胡麻油烟冷凝物致人胚肺二倍体细胞恶性转化的实验研究

目的研究胡麻油烟冷凝物致人胚胎二倍体细胞恶性转化作用.方法以人胚肺二倍体细胞株为靶细胞,建立体外转化系统,以胡麻油烟冷凝物作为受试物染毒人胚肺二倍体细胞,观察细胞转化情况,并对转化细胞进行生物学性状检测和鉴定.结果实验剂量范围内的胡麻油烟冷凝物（25～400μg/mL）能够诱导人胚肺二倍体细胞发生失去接触抑制性、饱和密度增大、血清需求降低,ConA凝集能力增强、锚着依赖性丧失等多种与肿瘤形成相关的表型改变,并且剂量-反应关系明显（r=0.972,P＜0.01）.结论胡麻油烟冷凝物具有诱导人胚肺二倍体细胞转化的作用.     

壮龄剂对人胚肺二倍体细胞的抗老化实验研究

本研究用体外培养人胚肺二倍体成纤维细胞作为壮龄剂抗老化研究的细胞模型,从35代开始,于培养液中加入壮龄剂者为实验组,不加药为对照组。现察了壮龄剂对二倍体细胞的形态结构、生长速度和增殖的影响。结果是实验组细胞的传代寿命为68代,对照组为51代,实验组比对照组多传17代,能延长细胞寿命33.3％代。实验组细胞的生长状态,速度和酸性磷酸酶活性变化均比同代对照组细胞好。这些结果证明了壮龄剂有促进细胞生长增殖和抗老化作用。     

低剂量苯并芘作用下传代培养人胚肺二倍体细胞的超微结构特征

探讨了体外连续培养的人胚肺二倍体细胞在低剂量苯并芘长时期作用下超微结构的早期癌特征。结果发现:低剂量(10~(-7)及10~(-8)mol)苯并芘(Bap)长时期(23～38代)作用下,光镜检查未见细胞有明显癌变征,而电镜下发现细胞核外形不规则,核膜深陷,有者呈复杂折叠及套叠,出现细桥伴分叶核形成,以及核内胞浆包涵体(或称核内假包涵体),核内的常染色质一般丰富;核仁巨大或多核仁等癌细胞特征。说明用电镜可观察到在致癌物作用下细胞早期癌变的征象。实验结果对进一步研究致癌物在低剂量、长时期作用下的致癌机理和预防措施将有重要意义。     

含何首乌血清对人胚肺二倍体成纤维细胞端粒酶活性的影响

目的观察含何首乌血清对人胚肺二倍体成纤维细胞(2BS)超氧化物歧化酶(SOD)活性、c-myc mRNA表达及端粒活性的影响。方法采用含何首乌血清对2BS细胞株进行处理,用黄嘌呤氧化酶法检测SOD活性,RT-PCR检测c-myc mRNA表达,TRAP-ELISA检测端粒酶活性。结果与正常对照组相比,用药组2BS细胞SOD活性明显增加(P<0.05),c-myc mRNA表达无变化,端粒酶活性显著增加(P均<0.05)。结论含何首乌血清对2BS细胞具有抗衰老作用,其机理可能与促进自由基的清除和激活端粒酶活性有关。     

刺五加对人胚肺二倍体纤维母细胞生长的影响

目的 :探讨刺五加 (APS)对人胚肺二倍体纤维母细胞 (2 BS)增殖、凋亡的影响。方法 :采用生物活性法观察不同浓度APS在不同时间对 2 BS细胞增殖的抑制作用 ,利用流式细胞仪检测其诱导 2 BS细胞凋亡小体形成百分率及对细胞周期的影响 ,并与甲基强的松龙 (M- pred)比较。结果 :1APS和 M- pred对 2 BS细胞均有增殖抑制作用 ,与无药空白对照组比较差异有统计学意义 (P <0 .0 1) ,但两药作用相比差异无统计学意义 (P >0 .0 5 ) ;2 APS和 M- pred均有诱导 2 BS细胞凋亡作用 ,主要作用于 S期 ,2 BS细胞凋亡小体形成百分率与无药空白对照组比较差异均有统计学意义 (P <0 .0 1) ,但两药作用相比差异无统计学意义 (P >0 .0 5 )。结论 :APS有显著抑制 2 BS细胞增殖并诱导其凋亡的作用、活性与 M- pred相近 ,但由于 APS尚有多种药理作用而无不良副反应 ,所以是治疗肺纤维化较好的药物。     

低剂量苯并芘作用下传代培养人胚肺二倍体细胞的超微结核…

探讨了体外连续培养的人胚肺二倍体细胞在低剂量苯并芘长时期作用下超微结构的早期癌特征。结果发现：低剂量（１０＾－７及１０＾－８ｍｏｌ）苯并芘（Ｂａｐ）长时期（２８－３８）作用下，光镜检查未见细胞有明显癌变征，而电镜下发现细胞核外形不规则，核膜深陷，有者呈复杂折叠及套叠，出现细桥伴分叶核形成，以及核内胞浆包涵体（或称核内假包涵体），核内的常染色质一般丰富；核仁巨大或多核仁等癌细胞特征。说明用电镜可观察     

