促酰化蛋白对3T3-L1脂肪细胞炎性反应的影响

目的 观察3T3-L1成熟脂肪细胞胰岛素抵抗状态下促酰化蛋白(acylation stimulating protein,ASP)对炎性因子(IL-6、MCP-1、MIP-1α和TNF-α)分泌水平以及炎性信号因子(JNK1、IKKβ)蛋白表达的影响。 方法 3T3-L1成熟脂肪细胞分别给予不同浓度(0、0.125、0.5、1.0mmol/L)油酸(C18∶ 1)或棕榈酸(C16∶ 0)温育过夜,诱导胰岛素抵抗,在此基础上给予ASP刺激,用ELISA测定IL-6、MCP-1、 MIP-1α和TNF-α 4种细胞炎性因子的分泌水平,采用Western blot法检测JNK1和KKβ蛋白表达。 结果 油酸诱导的胰岛素抵抗下,ASP刺激的脂肪细胞IL-6和MCP-1的分泌水平轻度下调,但差异无统计学意义;而ASP刺激的脂肪细胞MIP-1α和TNF-α的分泌水平显著下降,MIP-1α和TNF-α的分泌分别下调57%(P<0.05)和48%(P<0.05)(1.0mmol/L油酸组)。棕榈酸诱导的胰岛素抵抗下,ASP刺激的脂肪细胞IL-6分泌水平呈下降趋势,最大下调50% IL-6(P<0.05);22% MCP-1(P>0.05),35% MIP-1α(P>0.05)和38%TNF-α(P>0.05)的分泌。高浓度(1.0mmol/L) 油酸和棕榈酸诱导的脂肪细胞胰岛素抵抗状态下,ASP刺激的炎性信号蛋白JNK1蛋白表达显著下调,分别为34%(P<0.05)和54%(P<0.01)。但IKKβ蛋白表达差异无统计学意义。 结论 在脂肪酸诱导的脂肪细胞胰岛素抵抗状态下,ASP在一定程度上调节炎性因子分泌,参与调节JNK、IKK/NF-κB信号通路中重要信号分子的功能,ASP参与了脂肪细胞脂毒性-炎性反应的调控。     

清润方对糖尿病大鼠肝脏PI3K/AKT/mTOR信号的影响

目的 研究清润方对2型糖尿病胰岛素抵抗大鼠PI₃K/AKT/mTOR信号通路的影响。方法 采用脂肪乳灌胃和腹腔注射链脲佐菌素（streptozotocin,STZ）建立2型糖尿病胰岛素抵抗模型。将大鼠随机分成空白对照组、模型组、清润方大剂量组[11.2g/（kg·d）]、清润方中剂量组[5.6g/（kg·d）]、清润方小剂量组[2.8g/（kg·d）]、二甲双胍组[250mg/（kg·d）]。各组均灌胃给药。每天1次,连续8周。干预后检测血清中血清总胆固醇（total cholesterol,TC）、甘油三酯（triglyceride,TG）、低密度脂蛋白（low density lipoprotein,LDL-C）和高密度脂蛋白（high density lipoprotein,HDL-C）,检测肝组织中p-AKT、p-PTEN及p70S6K的mRNA以及蛋白表达水平。结果 与模型组比较,清润方大剂量组和二甲双胍组的TC、TG和LDL-C降低,HDL-C升高（P<0.05）。清润方大剂量组的AKT和PTEN的mRNA表达升高（P<0.05）,p70S6K的mRNA表达下降（P<0.05）,与模型组比较,清润方大剂量组的p-AKT和p-PTEN的蛋白表达升高（P<0.05）,p-p70S6K的蛋白表达下降（P<0.05）。结论 清润方可能通过PI₃K/AKT/mTOR信号通路来改善胰岛素抵抗。     

