV 感染可表现为急性、慢性或暴发性肝炎。目前采用聚合酶链反应检测 HGV RNA 是诊断 HGV 感染的主要手段。我们在 HGV5′端非翻译区(5′UTR)设计引物。建立了检测 HGV RNA 的逆转录-套式-聚合酶链反应(RT-Nested-PCR),并用于 HGV感染的诊断。材料与方法一、标本来源     

血清抗—HCV与HCV RNA检测结果比较

采用逆转录一大一聚合酶链反应（ＲＴ－ｎｅｓｔｅ－ＰＣＲ）及ＥＬＩＳＡ（Ａｂｂｏｔｔ）对一组经第二代抗－ＨＣＶ ＥＬＩＳＡ（上海科华生物技术有限公司，科华）试剂筛选的抗－ＨＣＶ阳性血清及抗－ＨＣＶ阴性的非甲非乙型肝炎患者清，进行了ＨＣＶＲＮＡ与抗－ＨＣＶ检测。对两者检测结果表明相互关系进行了分析与比较。结果显示：Ａｂｂｏｔｔ与科华ＥＬＩＳＡ试剂两者抗－ＨＣＶ检测的阳性符合率及总符合率为７７．７％及７     

原位聚合酶链技术检测肝细胞癌组织内丙型肝炎病毒核酸及其意义

应用一步反转录。聚合酶链原位扩增法（ＯＲＴ－ＰＣＲＩＳ）检测肝细胞癌（ＨＣＣ）及癌周组织内丙型肝炎病毒核糖核酸（ＨＣＶＲＮＡ），同时以一步反转录－ＰＣＲ（ＯＲＴ－ＰＣＲ）法检测血清及肝组织匀浆内ＨＣＶＲＮＡ。发现癌和癌周组织经原位扩增后ＨＣＶＲＮＡ检出率为７７．８％（２／２７）及８１．５％（２２／２７），而血清及组织匀浆内仅为２９．６％及３７．Ｏ％，两者与癌及癌周组织相比差异均有显著性（Ｐ＜０．０１）。ＯＲＴ－ＰＣＲＩＳ示在癌组织中ＨＣＶＲＮＡ以核型为主（１２／２１），阳性细胞点样分布，细胞内信号强度多为＋（５７．１％）；而癌周组织以核浆型为主（１４／２２），阳性细胞弥漫分布，信号强度多为＋＋＋（５０．０％）。无论在癌还是在癌周组织均未发现ＨＣＶｃＤＮＡ存在。结果提示ＯＲＴ－ＰＣＲＩＳ优于ＲＴ－ＰＣＲ，ＨＣＶ对本地区ＨＣＣ发生、发展起着极为重要的作用。癌周ＨＣＶ复制较癌组织内活跃，癌和癌周细胞核阳性表明ＨＣＶＲＮＡ在核内整合或复制，这种整合或复制对肝细胞基因组ＤＮＡ产生的影响可能与乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）相类似。     

聚合酶链反应研究丙型肝炎病毒与肝癌的关系

聚合酶链反应研究丙型肝炎病毒与肝癌的关系谢小明，苏先狮，张铮，郑宣鹤，陈一德丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）是输血后肝炎和散发非甲非乙肝炎的主要致病因子。近年来国内外已报道，在肝细胞癌（ＨＣＣ）患者特别是乙型肝炎病毒标志阴性者中，抗－ＨＣＶ有高检出率。作者为进...     

套式及免疫套式聚合酶链反应检测乙型肝炎表面抗原阴性肝病患…

为了更准确，简便而又快速地了解乙型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）阴性肝病患者的病因，建立了套式和免疫套式聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测血清中乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）ＤＮＡ的技术，结合丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）感染指标的检测，对ＨＢｓＡｇ阴性肝病患者的病因进行了研究，发现套式ＰＣＲ能将单次ＰＣＲ的敏感性稳定地提高１０００倍；免疫套式ＰＣＲ可检测到０．１～０．０１ｐｇ／Ｌ水平，检测ＨＢｓＡｇ阴性肝硬化２２例（Ａ组）     

