红花对肝星状细胞基质分解素-1及其抑制因子基因表达的调节

目的 观察红花对HSC-T6细胞基质分解素-1(MMP3)及其抑制因子基因表达的影响.方法 以不同浓度的红花(1.0、0.5 g/L)作用于培养的肝星状细胞株HSC-T6细胞48 h,收集细胞,提取总RNA;用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法测定MMP3及金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)的基因表达水平.结果 MMP3基因表达水平在红花1.0、0.5 g/L两组分别为2.80±0.36、2.52±0.32,而空白对照组为2.13 ±0.30.TIMP-1基因表达水平在红花1.0、0.5 g/L两组分别为1.66±0.23、2.04±0.30,而空白对照组为4.03±0.56.结论 红花可增强HSC-T6细胞MMP3的基因表达,并显著抑制HSC-T6细胞TIMP-1的基因表达,且与剂量有关.     

肿瘤坏死因子-α对肝星状细胞基质分解素-1及其抑制因子基因表达的调节

目的 探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对肝星状细胞基质分解素-1及金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP1)基因表达的影响.方法 在培养的肝星状细胞系中加入30μg/L TNF-α,于8、24、48、72h 4个不同的时间点收集细胞,提取总RNA;用逆转录定量聚合酶链反应(PCR)方法测定基质分解素-1及TIMP1的基因表达水平.结果 TNF-α组肝星状细胞基质分解素-1基因表达水平在8、24、48、72h 4个时间点均明显高于对照组;24～48h达高峰,为对照组的2倍.TNF-α组肝星状细胞TIMP1的基因表达水平在8、24、48h与对照组差异无显著性(P>0.05),72h显著升高,为对照组的近3倍.结论 TNF-α可增强肝星状细胞基质分解素-1及TIMP1基因的表达.     

肿瘤坏死因子—α对肝星状细胞基 发解素—1及其抑制因子基 …

目的 探讨肿瘤坏死因子－α（ＴＮＦ－α）对肝星状细胞基质分解素－１及金属蛋白酶组织抑制因子－１（ＴＩＭＰ１）基因表达的影响。方法 在培养的肝星状细胞系中加入３０ｕｇ／Ｌ ＴＮＦ－α,于８、２４、４８、７２ｈ４个不同的时间点收集细胞,提取总ＲＮＡ;用逆转定量聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法测定基质分解素－１及ＴＩＭＰ１的基因表达水平。结果 ＴＮＦ－α组肝星状细胞基质分解素－１基因表达水平在８、２４、４８、     

丹参对肝星状细胞基质分解素-1及其抑制因子基因表达的影响

目的 观察丹参对HSC-T6细胞基质分解素-1(MMP3)及其抑制因子基因表达的影响.方法 以不同浓度的丹参(0.8、0.4 g/L)作用于培养的肝星状细胞株HSC-T6细胞48 h,收集细胞,提取总RNA;用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法测定MMP3及基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)的基因表达水平.结果 MMP3基因表达水平在丹参0.8、0.4 g/L两组分别为2.03±0.32、2.19±0.26,而空白对照组为2.13±0.30.TIMP-1基因表达水平在丹参0.8 g/L、0.4g/L两组分别为2.11±0.32、3.12±0.46,而空白对照组为4.03±0.56.结论 丹参可明显抑制HSC-T6细胞TIMP-1的基因表达,且与剂量有关;但对MMP3的基因表达无明显影响.     

血小板衍生生长因子对肝星状细胞c-jun基因表达的影响

23)、48 h(1.11±0.10、1.63±0.16、2.32±0.21)、72 h(0.77±0.09、1.23±0.10、1.91±0.16)4个时间点均显著高于对照组;随剂量加大,HSC-T6细胞c-jun基因表达水平逐渐升高;3组间差异有统计学意义(P＜0.01).结论 PDGF可显著增强肝星状细胞c-jun的基因表达.     

