DNA去甲基化药物对肝癌SMMC-7721细胞株IGF2印迹状态及表达的影响

目的:研究5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对肝癌SMMC-7721细胞株IGF2印迹状态及表达的影响。方法:用终浓度为10μmol/L的5-氮杂-2′-脱氧胞苷处理培养的SMMC-7721细胞,不含5-Aza-CdR培养液培养的细胞作为对照组;IGF2基因的印迹状态使用PCR-RFLP方法检测;IGF2基因的表达使用半定量RT-PCR确定。结果:SMMC-7721细胞中IGF2基因处于母源印迹状态,为杂合子;5-氮杂-2′-脱氧胞苷处理后IGF2基因的mRNA表达量降低,电泳条带的半定量分析显示处理和对照之间的差异具有统计学意义(P<0.01),RFLP结果未见印迹丢失。结论:胞嘧啶去甲基化药物能够改变SMMC-7721细胞中IGF2的甲基化状态,降低IGF2mRNA的表达量,但并不引起IGF2基因完全失表达。     

5-氮杂-2’-脱氧胞苷对 Molt-4细胞 RASSF10基因启动子甲基化状态的影响研究

目的：Molt-4细胞应用5-氮杂-2’-脱氧胞苷进行处理,并观察期对 Molt-4细胞 RASSF10基因启动子甲基化状态的影响。方法：于体外进行 Molt-4细胞培养,并采用不同浓度5-氮杂-2’-脱氧胞苷处理。然后采用 MTT 法检测性别增殖抑制率,同时采用 RT-PCR 法检测 RASSF10 mRNA 表达情况。采用 COBRA 检测 RASSF10甲基化水平;Westernblot 法检测 RASSF10蛋白表达情况。结果：经检测发现,采用一定浓度5-氮杂-2’-脱氧胞苷作用于 Molt-4细胞后,细胞增殖抑制率明显升高;且表现为剂量依赖性和时间性。然对照组 Molt-4细胞 R 中未检测出 RASSF10 mRNA、蛋白表达情况。然经5-氮杂-2’-脱氧胞苷处理后,RASSF10基因出现部分甲基化。结论：临床应用5-氮杂-2’-脱氧胞苷处理 Molt-4细胞,其可经对 RASSF10基因去甲基化来恢复 RASSF10表达,最终达到抑制 Molt-4细胞增殖效果。     

甲基化抑制剂对肾癌细胞株中γ-caenin蛋白表达的影响

目的 研究甲基化抑制剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对人肾癌A498细胞增殖及γ-连环蛋白(γ-catenin)表达的影响.方法 使用不同浓度(10-7、10-6、10-5 mol/L)的特异性DNA甲基转移酶抑制剂5-Aza-CdR处理A498肾癌细胞株.MTT检测5-Aza-CdR对肾癌细胞株A498抑制作用.细胞免疫化学检测5-Aza-CdR处理A498肾癌细胞株后γ-catenin表达的变化.结果 5-Aza-CdR能明显抑制肾癌细胞的增殖,且与药物浓度及作用时间有关.药物处理后γ-连环蛋白表达增加.结论 γ-catenin蛋白表达受甲基化的抑制,提示5-Aza-CdR可使γ-catenin基因去甲基化而抑制A498肾癌细胞株增殖.     

5-AzaDc诱导孕酮受体基因启动子脱甲基化可能与DNMT1表达下调有关

目的 探讨5-杂氮-2'-脱氧胞苷诱导DNA脱甲基化可能机制.方法 用5-杂氮-2'-脱氧胞苷处理白血病细胞株HL-60、K562和Jukat,分析处理前后DNA甲基转移酶1 mRNA表达和孕酮受体双启动子(PRA、PRB)甲基化状态的变化.结果 5-杂氮-2'-脱氧胞苷处理白血病细胞株后,PRA、PRB都发生脱甲基化作用,DNA甲基转移酶1 mRNA较处理前显著降低(P＜0.01).结论 5-杂氮-2'-脱氧胞苷诱导DNA脱甲基化可能与其降低DNA甲基转移酶1 mRNA表达有关.     