竞争性逆转录聚合酶链反应定量检测对HCV RNA

为了解感染丙型肝炎病素（ＨＣＶ）后的（ＨＣＶＲＮＡ）含量与丙型肝炎病情轻重，预后，治疗反应的关系，采用竞争性逆转录聚合酶链反应（ＣＲＴ－ＰＣＲ）的方法，对９例感染了ＨＣＶ患者的血清进行了ＨＣＶＲＮＡ的定量检测。结果：６．６×１０３拷贝１毫升占８８．９％，６．６×１０４拷贝／毫升占１１．１％。结果提示：急慢性丙型肝炎及无症状ＨＣＶ感染者体内均含有较高的病毒滴度，且滴度低预后好，抗病毒疗效好。     

28例HCV RNA阳性血清聚合酶链反应产物的酶切分析

为了探讨广州地区ＨＣＶ感染的基因型，作者对广州地区不同人群中１０５例抗－ＨＣＶ阳性血清用逆转录聚合酶链反应（ＴＲ－ＰＣＲ）进行了ＨＣＶ ＲＮＡ的检测，对其中８２例ＨＣＶ ＲＮＡ阳性患者血清做了ＰＣＲ产物的限制性内切片段长度多态性（ＲＦＬＰ）分析，结果显示：ＨＣＶⅡ型感染７８例（９２．１％），ＨＣＶⅢ型１例，ＨＣＶⅡ／Ⅲ型混合感染３例，４例ＨＣＶⅢ型感染均是肝病患者，初步表明广州地区ＨＣＶ感染大多数     

肝细胞癌组织中HCV复制中间体的研究

本文报道在逆转录反应时仅加入与负链（复制中间体）ＨＣＶＲＮＡ互补的有义外引物，待将逆转录酶变性灭活后，再加入反义外引物，然后进行两轮聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增。用这种逆转录反应和套式ＰＣＲ方法，检测了ＨＣＣ组织和对照血清中负链ＨＣＶＲＮＡ的存在状况。结果负链ＨＣＶＲＮＡ在１０例（其中３例为已测血清总ＨＣＶＲＮＡ阳性，余７例为随机选择）ＨＣＣ组织中检出５例，而在５例（其中３例与组织配对）总ＨＣＶＲＮＡ的ＨＣＣ阳性病人血清则均阴性。表明ＨＣＣ组织中确有ＨＣＶ复制，从而进一步提示ＨＣＶ感染与我国ＨＣＣ的发生密切相关。     

两种实时荧光定量聚合酶链反应检测血清HCV RNA的比较

目的 比较全自动病毒载量检测系统(COBAS TaqMan)和国产荧光定量PCR试剂盒对血清HCV RNA载量的检测结果,探讨两种检测方法在临床诊断和治疗中的应用价值.方法 收集26例慢性丙型肝炎患者抗病毒治疗前和治疗过程中2、4、8、12、24、36和48周的系列血标本,共168份,采用COBAS TaqMan 48全自动分析系统和广州某国产TaqMan实时PCR试剂盒分别检测系列血清中的HCV RNA载量.统计学处理采用x2检验和t检验.结果 当血清HCV RNA≥1×104IU/mL时(0周),COBAS检测和国产试剂盒均能很好测定HCV载量,而且国产试剂盒检测值为1.35×107IU/mL高于COBAS检测值2.21×106IU/mL,差异有统计学意义(t=2.05,P<0.05);血清HCV RNA<1×104IU/mL时(2～48周),COBAS检测出的HCV阳性率为21.4%(30/140),远高于国产试剂盒的1.4%(2/140),差异有统计学意义(t=3.66,P<0.01);治疗4周时,COBAS检测26例患者中14例血清HCV为阳性,12例病毒载量低于检测下限,获得快速病毒学应答(RVR);国产试剂盒检测结果为3例血清HCV为阳性,23例获得RVR.COBAS与国产试剂盒梧比,转阴率差异有统计学意义(x2=10.575,P<0.01).治疗12周时,COBAS检测完全早期病毒学应答(cEVR)率为95.7%(22/23),国产试剂盒检测的cEVR为100%(17/17),差异无统计学意义(x2=0.726,P>0.05).结论 国产荧光定量PCR试剂盒可用于HCV疑似患者的筛查和高HCVRNA载量者的确诊,对于低HCV RNA载量的疑似患者和抗病毒治疗过程中HCV载量的检测,COBAS则更为敏感.