实验性肝纤维化金属蛋白酶组织抑制因子—1基因表达的动态 …

观察实验性肝纤维化过程中金属蛋白酶组织抑制因子－１基因表达的动态变化。方法 建立四氯化碳中毒性及人血白蛋白损伤性两种大鼠肝纤维化模型，采用逆转录定量ＰＣＲ方法，测定肝纤维经不同阶段ＴＩＭＰ１的基因表达水平。结果 正常大鼠肝组织可见ＴＩＭＰ１的基因表达。     

表皮生长因子对肝星状细胞c-jun基因表达的影响

目的 观察表皮生长因子(EGF)对肝星状细胞c-jun基因表达的影响.方法 在培养的肝星状细胞株中加入不同浓度的EGF(终质量浓度20、100、500μg/L),于8、24、48、72 h四个时间点分别收集细胞,提取肝星状细胞总RNA;用逆转录定量聚合酶链反应(PCR)方法测定c-jun的基因表达水平.结果 EGF 3组HSC-T6细胞c-jun基因表达水平在8 h(1.46±0.16、2.12±0.20、2.78±0.32)、24 h(1.32±0.13、1.87±0.17、2.43±0.26)、48 h(1.03±0.10、1.51±0.13、2.03±0.20)、72 h(0.77±0.09、1.17±0.10、1.66±0.12)四个时间点均显著高于对照组;随剂量加大,HSC-T细胞c-jun基因表达水平逐渐升高;3组间差异有统计学意义.结论 EGF对肝星状细胞c-jun基因表达有明显的上调作用.     

罗格列酮对肝星状细胞基质金属蛋白酶-2和-9基因表达的影响

目的 观察过氧化物酶体增殖物活化受体γ(PPARγ)特异配体罗格列酮对肝星状细胞(HSC)表达基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9的影响.方法 在培养的HSC株中加入不同浓度的罗格列酮(终质量浓度为5、10、15、20 μmol/L),于24 h后收取细胞,利用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定MMP-2、MMP-9 mRNA表达.结果 MMP-2表达水平在罗格列酮5、10、15、20 μmol/L组分别为0.5708±0.0609、0.8900±0.0823、1.1348±0.1205、1.4490±0.0832,而空白对照组为0.3237±0.0796.MMP-9表达水平在罗格列酮5、10、15、20 μmol/L组分别为0.5487±0.0770、0.7554±0.0510、0.9497±0.0451、1.1088±0.0777,空白对照组为0.3220±0.0592.结论 罗格列酮可增强HSC对MMP-2、MMP-9的表达,并在一定范围内,呈剂量依赖性.     

重组人肝再生增强因子抑制大鼠肝星状细胞c-jun基因表达的研究

目的探讨重组人肝再生增强因子(hALR)对大鼠肝星状细胞c-jun基因表达的影响。方法在培养的肝星状细胞系中加入200、20、2 μg／L三种浓度的hALR,于8、24、48、72 h四个时间点收集细胞,提取总RNA;用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法测定c-jun的基因表达水平。结果对照组肝星状细胞有c-jun的明显表达;不同浓度的hALR 3组肝星状细胞c-jun基因表达水平在8、24、48、72 h四个时间点均明显低于对照组;2μg／L组为对照组的60％-64％,20μg／L组为对照组的41％-43％,200 μg／L组为对照组的29％-35％。与对照组比较差异有显著性(P<0.01)。结论hALR对大鼠肝星状细胞c-jun基因表达有明显的抑制作用。     

抗血小板衍生生长因子小干扰RNA表达质粒构建及其对肝星状细胞的影响

目的 研究靶向PDGF-B链的小干扰RNA(siRNA)对肝星状细胞(HSCs)细胞外基质分泌的影响.方法 根据PDGF-B链序列设计合成siRNA序列,将siRNA序列插入pSilencer 3.1-H1hygro质粒,酶切后测序鉴定;PDGF-B链siRNA表达质粒转染HSCs,潮霉素筛选阳性细胞株,RT-PCR和Western blot分别检测PDGF Mrna和蛋白的表达;将各组筛选的阳性HSCs细胞株培养,MTT观察各组细胞增殖,放射免疫法检测HSCs细胞株上清液中透明质酸和Ⅲ型前胶原的表达. 结果 成功构建3种表达PDGF-B链siRNA表达质粒,RT-PCR和Western blot结果表明各siRNA表达质粒阳性HSCs细胞PDGF Mrna和蛋白表达均有明显抑制.PDGF-B链siRNA表达质粒HSCs细胞组较对照组能明显降低HSCs增殖,下调透明质酸和Ⅲ型前胶原表达.结论 靶向PDGF-B链的siRNA能降低HSCs增殖和分泌细胞外基质的能力,具有抗纤维化治疗的潜力.     