5-Aza-CdR对人肝癌细胞RASSF1 A甲基化的影响

目的：探讨5-氮杂-2ˊ-脱氧胞苷（5-Aza-CdR）对人肝癌细胞RASSF1A基因启动子甲基化以及mRNA表达的影响。方法体外培养人肝癌细胞株SMMC-7721,分别用0.5、5.0、30.0、50.0μmol/L的5-Aza-CdR与之孵育72 h,甲基化PCR检测处理前后启动子甲基化水平,RT-PCR检测RASSF1A mRNA表达。结果随着药物浓度的增加,甲基化RASSF1A含量逐渐降低,而未甲基化产物逐渐增高;5-Aza-CdR处理后,RASSF1A mRNA的含量随之增高。结论5-Aza-CdR可逆转SMMC-7721细胞株细胞中基因甲基化修饰状态。     

5-氮-2＇脱氧胞苷对Reh细胞增殖及RUNX3基因启动子区甲基化状态的影响

目的：探讨5-氮-2＇脱氧胞苷对Reh细胞增殖及其抑癌基因RUNX3启动子区甲基化状态的影响。方法：应用MTT法观察5-氮-2＇脱氧胞苷对Reh细胞增殖的抑制能力;采用甲基化特异性PCR（MSP）检测5-氮-2＇脱氧胞苷干预前后RUNX3基因启动子区的甲基化状况;应用RT-PCR检测干预前后RUNX3基因的mRNA表达水平的变化。结果：经5-氮-2＇脱氧胞苷处理后,RUNX3基因启动子高甲基化的区域发生部分去甲基化,5-氮-2＇脱氧胞苷处理前启动子高甲基化的RUNX3 mRNA未见表达,而在其处理后该基因可见重新表达,经5-氮-2＇脱氧胞苷处理后,Reh细胞生长缓慢。结论：5-氮-2＇脱氧胞苷能使Reh细胞RUNX3基因启动子区发生部分去甲基化,从而调控RUNX3基因表达并能抑制其细胞生长。启动子区异常甲基化是白血病Reh细胞RUNX3基因失活的主要原因之一。     

DNA 甲基化对NOR1 基因启动子活性和基因表达的影响

目的:研究DNA 甲基化对NOR1 基因启动子活性和表达的影响。方法:采用SssI 甲基转移酶处理NOR1基因启动子报告载体,经重亚硫酸钠修饰后测序检测报告载体甲基化水平。未经SssI 处理和经SssI 处理的NOR1 基因启动子报告载体分别转染细胞,检测荧光素酶活性或GFP 表达。采用去甲基化药物5-氮杂-2'-脱氧胞苷处理白血病细胞系HL60 细胞,抽提RNA,Real-time RT-PCR 检测NOR1 mRNA 表达水平。结果:重亚硫酸钠测序表明SssI 甲基转移酶体外处理导致NOR1 启动子CpG 岛CG 位点完全甲基化。体外甲基化的NOR1 启动子活性完全丧失。去甲基化药物5-氮杂-2'-脱氧胞苷连续处理3 d 后,白血病细胞系HL60 细胞中内源性NOR1 mRNA 表达水平显著增加。结论:SssI 甲基转移酶可用于体外甲基化修饰NOR1 基因启动子报告载体。甲基化修饰导致NOR1 启动子活性丧失。去甲基化药物5-氮杂-2'-脱氧胞苷处理恢复NOR1 mRNA 表达。     

