结直肠癌中错配修复基因杂合性缺失的初步分析

目的探讨散发性结直肠癌中错配修复基因杂合性缺失的发生情况。方法利用微卫星分析法对30例散发性结直肠癌6个错配修复基因(mismatchrepairgenes,MMR)的杂合性缺失(lossofheterozygosity,LOH)进行了分析。结果6个MMR基因LOH的发生率由高到低依次分别为hMSH3(30%)、hPMS2(25%)、hMLH1(30.0%)、hMSH2/hMSH6(23.07%),hPMS1基因未发现杂合性缺失。结论在中国人散发性结直肠癌中,MMR基因通过等位基因杂合性缺失是结直肠癌发生的重要分子遗传途径之一。     

白细胞介素-6及微卫星不稳定在溃疡性结肠炎相关性结直肠癌中的表达及意义

目的分析溃疡性结肠炎(UC)相关性结直肠癌(UC-CRC)中白细胞介素-6(IL-6)及微卫星不稳定(MSI)情况并探讨其在UC患者癌变过程中所起的作用。方法回顾性分析了鄂东医疗集团2013年1月至2019年1月期间收治的符合纳入标准的17例UC-CRC患者及55例散发性结直肠癌(SCRC)患者术后病理标本资料并检测其癌组织标本中错配修复(MMR)蛋白hMLH1、hPMS2、hMSH2、hMSH6的表达情况;同时检测30例对照(非UC、UC-CRC、SCRC患者)、43例UC、17例UC-CRC及55例SCRC患者的血清中IL-6水平,并对SCRC及UC-CRC患者的癌组织中IL-6与MMR蛋白表达做相关性分析。结果 17例UC-CRC的癌组织标本中出现错配修复基因缺失(dMMR)7例(41.2%),其中hMLH1和hPMS2蛋白表达缺失、hMSH2和hMSH6蛋白表达缺失存在明显相关性(P0.001);UC-CRC组患者血清中IL-6水平明显高于UC组(t=4.97,P0.001)及SCRC组(t=5.26,P=0.006)。由于病例数较少,未对UC-CRC癌组织中dMMR与IL-6蛋白表达进行统计学分析,而在SCRC癌组织中未发现dMMR与IL-6蛋白表达有关(rs=0.04,P=0.77)。结论与SCRC类似,MSI同样参与了UC-CRC的发生及发展过程,UC-CRC的MMR蛋白缺失更常见于hMLH1与hPMS2、hMSH2与hMSH6的共同表达缺失,未发现IL-6参与了结直肠癌的MSI相关癌变机制,而从有限的病例初步推测IL-6可能参与了UC-CRC患者MSI的发生。     

散发性结直肠癌的hMSH3和hMSH6基因突变

目的：研究错配修复基因hMSH3和hMSH6在散发性结直肠癌发生中的作用。方法：应用放射性同位素为基础的PCR技术，检测了48例散发性结直肠癌和20例癌旁组织中hMSH3和hMSH6基因的突变。结果hMSH3和hMSH6在散发性结直肠癌中的突变率分别为5／48（10．4％）和12／48（25％），在癌旁组织中未见突变。结论：错配修复基因hMSH3和hMSH6参与了部发散发性结直肠癌的发生过程。     

散发性结直肠癌的hMSH3和hMSH6基因突变

目的　研究错配修复基因hMSH3和hMSH6在散发性结直肠癌发生中的作用。方法　应用放射性同位素为基础的PCR技术 ,检测了 4 8例散发性结直肠癌和 2 0例癌旁组织中hMSH3和hMSH6基因的突变。结果　hMSH3和hMSH6在散发性结直肠癌中的突变率分别为 5 / 4 8(10 .4 % )和12 / 4 8(2 5 % ) ,在癌旁组织中未见突变。结论　错配修复基因hMSH3和hMSH6参与了部分散发性结直肠癌的发生过程     