烹调油烟冷凝物诱导人胚肺 K M B- 17 细胞转化

为了探讨烹调油烟对人体的潜在致癌性,应用人胚肺二倍体细胞株 Ｋ Ｍ Ｂ－ １７ 细胞建立体外细胞转化系统,观察烹调油烟冷凝物诱导细胞转化作用。结果表明：试验剂量范围内的烹调油烟冷凝物（５０ ～４００ μｇ／ｍｌ） 能不同程度地诱导细胞转化,具有明显的剂量反应关系（ｒ ＝ ０ ．９９３６） ,提示烹调油烟对人体具有潜在致癌性。     

甲醛与苯系物对人胚肺细胞联合毒性的作用

目的 探讨甲醛及苯系物对人胚肺细胞的联合毒性及联合毒作用类型.方法 以不同浓度毒物及其混合物对人胚肺二倍体细胞染毒,采用MTT法测各浓度组人胚肺细胞存活率,根据线性回归法求出各毒物及其混合物半数致死浓度(OLC50),以Finney法求业各毒物及其混合物预计半数致死浓度(PLC50),根据预计半数致死浓度与实际半数致死浓度的比值Q判断各毒物联合毒作用类型.结果 4种化合物对人胚肺细胞的LC50分别为甲醛0.267×10-3 mmol/ML、苯0.086 mmol/mL、甲苯0.08l mmol/mL、二甲苯0.090 mmol/mL.甲醛与苯系物混合染毒Q值在0.5到2.6之间,苯与甲苯、二甲苯混合染毒Q值＜0.5,甲苯、二甲苯混合染毒Q值＞2.6.结论 4种化合物毒性大小顺序是甲醛＞苯＞甲苯＞二甲苯,与其体外毒性大小顺序基本一致;甲醛与苯系物之间联合毒性呈相加作用,苯可以拮抗甲苯、二甲苯的毒性作用,甲苯、二甲苯之间为协同作用.     

氟对人胎肝细胞细胞周期、凋亡及p53表达的影响

目的　研究氟对人胎肝细胞 (L 0 2细胞 )细胞周期、凋亡及p5 3表达的影响。方法　体外培养的人胎肝细胞接触 4 0、 80、 16 0 μg/ml氟化钠 2 4h后 ,MTT法检测L 0 2细胞存活率 ,流式细胞术检测细胞凋亡率和周期构成比 ,Westernblot检测P5 3蛋白的表达水平。结果　高剂量氟染毒组细胞存活率显著低于对照组 (P <0 0 1) ;各染氟组S期细胞数与对照组相比均明显增多 (P <0 0 1) ,中、高剂量氟染毒组细胞凋亡率和p5 3蛋白表达量均显著高于对照组 (P <0 0 1)。结论　氟可使L 0 2细胞S期细胞数增多 ,诱导人胎肝细胞凋亡和 p5 3表达 ,并呈剂量 效应关系。     

体外人巨细胞病毒感染细胞细胞周期素表达改变与细胞病变的关系

目的探讨人巨细胞病毒( human cytomegalovirus, HCMV)感染的人胚肺成纤维上皮细胞( human embryo lung fibroblast, HEL)细胞周期素 E (cyclin E)、 D (cyclin D)、 A (cyclin A)、 B (cyclin B)表达的改变与细胞病变的关系.方法建立体外 HCMV感染细胞膜型,观察感染细胞感染 12、 48h后细胞病变( cytopathologic effects, CPE);并在相同时间点收获细胞,用乙醇固定 HCMV感染的宿主细胞后用 PI染色,经流式细胞术( FACSVantage)根据细胞 DNA倍性分选出 G1、 S、 G2/M期细胞,然后分别取等量细胞裂解, 用 Western blot分析上面各不同时相细胞中 cyclins的表达.结果 ①培养 12h,仅病毒感染组在电镜可观察到细胞肿胀,其余各组未见明显病变;②培养 48h,与 HCMV169感染组相比,药物干预 HCMV169感染 HEL两组细胞中,光镜及电镜 CPE程度较轻,正常组细胞无 CPE;③乙醇固定细胞经流式细胞术分选,感染 12、 48h细胞均以 G1为主,少见 S期细胞、未见 G2期和 M期的细胞,与正常对照组比较有显著差异( P< 0.05);根据细胞 DNA倍性分选出的各期细胞裂解行 Western blot检测,正常细胞未检测到 cyclins,感染细胞中 cyclin E、 cyclin D有明显表达,未见 cyclin A、 cyclin B的表达.④ Western blot对分选后的感染细胞中 cyclin E、 cyclin D表达的检测与流式细胞术分析的结果一致.结论体外 HCMV感染细胞细胞周期进程受阻与细胞病变关系密切,细胞周期进程异常可能是导致细胞病变的病理学基础.     