5'-氮杂-2'-脱氧胞苷对结直肠癌细胞株HT-29和LoVo中MLH-1基因甲基化状态、mRNA及蛋白表达的影响

目的:探讨甲基化酶抑制剂5'-氮杂-2'-脱氧胞苷(5'-Aza-2'-deoxycytidine)对结直肠癌细胞株HT-29和Lo Vo中MLH-1基因甲基化水平、mRNA及蛋白表达的影响。方法:用不同浓度5'-氮杂-2'-脱氧胞苷处理结直肠癌细胞株HT-29和Lo Vo。应用Taq Man探针为基础的实时定量PCR(Methylight)方法、SYBR Green PCR方法及蛋白印迹实验(Western blot)检测药物处理前后HT-29和Lo Vo细胞中MLH-1基因的甲基化状态、mRNA和蛋白表达。结果:Methylight检测HT-29细胞株中MLH-1蛋白在药物作用后异常甲基化得到逆转;实时荧光定量PCR和Western Blot检测到0.5、1.0、1.5μmol/L 5'-氮杂-2'-脱氧胞苷处理后MLH-1基因mRNA和蛋白表达上调,实时荧光定量PCR检测对照组和不同浓度实验组在HT-29细胞株相对表达量分别为1.000±0.000、1.171±0.126、1.356±0.085和1.422±0.090;在Lo Vo细胞株相对表达量分别为1.000±0.000、1.117±0.094、1.273±0.062和1.285±0.070。Western blot检测MLH-1蛋白对照组和不同浓度实验组在HT-29细胞株相对表达量分别为0.114±0.033、0.365±0.040、0.831±0.041和0.849±0.051;Lo Vo细胞株相对表达量分别为0.602±0.020、0.621±0.028、0.934±0.029和1.057±0.045。以上作用均呈时间、剂量依赖性,MLH-1基因mRNA在HT-29细胞株表达(F=8.918,P=0.010)和Lo Vo细胞株表达(F=8.351,P=0.011)具有统计学意义。MLH-1蛋白表达在HT-29细胞株表达(F=226.825,P=0.000)和Lo Vo细胞株表达(F=153.642,P=0.000)亦具有统计学意义。结论:结直肠癌细胞株HT-29和Lo Vo中MLH-1启动子甲基化可能是导致该基因表达下调甚至失活的主要原因。5'-氮杂-2'-脱氧胞苷能够较成功的逆转结直肠癌细胞株HT-29和Lo Vo中MLH-1基因的甲基化状态,并能恢复mRNA及蛋白重新表达。     

5-杂氮-2′-脱氧胞苷抗白

目的:研究甲基转移酶抑制荆5-杂氮-2′-脱氧胞苷(5-aza-2dC)对人急性髓系白血病细胞株HL-60生长、分化、凋亡的影响,初步探讨其抗白血病作用的可能机制.方法:不同浓度和时间的5-aza-2dC处理HL-60细胞后,采用MTT比色试验检测5-aza-2dC对HL-60细胞生长的影响;采用流式细胞术检测5-aza-2dC对HL-60细胞周期及分化的影响;采用Hochest33342染色和流式细胞术检测5-aza-2dC时HL-60细胞凋亡的影响;采用RT-PCR法检测药物处理对S100A8和S100A9基因mRNA表达水平的影响.结果:(1)5-aza-2dC呈剂量和时间依赖性地抑制HL-60细胞的生长,并使HL-60细胞周期阻滞于G2/M期;(2)5-aza-2dC处理使HL-60细胞的髓系分化抗原CD11b的表达增强,在低浓度(0.5 μmol/L)时其促分化作用最明显;(3)5-aza-2dC呈剂量和时间依赖性地诱导HL-60细胞凋亡,在高浓度(5.0μmol/L)时诱导凋亡的作用最明显;(4)5-aza-2dC能明显上调S100A8和S100A9基因mRNA的表达.结论:5-aza-2dC能抑制HL-60细胞生长,阻滞HL-60细胞于G2/M期,促进HL-60细胞分化和诱导其凋亡,并能上调S100A8和S100A9基因的表达,这些作用可能是5-aza-2dC抗急性髓系白血病的重要机制.     

