肝星状细胞与肝纤维化的研究进展

一、ＨＳＣ的增殖活化及凋亡 当肝脏受到物理、化学及生物因素的刺激时,ＨＳＣ增殖并激活,转变为“肌成纤维细胞（ｍｙｏｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ, ＭＦＢ）”,表达ａ－平滑肌动蛋白（ａ－ｓｍｏｏｔｈ ｍｕｓｃｌｅａｃｔｉｎ, ａ—ＳＭＡ）、合成ＥＣＭ等。Ｇｒｅｓｓ一ｆｉｅｒ等［１］根据已有的研究结果,提出了ＨＳＣ激活的“三步级联反应”模式。（１）炎症前期阶段,肝细胞受损后释放丝裂原,旁分泌作用于ＨＳＣ从而引起ＨＳＣ增殖,且肝细胞丧失接触抑制。（２）炎症阶段,活化的ｋｕｐｆｆｅｒ细胞、巨噬细胞及血小板释放细胞因…     

马兜铃酸I诱导人肾小管上皮细胞转分化的作用及机制

目的：探讨马兜铃酸Ｉ（Ａｒｉｓｔｏｌｏｃｈｉｓ ａｃｉｄ Ｉ,ＡＡＩ）在人类肾小管上皮细胞（ＨＫＣ）转分化中的可能作用,了解ＡＡＩ引起肾小管间质损害的机制。方法：将体外培养ＨＫＣ细胞分为无血清对照组（Ｃ组）和ＡＡＩ实验组两组,波形蛋白和α－平滑肌肌动蛋白（α－ｓｍｏｏｔｈ ｍｕｓｃｌｅ ａｃｔｉｎ,α－ＳＭＡ）表达的变化;应用流式细胞技术检测表达α－ＳＭＡ阳性（＋）的ＨＫＣ细胞百分率;采用免疫酶标     

单个核细胞趋化蛋白—1和马兜铃酸Ⅰ在诱导人类肾小管 …

目的 探讨单个核细胞趋化蛋白－１（ＭＣＰ－１）和马兜铃酸Ⅰ（ａｒｉｓｔｏｌｏｃｈｉｃ ａｃｉｄⅠ,ＡＡⅠ）及其两者的协同作用,对人类肾小管上皮细胞（ＨＫＣ）转分化的影响。方法 应用间接免疫荧光法测定ＨＫＣ细胞皮形蛋白（ｖｉｍｅｎｔｉｎ）、α－平滑肌肌动蛋白（α－ｓｍｏｏｔｈ ｍｕｓｃｌｅ ａｃｔｉｎ,α－ＳＭＡ）及角蛋白（ｃｙｔｏｃｒｅａｔｉｎ）的表达;应用流式细胞技术测定表达α－ＳＭＡ＾（＋）Ｈ     

HBV.CP—β—IFN真核表达载体的构建及鉴定

目的 扩增ＨＢＶ基因Ｃ区启动子,将其与β－干扰素基因进行连接,以构建真核表达载体,为下一步研究表达打下基础。方法 ＰＣＲ方法扩增ＨＢＶ基因Ｃ区启动子,产物经ＤＮＡ自动测序正确后,与表达干扰素的ｐ３．１ｃＤＮＡ（＋）－β－ＩＦＮ质粒进行粘端连接,并对构建真核表达载体进行限制性片段长度多态性（ＲＦＬＰ）分析。结果 扩增出ＨＢＶ,ＣＰ,序列与报告资料基本一致;与ｐ３．１ｃＤＮＡ（＋）－β－ＩＦＮ真核表达载体。     

小鼠高低转移性肝癌3号染色体微卫星不稳定性的研究

为探讨微卫星不稳定性（ｍｉｃｒｏ－ｓａｔｅｌｌｉｔｅ ｉｎｓｔａｂｉｌｉｔｙ，ＭＳＩ）与肝癌发生及转移的关系，我们应用微卫星多态性标记对小鼠高、低转移性肝癌细胞系ＭＳＩ进行了研究。 １．材料与方法：（１）标本收集：小鼠高、低转移性肝癌细胞系Ｈｃａ／１６Ａ３－Ｆ（Ｆ）和Ｈｃａ／Ａ２－Ｐ（Ｐ）由大连医科大学病理学教研室凌茂英教授惠赠，ＳＰＦ级Ｃ３Ｈ小鼠购自上海西普尔－必凯实验动物有限公司。（２）基因组ＤＮＡ的提取：采用常规蛋白酶Ｋ消化，苯酚－氯仿－异戊醇抽提基因组ＤＮＡ，另取正常Ｃ３Ｈ小鼠肝组织作对照…     