错配修复蛋白表达缺失在结直肠癌中的意义

目的检测结直肠癌组织中错配修复（MMR）蛋白表达情况，探究错配修复缺陷（dMMR）与患者临床病理特征的相关性及其对预后的影响。 方法回顾性收集2019年1月至2021年5月于攀枝花市中心医院就诊且行根治术治疗的214例结直肠癌患者临床资料及病理组织标本进行研究。采用免疫组织化学染色法和免疫印迹法分别检测临床肿瘤组织、对应癌旁正常组织中MMR蛋白（hMSH2、hMSH6、hMLH1、hPMS2）的表达情况，任一蛋白表达缺失则判定为dMMR。分析MMR蛋白表达与患者临床病理特征的相关性；Pearson检验结直肠癌组织中四种MMR蛋白表达缺失的相关性；绘制Kaplan-Meier生存曲线，分析dMMR对患者预后生存的影响。 结果（1）四种MMR蛋白阳性染色均主要分布于细胞核中，呈棕黄色或棕褐色。结直肠癌组织中dMMR发生率为15.4%（33/214），显著高于对应癌旁正常组织的3.3%（7/214），差异有统计学意义（χ²=18.642，P<0.001）。hMLH1蛋白表达缺失25例，hPMS2 20例，hMSH2 12例，hMSH6 9例；MMR蛋白常协同表达缺失，以hMLH1/hPMS2协同缺失为主。（2）dMMR与肿瘤位置有关，多位于右半结肠；错配基因功能正常（pMMR）患者则多位于直肠和左半结肠，表现为高-中分化腺癌。hMLH1表达缺失多为中-低分化腺癌，与肿瘤直径、分化程度和TNM分期密切相关；hMSH2表达缺失与肿瘤直径密切相关；hPMS2表达缺失与分化程度、TNM分期及浸润深度密切相关；hMSH6表达缺失与肿瘤形态密切相关（均P<0.05）。（3）结直肠癌组织中四种MMR蛋白表达缺失呈正相关关系，以hMLH1/hPMS2、hMSH2/hMSH6协同表达缺失最为显著（P<0.05）。（4）dMMR患者的术后累积总生存率为84.8%，显著高于pMMR患者的61.3%，差异有统计学意义（Log-rank χ²=2.985，P=0.043）。 结论结直肠癌组织中dMMR发生率高于癌旁正常组织，在右半结肠癌患者中比例更高，以hMLH1/hPMS2协同表达缺失较为多见；dMMR患者预后更好。dMMR对于判断结直肠癌临床恶性程度、选择治疗方案及预测患者预后有重要意义。     

探讨结直肠癌与DNA错配修复基因hMSH2的关系

DNA错配修复基因(DNA mismatch repair gene)首先在细菌和酵母中发现,在人类基因组中也存在类似物.这种基因的突变在人类遗传性非息肉型结直肠癌(hereditary nonpolyposis colorectal cancer,HNPCC)和散发性结直肠癌(Sporadic Col-orectal Cancer,SCRC)的发病过程中起重要作用.DNA错配修复基因既非癌基因,也非抑癌基因,是另一类肿瘤相关基因,这是继癌基因与抑癌基因之后,在肿瘤发病的分子机制方面的又一重大进展[1].错配修复基因(MMR)是一类和人类的错配修复反应有关的基因, 包括hMSH2、hMLH1、hMSH3、hMSH6、hPMSH1和hPMSH2等基因.其中,又以hMSH2为尤为重要.本文现就错配修复基因hMSH2及其与结直肠癌的关系综述如下.     

微卫星不稳定结直肠癌hMLH1和hMSH2及hMSH6种系突变与hMLH1启动子甲基化检测

目的探究微卫星不稳定（MSI）结直肠癌患者的hMLH1、hMSH2和hMSH6种系突变特征和hMLH1启动子甲基化状态。方法对前瞻性收集的34例MSI结直肠癌患者检测其hMLH1、hMSH2和hMSH6种系突变，并研究其肿瘤的hMLH1启动子甲基化状态。结果34例MSI结直肠癌中。共检测到MLH1基因启动子的甲基化19例（55．9％）。19例MSI—H结直肠癌中检测到MLH1基因的甲基化14例（73．7％）；15例MSI—L结直肠癌检测到MLH1基因的甲基化5例（33．3％）；两组差异有统计学意义（P〈0．05）。全组共发现8个hMSH2和hMSH6基因的突变，其中hMSH6基因突变3个，hMSH2基因突变5个。结论中国人MSI结直肠癌错配修复基因突变（未测到MLH1基因突变）和MLH1基因启动子的甲基化检出率可能有别于国外MSI结直肠癌。     