5-Aza-CdR对人肾癌OS-RC-2细胞生长及γ-连环蛋白表达的影响

目的:研究甲基化抑制剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对人肾癌OS-RC-2细胞增殖、凋亡及γ-连环蛋白(γ-catenin)表达的影响.方法:使用不同浓度(10-7,10-6,10-5,10-4 mol/L)的特异性DNA甲基转移酶抑制剂5-Aza-CdR处理OS-RC-2肾癌细胞株.MTT检测5-Aza-CdR对肾癌细胞株OS-RC-2的生长抑制作用.流式细胞仪检测5-Aza-CdR对OS-RC-2肾癌细胞株凋亡的影响.细胞免疫化学检测5-Aza-CdR处理OS-RC-2肾癌细胞株后γ-catenin表达的变化.结果:5-Aza-CdR明显抑制肾癌细胞的增殖,促进其凋亡,且与药物浓度及作用时间有关.药物处理后γ-连环蛋白表达增加.结论:γ-catenin蛋白表达受甲基化的抑制,提示5-Aza-CdR可使γ-catenin基因去甲基化而抑制肾癌OS-RC-2细胞株增殖,并促进其凋亡.     

启动子甲基化调控胰腺癌他扎罗汀诱导基因1表达的研究

目的 研究他扎罗汀诱导基因1(tazarotene-induced gene-1,TIG1)在胰腺癌中的表达情况及启动子在胰腺癌细胞中的甲基化状态。 方法 收集67组胰腺癌和对应癌旁组织,用SP法进行TIG1蛋白检查并分析TIG1在癌、癌旁组织的表达差异。培养胰腺癌细胞株PANC1、BxPC3和SW1990,提取细胞总DNA,甲基化修饰后亚硫酸盐测序PCR(BSP)分析启动子CpG岛甲基化状态;筛选细胞总RNA,用实时定量PCR(real-time PCR)依次测各细胞株、经5-杂氮-2-脱氧胞嘧啶(5-aza-dC)干预前后TIG1 mRNA的表达差异。 结果 TIG1在癌组织中的表达低于癌旁组织(P<0.05)。TIG1的表达与胰腺癌的大小、分期无相关性,但与部位存在相关性(P<0.05)。TIG1在BxPC3和SW1990细胞中存在高甲基化状态,分别为(92±2)%和(86±2)%,在PANC1细胞甲基化率为(40±2)%。TIG1甲基化的BxPC3和SW1990细胞经5-aza-dC处理后TIG1表达明显上调(P<0.05),而甲基化的PANC1细胞经同样处理后TIG1的表达变化不明显。 结论 癌组织中TIG1的表达显著低于癌旁组织。不同部位胰腺癌TIG1的表达存在差异。TIG1基因在BxPC3和SW1990胰腺癌细胞中的低表达与甲基化有关。TIG1基因甲基化可能是调控胰腺癌细胞TIG1表达的重要分子机制之一。      

SOX7基因在胰腺癌细胞株的表达及其启动子区甲基化状态的研究

目的:检测SOX7基因在胰腺癌细胞株中的表达及其启动子区的甲基化状态,初步探讨两者之间的关系?方法:采用RT-PCR检测SOX7基因在胰腺癌细胞株BXPC-3?CFPAC-1?PANC-1和SW1990中的表达水平?重亚硫酸盐测序PCR(bisulfite sequencing PCR,BSP)和结合重亚硫酸盐的限制性内切酶法 (combined bisulfite restriction analysis,COBRA)检测启动子区域甲基化状态?采用去甲基化药物5-氮杂胞苷(5-aza-2-adeoxycytidine,5-aza-dC)处理各细胞株后,检测SOX7基因的mRNA表达和甲基化状态变化?结果:在胰腺癌细胞株BXPC-3?CFPAC-1中SOX7基因的mRNA呈阳性表达,而在PANC-1和SW1990中SOX7基因表达沉默;与BXPC-3?CFPAC-1相比,PANC-1和SW1990中SOX7基因启动子区甲基化率较高?经过去甲基化处理后,PANC-1与SW1990中SOX7启动子区的甲基化率下降,基因重新表达?结论:胰腺癌细胞株PANC-1和SW1990中的SOX7基因表达与启动子区甲基化状态有关,启动子区的高甲基化导致PANC-1? SW1990中SOX7基因的表达沉默?     