慢性重型肝炎患者外周血单个核细胞内干扰素和白细胞介素的表达及意义

目的探讨慢性重型肝炎（ＣＳＨ）病人外用血单个核细胞（ＰＢＭＣ）内干扰素－γ（ＩＦＮ－γ）及白细胞介素－４（ＩＬ－４）的表达及其临床意义。方法常规分离ＰＢＭＣ,在ＰＭＡ、Ｉｏｎｏｍｙｃｉｎ、Ｍｏｎｅｎｓｉｎ的刺激下,采用流式细胞术（ＦＡＣＳ）,对１７例ＣＳＨ患者及１９例正常健康者ＣＤ４＋Ｔ细胞内ＩＦＮ－γ和ＩＬ－４的表达进行分析,并应用荧光定量聚合酶链反应检测ＨＢＶ ＤＮＡ含量。结果 ＣＤ４＋Ｔｈ１、 Ｔｈ２细胞在ＣＳＨ组分别为７．２％—２６．３％（平均１５％）和０、ｌ％—１０．９％（平均２．０％）,正常对照组则分别为２．２％—１１．９％（平均５．９％）和０．４％—３．９％（平均２．２％）;ＣＤ４＋Ｔｈ１细胞百分数两组间差异有显著意义（Ｐ＜０．０１）。荧光定量ＰＣＲ结果表明ＣＳＨ组中１３例ＨＢＶ　ＤＮＡ阳性,其ＨＢＶ ＤＮＡ的含量与ＩＦＮ－γ表达细胞百分数呈负相关。结论 Ｔｈ１细胞与肝脏的炎症活动明显相关,ＩＦＮ－γ的表达对ＨＢＶ复制可能具有一定的影响。     

氧化应激在肝星状细胞活化中的作用

肝纤维化是肝脏对各种慢性损伤的一种修复应答反应，其病理中心环节是肝星状细胞（ｈｅｐａｔｉｃ ｓｔｅｌｌａｔｅ　ｃｅｌｌ，ＨＳＣ）由静止状态转变为活化状态，成为肝纤维化形成的细胞学基础。ＨＳＣ的活化具体表现在：（１）细胞体积增大，伸出伪足，含维生素Ａ的脂滴减少，表型向肌成纤维细胞样细胞（ｍｙｏｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ—ｌｉｋｅ ｃｅｌｌ）转化。（２）细胞获得增殖能力。（３）纤维化能力增强，大量生成细胞外基质。（４）表达平滑肌细胞骨架蛋白如α－平滑Ｌ动蛋白。许多因素如炎性因子、细胞外基质的改变、生长因子以…     

人类HLA—B7可诱导启动子调控IRES连接的人TNFα和IFN？…

目的：为增强肿瘤细胞表面ＭＨＣＩ类分子表达，并调动免疫系统更有效地抑制和杀伤肿瘤细胞，构建在ＨＬＡ－Ｂ７启动子调控下，ＩＲＥＳ连接的人ＴＮＦα和ＩＦＮβ基因的重组逆转录病毒载体，方法与结果：将ＴＮＦαｃＤＮＡ克隆入ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔｓｋ（＋）中，改换酶切位点后定向克隆入含ＨＬＡ－Ｂ７启动子的质粒中，构建成ｐＧＬ３Ｂ７ＴＮＦ。ＩＦＮβｃＤＮＡ经定向插入ｐＧＥＭ－７Ｚｆ（＋）改换酶切点切下，定向克     

