兔膝骨关节炎关节软骨细胞凋亡的实验研究——超微结构观察

目的 为探讨骨关节炎关节软骨退变的发生机理。方法 按照Hulth法建立兔膝关节炎模型实验组，12只实验兔随机分为2组，每组6只，自身健侧做实验对照组，分别为建模后2周组和4周组后取材，分别制作光镜电镜标本进行系统观察研究。结果 不同时期的骨关节炎关节软骨有程度不一的软骨细胞凋亡，以4周组最为显著，特别是在电镜下软骨细胞凋亡的形态学改变更具特征、更为典型。结论 (1)膝骨关节炎的关节软骨细胞退变时，软骨细胞数目的减少有软骨细胞凋亡的参与。(2)关节软骨退变的程度与软骨细胞数目的减少即与软骨细胞凋亡的程度有关。(3)形态学的特征性表现可作为判断软骨细胞是否发生凋亡的“金指标”。     

骨关节炎软骨细胞凋亡的研究进展

近年来研究表明,软骨细胞过度凋亡在OA的发病中具有重要作用.在OA中,软骨细胞凋亡多通过NO途径和Fas途径发生,并且受相关癌基因表达的影响.阐明软骨细胞凋亡在OA的发病机制中的作用,将有助于OA的防治.     

组织工程化关节软骨细胞凋亡的研究

目的 观察离心管构建的组织工程骨细胞亡及细胞增殖情况。方法 对离心管构建3周的组织工程骨进行透射电镜，流式细胞仪检测和^3H-TdR掺入测定，与3周龄兔关节软骨对照。结果 透射电镜检查组织工程软骨在5％左右的细胞凋亡，正常关节软骨未见明显的细胞凋亡；流式细胞仪显示软骨细胞有8．5％左右的亚二倍体细胞，正常关节软骨在2．4％左右的亚二倍体细胞。^3H-TdR掺入测定显示细胞增殖能力较正常关节软骨明显增强。结论 培养3周的组织工程软骨细胞凋亡与细胞增殖均较正常软骨增强。     

骨碎补对兔膝骨关节炎关节软骨细胞凋亡相关因子作用实验研究

目的：采用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测方法,观察骨碎补对实验性兔膝骨关节炎软骨细胞凋亡的影响并进行理论分析。方法：将24只成年新西兰大耳白兔,随机分为6组,空白组6只。模型组6只,治疗组（骨碎补组）6只,对照组（维固力组）6只。兔左后肢伸直位管型石膏固定6周得到兔膝OA的模型。用药4周后,以耳缘静脉空气栓塞法处死各组动物取下每只家兔左后肢股骨髁,取下的关节软骨用于RT—PCR检测。采用SPSS13．0软件包对RT-PCR结果进行方差分析和Pearson相关分析,P〈0．05有统计学意义。结果：MMP3mRNA、BAXmRNA：模型组较空白组的表达水平明显上升,差异有显著性（P〈0．05）;对照组较模型组的表达水平有所下降,差异有显著性（P〈0．05）;治疗组较模型组的表达水平明显下降,差异有显著性（P〈0．05）;治疗组较对照组的表达差异无显著性。bcl-2mRNA：模型组较空白组的表达水平明显下降,差异有显著性（P〈0．05）;对照组较模型组的表达水平有所上升,差异有显著性（P〈0．05）;治疗组较模型组的表达水平明显上升,差异有显著性（P〈0．05）;治疗组较对照组的表达差异无显著性。结论：单味中药骨碎补对防治OA有重要作用。     

骨关节炎软骨细胞凋亡率的实验研究

目的检测和分析髋关节骨关节炎中软骨损伤轻重部位的软骨细胞凋亡率。方法关节软骨组织切片分别进行HE染色，番红O-固绿染色，Mankin评分评价软骨损伤程度，TUNEL方法检测软骨细胞凋亡率。结果关节软骨损伤重的部位的Mankin评分值及软骨细胞凋亡率均高于软骨损伤轻的部位。结论软骨细胞凋亡率与骨关节炎软骨损伤程度相一致，说明细胞凋亡可能是骨关节炎软骨损伤的机制之一。     