散发性结直肠癌患者18号染色体高频杂合缺失的研究

目的：探讨散发性结直肠癌患者18号染色体上抑癌基因相关的杂合缺失（LOH）情况，并探索新的抑癌基因位点。方法：对83例散发性结直肠癌患者基因组DNA用14个不同荧光标记的高度多态性微卫生引物，扩增相应的微卫星位点，平均距离为10厘摩（centi-morgan,cM）。用ABI PRISM377测序仪进行基因扫描，统计各位点杂合缺失率。结果：在12个获得有效数据的微卫星位点中，平均杂合缺失率为36．78％,18p中最高为D18S53（38．09％），18q中最高为D18S474（55．74％）。4位患者的18号染色体所有杂合位点都存在缺失，30位患者的杂合缺失位点不少于50％（平均6个／人）；缺失位点少于50％的有53人（平均1个／人）。结论：结直肠癌患者18号染色体存在高频的LOH，并以整体缺失为特点。存在高频LOH的区域定位有转化生长因子（TGF）信号传导相关基因、结直肠癌缺失基因（DCC）、Rb结合蛋白8(RbBP8），特别是TGF信号传导相关基因MADH2、4、转化生长因子－β1反应元件（TGF－β1）等的缺失可能对结直肠癌的发生有重要影响。18p也有存在未知抑癌基因的可能。     

散发性大肠癌微卫星不稳定及hMSH2基因突变研究

目的了解散发性大肠癌微卫星不稳定及其hMSH2基因突变情况。方法用6个微卫星位点标记，PCR法检测微卫星不稳定性（microsatelliteinstabilty，MI），银集PCR－SSCP法检测hMSH2基因5、7、8、12、13、15外显子突变。结果60例大肠癌中，微卫星改变总的发生率为50％（30／60）；20例（3333％）表现微卫星不稳定性，其中4例同时有杂合性缺失（lossofheterozygosityLOH），DNA复制错误（RER）阳性11例（1833％）；14例（233％）检测到LOH。8例微卫星不稳定性大肠癌组织检测到第5外显子杂合性突变，而未发现胚系突变。结论散发性大肠癌中微卫星不稳定是一个常见的分子事件，与hMSH2基因胚系突变无关，可能为体细胞性突变或／和缺失所致。     

散发性结直肠癌中SMAD4基因的突变

目的观察SMAD4基因在散发性结直肠癌中的突变，并探讨其对散发性结直肠癌发生发展的意义。方法对本院83例散发性结直肠癌患者，应用聚合酶链反应-单链构象多态性（PCR—SSCP）分析癌组织中SMAD4基因各外显子的突变情况，基因突变率与临床病理参数间采用，检验；应用多态性微卫星标记研究SMAD4基因所在18q21区的杂合性缺失。结果SMAD4基因在83例散发性结肠癌的患者中共有9例发生突变，平均突变率为10．8％。经Χ^2检验SMAD4基因突变率在肿瘤的Dukes分期及有无远处转移间差异有统计学意义（P〈0．05），而与肿瘤的分化程度、发生部位及患者的性别差异无统计学意义（P〉0．05）。18q21区的杂合性缺失率为62．71％，其中发生突变的9例均存在18q21区的杂合性缺失。结论SMAD4基因的突变可能介导了散发性结直肠癌后期的发生发展。     