熊果酸抑制AngⅡ诱导大鼠心肌细胞肥大实验研究

目的 探讨熊果酸（ursolic acid,UA）对血管紧张素Ⅱ（angiotensin Ⅱ,AngⅡ）诱导大鼠心肌细胞肥大的抑制作用及其可能机制。方法 按常规方法分离并培养新生大鼠心肌细胞。CCK-8法确定UA（2、4、8、16μmol/L）对心肌细胞的最佳作用浓度,利用AngⅡ诱导建立新生大鼠心肌细胞肥大模型。实验分对照组（control组）、AngⅡ组、UA干预组、LY294002（PI₃K/Akt通路抑制剂）干预组共4组。UA和LY294002均预处理心肌细胞30min。以心肌细胞表面积、β-肌球蛋白重链（β-MHC）mRNA和脑钠肽（BNP）mRNA表达作为心肌细胞肥大标志,同时使用蛋白免疫印迹法检测T-Akt（total Akt）和p-Akt（phospho-Akt）蛋白表达。结果 显微镜下观察各组心肌细胞生长良好。与control组相比,AngⅡ组和UA干预组大鼠心肌细胞表面积增加（P<0.05）,LY294002干预组心肌细胞表面积差异无统计学意义（P>0.05）;与AngⅡ组相比,UA干预组和LY294002干预组大鼠心肌细胞表面积减小（P<0.05）。与control组相比,AngⅡ组的p-Akt蛋白、BNP mRNA和β-MHC mRNA表达显著增加（P<0.05）;与AngⅡ组相比,UA干预组和LY294002干预组的p-Akt蛋白、BNP mRNA和β-MHC mRNA表达均降低（P<0.05）;UA干预组和LY294002干预组之间p-Akt蛋白、BNP mRNA和β-MHC mRNA表达均差异无统计学意义（P>0.05）;4个实验组间T-Akt蛋白水平差异无统计学意义（P>0.05）。结论 （1）AngⅡ诱导的新生大鼠心肌细胞肥大模型中,心肌细胞表面积增加,BNP mRNA和β-MHC mRNA表达升高,同时伴有p-Akt蛋白表达增加,提示PI₃K/Akt通路在AngⅡ致心肌细胞肥大中起重要作用。（2）UA能减轻AngⅡ诱导的大鼠心肌细胞肥大,使心肌细胞表面积减小,p-Akt蛋白、BNP mRNA和β-MHC mRNA表达减少,这与LY294002作用一致,提示UA可能是通过抑制PI₃K/Akt通路而发挥抗心肌肥大作用。     

胰岛素对高糖培养海马神经元凋亡及IRS/PI3K/AKT信号通路、Bcl-2与Bax蛋白表达的影响

目的 探讨胰岛素对高糖培养海马神经元的保护作用及其作用机制。方法 选择新生24h SD大鼠,取海马神经元进行原代培养,分为正常对照组（NC组）,高糖模型组（HG组）,实验组（RI组）,采用Tunel检测海马神经元的凋亡,Western blot法检测各组P-IRS、IRS1、P-AKT、AKT、Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果 与NC组相比,HG组海马神经元凋亡率显著增加（P<0.01）;与HG组相比,RI组凋亡率显著降低（P<0.01）。与NC组相比,HG组P-IRS、IRS1蛋白表达显著降低（P<0.05）;RI组P-IRS表达及P-IRS/IRS1显著升高（P<0.01）。与HG组相比,RI组P-IRS表达及P-IRS/IRS1显著升高（P<0.01）。与NC组相比,HG组AKT表达显著降低（P<0.01）;RI组P-AKT、AKT表达及P-AKT/AKT显著升高（P<0.01）。与HG组相比,RI组P-AKT、AKT表达及P-AKT/AKT显著升高（P<0.01）。与NC组相比,HG组Bcl-2、Bcl-2/Bax蛋白表达显著降低（P<0.01）;RI组Bcl-2、Bcl-2/Bax蛋白表达显著升高（P<0.01）,Bax蛋白表达显著降低（P<0.01）。与HG组相比,RI组Bcl-2、Bcl-2/Bax蛋白表达显著升高（P<0.01）,bax蛋白表达显著降低（P<0.01）。结论 胰岛素能够抑制高糖培养海马神经元的凋亡,其作用可能是通过活化IRS1/PI₃K/AKT信号通路,同时上调Bcl-2/Bax实现的。     

