昆布多糖硫酸酯抑制BxPC-3细胞增殖的实验研究

目的探讨LAMS对BxPC-3细胞增殖的抑制作用. 方法以MTT法分别测定不同浓度LAMS对BxPC-3细胞增殖的抑制作用,对以LAMS处理前后的BxPC-3细胞分别用TUNEL(POD)法测定凋亡细胞、免疫组化法测定其凋亡,Bcl-2、BaX基因蛋白含量. 结果 LAMS可使BxPC-3细胞增殖抑制,细胞Bcl-2基因蛋白表达下降、BaX基因蛋白表达增加.结论 LAMS可有效地抑制BxPC-3细胞增殖.     

PKM2抑制Hippo信号通路促进肝癌细胞增殖和侵袭迁移能力

目的：探讨PKM2对肝癌细胞增殖和侵袭迁移能力的影响及其机制。方法：定量PCR、Western blot和免疫组化检测肝癌组织及肝癌细胞系（HepG2、Hep3B、Huh7和SMMC?7721）PKM2的表达;采用小干扰RNA（siRNA）抑制肝癌细胞PKM2表达,分析其对肝癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响,并研究PKM2 siRNA对Hippo信号通路的影响。结果：定量PCR、Western blot和免疫组化显示PKM2在肝癌组织表达较癌旁组织表达明显升高,在肝癌细胞较肝细胞（L02）中表达明显升高;PKM2 siRNA可有效抑制肝癌细胞增殖、侵袭和迁移,进一步证实肝癌细胞中Hippo信号通路被抑制,PKM2 siRNA可有效提高Hippo信号通路活性,且抑制Hippo信号活性能明显逆转PKM2 siRNA抑制肝癌细胞增殖、侵袭和迁移能力。结论：PKM2可能通过抑制LATS1和YAP磷酸化,进而抑制Hippo信号通路,促进肝癌细胞增殖、侵袭和迁移能力。     

口服类肝素理化性质和药理活性的研究

目的：制备口服类肝素样品并研究其理化性质、促脂酶释放活性和抑制血栓形成作用。方法：猪十二指肠通过提取分离得到类肝素样品，采用常规方法测定其抗Xa因子活性、活化部分凝血激酶时间(APTT)活性等各项理化性质，采用比色测定法考察其促进肝脂酶(HL)和脂蛋白脂酶(LPL)释放活性，并采用大鼠动静脉旁路血栓模型考察其口服给药对血栓形成的抑制作用。结果：类肝素样品抗Xa因子活性70.4IU／mg，APTT活性33.8IU／mg，FXa／FIIa为2．1，促HL和LPL释放及抑制大鼠动静脉旁路血栓作用显著。结论：类肝素样品具有显著的促HL和LPL释放及口服抑制血栓形成作用。     

蝎毒对人肝癌Bel-7404 细胞端粒酶活性的影响

目的：观察蝎毒(BMK)对人肝癌Bel-7404细胞端粒酶活性的影响。方法：不同浓度的BMK处理体外培养的人肝癌Bel-7404细胞72h，聚合酶链反应一端粒重复扩增(PCR-TRAP)法测定端粒酶活性，四甲基偶氮唑盐比色(MTT)法测定细胞增殖抑制。结果：BMK可抑制Bel-7404细胞端粒酶活性，随BMK浓度增大，端粒酶活性抑制增强。MTT结果显示BMK抑制Bel-7404细胞增殖且抑制有浓度依赖性。结论：端粒酶活性的抑制可能是BMK发挥抗癌活性的作用机制之一，并可作为评价BMK抗肝癌冶疗效果的指标之一。     

肝癌细胞分泌物对凝血系统的直接影响

目的：探讨肝癌细胞分泌物对凝血系统的直接影响。方法：以一期法测定肝癌细胞分泌物对APTT、PT、TT及Ⅷ、Ⅴ因子活性的影响。结果：肝癌细胞分泌物使正常血浆APTT缩短、TT延长、Ⅷ因子活性增加、V因子活性降低。异常血浆PT、TT延长。结论：肝癌细胞分泌物可直接改变血浆凝血像。     