散发性结、直肠癌APC基因杂合缺失和突变的研究

目的　研究中国人散发性结、直肠癌中APC基因的失活形式和规律。方法　应用聚合酶链反应 单链构象多态性分析 (PCR SSCP)、DNA直接测序及微卫星标记PCR LOH分析方法 ,检测分析 40例散发性结直癌APC基因的突变和杂合缺失。结果　 40例结、直肠癌中有 3 1例检测到APC基因改变 :双次打击 2 4例 (其中LOH加突变 15例 ,双突变 9例 ) ,单个突变而无LOH 5例 ,仅有LOH而无突变 2例。APC基因突变率及杂合缺失率与肿瘤部位 ,肿瘤分化程度及Duke’s分期等无关。结论　APC基因改变与中国人散发性结直肠癌的发生有关。在大多数的中国人散发性结直肠癌的发生中 ,需要APC基因的双打击致功能完全失活 ,而且LOH加突变可能是其主要形式。在肿瘤获得恶性表型后 ,其进展及预后与APC基因杂合缺失与否无关。     

hMLH1/hMSH2基因启动子变异在遗传性非息肉病性结直肠癌发生中的作用

目的 探讨hMLH1及hMSH2基因启动子变异在遗传性非息肉病性结直肠癌(HNPCC)发生中的作用。方法 PCR法扩增25例HNPCC患、20例散发性结直肠癌和10例非肿瘤患的hMLH1及hMSH2基因启动子序列，对PCR产物进行测序。对发现携带突变患的肿瘤标本进行hMLH1及hMSH2基因表达研究和微卫星不稳定(MSI)检测，同时用测序方法检测该患hMLH1及hMSH2基因编码序列的改变。结果55例检测样本中，C3．1及C3．2发现hMLH1启动子在-342位和-337位2处A插入变异，免疫组化检测该患hMLH1表达阴性，肿瘤MSI检测为MSI—H，而编码序列的检测未发现异常。结论 hMLH1／hMSH2基因启动子种系突变可能导致该基因的不表达，从而导致HNPCC结直肠癌的发生。错配修复基因编码序列正常的HNPCC患中可能存在该基因启动子突变。     

中国人遗传性非息肉病性结直肠癌hMLH1/hMSH2表达及其临床意义

目的探讨hMLH1和hMSH2表达对于中国人遗传性非息肉病性结直肠癌(HNPCC)患者的临床意义。方法 利用免疫组织化学(免疫组化)的方法研究符合Amsterdam标准的22例典型HNPCC(Ⅰ组)、15例非典型HNPCC(Ⅱ组)、10例散发性结直肠癌(Ⅲ组)和10例良性疾病(Ⅳ组)患者的hMLH1和hMSH2表达情况。结果 hMLH1和(或)hMSH2表达缺失率在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ组分别为64％、20％、10％和0;Ⅰ组与Ⅱ组、Ⅲ组相比,差异有显著性意义(P<0.05);而Ⅱ组与Ⅲ组之间相比,差异无显著性意义(P=0.513)。结论 免疫组化检测错配修复基因的表达可能成为HNPCC的一种简单、重要的分子生物学诊断方法。     

遗传性非息肉病性结直肠癌hMLH1和hMSH2蛋白表达与其临床病理特征及预后的关系

目的探讨错配修复(MMR)基因hMLH1和hMSH2的蛋白表达与遗传性非息肉病性结直肠癌(HNPCC)临床病理特征及预后的关系。方法应用免疫组化方法(Elivision-两步法)检测48例符合修订后的《Bethesda指南》的HNPCC患者中hMLH1和hMSH2蛋白的表达情况,并定义两者同时表达阳性为MMR蛋白表达,分析其表达与HNPCC临床病理特征及预后的关系。结果 hMLH1蛋白的表达缺失率为20.83(10/48),高于hMSH2蛋白的表达缺失率(8.33%,4/48),Ρ<0.05;MMR蛋白的表达阳性率为70.83%(34/48)。MMR蛋白表达与肿瘤的浸润深度相关(Ρ<0.05)。MMR蛋白表达缺失与表达正常者的总生存率分别为85.71%(12/14)和85.29%(29/34),两者生存曲线比较差异无统计学意义(Ρ>0.05)。结论 hMLH1蛋白的表达缺失率高于hMSH2蛋白,hMLH1和hMSH2蛋白表达缺失与肿瘤的浸润深度相关,与患者的预后无关。     