三氧化二砷联合苦参碱抑制K562细胞增殖及机制研究

目的 探讨三氧化二砷联合苦参碱对慢性髓系白血病细胞株K562增殖的影响及可能机制。方法 用不同浓度的三氧化二砷单药（0.75、1.5、3、6、8μmol/L）,苦参碱单药（0.5、0.75、1.0、1.25、1.5g/L）及三氧化二砷（3μmol/L）+苦参碱（0.75g/L）两药联合分别作用于K562细胞,CCK-8法测定细胞增殖抑制率;流式细胞术检测细胞周期,免疫印迹法（Westernblot法）检测cyclinD1、CDK4、p21蛋白表达的变化。结果 不同浓度苦参碱及三氧化二砷均可抑制K562细胞增殖,且随作用时间延长和浓度增加而明显（P<0.05）,两药联合应用后抑制作用更显著（P<0.05）;与对照组比较,苦参碱阻滞K562细胞于G₁期,三氧化二砷阻滞K562细胞于G₂期,苦参碱可增强三氧化二砷对K562细胞周期的阻滞作用;与单药组及对照组相比,两药联合后K562细胞p21蛋白表达水平上调（P<0.05）,cyclinD1、CDK4蛋白表达水平明显下降（P<0.05）。结论 苦参碱可增强三氧化二砷对K562细胞的增殖抑制作用,阻滞细胞于G₂期,其机制可能与p21蛋白表达增加及cyclinD1、CDK4蛋白表达减少相关。     

肝脏脂肪变对胰高血糖素受体的表达影响

目的 观察胰高血糖素受体（GCGR）在ob/ob小鼠肝组织以及肝癌细胞株HepG₂细胞脂肪变后表达变化。方法 分别检测10周龄的雄性ob/ob小鼠和同窝野生对照小鼠的体重、肝功、血糖、血脂以及胰岛素等指标,用荧光定量PCR方法、Western blot法和免疫组化分别检测两组鼠肝脏中gcgr基因、蛋白表达的差异以及定位情况。不同浓度油酸处理HepG₂细胞,油红O染色观察HepG₂细胞脂肪病变程度,QPCR法和Western blot法检测细胞gcgr mRNA和蛋白的表达变化。结果 GCGR广泛表达于多种组织,以肝脏表达较多,ob/ob小鼠呈现明显的脂肪肝性病变,且免疫组化结果发现,ob/ob小鼠与正常对照小鼠相比,肝脏中GCGR表达减少;mRNA表达水平分别为0.709±0.174 vs 1.000±0.000,与对照组比较,差异有统计学意义（P<0.05）;蛋白表达水平分别为0.761±0.211 vs 1.200±0.346,与对照组比较,差异有统计学意义（P<0.05）。不同浓度梯度油酸处理HepG₂细胞,其GCGR mRNA和蛋白水平表达随油酸浓度增加而逐渐降低,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 肝脏脂肪性病变降低了肝脏GCGR表达水平,从而可能影响肝脏的糖脂代谢。     