Abstract：

Objective To compare the plasma hepatitis C virus(HCV)RNA levels detected by the fully automated viral load detection system(COBAS TaqMan)and the national real-time quantitative polymerase chain reaction(PCR)kit,and to investigate the clinical application value of these two methods in clinical practice.Methods A total of 168 serial plasma samples collected from 26 patients with chronic hepatitis C(CHC)before and at week 2,4,12,24,36 and 48 of antiviral treatment were detected by both COBAS Taqman 48 analyzing system and the national real-time quantitative PCR kit.The results of two methods were compared by chi square test and t test.Resnlts Both COBAS and national kit showed great positive detecting results when HCV RNA≥1×104IU/mL(at week O),and the virus load value detected by national kit was significantly higher than that detected by COBAS(t=2.05,P<0.05).However,when HCV RNA<1×104(at week 2-48),the positive rate of HCV detected by COBAS was significantly higher than that detected by national kit (t=3.66,P<0.01).At week 4 of treatment,the rapid virological response(RVR)rate was 46.2 % (12/26)detected by COBAS,while that was 88.5%(23/26)detected by national kit,and the difference was significant(x2=10.575,P<0.01).At week 12 of treatment,the complete early virological response(cEVR)was 95.7%(22/23)detected by COBAS,while that was 100%(17/17)detected by national kit,and the difference was not significant(x2=0.726,P>0.05).Conclusions The national TaqMan real-time quantitative PCR kits could be used to screen the suspected cases of HCV infecrion and to diagnose CHC cases with high HCV virus load.COBAS detection is more sensitive in cases with low HCV virus load and in on-treatment monitor during anti-HCV therapy.     

HGV RNA逆转录套式聚合酶链反应法的建立及应用

建立ＨＧＶ ＲＮＡ逆转录套式聚合酶甸反应法并应用于我国不同人群ＨＧＶ感染的检测。方法 根据中国株ＨＧＶ ５端非编码区序列设计引物，建立ＨＧＶ ＲＮＡ ＲＴ－ｎＰＣＲ方法。结果 检测３份ＨＧＶ ＲＮＡ阳性血清，其最终阳性稀释度分别为１０＾－４，１０＾－９和１０＾－９，检测５０份ＨＧＶ ＲＮＡ阴性血清均为阴性。     

聚合酶链反应检测血液病患者合并丙型肝炎病毒感染

聚合酶链反应检测血液病患者合并丙型肝炎病毒感染杨桂玲，陈文 ，杨碧云，曹瑞生，文艺丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）感染是输血后非甲非乙型肝炎的主要原因。在免疫抑制群体如恶性血液病，尤其是化疗或骨髓移植治疗后，以及再生障碍性贫血，常需输血治疗，大大增加了感染的机...     

逆转录—套式—聚合酶链反应快速诊断黄病毒感染

为了早期快速诊断黄病毒感染，应用闻和转录－套式－聚合酶链反应检测子流行性乙型脑炎患者血清标本２２份和登革热患者血清标本７８份。     

丙型肝炎患者血清和外周血单个核细胞中HCV RNA检测及意义

目的 了解丙肝患者血清和外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）中ＨＣＶＲＮＡ存在情况及有其临床意义，方法 应用套式ＰＣＲ检测４６例急性丙型肝炎（丙型肝炎以下简称丙肝）和４２例慢性丙型肝炎患者血清和ＰＢＭＣ中ＨＣＶＲＮＡ。结果 慢性丙型肝炎患者ＰＢＭＣ中ＨＣＶＲＮＡ检出率显著高于急性丙型患者（Ｐ〈０．００１），急，慢性丙型肝患者血清和慢性丙肝患者ＰＢＭＣ中ＨＣＶ ＲＮＡ检出率显著高于ＡＬＴ正常的抗－ＨＣＶ阳性     

聚合酶链反应一步法检测汉坦病毒RNA

肾综合征出血热病毒（ＨＦＲＳＶ）属布尼亚病毒科汉坦病毒属（ＨＶ）,长期以来人们希望从组织和其它标本中直接检测出病原体,尽管用动物和细胞培养分离病毒是最为可靠的,但费时、费力、费钱。而常用的ＩＦＡ和ＥＬＩＳＡ法对少量抗原的直接检测不够灵敏。聚合酶链反应...