遗传性非息肉病性结直肠癌家系临床及分子遗传学分析

目的探讨总结遗传性非息肉病性结直肠癌(hereditary nonpolyposis colorectal cancer,HNPCC)的临床和分子生物学特征,提高临床诊断和治疗水平。方法分析总结温州地区12个HNPCC家系临床病理特征。用显微切割、微卫星不稳定性分析、免疫组织化学、直接DNA测序法,检测HNPCC患者肿瘤组织微卫星不稳定性状态,错配修复基因hMHL1和hMSH2蛋白水平表达及hMHL1和hMSH2基因种系突变。结果12个家系32例患者中,患第1癌的中位年龄45．2岁;75．0％的患者在50岁以前发病;51．1％的肿瘤位于脾曲近侧结肠,34．4％为多原发结直肠癌,53．1％为组织分化差的癌,68．8％为Dukes A、B期。12个家系中6个家系伴有7例肠外肿瘤患者;19例健在患者生存1～28年,13例死亡患者平均生存期6．4年。9例患者肿瘤组织均表现高度微卫星不稳定性,其中5例患者表现hMSH2或hMLH1蛋白失表达(5／9);5个家系中3个家系存在hMH;1或hMSH2突变(3／5),其中有2个新发现的突变。结论HNPCC有特定的临床病理特征;检测错配修复基因hMHL1和hMSH2序列对HNPCC家系的成员具有指导价值;微卫星不稳定性和错配修复蛋白失表达是HNPCC的重要特征,可作为测序前的筛选手段。     

遗传性非息肉病性大肠癌研究进展

遗传性非息肉病性大肠癌（HNPCC）是一种常染色体显性遗传病,错配修复基因是其致病的贵传学基础,目前已克隆的基因有hMSH2、hMLH1、hPMS1、hPMS2、hMSH6及hMSH3并检测到它们的突变。该基因的突变导致微卫星不稳定性是肿瘤发生的始动因素。而且,检测错配修复基因和微卫星不稳定性可以遴选HNPPC家族,进行长期的随访可以降低该病的发生率,提高治疗效果。     

散发性结直肠癌微卫星不稳定与hMHL1和hMSH2基因突变的研究

目的:探讨散发结直肠癌组织微卫星不稳定性与错配修复基因hMHL1和hMSH2蛋白表达的关系。方法:结直肠癌患者病理标本和正常肠壁组织(距肿瘤边缘10cm取材各40例)。选取微卫星位点(D2S123、BAT-26、D17S261、D17S799)进行PCR,PCR产物行毛细管电泳法检测。用免疫组化染色方法分析错配修复基因hMHL1和hMSH2在肿瘤组织的蛋白表达情况。结果:1)4个位点(D2S123、BAT26、D17S261、D17S799)的微卫星不稳定性检出率分别为:12.5%、17.5%、10%、7.5%。总的微卫星不稳定率为9/40(22.5%)。MSI-H表达为7例,均表现BAT26位点不稳定。MSI-L表达2例。2)所有标本错配修复基因hMSH2检测均正常表达。错配修复基因hMHL1表达阴性11份,结肠比直肠hMLH1蛋白的阴性表达率高(P0.01)。3)hMLH1表达阴性,是出现MSI的重要分子因素,hMLH1不表达和MSI相关显著(P0.01)。结论:1)错配修复基因突变引起微卫星不稳定性是散发性结肠癌发生的重要机制;2)部分微卫星不稳定性是由错配修复基因hMLH1不表达引起,其余的微卫星不稳定性可能涉及到其它错配修复基因。     