生长激素-胰岛素样生长因子轴与肝脏疾病

生长激素（ｇｒｏｗｔｈ ｈｏｒｍｏｎｅ, ＧＨ）是在促生长激素释放素及生长抑素的作用下,由腺垂体嗜酸细胞分泌的一种单链多肽蛋白质。肝脏是体内ＧＨ作用主要的靶器官,ＧＨ调节肝脏合成与分泌胰岛素样生长因子－１（Ｉｎｓｕｌｉｎ ｌｉｋｅ ｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ－１, ＩＧＦ－１）、 ＧＨ结合蛋白（ＧＨＢＰ）、ＩＧＦ－１结合蛋白、酸不稳定蛋白亚单位（Ａｃｉｄ－ｌａｂｉｌｅ ｓｕｂｕｎｉｔ, ＡＬＳ）等。因此,将ＧＨ－肝脏－ＩＧＦ－１称为生长激素、胰岛素样生长因子轴,肝脏是这个轴的中枢。我们就ＧＨ－ＩＧＦ轴的生…     

HCV和HIV-1合并感染标本中HCV基因分型

目的了解丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）和人类免疫缺陷病毒Ｉ型（ＨＩＶ－１）混合感染标本中ＨＣＶ基因型情况。方法采用了根据ＨＣＶ５′端非转译区基因组所设计的反相探针杂交测定方法（ＩＮＮＯＬｉＰＡ，ＨＣＶⅡ），对来自六个地区的１７份抗－ＨＣＶ和抗－ＨＩＶ－１双阳性标本进行ＨＣＶ基因型分型研究。结果在１７份标本中，７份（４１．１８％）为Ｉ（１ｂ）型病毒，５份（２９．４１％）为Ⅱ（２ａ／２ｃ）型病毒，５份（２９．４１％）为Ｉ型（１ｂ）和Ⅱ（２ａ／２ｃ）混合型病毒。结论发现ＨＣＶ与ＨＩＶ－１合并感染标本中存在Ｉ（１ｂ）型、Ⅱ（２ａ／２ｃ）型以及Ｉ（１ｂ）型与Ⅱ（２ａ／２ｃ）型混合型ＨＣＶ。值得注意的是对α－干扰素治疗不敏感并且较易趋于导致严重的慢性肝炎、肝硬化和肝细胞癌的Ⅱ型ＨＣＶ感染的比率占７０．５８％（１２／１７）。     

干扰素α抗肝纤维化的实验研究

我们研究ＩＦＮα对肝纤维化ＥＣＭ、ＴＧＦβ及肝脏病理的影响，探讨ＩＦＮα抗肝纤维化的作用机理。 一、材料与方法 １．动物模型的建立：ＳＤ大鼠６３只，体重２００ｇ左右，随机分为正常对照组（ａ组）、模型对照组（ｂ组）、干扰素治疗组（ｃ组），各２１只。其中ｂ组及ｃ组采用皮下注射４０％ＣＣｌ４（用精制橄榄油配制）３ｍｌ／ｋｇ，每３日１次，首剂加倍，共１２周，诱导肝纤维化［１］。ａ组注射等剂量的精制橄榄油，ｃ组隔日１次皮下注射ＩＦＮα（沈阳三生药业有限公司提供）５万单位。ａ、ｂ、ｃ三组分别于早期（３周），中…     

重组体pCD—HCV1诱发小鼠免疫反应的研究

目的探讨丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）基因重组体诱发小鼠免疫反应。方法将编码Ⅱ型ＨＣＶ结构蛋白的基因片段Ｃ、Ｅ１和大部分Ｅ２插入到真核细胞表达载体ｐＣＤＳＲα１中,构建成重组体ｐＣＤＨＣＶ１。经肌内注射将此重组体免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠。结果ｐＣＤＨＣＶ１（１００μｇ／只,ｎ＝１２）３～４次接种小鼠后,血清抗体水平达０．７１～０．７７（Ａ值,下同）,空载体ｐＣＤＳＲα１免疫鼠（ｎ＝８）,血清抗体阴性;对其中８只免疫鼠持续检测１８周,未见抗体水平有下降趋势（０．６８～０．７５）。重组体ｐＣＤＨＣＶ１免疫鼠（ｎ＝１２）的脾细胞对ＨＣＶ合成肽ＣＰ９、基因重组抗原Ｃ、Ｅ１刺激后,均出现增殖反应（ｃｐｍ）,ＳＩ分别为４．１４±０．９,３．９８±１．６,４．０２±１．２,与ｐＣＤＳＲα１免疫鼠（ｎ＝８）相比,差异有显著性（Ｐ＜０．００１）。结论构建的ＨＣＶＤＮＡ重组体可诱发Ｂａｌｂ／ｃ小鼠产生免疫反应。     