干预GLP-1通路保护过氧化氢诱导心肌细胞凋亡的研究

目的 观察Exendin-4（Ex-4,GLP-1受体激动剂）对H₂O₂孵育的心肌细胞凋亡的影响,探讨GLP-1通路干预心肌细胞损伤的机制。方法 分离、培养心室肌细胞,分成5组∶A组为对照组;B组为H₂O₂干预组（100μmol/L,24h）;C组为H₂O₂+Ex-4（Ex-10nmol/L,孵育24h）组;D组为H₂O₂+Ex-4（Ex-20nmol/L,孵育24h）组;E组为H₂O₂+Ex-4+LY294002（Ex-20nmol/L,LY-5μmol/L,孵育24h）组。荧光染色测定各组细胞内活性氧簇（ROS）生成的水平;流式细胞仪测定各组细胞凋亡率情况。以Western blot法测定各组细胞凋亡蛋白及机制蛋白（PI₃K/AKT）的表达。结果 与H₂O₂孵育组相比,Ex-4干预使得心肌细胞内ROS水平下降,细胞凋亡率下降,在高剂量组（D组）均达到差异统计学意义（P<0.05）。同时,Ex-4干预可使p-AKT/AKT表达显著增加,caspase-3表达显著下降（P<0.05）;而这些效应可被LY294002共孵育（E组）所逆转。结论 干预GLP-1通路,可缓解H₂O₂诱导的心肌细胞凋亡,此效应至少部分是通过影响PI₃K/AKT途径实现的。     

促酰化蛋白诱导前脂肪细胞分化过程中DGAT、LPL、adipsin mRNA表达

目的观察促酰化蛋白（acylation stimulating protein，ASP）诱导3T3-L1前脂肪细胞的分化过程中。脂肪特异性的功能酶脂蛋白脂酶（LPI。）、二酰基甘油转酰酶（DGAT）以及脂肪细胞特异性功能蛋白adipsin表达的时序性和强度。方法以3T3-L1前脂肪细胞为实验对象，用ASP代替经典激素鸡尾酒诱导刺激中的胰岛素。诱导3T3-L1前脂肪细胞分化，分别在诱导分化1、2、4、6、8d收获细胞，采用RT—PCR法检测分化过程中LPL、DGAT和adipsin的mRNA表达情况。结果在ASP诱导3T3-L1前脂肪细胞分化过程中。LPL、DGAT、adipsinmRNA表达逐渐升高。其中LPL mRNA表达最早，在分化1d时就有低水平的表达。分化2d时出现DGAT mRNA的表达，并随着脂肪细胞的进一步分化成熟，LPL和DGAT mRNA表达水平逐步升高，持续到分化终末期；adipsin mRNA表达出现最晚，在分化4d时才有表达，随后其表达水平急剧升高，持续到分化终末期。结论ASP诱导3T3-L1前脂肪细胞分化过程中。按照一定的时序性依次诱导脂肪特异性的功能酶LPL、DGAT和功能蛋白adipsin的mRNA表达，是脂肪细胞生物学功能成熟的重要物质基础，同时也是ASP诱导前脂肪细胞分化的分子机制之一。     

高脂饮食对西藏小型猪胰岛素抵抗及肝胰岛素受体底物1、2表达的影响

目的 探讨高脂饮食对西藏小型猪胰岛素抵抗（IR）及肝胰岛素受体底物（IRS）1、2表达的影响。方法 将10只西藏小型猪随机分为正常对照组（Ctr）5只饲喂普通饲料、IR模型（IR model）组5只饲喂高脂饲料,连续造模12周。造模12周后,称重并测量体长,计算体质量指数（BMI）,空腹取前腔静脉血测定总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白（LDL-C）、高密度脂蛋白（HDL-C）、甘油三酯（TG）、游离脂肪酸（FFA）、空腹血糖（FBG）和胰岛素（insulin）,计算胰岛素抵抗指数（homeostasis model assessment-estimated insulin resistance,HOMA-IR）;同时进行糖耐量试验,并计算糖耐量曲线下面积（AUC）;取肝组织检测IRS-1和IRS-2基因和蛋白表达,并行油红O、PAS和HE染色,分别观察肝脂质沉积、糖原及组织病理变化。结果 与正常对照组比,IR模型组体重、BMI指数、TC、LDL-C、HDL-C、FFA、FBG、insulin和HOMA-IR指数均显著升高（P<0.05,P<0.01）;糖耐量试验显示血糖和胰岛素水平曲线下降延缓,而AUC_血糖和AUC_胰岛素均明显升高（P<0.05,P<0.01）;肝组织中出现脂质沉积、糖原增加和局部肝细胞浊肿、部分胞核消失或被挤向一端,偶见淋巴细胞浸润;同时肝组织中IRS-1和IRS-2 mRNA和蛋白表达均显著降低（P<0.05,P<0.01）。结论 高脂饮食可引起西藏小型猪胰岛素抵抗,肝组织IRS-1和IRS-2表达降低是高脂饮食影响西藏小型猪胰岛素敏感性的分子机制之一。     