散发性胆管癌患者染色体3p21.3区段微卫星位点不稳定性分析

目的研究散发性胆管癌患者染色体3p21．3区段的微卫星不稳定性（MSI）及杂合性缺失（LOH），探讨染色体3p21．3区段遗传不稳定性与散发性胆管癌发生发展的关系，定位该区段上散发性胆管癌相关肿瘤基因。方法用聚合酶链反应一单链构象多态性分析（PCR—SSCP）方法检测24例散发性胆管癌患者染色体3p21．3区段上D3S1568、D3S1621、D3S1578和D3S1289四个微卫星位点的MSI和LOH发生率，分析其与临床病理因素之间的关系。结果24例散发性胆管癌组织中，4个微卫星位点的MSI和LOH平均发生率分别为7．23％和15．63％。其中D3S1621位点的LOH最高（45．83％，11／24），并与TNM分期、是否伴有局部／淋巴结转移相关（P〈0．05）。结论染色体3p21．3区段133S1621位点高频率杂合性缺失，提示3p21．3区段定位有散发性胆管癌的候选抑癌基因，并在散发性胆管癌的发生发展过程中发挥重要作用。     

中国人遗传性非息肉病性结直肠癌家系错配修复基因突变的研究

目的探讨中国人遗传性非息肉病性结直肠癌(HNPCC)家系中hMLH1、hMSH2基因遗传性突变情况。方法取14个符合中国人HNPCC标准的HNPCC家系肿瘤先证者外周血DNA样本,聚合酶链反应扩增hMLH1、hMSH2基因共35个外显子,应用变性高效液相色谱技术(DHPLc)结合DNA测序法检测突变。结果14个家系中共发生41个大肠癌和19个肠外恶性肿瘤,其中胃癌是最常见的肠外恶性肿瘤类型。14个患者中检测到分属于9个家系的12个遗传性单个碱基改变,其中8％为无义突变,25％为错义突变,其余42％为单核苷酸多态,17％为内含子区的单碱基改变,8％为同义突变。结论(1)应用DHPLc成功检测到hMLH1、hMSH2基因杂合性突变。(2)符合中国人HNPCC标准家系约有1／3可检出hMLH1、hMSH2基因遗传杂合性突变,其中错义突变较多见。     

错配修复蛋白hMLH1、hMSH2和hMSH6在散发性结直肠癌中的表达及意义

目的探讨三种错配修复蛋白hMLH1、hMSH2和hMSH6在散发性结直肠癌(SCRC)中的表达情况及临床意义。 方法随机选取空军总医院普通外科和北京大学肿瘤医院结直肠外科自2008年3月至2012年12月收治的SCRC患者290例,采用免疫组织化学SP法检测患者肿瘤组织中hMLH1、hMSH2、hMSH6蛋白的表达情况,并结合其临床病理参数进行回顾性分析。 结果290例SCRC患者的肿瘤组织中hMLH1蛋白表达缺失率13.4%(39/290),hMSH2表达缺失率12.1%(35/290), hMSH6表达缺失率29.0%(84/290); hMLH1/hMSH2共同缺失率3.8%(11/290), hMLH1/hMSH6共同缺失率10.0%(29/290),hMSH2/hMSH6共同缺失率7.2%(21/290)、hMLH1/hMSH2/hMSH6共同缺失率3.4%(10/290)。hMSH1蛋白在中分化腺癌和低分化、黏液癌组织中表达率明显高于高分化腺癌(P<0.01); hMSH2蛋白在直径≤5 cm的肿瘤组织中的表达率显著高于直径>5 cm的肿瘤组织(P<0.01);hMSH6蛋白在女性组中的表达率显著低于男性组(P<0.01),在直径≤5 cm的肿瘤组织中的表达率高于直径>5 cm的肿瘤组织(P<0.05),有脉管内癌栓组的表达率高于无脉管内癌栓组(P<0.05),且在淋巴结转移多的组织中表达率高于淋巴结低转移者(P<0.01)。hMLH1与hMSH2的表达无明显相关性,而hMSH6与hMLH1、hMSH2的表达均呈明显相关性。 结论在SCRC中,错配修复蛋白hMLH1、hMSH2、hMSH6的表达缺失并不少见,且其表达缺失与SCRC临床病理参数的关系也明显不同于遗传性非息肉病性大肠癌。因此,当hMLH1、hMSH2、hMSH6作为对SCRC患者行肿瘤恶性度评定或制定个体化的化疗方案和预后判断的参考指标时,其标准也不同于遗传性非息肉病性大肠癌。