实验性骨关节炎超微结构研究

在32只成年家兔中,经手术切断前交叉韧带及内侧副韧带,造成膝关节骨关节炎,透射电镜观察发现在骨关节炎发展过程中,关节软骨的基质及软骨细胞发生变化。基质变化包括胶原纤丝的直径及排列方面的改变以及蛋白聚糖的改变,软骨细胞改变包括细胞增殖、退变以及形态方面的改变。所有上述变化随关节软骨的不同部位及发病的不同时期而异。     

尼古丁抑制MIA诱导的骨关节炎软骨细胞凋亡

目的探讨尼古丁抑制碘乙酸钠(MIA)诱导的骨关节炎软骨细胞凋亡。方法酶消化法分离大鼠原代软骨细胞,并用10-8,10-7,10-6,10-5mol/L尼古丁处理细胞48 h,随后实验分为5组,除正常组外,其余4组皆用4μM MIA处理24 h,并给予尼古丁。MTT法检测各组软骨细胞活力;Annexin V-FITC/PI流式双染细胞术检测各组软骨细胞凋亡;分光光度法检测各组软骨细胞中含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase 3)活性;Western blot分析磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)激活状况及下游靶分子Bax,Bcl-2的表达情况。结果 10-7,10-6mol/L尼古丁显著促进大鼠软骨细胞活力(P0.05),10-5mol/L尼古丁显著降低大鼠软骨细胞活力(P0.05),10-8mol/L尼古丁对大鼠软骨细胞活力无影响(P0.05)。10-8,10-7,10-6mol/L尼古丁能剂量依赖性的提高MIA诱导的大鼠软骨细胞活力,并抑制MIA诱导的大鼠软骨细胞凋亡及Caspase 3活性(P0.05);10-7,10-6mol/L尼古丁能提高PI3K表达及AKT磷酸化水平,并下调促Bax表达,上调Bcl-2表达(P0.05)。结论一定剂量尼古丁能显著的抑制MIA诱导的大鼠软骨细胞凋亡,可能与PI3K/AKT信号通路有关。     

骨性关节炎关节软骨细胞凋亡的研究进展

随着社会人口的老龄化 ,骨性关节炎 (os teoarthritis,OA)发病率越来越高 ,危害越来越大。1 995年国际OA专题会议提出了OA的最新定义 :认为骨性关节炎是力学和生物学因素共同作用下导致软骨细胞、细胞外基质以及软骨下骨三者降解和合成正常偶联失衡的结果。既往对OA的研究 ,大多数着重于细胞外基质酶性降解和 /或合成新的基质受到抑制而导致软骨的破坏 ,很少注重软骨细胞生存或死亡在OA关节软骨降解中所起的作用。近年来 ,国内外许多学者对OA关节软骨组织学研究发现有软骨细胞减少 ,而软骨细胞凋亡在其中起到关键作用[1 ,2 ] 。1　OA…     

骨关节炎软骨细胞凋亡研究进展

随着社会人口老龄化,骨关节炎（Osteoarthritis,OA）发病率越来越高,已成为50岁以上男性无法参加工作的第二位原因,仅次于缺血性心脏病。OA的主要病理特征为关节软骨细胞凋亡和细胞外基质的进行性降解,以往研究大多侧重于基质酶性降解和／或合成新的基质受到抑制而导致软骨的破坏,很少注重软骨细胞生存或死亡在OA关节软骨降解过程中所起的作用。近年来研究显示,正常的软骨细胞是维持细胞外基质稳定的必要条件,细胞凋亡是OA关节软骨退变的关键因素。现就软骨细胞凋亡与OA的关系作一综述。     