CTGF基因转染对胰腺癌细胞MMP-9、VEGF表达及增殖的影响

目的：通过研究结缔组织生长因子（connective tissue growth factor,CTGF）基因对人胰腺癌SW1990细胞基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、血管内皮生长因子（VEGF）表达及细胞增殖的影响,深入探讨CTGF在胰腺癌侵袭和转移中的作用机制。方法：经脂质体介导将含有CTGF重组表达质粒转染人胰腺癌SW1990细胞株,用G418筛选阳性细胞克隆及RT-PCR、蛋白质印迹法鉴定;采用RT-PCR和蛋白质印迹法检测阳性细胞克隆MMP-9及VEGF表达的改变;噻唑盐（MTT）比色法检测阳性细胞克隆的增殖活性。结果：成功建立稳定高表达CTGF的阳性SW1990细胞克隆,与对照组相比,阳性克隆MMP-9、VEGF mRNA及蛋白表达显著增高,细胞增殖活性也显著增加。结论：CTGF转染可显著增加胰腺癌细胞MMP-9、VEGF的表达并促进其细胞增殖,CTGF可能是胰腺癌基因治疗的潜在靶点。     

X射线对胰腺癌细胞株SW1990和Capan-2细胞增殖及凋亡的影响

目的探究不同剂量的x射线对胰腺癌细胞株SW1990和Capan-2增殖和凋亡的影响。方法取处于对数生长期的SW1990和Capan-2细胞,经不同剂量的x射线（2、4、6、8和10Gy）照射后分别培养24、48和72h.CCK培法检测细胞增殖;采用AnnexinV／PI双染的方法检测SW1990和Capan-2细胞的凋亡;Westernblotting检测细胞凋亡相关蚩白的表达变化;RT—PCR检测细胞凋亡相关蛋白的mRNA表达。结果相比正常对照组,x射线能明显抑制SW1990和Capan-2细胞的增殖,井且这种,抑制作用呈剂量依赖性。细胞凋亡率在x射线的作用下也明显增加,并呈现剂量依赖性。Westernblotting结果显示x射线能增加两种细胞中促凋亡蛋白Bax的表达。RT-PCR结果显示x射线能降低抗凋亡蛋白Bel-2mRNA表达,上凋抗凋亡蛋白Bax mRNA表达。结论x射线能抑制胰腺癌细胞株SW1990和Capan-2的增殖并提高其凋亡率,呈现一定的剂量依赖性,其机制可能与诱导胰腺癌细胞凋亡有关。     

吉西他滨耐药的胰腺癌SW1990细胞株的建立及相关特性检测

目的：探讨对吉西他滨( GEM )耐药的胰腺癌SW1990细胞诱导方法,以期进一步认识胰腺癌耐药的发生机制,并对诱导的GEM耐药的胰腺癌细胞与其亲本细胞的生物学特性进行比较。方法采用逐步浓度递增法诱导对GEM耐药的细胞株 SW1990-GZ。 MTT 法检测 SW1990和SW1990-GZ 的半数致死量(IC50)、耐药系数(R),并观察其生长差异。采用高效液相色谱法( HPLC)检测不同时间点SW1990和 SW1990-GZ 对 GEM 药物的摄取情况。结果SW1990和SW1990-GZ的IC50为(0．07±0．0021)、(87．50±3．2400)μg/ml,R=1250;在不同浓度GEM作用下,诱导后耐药的SW1990-GZ对GEM的敏感性明显降低。细胞生长曲线显示耐药细胞 SW1990-GZ相对于 SW1990生长缓慢。不同时间点GEM孵育后,SW1990-GZ细胞对GEM药物的摄取较SW1990细胞降低。结论成功诱导了耐GEM药物的SW1990-GZ细胞株,耐药性能稳定、明显。 SW1990-GZ细胞可能存在着一定的机制使得细胞摄取GEM降低。     