贯众水提物对体外培养人肝癌细胞增殖及代谢的影响

目的研究中药贯众(DCN)提取物对体外培养的人肝癌细胞的抑癌活性。方法 DCN经粉碎、浸提、超速离心、减压浓缩、冷冻干燥得DCN提取物。人肝癌SMMC-7721细胞经DCN提取物处理不同时间后以MTT法测其对人肝癌细胞线粒体代谢活性的影响,以细胞计数法观察了其对细胞增殖的影响。结果(1)DCN提取物能明显抑制人肝癌细胞的生长,降低线粒体代谢活性;(2)经DCN提取物处理24h后的人肝癌细胞,既使更换为正常培养基,其线粒体代谢活性及细胞增殖与对照相比仍差异显著。结论中药DCN提取物含抑癌活性物质,能抑制体外培养的肝癌细胞增殖和降低线粒体代谢活性。     

5-烯丙基-7-二氟亚甲氧白杨素抑制肝癌细胞NF-κB表达的研究

目的：研究5-烯丙基-7-二氟亚甲氧白杨素（ADFMChR）抑制体外培养人肝癌SMMC-7721细胞增殖和诱导凋亡作用及机制。方法：体外培养SMMC-7721细胞,MTT比色法测定ADFMChR对SMMC-7721细胞增殖活性的影响;Western Blotting法分析ADFMChR对SMMC-7721细胞NF-kB蛋白表达活性的影响。结果：MTT比色法结果显示ADFMChR有效抑制SMMC-7721细胞增殖活性,呈剂量依赖性,其IC50值为3.56μM;Western Blot分析证实ADFMChR下调NF-κB蛋白表达,呈浓度和时间依赖性。结论：ADFMChR具有抑制人肝癌SMMC-7721细胞增殖和诱导细胞凋亡作用,其机制与NF-κB蛋白表达有关。     

昆布多糖硫酸酯对急性髓性白血病HL-60细胞的调控

目的：研究昆布多糖硫酸酯(LAMS)对急性髓性白血病HL-60细胞株的调控作用。方法：用MTT法测定不同浓度LAMS对HL-60细胞株的增殖抑制作用；流式细胞仪分析不同浓度作用下细胞凋亡率；免疫组化法测定LAMS对HL-60细胞株NF—κB家族P65亚单位的作用。结果：HL-60细胞增殖抑制程度与昆布多糖硫酸酯的浓度呈正相关；HL-60细胞凋亡率随药物浓度的增加而升高；在LAMS浓度为0．75μg／ml作用下，P65在12h表达呈强阳性，24h几乎不表达，而IKbα在6h表达呈强阳性。结论：LAMS可以诱导体外HL-60细胞凋亡，其中对凋亡的调控作用可能为负调控；LAMS能够调控NF-κB的表达，其表达有时间差异性。说明LAMS已作用于分子水平。     

氯喹对体外培养人肝癌细胞增殖及细胞周期的影响

目的：探讨氯喹对体外培养人肝癌细胞HepG2增殖和细胞周期的影响,为氯喹作为肝癌治疗药物的研究提供依据。方法： 对数生长期人肝癌HepG2细胞分为对照组、氯喹 (8.00、16.00、32.00、64.00和128.00 mmol•L^-1 )处理组,用MTT法检测不同培养时间（24、48和72 h）细胞增殖活性,用流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡率。结果：与对照组比较,32.00~128.00 mmol•L^-1氯喹处理HepG2细胞24 h和8.00~128.00　 mmol•L^-1氯喹处理HepG2细胞48 h~72 h,细胞增殖活性随着剂量和时间增加而逐渐下降( P< 0.01),以72 h、128.00 mmol•L^-1氯喹抑制作用最强( P< 0.01);与对照组比较,氯喹处理组（32.00~128.00 mmol•L^-1）G₂/M期细胞比率及细胞凋亡率随着剂量增加而上升( P< 0.01),以128.00 mmol•L^-1组最为明显。结论：氯喹具有抑制人肝癌HepG2细胞增殖作用,可诱导人肝癌HepG2细胞的凋亡,并可使人肝癌HepG2细胞周期阻滞在G₂/M期而抑制细胞活性,可能作为肝细胞癌的治疗药物。     