乙型病毒S基因单独和与白细胞介素—12基因联合免疫小鼠诱生的体液免疫应

以ＰＣＲ技术扩增得到乙肝病毒表面抗原的编码基因,构建Ｓ基因真核表达载体ｐｃＤＮＡ３．１（＋）－Ｓ。以ＰＣＲ方法扩增得到小鼠白细胞介素－１２的全长ｃＤＮＡ序列,构建真核表达载体ｐｃＤＮＡ３－ＩＬ－１２（以下简称ＩＬ－１２）。以Ｓ和Ｓ＋ＩＬ－１２经肌肉注射免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠,以空载体ｐｃＤＮＡ３．１（＋为阴性对照,血源ＨＢｓＡｇ蛋白为阳性对照,用ＥＬＩＳＡ方法检测下同时间免疫小鼠血清中的抗０－ＨＢｓ     

细胞因子对树突状细胞抗肝癌作用的影响

目的研究人血树突状细胞（ＤＣ）和细胞因子ＴＮＦ,ＧＭＣＳＦ或ＩＦＮγ联合ＤＣ对淋巴因子和ＰＨＡ激活的杀伤细胞（ＬＰＡＫ细胞）体外杀伤人肝癌细胞株ＢＥＬ７４０２的影响．方法实验分为Ｌ组（ＬＰＡＫ）,Ｄ组（ＬＰＡＫ＋ＤＣ）,Ｔ１组（ＬＰＡＫ＋ＤＣ＋ＴＮＦ５０００ｋＵ／Ｌ）,Ｔ２组（ＬＰＡＫ＋ＤＣ＋ＴＮＦ５００ｋＵ／Ｌ）,Ｇ１组（ＬＰＡＫ＋ＤＣ＋ＧＭ－ＣＳＦ５００ｋＵ／Ｌ）,Ｇ２组（ＬＰＡＫ＋ＤＣ＋ＧＭ－ＣＳＦ１００ｋＵ／Ｌ）,Ｉ１组（ＬＰＡＫ＋ＤＣ＋ＩＦＮγ５００ｋＵ／Ｌ）和Ｉ２组（ＬＰＡＫ＋ＤＣ＋ＩＦＮγ１００ｋＵ／Ｌ）．每组效靶细胞比分别采用５∶１和１０∶１两种．培养４８ｈ后用中性红比色法检测细胞毒活性．结果Ｌ,Ｄ,Ｔ２和Ｔ１组的细胞毒活性依次增强,各组间差异有显著性（Ｐ＜００１）．Ｇ１和Ｇ２组均高于Ｄ组（Ｐ＜００１）,但Ｇ１,Ｇ２组间差异无显著性．Ｉ１,Ｉ２组与Ｄ组相比,也无显著性差异．随效靶比增加,各组细胞毒活性均相应增强．结论ＤＣ能增强ＬＰＡＫ细胞对肝癌细胞ＢＥＬ７４０２的细胞毒活性;ＴＮＦ或ＧＭＣＳＦ与ＤＣ联用,两者有协同作用;但与ＩＦＮγ联用,则无进一步增强作用     

促生长素释放激素及细胞因子对垂体促生长素基因表达的 …

目的 研究人促生长素释放激素（ｈＳＲＨ）、白细胞介素－１β（ＩＬ－１β）、白细胞介素－６（ＩＬ－６）和肿瘤坏死因子－ａ（ＴＮＦ－ａ）对垂体前叶促生长素细胞中生和素基表达的调控作用及其与Ｐｉｔ－１的关系。方法 将含有人促生长素基因启动子和萤光素酶报告基因的融合基历表达质粒（ｐＧＬ２－ＧＨ－Ｌｕｃ）单独转染或与人Ｐｉｔ－１基因表达质粒（ＰｃＤＮＡ－Ｐｉｔ－ｌｃＤＮＡ）共转染于大鼠ＧＨ３细胞中，体外观察     