低氧诱导高迁移率组蛋白B1对人胰腺癌细胞凋亡抵抗和迁移的作用研究

目的 观察低氧诱导人胰腺癌细胞系(SW1990)分泌高迁移率组蛋白B1(HMGB1)作用,并探讨胞外HMGB1在胰腺癌细胞凋亡抵抗及转移中的作用.方法 取对数生长期SW1990细胞分别给予以下处理:(1)常氧+PBS;(2)低氧+PBS;(3)低氧+HMGB1(100μg/L);(4)低氧+HMGB1(100μg/L)+EP(胞外HMGB1特异性抑制剂).细胞处理72 h后,ELISA检测(1)及(2)2组细胞培养上清中HMGB1表达的差异;AnnexinV/PI流式细胞术检测(2)、(3)、(4)各组细胞的凋亡率;Transwell迁移实验检测(2)、(3)、(4)各组细胞迁移能力差异;Western-blotting检测(2)、(3)、(4)各组细胞凋亡相关蛋白(Bcl-2)及迁移相关蛋白(E-cadherin、MMP-9)表达的差异.结果 ELISA结果显示低氧条件下,细胞培养上清中HMGB1表达含量升高,是常氧条件下的5倍;AnnexinV/PI流式细胞术检测以上3组细胞的凋亡率分别为:(23.47±2.20)%、(6.57±1.20)%、(20.03±1.89)%;低氧+HMGB1处理组细胞凋亡比率明显低于其他2组,差异有统计学意义(P<0.05);Transwell迁移实验中各组穿至下室的细胞数分别平均为(161.3±16.0)、(399.7±13.0)、(184.3±16.0)个,差异有统计学意义(P<0.05),提示低氧条件下HMGB1能明显促进人胰腺癌SW1990细胞的迁移;Western-blotting结果显示HMGB1处理组Bcl-2及MMP-9表达增高,E-cadherin表达降低,差异有统计学意义(P<0.05).结论 低氧可以促进肿瘤细胞释放HMGB1,从而促进人胰腺癌SW1990凋亡抵抗与迁移.     

穿膜肽修饰的纳米颗粒抗胰腺癌的初步研究

目的 探究穿膜肽修饰的纳米颗粒介导的光动力学疗法(PDT)对胰腺癌SW1990细胞的杀伤作用.方法 将胰腺癌SW1990细胞分成4组,不光照不含光敏剂的细胞作为空白对照组,与细胞共孵育的游离Ce6组,NP/Ce6组及TAT-NP/Ce6组.首先分别制备出纳米颗粒TAT-NP/Ce6和NP/Ce6.利用流式细胞仪(FACS)检测各组被SW 1990细胞摄取的情况;荧光显微镜观察各组光照下在细胞内产生活性氧的情况;最后用MTT或活死染色法检测光照下各组对细胞的杀伤效果.结果 FACS结果显示各组分别被细胞摄取4h后,TAT-NP/Ce6组胞内荧光显著高于NP/Ce6组(P＜0.001),同时NP/Ce6组明显强于free Ce6组(P ＜0.001).荧光显微镜显示光照下纳米颗粒TAT-NP/Ce6组在细胞内产生活性氧明显强于其他各组(P ＜0.001).MTT法显示在每一Ce6浓度下光照时,TAT-NP/Ce6组对细胞的杀伤效果明显强于NP/Ce6 (P＜0.01),Ce6浓度为0.5μg/ml时,活死细胞染色法同样证明了对细胞的这种杀伤效果.结论 TAT肽修饰的纳米颗粒能有效增加胰腺癌细胞对其摄取,其介导的PDT杀伤胰腺癌细胞效果明显增强.     

MiR-183调控PDCD4表达对SW1990胰腺癌细胞生长的调节作用

目的 观察miR-183在体外通过靶向调控程序性细胞死亡因子4（PDCD4）对SW1990胰腺癌细胞生长的调节作用。方法 将不同浓度的miR-183模拟物（miR-183 mimics）和拮抗剂（miR-183 inhibitors）通过细胞转染技术转入SW1990胰腺癌细胞株中,筛选出合适浓度,进一步应用实时荧光定量PCR（qPCR）和Western blot检测PDCD4基因和蛋白表达水平;MTT法检测miR-183 inhibitors对SW1990细胞生长的影响,流式细胞术和Hoechst染色检测SW1990细胞凋亡和细胞周期,Western blot检测抗凋亡基因bcl-2蛋白的表达。结果 细胞转染50 nmol/L miR-183 mimic和150 nmol/L inhibitor后,miR-183基因的表达量与对照比较差异有统计学意义（P<0.05）。qPCR和Western blot发现miR-183 mimics能下调PDCD4的表达,而miR-183 inhibitors能上调PDCD4的表达,下调bcl-2（P <0.05）。MTT法显示miR-183 inhibitors能抑制细胞增殖,流式细胞术和Hoechst染色显示miR-183 inhibitors能促进胰腺癌细胞的凋亡及阻滞细胞周期于G₀/G₁期。结论 miR-183拮抗剂体外能抑制胰腺癌细胞增殖,促进凋亡和阻滞细胞周期,且可能通过靶向调节PDCD4基因发挥其调节作用。     