三羟异黄酮对人乳腺癌细胞株MDA-MB-435S细胞周期的影响

目的：观察三羟异黄酮(genistein，Gen)对体外培养的人乳腺癌细胞株MDA—MB—435S细胞存活率、细胞周期和凋亡的影响。方法：用噻唑蓝(MIT)法观察Gen对MDA—MB-435S细胞生长的影响；流式细胞仪观察Gen处理人乳腺癌细胞后细胞周期改变的剂量效应和时间效应关系；吖啶橙／溴乙锭染色法(acridine orange/ethidium bromide staining)在荧光显微镜下观察Gen对MDA—MB—435S细胞的凋亡作用。结果：随剂量增大和作用时间延长，Gen对MDA—MB—435S细胞增殖的抑制作用逐渐增强。同时可以阻滞细胞周期于G2—M期，而且随剂量的增大，作用时间的延长，阻滞作用也增强。吖啶橙染色法于荧光显微镜下可见，随Gen剂量增大，细胞凋亡也逐渐明显。结论：Gen可抑制人乳腺癌细胞的增殖，其作用机制可能包括诱导细胞凋亡和G2—M期阻滞。     

丁酸对人肺癌细胞的生长,细胞周期和形态的影响

运用鉴别细胞群体生物学特性的常规方法和流式细胞光度术(FCM),我们研究了正了酸对人肺癌细胞(PLA-801D)的某些生物学作用。当培养液中含2或3mmol/L丁酸时,细胞分裂和增生受到明显抑制,群体倍增时间几乎延长1倍,细胞周期行进受阻,大多数细胞阻断在G1期,平皿集落形成率从23.9％降为1.9％,饱和密度从237.4万/ml降至48.8万/ml,细胞群体提前3d进入饱和状态。与此同时,细胞变扁平,几乎丧失叠堆生长能力,表面膜活动减弱,核形趋于规则,染色质颗粒分散变稀疏,细胞间粘着连接明显增多。以上发现提示丁酸可使PLA-801D肺癌细胞获得一些相对正常的生长特性和表型,显示丁酸对该细胞有一定程度的分化诱导作用和潜在的抗癌作用。     

自然转化的人胚肺细胞对几种不同病毒敏感性的研究

本文报道了自然转化的人胚肺细胞对腺病毒-3型,疱疹病毒-2型,红斑性肢痛症相关痘病毒,呼肠病毒-Ⅱ型的敏感性试验,结果发现这些病毒在这株细胞上均可引起特征性的病变,这为病毒性疾病的诊断提供了一个新的细胞系统.     

MTT法探讨改良五黄油对人皮肤成纤维细胞增殖的抑制作用

目的 MTT法探讨改良五黄油对人皮肤成纤维细胞增殖的抑制作用,为烧伤创面外用药物五黄油的改良目的之一--抑制瘢痕增生,寻求确切有效的实验依据.方法 倒置显微镜下观察细胞形态学变化.MTT比色法检测不同终浓度(0.10、0.15、0.20、0.25、0.30g/ml)改良五黄油作用下增殖状态下成纤维细胞72h后对细胞增殖的抑制程度,主要指标,细胞形态,吸光度(A)值.结果 倒置显微镜下可见空白对照组成纤维细胞大小均匀,生长密集,改良五黄油实验组和五黄油对照组细胞生长及形态明显改变,增殖缓慢,生长差,贴壁能力减弱.MTT比色法结果表示:0.10～0.30g/ml浓度药物作用人成纤维细胞,其增殖抑制程度与改良五黄油的浓度存在正相关性;与五黄油相对照,改良五黄油增殖抑制率以0.30g/ml浓度最显著(P＜0.01).结论 体外抑制人成纤维细胞增殖,改良五黄油比五黄油更有效.     

非小细胞肺癌中人乳头瘤病毒感染与细胞增殖及凋亡的关系

目的探讨人乳头瘤病毒（HPV）16、18型感染与原发性非小细胞肺癌（NSCLC）组织中细胞增殖及凋亡的关系及其意义。方法应用PCR、TUNEL和免疫组化SP法分别检测76例NSCLC及13例肺良性病变中HPV16、18型DNA、细胞凋亡和增殖细胞核抗原（PCNA）的表达，并分别计算增殖指数（MI）和凋亡指数（AI）。结果NSCLC中HPV16、18型总阳性率为40．8％（31／76），而肺良性病变组阳性率为7．7％（1／13），差异有显著性意义（P〈0．05）。HPV感染在不同组织学类型及有无淋巴结转移间差异无显著性意义，而在不同组织分化程度间差异有显著性意义（P〈0．05）。NSCLC中HPV阳性组与阴性组之间MI及AI差异均有显著性意义（均P〈0．05）。结论HPV16、18型感染在NSCLC发生中可能有病因学意义，其致癌机制之一可能通过减少癌变细胞凋亡和促进细胞异常增殖而导致细胞癌变。