腰痛舒胶囊对一氧化氮诱导的软骨细胞凋亡的影响

目的　观察腰痛舒胶囊对一氧化氮在体外诱导的兔软骨细胞凋亡的影响。方法　体外培养的兔软骨细胞 ,分别加入硝普钠 (SNP)培养 12、2 4、4 8h ,用透射电镜和流式细胞仪观察软骨细胞凋亡的变化 ,并以不同剂量腰痛舒胶囊含药血清加入NO诱导的软骨细胞凋亡体系培养 2 4h ,采用annexinV PI方法检测凋亡情况。结果　在体外培养兔软骨细胞加入硝普钠 2 4h ,流式细胞仪检测凋亡率为 (74 0 5± 6 6 8) % ,对照组为 (3 15± 0 76 ) % (P <0 0 1) ;透射电镜可见较典型凋亡细胞形态改变 ,加入不同剂量腰痛舒胶囊含药血清 ,其凋亡率明显下降 ,并以高剂量最为显著。结论　硝普钠在体外能诱导软骨细胞凋亡 ;高剂量腰痛舒含药血清能明显降低NO诱导的软骨细胞凋亡 ,提示腰痛舒胶囊能抑制软骨细胞凋亡。     

单侧髁突切除对非手术侧髁突软骨细胞增殖与凋亡的影响

目的研究兔单侧髁突切除对非手术侧髁突软骨细胞增殖和凋亡活性的影响.方法 24只5～6月龄的日本大耳白兔被随机分为两组：空白对照组和手术组.手术组通过手术切除右侧髁突建立动物模型,分别于术后2月、4月的时间处死动物,取其左侧（非手术侧）颞颌关节,采用免疫组化染色和TUNEL染色,分别观察非手术侧髁突软骨中增殖细胞核抗原（PCNA）及凋亡细胞的表达和分布.结果免疫组化和TUNEL染色显示与同时间段空白对照组相比,无论是手术组（单侧髁突切除）术后2月,还是手术组术后4月,非手术侧髁突软骨PCNA阳性细胞表达量均降低;而TUNEL染色阳性细胞数增高（P〈0.05）;与手术组术后2月相比,手术组术后4月PCNA阳性细胞表达量降低;而TUNEL染色阳性细胞数增高（P〈0.05）.结论单侧髁突切除可导致非手术侧髁突软骨细胞增殖能力下降,凋亡细胞数量增加.     

兔下颌骨髁状突软骨细胞体外培养及生物学特性的研究

为探讨兔下颌骨髁状突软骨细胞的体外培养方法及其生物学特性，用胰酶及胶原酶联合消化法获取软骨细胞，并在ＤＭＥＭ培养基中进行原代及传代培养；通过形态学观察及免疫组织化学染色对软骨细胞的贴壁率、生长曲线及表型等细胞生物学特性进行了研究。结果：所获软骨细胞主呈多角形，第３代软骨细胞１２ｈ贴壁率达９５％，软骨细胞倍增时间约５５．１ｈ，６代以内软骨细胞的Ⅱ型胶原蛋白稳定表达。结果表明：本方法获软骨细胞具有稳定     

软骨细胞三种凋亡模型的建立

为了观察药物对骨关节炎中软骨细胞凋亡的影响，建立了软骨细胞三种凋亡模型。将硝普钠(SNP)、全反式维甲酸(ATRA)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)分别加入软骨细胞培养体系，建立三种不同药物诱导的软骨细胞凋亡模型，采用Annexin v／PI双参数法以及透射电镜对软骨细胞凋亡进行定量、定性检测。在兔软骨细胞培养体系中分别加入2mmol／L SNP，10^-4mol／L ATRA24h后，在人胚胎软骨细胞培养体系中加入30μg／L人TNF-α24h后，均可成功建立软骨细胞凋亡模型。提示硝普钠、全反式维甲酸、肿瘤坏死因子-α加入软骨细胞培养体系中，可建立软骨细胞凋亡模型。     

