TRFIA与ELISA法检测乙型肝炎病毒前S1抗原对比分析

[目的]对比分析酶联免疫吸附试验(ELISA)与时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)法进行前S1(PreS1)抗原检测的特点。[方法]收集500例乙型肝炎患者血清标本,从阳性率、测量范围和灵敏度、精密度和特异性对2种方法进行比较。[结果]TRFIA法阳性率高于ELISA法(P<0.01),有17例标本ELISA法结果为阴性,而用TR-FIA法可检测到PreS1抗原。对这17例标本进行HBV DNA定量检测,其中11例标本HBV DNA拷贝数异常,另6例标本HBV DNA拷贝数正常;高、中、低3个浓度,TRFIA法批内和批间精密度测试,CV均<10%;TRFIA法从低值到高值,从批内至批间CV均优于ELISA法;对于强阳性标本,从原倍到1∶16倍稀释,ELISA法都无法区分阳性程度的强弱,而TRFIA法结果从高到低有显著性区别;TRFIA法与ELISA法相比灵敏度提高4倍。100份正常体检者血清标本TRFIA法结果均阴性,特异性100%。[结论]TRFIA与ELISA法相比,测量范围、精密度和灵敏度有较大提高。     

时间分辨荧光免疫分析法测定抗环瓜氨酸肽抗体方法学的建立

目的 建立高灵敏度、宽量程的定量检测患者血清中的抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体的时间分辨荧光免疫分析方法.方法 以CCP重组抗原和鼠抗人IgG抗体分别作为固相抗原和Eu3+记抗体,如果样本中存在抗CCP抗体,则形成CCP重组抗原-抗CCP抗体-Eu3+标记鼠抗人IgG抗体复合物,加入解离增强液解离铕离子,检测荧光强度,样本中抗CCP抗体含量与荧光强度成正比;对建立的时间分辨荧光免疫(TRFIA)法检测抗CCP抗体的线性范围、精密度、检测范围进行分析;对32例阳性血清标本分别利用TRFIA及酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测抗CCP抗体,分析其相关性;收集50名健康献血者,32例系统性红斑狼疮,26例干燥综合征,10例硬皮病,20例混合性结缔组织病,18例多发性硬化症,利用TRFIA检测其血清中的抗CCP抗体,计算临床特异度.TRFIA与ELISA 2种方法检测结果的一致性检验采用Mc Nemar检验.结果 TRFIA法检测高、中、低3种浓度混合血清的批内(20份)精密度分别为2%、3%和4%,批间(8份)精密度分别为3%、4%和7%;平均回收率为101%;方法的灵敏度为1.0 U/ml;TRFIA法检测健康献血者、系统性红斑狼疮、干燥综合征、硬皮病、混合性结缔组织病及多发性硬化症患者血清中抗CCP抗体,临床特异度分别为98%、97%、96%、100%、95%、100%;2种方法检测的相关系数为0.989;TRFIA比ELISA的检测范围更宽,稳定性能好.结论 首次建立稳定的高灵敏度和宽检测范围的TRFIA法检测人血清中的抗CCP抗体,对早期诊断RA及监测疗效具有重要意义,该方法以其优势有望在各检验科室得以普遍应用.     

血吸虫病时间分辨免疫荧光检测试剂盒的研制和效能评价

目的研制日本血吸虫SjP38的时间分辨免疫荧光分析(Time-resolved fluoroimmunoassay,TRFIA)试剂盒,并评价其效能。方法将抗SjP38的9G7单克隆抗体作为捕获抗体包被96孔板,Eu~(3+)标记1A6单克隆抗体作为检测抗体,研制SjP38 TRFIA试剂盒,并评价试剂盒的准确度、灵敏度、精密度、稳定性以及与病原学检测方法的符合率等指标。结果自制试剂盒准确度好,线性范围为2~1 250 ng/ml,最低检出浓度为0.14 ng/ml;精密度良好,分析内精密度为3.6%~4.6%,分析间精密度为5.1%~6.7%。定性试验表明该试剂盒可在4℃稳定半年,37℃稳定7 d。自制试剂盒与病原学检测方法的阳性符合率为95%,阴性符合率为100%。结论所研制试剂盒的各项性能及检测指标均达到临床检验的要求,但临床推广使用还有待进一步的验证。     

狂犬病毒核蛋白时间分辨免疫荧光分析试剂盒研制

目的 研制狂犬病毒（RV）核蛋白（NP）时间分辨免疫荧光分析（TRFIA）试剂盒。方法 采用双抗体夹心法建立RV NP TRFIA 试剂盒,对试剂盒的各项指标进行评价。结果 试剂盒准确度好,线性范围为5～2 500 mEU/mL,灵敏度为1.018 mEU/mL,精密度良好,分析内精密度为2.7%～9.3%,分析间精密度为3.5%～12.2%。将15份疫苗样品用本法与国内常用ELISA检测试剂盒同时检测,其相关系数r为 0.85,稳定性试验表明试剂可以在4 ℃稳定半年,37 ℃稳定7d。结论 试剂盒各项已检测指标达到临床检验要求,有望替代同类产品进一步作临床检测试验。     