肝脏细胞胶原合成及其I型胶原mRNA的稳定性

目的：为了明确贮脂细胞（ＦａｔＳｔｏｒｉｎｇＣｅｌｌ，ＦＳＣ）和肝细胞（Ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ，ＨＣ）在肝纤维化胶原合成中的作用。方法：本文在分离培养大鼠ＦＳＣ和ＨＣ的基础上，用＾３Ｈ－Ｐｒｏｌｉｎｅ掺入结合胶原酶消化法和定量斑点杂交法，分析了体外培养的ＦＳＣ和ＨＣ胶原和非胶原蛋白的合成以及Ｉ型前胶原ｍＲＮＡ的稳定性。结果：发现ＦＳＣ合成胶原蛋白的能力较ＨＣ强，而非胶原蛋白则与此相反ＦＳＣ中Ｉ型前胶     

反转录—聚合酶链反应法研究肝星状细胞与细胞间粘附分子—1表达？…

目的 研究肝星状细胞（ＨＳＣ）与细胞间粘附分子－１（ＩＣＡＭ－１）表达的关系。方法 用链酶蛋白和原酶原位灌流,Ｎｙｃｏｄｅｎｚ密度梯度离心分别分离正常大鼠及四氯化碳实验性大鼠肝纤维化模型中的ＨＳＣ,并进行体外培养,应用免疫组织化学方法和反转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术分别观察不同培养时期的ＨＳＣ、正常及造模型肝组织中ＨＳＣＲ ＩＣＡＭ－１的表达。结果 正常大鼠新分离的ＨＳＣ中,ＩＣＡＭ－１     

IV型胶原与慢性肝病

ＩＶ型胶原（ＩＶ－Ｃ）是基底膜的主要胶原成份，ＩＶ－Ｃ分子绝大多数是由两条α１（ＩＶ）链与一条α２（ＩＶ）链构成的异三聚异三聚体结构，每个ＩＶ－Ｃ分子可分成四个组成部分，即两个三螺旋区（７Ｓ区或称次三螺旋区与主三螺旋区）及两个非胶原区（ＮＣ１与ＮＣ２）在血表中唁要存在形式为７Ｓ段ＮＣ１段与主三螺旋区三种，用免疫学方法测定这三种片段均可较好反映肝细胞损伤及肝纤维化程度，对肝病及早期肝纤维化诊断与活动     

TSH受体抗体对甲状腺细胞功能的调控及途径

ＴＳＨ受体抗体（ＴＳＡｂ）是Ｇｒａｖｅｓ病的主要病因子，与甲状腺细胞上ＴＳＨ受体结合后，通过不同的信号途径调节甲状腺细胞生长，分化和激素合成及分泌，参与ＴＳＡｂ调节作用的信号途径包括腺苷酸环化酶（ＡＣ）－ｃＡＭＰ，磷脂酶Ｃ－Ｃａ＾２＋和磷脂酶Ａ２－ＡＡ等，其中ＡＣ－ｃＡＭＰ和磷脂酶Ａ２－ＡＡ参与甲状腺细胞生长的调节，磷脂酶Ｃ－Ｃａ＾２＋与甲状腺激素合成密切相关，通过激活不同的信号途径来区分ＴＳＡｂ     

γ-干扰素对肝星状细胞表达α1(I)mRNA信号传递途径的影响

探讨ＩＦＮ－ｒ对ＨＳＣ前胶原基因表达的信号传递途径影响。 一、材料与方法 １．鼠ａ１（Ｉ）ＣＤＮＡ、ａ１（ＩＩＩ）ｃＤＮＡ及磷酸一３一甘油醛脱氢酶（ＧＡＰ）ｃＤＮＡ探针制备及标记：小鼠ａ１（Ｉ）及ａ１（ＩＩＩ）胶原ｃＤＮＡ重组质粒和用做内标准的ＧＡＰｃＤＮＡ克隆由ＤｅＣｒｕｍｂｒｕｇｇｈｅ提供,插入片断 ａ１（ Ｉ）为 ３２１ｂｐ． ａ１（ＩＩＩ）为 １ｋｂ,ＧＰＡ为 １．２ ｋｂ。按地高辛标记的 ＤＮＡ检测试剂盒（德国宝林曼）说明操作,标记探针浓度分别为 ５２ｎｇ／ｍｌ、 ４８ｎｇ／ｍｌ和５４ ｎｇ／ｍｌ…