膀胱癌组织Beclin1、LC3Ⅱ蛋白的表达及与患者肿瘤特征、预后的相关性分析

目的 观察膀胱癌组织中自噬基因Beclin1、微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ（LC3Ⅱ）蛋白表达状况,并分析两者与预后的相关性。方法 选取2020年1月—2021年8月新疆医科大学附属肿瘤医院病理资料完整的110例膀胱癌患者。观察患者膀胱癌组织中Beclin1、LC3Ⅱ蛋白表达状况,记录病理参数,并对患者进行为期1年的随访。统计预后情况,观察不同病理参数及预后的膀胱癌患者膀胱癌组织中Beclin1、LC3Ⅱ蛋白表达,并分析两者与患者预后的相关性。结果 膀胱癌组织Beclin1、LC3Ⅱ蛋白高表达率较癌旁组织低,Beclin1、LC3Ⅱ蛋白中低表达率较癌旁组织高（P <0.05）。高组织学分级、T₂～T₄分期、浸润性、淋巴结转移、预后不良的膀胱癌患者Beclin1蛋白高表达率低于低组织学分级、T_a～T₁分期、非浸润性、无淋巴结转移、预后良好的患者（P <0.05）。不同性别、年龄、肿瘤直径、血管侵犯的膀胱癌患者Beclin1蛋白表达率比较,差异无统计学意义（P >0.05）。高组织学分级、T₂～T₄分期、浸润性、淋巴结转移、预后不良的膀胱癌患者LC3Ⅱ蛋白高表达率低于低组织学分级、T_a～T₁分期、非浸润性、无淋巴结转移、预后良好的患者（P <0.05）。不同性别、年龄、肿瘤直径、血管侵犯的膀胱癌患者LC3Ⅱ蛋白表达率比较,差异无统计学意义（P >0.05）。经Phi系数相关性分析,Beclin1、LC3Ⅱ蛋白与预后不良均呈负相关（Phi=-0.277和-0.222,均P <0.05）。多因素逐步Logistic回归分析结果显示：Beclin1高表达［O^R=3.892（95% CI：1.504,10.072）］、LC3Ⅱ蛋白中低表达［O^R=3.358（95% CI：1.165,9.677）］是预后不良的危险因素（P <0.05）。结论 膀胱癌组织中Beclin1、LC3Ⅱ表达与预后密切相关,Beclin1、LC3Ⅱ蛋白中低表达是预后不良的危险因素。     

高浓度葡萄糖刺激脂肪细胞脂肪分解的效应及其机制

目的:研究高浓度葡萄糖刺激脂肪细胞脂肪分解升高血浆游离脂肪酸(free fatty acid, FFA)水平的效应及其机制,进一步阐明高糖导致胰岛素抵抗的作用机制.方法:以Sprague-Dawley(SD)大鼠附睾原代脂肪细胞为研究对象,设为正常葡萄糖(5mmol/L)对照组和高浓度葡萄糖(25mmol/L)干预组.将细胞孵育一定时间直接或加入异丙基肾上腺素刺激后测定培养基中甘油含量作为评价脂肪分解的指标.脂肪分解数据表示为每升脂肪细胞压积的毫摩尔甘油释放量(mmol/L packed cell volume, mmol/L PCV).用Western blot方法分别检测总的及磷酸化的脂滴包被蛋白(perilipin)含量以及激素敏感性脂肪酶(hormone-sensitive lipase, HSL)和脂肪组织甘油三酯水解酶(adipose triglyceride lipase, ATGL)的含量.用酶化学法测定胞浆脂肪分解酶活性.结果:高浓度葡萄糖明显刺激大鼠原代脂肪细胞脂肪分解.将细胞在高糖中孵育24h,甘油累积量从4.4mmol/L PCV增加至6.4mmol/L PCV,即增加1.5倍(P<0.01);30min甘油释放量从0.11mmol/L PCV增加至0.24 mmol/L PCV,即增加2.1倍(P<0.01).高糖刺激脂肪分解的作用从细胞孵育16h开始持续到24h,且25mmol/L葡萄糖的效应较10mmol/L葡萄糖强.高糖明显增加perilipin磷酸化,但不影响该蛋白表达.高糖使胞内脂肪分解酶活性升高1.74倍并显著上调HSL蛋白表达,但不影响ATGL蛋白含量.异丙基肾上腺素刺激的脂肪分解在高糖环境下进一步增强.结论:高浓度葡萄糖通过增加perilipin磷酸化、上调HSL蛋白表达和升高脂肪分解酶活性从而直接刺激脂肪细胞脂肪分解.这提示高浓度葡萄糖单独即可以使FFA从脂肪组织向血浆中释放增加,循环FFA水平升高从而导致胰岛素抵抗.     