乙肝病毒外膜大蛋白检测在临床诊断与治疗中的意义

目的:对乙肝病毒血清学标志物HBV-M(包括HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb),乙肝病毒外膜大蛋白(HBV-Lp),乙肝病毒前S1抗原(HBV-Pres1)和乙肝病毒脱氧核糖核酸(HBV-DNA)联合检测结果进行比较,观察乙肝病毒外膜大蛋白(HBV-Lp)检测在临床诊断治疗乙肝中的应用价值,寻求比现有常规检测更敏感、更准确的实验室乙肝检测方法。方法:将感染科461例标本分成5组进行比较分析:78例乙肝表面抗原(吸收度A值1)阴性血清标本为A对照组;9例HBsAg弱阳性(吸收度A值为1~2)血清标本为B组;201例HBsAg阳性(吸收度A值2)且HBV-DNA含量5×102IU/ml的血清标本为C组;133例HBsAg阳性(吸收度A值2)且HBV-DNA含量5×102~5×105IU/ml的血清标本为D组;40例HBsAg阳性(吸收度A值2)且HBV-DNA含量5×105IU/ml的血清标本为E组。用酶联免疫吸附法检测HBV-M,HBV-Lp和HBVPres1,PCR-荧光探针法定量检测HBV-DNA。结果:A组和B组未见Pre-S1和HBV-LP结果异常。C、D、E组中HBeAg的阳性率依次为0.99%,6.02%,77.50%;Pre-S1的阳性率依次为29.35%,42.86%,90.00%;HBVLP的阳性率依次为38.31%,55.64%,95.00%,HBV-LP、HBeAg和Pre-S1的阳性率可能性均随着HBV-DNA含量的增加而增大(P0.05)。C、D、E组中HBeAg、Pre-S1和HBV-LP的检出率分别为10.96%,40.64%,50.53%,HBV-LP的检出率明显高于HBeAg和Pre-S1的检出率(P0.05)。通过对相同HBV-DNA含量组的HBV-LP、HBeAg和Pre-S1阳性率进行统计学t检验比较,可以看出HBV-LP的检出率明显高于HBeAg和PreS1的检出率(P0.05)。C、D、E组中HBV-LP的平均吸收度A值依次为2.53,5.35,13.93。HBV-DNA含量的增加伴随着有HBV-LP浓度的增加(P0.05)。结论:HBV-LP检测比HBeAg和Pre-S1检测敏感性强,被检出的可能性更大,漏检的可能性更小。HBV-LP检测与HBV-DNA检测呈正相关性,HBV-LP在HBsAg阳性而HBV-DNA检测阴性时有理想的检出率,可能会对乙型肝炎诊断治疗进行补充作用。     

胰腺癌血清PerioStin水平与淋巴结转移的关系

目的 探讨胰腺癌血清Periostin( PN)水平与淋巴结转移的关系.方法 采用ELISA检测血清中PN水平,并进行自制ELISA试剂盒的指标评价.结果 ELISA法检测PN的最小检出限为4.903 ng/ml,标准曲线方程式曲线拟合度R2 =0.968.平均批内变异系数为7.6％,平均批间变异系数为13.15％,回收率为82％ ～ 92％.健康对照者31例的血清PN含量为(22.0±6.8) ng/ml,18例胰腺癌患者的血清PN含量为(37.9±20.9) ng/ml,18例有远处转移的胰腺癌患者的血清PN含量为(45.6±25.8) ng/ml.胰腺癌患者与健康对照者间有显著性差异(P＜0.05),而18例胰腺癌患者与健康对照者和18例有远处转移的胰腺癌患者组间也有显著性差异(P＜0.05).结论 PN-ELISA试剂盒具有良好的灵敏性、特异性和准确性.PN与肿瘤转移有密切关系,且PN蛋白水平的检测可以用于判断胰腺癌和作为诊断胰腺癌是否出现淋巴结转移的指标.     