MMP-1、TIMP-1及PDGF在病理性瘢痕中的表达

目的研究基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)、血小板源性生长因子(PDGF)在病理性瘢痕中的表达及意义。方法对58例病理性瘢痕手术切除标本采用免疫组化方法。结果MMP-1、TIMP-1、PDGF在病理性瘢痕中呈阳性表达(62.07%,63.71%,55.17%),在正常皮肤与普通瘢痕中几乎无阳性表达,病理性瘢痕组与两对照组差异均有显著意义(P<0.05)。病理性瘢痕中TIMP-1与PDGF呈正相关(r=0.331,P<0.05)。结论TIMP-1、PDGF促进病理性瘢痕形成;在病理性瘢痕形成过程中PDGF可促进TIMP-1的表达;病理性瘢痕的形成与MMP-1、TIMP-1、PDGF相互作用失衡有关。     

肿瘤坏死因子-α对肝星状细胞形态及表达结缔组织生长因子的影响

目的 通过观察肿瘤坏死因子（TNF）-α对肝星状细胞（HSC）形态和结缔组织生长因子（CTGF）表达的影响，探讨TNF—α在肝纤维化中的作用机制。方法 采用体外培养大鼠肝星状细胞，加入TNF-α和TGF-β1，透射电镜观察肝星状细胞的形态学改变并应用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）技术检测不同处理组HSC中CTGF的表达。结果 TNF-α、TGF—β1均诱导HSC中CT-GF表达；10μg／L浓度的TNF-α作用6、24和48h后，检测到CTGFmRNA表达，而TGF-β1在1μg/L浓度作用4h后，即可诱导HSC中CTGFmRNA表达。结论 TNF-α诱导HSC中CTGF的表达可能参与早期肝纤维化的形成。     

外源性前列腺素E1对血吸虫病家兔肝脏血小板衍生生长因子B及其受体表达的影响

目的　探讨外源性前列腺素E1(PGE1)对血吸虫病家兔肝脏血小板衍生生长因子B(PDGF B)及其受体表达的影响。方法　14只血吸虫病纤维化家兔模型,其中7只家兔在感染后6 0d开始给予PGE1( 2 5 μg/kg·d-1)至12 0d。RT PCR、Westernblot和免疫组化分别检测肝组织PDGF BmRNA、PDGFR β蛋白和α平滑肌肌动蛋白(αSMA)表达。原位杂交观察内源性干扰素(IFN)γ水平。结果　纤维化形成过程中HSCs活化,PDGF BmRNA以及PDGFR β蛋白水平增高。外源性PGE1治疗后PDGFmRNA和受体β蛋白表达的增高趋势都受到明显抑制(与模型组比较分别为2 9 4 2±5 0 5和4 1 37±7 2 3,P <0 0 1;0 2 1±0 11和0 4 6±0 0 7,P <0 0 1)。αSMA表达强阳性视野从6 8下降到10个;而内源性IFN γ积分光密度从0 10 5±0 0 2 4升高到0 4 38±0 0 76 (P <0 0 1)。结论　PGE1可以降低血吸虫病家兔肝脏PDGF B基因及其受体表达水平,内源性IFN γ水平上调可能是这种作用的机制之一。     