visfatin对体外脂肪细胞胰岛素受体底物和PI3K表达的影响

目的：从胰岛素经典信号传导通路磷脂酰肌醇-3-激酶（PI3K）角度探讨内脏脂肪素（visfatin）与2型糖尿病（T2DM）胰岛素抵抗（IR）的关系。方法：复苏、传代和诱导分化人源T2DM前脂肪细胞,构建 visfatin过表达载体,进行载体转化、培养和提取;以4个不同表达梯度（0.0、1.0、2.5和5.0 μg）转染传代脂肪细胞,以0.0 μg组为对照组,其余3组为观察组;Q-PCR法检测visfatin 、胰岛素受体底物1（IRS-1）、胰岛素受体底物2（IRS-2）和 PI3K（P85α） mRNA表达水平,Western blotting法检测visfatin、IRS-1、IRS-2和PI3K（P85α） 蛋白表达水平及IRS-1和IRS-2酪氨酸磷酸化水平,[³H]-2-脱氧-D-葡萄糖摄取法测定细胞葡萄糖摄取率的变化。结果：各组 visfatin mRNA及蛋白表达水平随转染浓度梯度升高而升高（P<0.01）,所构建visfatin过表达载体有效。随visfatin表达增加,各组IRS-1和PI3K（P85α） mRNA和蛋白表达水平以及IRS-1磷酸化程度均明显升高（P< 0.01）,但IRS-2 mRNA和蛋白表达水平未出现明显变化（P>0.05）。脂肪细胞的葡萄糖摄取率随visfatin表达增加而升高（P<0.05）。结论：体外脂肪细胞visfatin过表达可增加IRS-1和PI3K的表达水平。     

Leptin Regulated Insulin Secretion via Stimulating IRS2-associated Phosphoinositide 3-kinase Activity in the isolated Rat Pancreatic Islets

Leptin,theproductofob gene,isa peptidehor-mone secreted by adipocytes thatacts in the hypotha-lamus and playsa centralrole in regulation of feedingbehavior and energy homeostasis[1] .It has recentlybeen confirmed that leptin receptor(OB- R) m RNAand protein were expressed in rat pancreaticβ- cells,indicating thatleptin may directly regulate insulin se-cretion.Several groups have addressed this question,but the results were controversial[2 ,3] .Up to now,the molecular mechanism by which lept…     