Ciglitazone在NF-κB圈套寡核苷酸抑制肝癌细胞增殖中的作用

目的:观察核转录因子-κB圈套寡核苷酸抑制NF-κB活性后,肝癌HepG2细胞对ciglitazone敏感性的变化。方法:运用基因转染技术将NF-κB圈套寡核苷酸转染入肝癌HepG2细胞中,检测转染前后NF-κB活性。再用ciglitazone处理转染细胞,描记HepG2细胞生长曲线,流式细胞仪检测细胞周期,Western blot检测处理前后细胞周期素D1(Cyclin D1)的变化。结果:转染后的肝癌HepG2细胞NF-κB活性明显降低;ciglitazone抑制HepG2细胞增殖作用增强,70.65%的细胞被阻滞于G1/G0期,Cyclin D1表达明显下降。结论:NF-κB圈套寡核苷酸能增加肝癌HepG2细胞对ciglitazone的敏感性,可能与其下调NF-κB的活性、增强ciglitazone抑制肝癌细胞增殖和阻滞细胞周期有关。     

硫化氢在大鼠肝星状细胞氧应激中的作用

目的利用铁超载的方法在体外复制肝纤维化的氧应激模型，给予H2S供体硫氢化钠（NaHS）和内源性H2S作用的KATP通道阻滞剂格列苯脲（GLBN），论证氧应激下硫化氢对HSC细胞具有保护作用的假说。方法将HSC—T6分为8组：空白组、对照组、NaHS组（分为3个浓度组）、格列苯脲组（分为3个浓度组）。用CCK-8试剂盒测定HSC细胞增殖情况；用MDA试剂盒测定上清液MDA（丙二醛）含量；用SOD（超氧化物歧化酶）试剂盒测定上清液和裂解液中SOD活力；用RT—PCR试剂盒检测p38基因表达水平。结果1．Fe—NTA能够促进HSC的增殖，使p38基因表达水平降低、SOD活性降低、MDA浓度提高。对照组和空白组有明显差异（P〈0．05）；2．给予NaHS处理后，细胞增殖减慢，上清液中MDA含量下降，上清液、裂解液中SOD活性提高，p38基因表达水平增高（P〈0．05）；3．给予GLBN处理后，各项指标结果与给予NaHS处理后结果相对应，各组与对照组比较均有明显差异（P〈0．05）。结论氧应激下硫化氢对HSC细胞具有保护作用，可抑制肝纤维化的发生发展。     

Hepsin蛋白对肝癌细胞生长的影响

目的:探讨Hepsin蛋白对肝癌细胞生长和细胞凋亡的影响。方法:运用RT-PCR技术检测肝癌组织样品肝癌细胞系中Hepsin基因的表达水平,并从原发性肝癌患者的癌组织中扩增Hepsin基因编码区序列,该序列被克隆并构建pCMV-tag-HS表达质粒。将pCMV-tag-HS表达质粒转染人肝癌细胞系HepG2细胞、Bel-7402细胞,观察Hepsin蛋白对肝癌细胞的增殖能力和细胞凋亡效应的影响。结果:Hepsin基因在临床肝癌组织和人正常肝细胞L-02细胞中高表达,在人肝癌细胞系Bel-7402细胞、HepG2细胞和临床肝癌癌旁组织不表达或低表达,Hepsin蛋白可以增强肝癌细胞系的增殖能力,同时抑制肝癌细胞凋亡。结论:Hepsin蛋白促进肝癌细胞生长并抑制肝癌细胞凋亡。     