血小板源生长因子对肝星状细胞增殖与Ⅰ型胶原合成的影响

目的 观察PDGF-BB对HSC细胞增殖以及合成Ⅰ型胶原的作用。方法 大鼠的HSC细胞用不同浓度的PDGF-BB培养处理，收集细胞和培养液上清。细胞增殖用噻唑蓝（MTT）法检测，流式细胞仪检测细胞周期，Ⅰ型胶原蛋白用ELISA法检测，RT—PCR法检测Ⅰ型胶原mRNA的表达。结果 PDGF-BB在浓度1～10μg/L时呈剂量依赖性地促进HSC细胞增殖，当浓度大于10μg/L其促增殖作用达到饱和。PDGF-BB明显促进细胞的DNA的合成，使细胞大部分处于S期。PDGF-BB能在蛋白和mRNA水平上促进Ⅰ型胶原的合成，并且随着PDGF-BB处理时间地延长其合成量也增加。结论 PDGF-BB除了能促进肝星状细胞的增殖外，也促进Ⅰ型胶原的合成。     

脂质体介导血小板衍化生长因子-B基因转染成纤维细胞的表达

目的用脂质体介导血小板衍化生长因子(PDGF)-B真核表达质粒转染成纤维细胞，使PDGF-B基因在成纤维细胞中特异表达。方法构建PDGF—B真核表达质粒，用脂质体LipofectAMINE介导转染成纤维细胞，G418筛选阳性克隆。逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和细胞爬片免疫组织化学染色检测PDGF-B基因在成纤维细胞中的表达。结果RT—PCR检测结果显示，转染组PDGF-BmRNA的表达量较未转染组明显增加。免疫组织化学染色结果显示转染组成纤维细胞胞浆中有大量棕黄色阳性颗粒。结论脂质体介导PDGF-B基因成功转染成纤维细胞并表达。为PDGF基因治疗奠定基础。     

MMP-1、TIMP-1及PDGF在病理性瘢痕中的表达

目的研究基质金属蛋白酶-1（MMP-1）、金属蛋白酶组织抑制剂-1（TIMP-1）、血小板源性生长因子（PDGF）在病理性瘢痕中的表达及意义。方法对58例病理性瘢痕手术切除标本采用免疫组化方法。结果MMP-1、TIMP-1、PDGF在病理性瘢痕中呈阳性表达（62．07％，63．71％，55．17％），在正常皮肤与普通瘢痕中几乎无阳性表达，病理性瘢痕组与两对照组差异均有显著意义（P〈0．05）。病理性瘢痕中TIMP-1与PDGF呈正相关（r=0．331，P〈0．05）。结论TIMP-1、PDGF促进病理性瘢痕形成；在病理性瘢痕形成过程中PDGF可促进TIMP-1的表达；病理性瘢痕的形成与MMP-1、TIMP-1、PDGF相互作用失衡有关。     

Platelet-derived growth factor stimulates matrix metalloproteinase-2 secretion in cultured human mesangial cells

Background. Platelet-derived growth factor (PDGF) is an important mediator of mesangial proliferative glomerulonephritis. Little is known about the role of PDGF in the regulation of intraglomerular extracellular matrix turnover. Method. Effects of PDGF on the secretion of matrix metalloproteinase-2 (MMP-2), tissue inhibitor of MMP-2 (TIMP-2), and type IV collagen by cultured human mesangial cells (HMCs) were examined in the present study. Secretion of MMP-2, TIMP-2, and type IV collagen by HMCs was quantified with an enzyme immunoassay. Collagenase activity of HMCs was evaluated by gelatin zymography. Results. Recombinant human PDGF (10–20 ng/ml) stimulated MMP-2 secretion by HMCs in a dose-dependent fashion. PDGF (20 ng/ml) increased TIMP-2 secretion by HMCs to a lesser extent. Enhanced activity of 72-kDa collagenase derived from HMCs incubated with PDGF was demonstrated by zymography. Although PDGF alone did not affect type IV collagen secretion by HMCs, PDGF increased type IV collagen secretion in the presence of TIMP. Conclusions. PDGF may contribute to intraglomerular matrix turnover by up-regulating secretion and activation of MMP-2 by HMCs. Received: January 24, 2001 / Accepted: September 13, 2002 Correspondence to:H. Osawa