慢性乙型肝炎患者血清乙型肝炎病毒表面大蛋白水平检测意义探讨

目的探讨慢性乙型肝炎、乙型肝炎肝硬化和原发性肝癌患者血清乙型肝炎病毒表面大蛋白（HBV-LP） 水平差异及意义。方法选取2014年8月~2015 年12月我院诊治的慢性乙型肝炎患者508例,乙型肝炎肝硬化患者74例,原发性肝癌患者29例,采用ELISA 法检测血清HBV-LP水平,采用FQ-PCR法检测血清HBV DNA水平。结果慢性乙型肝炎、乙型肝炎肝硬化和原发性肝癌患者血清HBV-LP阳性率分别为77.2%、82.4%和89.7%,血清HBV DNA阳性率分别为78.9%、83.8%和93.1%;3组血清HBV-LP水平分别为（9.78±4.25）μg/L、（17.24±8.63）μg/L和（38.65±19.38）μg/L,差异有统计学意义（P<0.05）。结论HBV-LP是乙型肝炎病毒感染者血清重要的标记物,与血清HBV DNA存在某种相关性,其检测的意义值得探讨。     

纳米磁珠分选联合TRFIA检测血清半乳糖凝集素-3对胰腺癌诊断的价值

目的 采用纳米磁珠分选联合时间分解荧光免疫测定（纳米磁珠-TRFIA）的方法检测血清半乳糖凝集素-3（Galectin-3）的浓度,评价其对胰腺癌的诊断价值.方法 收集88例胰腺癌、50例急性胰腺炎、10例胰腺囊肿患者的血清,以20位健康者作为正常对照组.先采用Galectin-3抗体耦联的纳米磁珠对人外周血清进行分选,再用TRFIA法检测Galectin-3浓度,并与常规TRFIA法检测所得的血清Galectin-3浓度进行比较.应用受试者工作特征（ROC）曲线下面积（AUC）确定诊断胰腺癌的界值,获取诊断胰腺癌的敏感性.结果 纳米磁珠-TRFIA法检测Galectin-3浓度在0.78 ～ 100 ng/ml范围内呈线性关系,批内CV≤6.38％,批间CV≤7.22％,平均回收率为105.3％.纳米磁珠-TRFIA法检测正常对照组的血清Galectin-3浓度为0.38（0.02～3.06） ng/ml,显著高于常规TRFIA法检测得到的0.18（0.00～2.64） ng/ml（P=0.000）.纳米磁珠-TRFIA法检测的胰腺癌、急性胰腺炎、胰腺囊肿患者血清Galectin-3浓度分别为4.85（0.00 ～42.67）、0.69（0.00～ 13.62）、0.70（0.00 ～ 14.54） ng/ml,胰腺癌患者明显高于急性胰腺炎、胰腺囊肿患者及正常对照者（P值均＜0.01）,而其他3组之间的浓度差异无统计学意义.Galectin-3诊断胰腺癌的AUC为0.851 ±0.040,95％可信区间0.772 ～ 0.929.以Galectin-3浓度1.07 ng/ml为诊断界值时,胰腺癌、急性胰腺炎、胰腺囊肿患者及正常对照者的阳性率分别为84.1％（74/88）、34.0％ （17/50）、20.0％ （2/10）、10.0％ （2/20）,对胰腺癌的诊断敏感性显著高于其他3组（P值均＜0.01）.结论 纳米磁珠分选联合TRFIA法可富集血清中的Galectin-3,从而提高血清Galectin-3检出敏感性及其对胰腺癌的诊断价值.     

3种HBsAg血液筛查试剂的检测效能评估

目的:对使用的3种HBsAg(2种酶免试剂+1种化学发光试剂)进行检测效能评估。方法:通过分析这3种HBsAg试剂对9个HBsAg血清盘(792个标本)的检测结果,分析3种试剂的批间精密度、批内精密度及其灵敏度、特异度及其正确率、假阳性例数和假阴性例数,最终比较3种试剂检测效能。结果:对于强阳性质控标本,3种试剂的批间精密度良好,变异系数在5.1%～10.2%。由于ELISA2对于弱阳性质控标本未能检出,因此ELISA2在批间精密度和批内精密度的统计中不计入内。对于弱阳性质控,ELISA1与CLIA的批间精密度分别为16.2%和21.7%。批内精密度的变异系数分别为10.9%和12.6%。对于亚型标本的分析,ayw1亚型的标本ELISA试剂1的检出下限是0.18IU/mL,ELISA试剂2的检出下限是0.36IU/mL,CLIA试剂的检出下限是0.09IU/mL。adw2亚型的标本ELISA试剂1的检出下限是0.09IU/mL,ELISA试剂2的检出下限是0.09IU/mL,CLIA试剂的检出下限是0.05IU/mL。adrq亚型的标本ELISA试剂1的检出下限是0.05IU/mL,ELISA试剂2的检出下限是0.09IU/mL,CLIA试剂的检出下限是0.05IU/mL。对于突变标本,3种试剂的检出率为42.3%～88.5%,其中CLIA检出率为88.5%。在611例常规血清盘标本,3种HBsAg试剂灵敏度为78.7%～87.5%,特异性为96.3%～98.4%,准确率为84.9%～90.2%,其中ELISA2的正确率最低为84.9%,假阳性例数为3～6例,假阴性例数为41～88例,其中CLIA的假阴性例数最少为6例。结论:CLIA试剂对于突变标本和亚型标本具有很好的检出能力。HBsAg试剂在使用前及使用中均要进行必要的评估,化学发光试剂在HBsAg检测中具有一定优势。