Modulatory Effects of EPA and DHA on Proliferation and Apoptosis of Pancreatic Cancer Cells

In order to investigate the effects of eicosapentaenoic acid （EPA） and docosahexaenoic acid （DHA） on the proliferation, apoptosis of pancreatic cancer cell line SW1990 cells and the expression of cyclin E mRNA, the SW1990 cells were treated with different concentrations of EPA or DHA （20, 40, 60 μg/mL） for 0, 12, 24, 36 and 48 h respectively. By using MTF method, the inhibitory effects of EPA or DHA on the cell growth were assayed. Real time PCR was used to detect the expression changes of cyclin E mRNA after the SW1990 cells were treated with 40μg/mL EPA or DHA for different time. Flow cytometry was used to test the changes of apoptostic rate in the SW1990 cells treated with different concentrations of EPA or DHA for 24 h. The results showed that EPA and DHA could inhibit the growth of SW1990 cells in a time- and concentration-dependent manner （P〈0.01）. EPA or DHA could also significantly inhibit the expression of cyclin E mRNA in a time-dependent manner （P〈0.05）. EPA or DHA could induce the apoptosis of SW1990 cells in a concentration-dependent manner （P〈0.01）. It was concluded that ω-3 fatty acid could inhibit the proliferation of pancreatic cancer cell line SW1990 cells and promote their apoptosis. The down-regulation of the cyclin E expression by ω-3 fatty acid might be one of the mechanisms for its anti-tumor effect on pancreatic cancer.     

Microarray analysis of gene expression profile of multidrug resistance in pancreatic cancer

Background  Chemotherapy is the most frequently adopted adjuvant therapy of pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC), but the development of drug resistance reduces its effectiveness. Clarification of the mechanism of multidrug resistance (MDR) development in PDAC is needed to improve the therapeutic effect of chemotherapy. This study was aimed to investigate the molecular mechanism of MDR of PDAC and to identify genes associated with MDR development.
Methods  The gene expression profiles of cell line SW1990 and three drug-selected pancreatic chemoresistant sub-lines, SW1990/5-Fu, SW1990/ADM and SW1990/GEM, were obtained using an oligonucleotide microarray (Affymetrix HG U133 2.0 plus) that contained approximately 38 000 human genes. The microarray results were validated by real-time quantitative polymerase chain reaction and Western blot analysis.
Results  There were 165 genes and expressed sequence tags, some of which have never been linked to drug resistance, that were up- or down-regulated at least 2-fold in all resistant sub-lines when compared with SW1990. According to Gene Ontology annotation, differentially expressed genes related to MDR in pancreatic cancer belong to many functional families and with diverse biological processes. Genes related to antioxidant activity, apoptosis, the cell cycle, signal transduction and intracellular adhesion may undergo epigenetic changes preceding MDR development. A hierarchical clustering was conducted and several interesting clusters were discovered that may be primarily related to cell cycle and developmental regulation. A prediction rule was built from the expression profiles of 117 genes after support vector machine (SVM) analysis, and the prediction result was examined by cytotoxic testing. As a result, a differential gene expression pattern was constructed in multidrug resistant pancreatic cancer cells.
Conclusions  The findings of this study prove that construction of a chemoresistance prediction rule, based on gene expression patterns, is practical. These data provide new insights into the molecular mechanism of pancreatic cancer MDR development and may be useful for the detection and treatment of MDR in pancreatic cancer patients.