不同频率的周期性压力对兔软骨细胞影响的生物学研究

目的：通过观察不同频率的周期性压力对兔软骨细胞增殖及整合素α1β1分泌量的影响,研究不同频率的力学刺激对软骨细胞产生的生物学影响。方法：取兔四肢关节的软骨细胞,在体外进行培养。表型稳定的第3代细胞进行研究,设置常压培养A组和周期性压力B组,并将B组在压力为172kPa按照加压频率分组,加压频率B1组为0．2Hz,B两组0．5Hz ,B3组1Hz,B4组2Hz,B5组5Hz。 B组每天干预2h,连续干预3d。检测A和B组软骨细胞增殖情况和整合素α1β1的含量。结果：OD值A组为1．08±0．13,B1组为1．19±0．11,B两组为1．23±0．08,B3组为1．35±0．06,B4组为1．45±0．09,B5组为1．37±0．12。加压各组与对照组比较OD值升高,差异有统计学意义。 B组各组间差异有统计学意义,峰值出现在B4组。 A组整合素α1β1水平为3．02±0．26pg/mL,B1组为3．28±0．19pg/mL, B两组为3．43±0．11pg/mL,B3组为3．77±0．24pg/mL,B4组为4．01±00．9 pg/mL,B5组为3．94±0．13pg/mL。加压各组与对照组比较整合素α1β1含量均有升高,差异有统计学意义差异（ P＜0．05）。 B组各组间整合素差异有统计学意义,峰值出现在B4组。结论：相同大小（172kPa）不同频率的周期性压力刺激兔软骨细胞,均能促进软骨细胞增殖和增加整合素含量的作用,但并非频率越高作用越强。本实验中以2Hz频率的周期性压力作用最强。     

脱氢表雄酮对白细胞介素-1β诱导的人骨关节炎软骨细胞退变的影响

目的:研究脱氢表雄酮(DHEA)对白细胞介素(IL-1β)诱导的人骨关节炎软骨细胞退变的影响。方法:分离人骨关节炎软骨细胞传代培养并加入IL-1β,分别将50,25和12.5μmol/L的DHEA作用于该软骨细胞。其后检测细胞增殖、上清液糖胺聚糖(GAG)和NO含量、细胞凋亡以及质金属蛋白酶-1及其组织抑制剂-1(MMP-1和TIMP-1)含量。结果:50,25和12.5μmol/L的DHEA均能促进软骨细胞增殖和GAG合成(均P<0.01),抑制IL-1β诱导的软骨细胞凋亡(均P<0.01)以及MMP-1合成(均P<0.01);50和25μmol/L的DHEA可抑制IL-1β诱导的软骨细胞NO形成(均P<0.01),还可抑制软骨细胞自身的凋亡(均P<0.01)和MMP-1合成(均P<0.05),其效应呈浓度依赖性;50μmol/L的DHEA还可改善IL-1β对骨关节炎软骨细胞TIMP-1合成的抑制作用(P<0.05)。结论:脱氢表雄酮能在一定程度上对抗IL-1β诱导的人骨关节炎软骨细胞退变。     

刺络放血法对兔膝骨性关节炎软骨细胞凋亡的影响

目的:探讨刺络放血法对兔膝骨性关节炎软骨细胞凋亡的影响,为临床应用提供一定的科学理论依据。方法:6月龄日本大耳白兔46只按随机数字表法分为空白组、模型组、针刺组、刺络放血组共四组,其中空白组10只,其余三组各12只。采用左后肢膝关节伸直位固定方法造模,造模成功后第2天开始,刺络放血组行刺络放血治疗,针刺组局部针刺治疗,隔日1次,一周治疗3次,共治疗3周;模型组造模成功后2天解除制动,不做治疗,正常饲养;空白组不做任何处理,正常饲养。治疗结束后第2天取材,TUNEL法检测软骨细胞凋亡,计算软骨细胞凋亡指数。结果:经治疗后,针刺组和刺络放血组分别与空白组、模型组比较有显著性差异(P0.05),刺络放血组和针刺组之间比较无显著性差异(P0.05),刺络放血组凋亡指数低于针刺组。结论:刺络放血法能够抑制兔膝骨性关节炎软骨细胞的过度凋亡。     