牛黄熊脱氧胆酸抑制TNF-α刺激3T3-L1细胞脂肪分解

目的探讨牛黄熊脱氧胆酸(tauroursodeoxycholic acid,TUDCA)对TNF-α刺激3T3-L1细胞脂肪分解及其可能的机制。方法以3T3-L1前脂肪细胞经1-甲基-3-异丁基-黄嘌呤、地塞米松、胰岛素诱导分化成3T3-L1脂肪细胞,设:①对照组;②TNF-α(50 ng/ml)组;③TUDCA(1 mmol/L)+TNF-α(50 ng/ml)组;④TUDCA组(1 mmol/L)。通过油红O染色观察脂滴形态变化并测定培养基中甘油含量作为评价脂肪分解的指标,同时用Western blot检测脂滴包被蛋白perilipinA蛋白表达。结果 TNF-α可以显著刺激3T3-L1细胞脂肪分解,包括功能学显示甘油释放量显著增加[(2.784±0.104)mmol/L,P<0.01],形态学显示脂滴碎裂;TUDCA可以明显抑制TNF-α刺激的3T3-L1细胞脂肪分解,包括阻止脂滴形态的改变,逆转甘油的释放[(1.718±0.085)mmol/L,P<0.01]。通过Western blot检测结果显示TNF-α可以下调perilipin A蛋白表达[(0.227±0.004),P<0.01],而TUDCA可以阻断TNF-α对perilipin A蛋白表达的下调作用[(0.705±0.066),P<0.01]。结论 TUDCA可能通过阻止perilipin A蛋白下调而抑制TNF-α诱发脂肪分解,通过减少游离脂肪酸FFA,从而对胰岛素抵抗、糖尿病等具有一定的改善作用。     

救脑益智方剂水提液对人神经母细胞瘤株SH-SY5Y细胞的保护作用

目的 通过观察复方中药救脑益智方剂水提液对人神经母细胞瘤株SH-SY5Y细胞生长以及胰岛素信号通路的影响, 探讨其对神经细胞保护作用的机制。方法 体外培养SH-SY5Y细胞, 分为对照组(C组)、救脑益智1号方组和3号方组, 每组药物剂量分别为0.0625 mg/mL、0.125 mg/mL、0.25 mg/mL、0.5 mg/mL和1 mg/mL, 测定各组细胞的噻唑蓝(MTT)代谢率, 选定0.125 mg/mL进行细胞免疫荧光染色, 观察细胞形态和胰岛素受体底物-1(IRS-1)、cAMP反应元件结合蛋白(CREB)表达的变化。结果 与对照组相比, 救脑益智组MTT代谢率升高(P<0.05), 细胞形态好, 表现为细胞胞体饱满、贴壁良好、突起延长, IRS-1和CREB表达增加。结论 复方中药救脑益智水提液能促进神经细胞生长, 提高神经元胰岛素信号通路相关因子IRS-1和CREB表达, 推测其神经保护作用机制与胰岛素信号通路有关。     

游离脂肪酸引起肝细胞胰岛素抵抗及其机制的研究

目的研究游离脂肪酸（FFA）诱导人肝癌细胞（HepG2）引起胰岛素抵抗及其分子机制.方法应用含0.25 mmol/L的软脂酸（PA组）或100 nmol/L胰岛素（Ins组）与不含软脂酸和胰岛素（正常组）的DMEM培养基培养HepG2细胞24 h,正常组和PA组中又分加与不加磷酯酰肌醇3激酶（PI3K）抑制剂Wort-mannin两个亚组,100 nmol/L胰岛素刺激后分别测定培养液中的葡萄糖浓度、细胞内的糖原含量、磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶（PEPCK）活性及胰岛素受体底物2（IRS-2）的蛋白水平.结果PA组和Ins组培养液中葡萄糖含量显著高于正常组（P＜0.01）,而细胞内糖原含量显著减少（P＜0.01）;PA组胰岛素刺激的PEPCK活性显著高于正常组（P＜0.01）,IRS-2蛋白水平显著低于正常组（P＜0.01）.无论应用Wortmannin处理与否,PA组中的PEPCK活性及IRS-2蛋白水平差异无显著性（P＞0.05）,而正常组中PEPCK活性及IRS-2蛋白水平的差异有显著性（P＜0.01）.结论加0.25 mmol/L的软脂酸培养24 h后,肝细胞可能由于胰岛素信号转导障碍产生胰岛素抵抗;胰岛素抵抗的形成可能与IRS-2及PI3K相关分子缺陷有关.