压应力下兔软骨细胞凋亡的实验性研究

目的 观察持续及间歇压应力下关节软骨的组织学变化、软骨细胞的凋亡,探讨压应力下软骨细胞凋亡和关节软骨退变的相互关系及压应力下软骨细胞凋亡的相关机制.方法 在活体新西兰大白兔左后肢的髌股关节间造成持续及间歇的不同压应力模型,60只新西兰大白兔,随机分为7组:A组,对照组;B组,持续伸直位;C组,持续屈曲80°位;D组,持续屈曲140°位;B1组,间歇伸直位;C1,间歇屈曲80°位;D1组,间歇屈曲140°位.持续组于1周、2周、4周、6周、8周,间歇组于4周、8周、12周先进行髌股关节间压应力测试,然后取材利用HE染色、甲苯胺蓝染色、TUNEL法等方法观察关节软骨细胞及关节软骨的组织学变化.结果 关节间持续及间歇的较高压应力可以引起关节软骨细胞凋亡并伴有关节软骨退变;持续的压应力引起的变化大于间歇的压应力;较长时间的关节制动也可以引起上述变化.结论 关节间持续及间歇的较高压应力可以引起软骨细胞凋亡,并继而出现软骨退变.     

鹿茸多肽对兔软骨细胞体外凋亡的影响

通过观察鹿茸多肽对白细胞介素-1β体外诱导软骨细胞凋亡的影响,以优化软骨组织工程的种子细胞。取新西兰大白兔关节软骨,用0．25％胰蛋白酶和0．2％Ⅱ型胶原酶消化后获得兔软骨细胞,并于体外培养。将第3代软骨细胞随机分成A姐(空白对照组),B组(IL-1β组),C组(鹿茸多肽组),D组(TGF-β1组)。采用透射电镜观察细胞形态,用Annexin V法检测细胞凋亡率,RT-PCR技术分析Caspase-3 mRNA表达水平,ELISA法检测Caspase-3蛋白酶活性。结果显示B组24 h后细胞核内染色质开始呈块状凝集,分布于核膜下,核膜不规则;48 h后细胞核内染色质凝集加剧;72h后部分细胞内的核碎片凝集成凋亡小体;各时间点C、D 组细胞结构改变相对滞后、且数量较少,而A组细胞结构几乎无明显改变。各时间点B组细胞凋亡率、 Caspase-3 mRNA表达及蛋白酶活性逐渐增高,与A组比较差异有统计学意义(P<0．01);C、D组与B组比较则逐渐下降,且差异有统计学意义(P<0．01)。说明Caspase-3参与细胞凋亡,鹿茸多肽通过减少Caspase-3 mRNA表达,并抑制其蛋白酶活性,来阻止或逆转软骨细胞凋亡。     

一氧化氮对体外培养大鼠软骨细胞Caspase-3及PKC-α表达的影响

目的:研究NO对大鼠软骨细胞Caspase-3及蛋白激酶C(PKC)-α(PKC-α)表达的影响,探讨NO诱导软骨凋亡的机制.方法:软骨细胞用不同浓度的NO处理24 h后,用TUNEL、MTT法和流式细胞术检测细胞凋亡和细胞活力.Western blot检测Caspase-3及PKC-α的表达.结果:NO处理后软骨细胞TUNEL阳性率明显增高,细胞核片段损害明显,Caspase-3的表达升高,同时抑制PKC-α的表达.结论:NO诱导的软骨细胞凋亡可能通过促进Caspase-3表达,作用机制与抑制PKC-α有关.