五灵胶囊对大鼠实验性肝纤维化的治疗作用

目的　研究五灵胶囊对大鼠肝纤维化的作用 .方法　采用以四氯化碳为主的复合因素致大鼠肝纤维化 ,观察五灵胶囊对肝组织病理学、肝组织和血清中羟脯氨酸 (HYP)、 , 型前胶原 (PC ,PC )含量的影响 .结果　病理学检查显示 ,模型组大鼠肝细胞损伤严重 ,胶原纤维大量增生 ,形成假小叶 .五灵胶囊组大鼠肝细胞结构破坏不明显 ,肝纤维化程度轻 ,在 3.0 g· kg- 1时治疗效果最好 .各治疗组的肝组织 HYP含量均较模型组明显下降 ,尤以五灵胶囊组 (3.0 g·kg- 1 )下降幅度最大 (P<0 .0 1) .各治疗组的血清 PC 及肝PC 含量均较模型组明显下降 (P<0 .0 1) .此外五灵胶囊组(3.0 g· kg- 1 )还可显著降低血清 PC 含量 (P<0 .0 1) .结论　五灵胶囊可有效地治疗肝纤维化     

Effects of vitamin E on the proliferation and collagen synthesis of rat hepatic stellate cells treated with IL-2 or TNF-α

Objective To study the effects of vitamin E on the proliferation and collagen synthesis of rat hepatic stellate cells treated with interleukin-2 (IL-2 ) or tumor necrosis factor-α (TNF-α). Methods Hepatic stellate cells were isolated from male Sprague-Dawley rats by using modified Friedman’s method. Using the isolated cells cultured and treated with IL-2 or TNF-α, we studied the effects of vitamin E on their proliferation and collagen synthesis through an (3)H-thymidine and (3)H-proline incorporation assay, as well as through observation of these cells under a contrary phase microscope. Results Adding IL-2 increased the both proliferation and collagen synthesis of hepatic stellate cells. Their proliferation was also increased by the addition of TNF-α, although it decreased collagen synthesis. Vitamin E had marked inhibitory effects on the ability of cells treated with IL-2 or TNF-α to reproduce or synthesize collagen. Conclusion Vitamin E can inhibit the proliferation and collagen synthesis of hepatic stellate cells. It is possible that vitamin E affects liver fibrosis through these activities.     

猫人参注射液抗肝癌作用和对免疫功能的影响

目的:初步探讨猫人参注射液抗动物移植性肝癌及其对荷瘤小鼠免疫功能的影响.方法:体内抗肿瘤实验采用液下接种肿瘤细胞及实体瘤称重的方法,腹腔接种肿瘤液观察荷瘤动物存活率,采用3H-TdR掺入法检测猫人参注射液对荷瘤小鼠脾T淋巴细胞转化功能和NK细胞活性的影响;流式细胞仪检测荷瘤小鼠T细胞亚群.结果:猫人参注射液100g/kg、50g/kg、25g/kg连续尾静脉注静10天后,对小鼠皮下移植性H22肝癌的抑瘤率分别为62.16%、35.14%、17.13%,有较明显的剂量依赖性(P＞0.05).剂量为100g/kg时抗肿瘤作用较理想,且可延长腹水型肝癌小鼠的生存期,对H22肝癌小鼠脾脏(胸腺)指数、脾淋巴细胞转化指数、T细胞CD4 /CD8 比值有升高趋势,略高于生理盐水组(P＜0.05),CTX对荷瘤小鼠细胞免疫功能则有明显的抑制作用(P＞0.05).结论:猫人参注射液具有良好的抗肝癌作用.     

肝癌发生过程中转录因子AP-1活化的研究

目的：检测肝癌及其癌周组织中AP-1活化状态，探索该转录因子在肝癌发生过程中可能的作用。方法：用电泳迁移率转移试验、免疫印迹和RNA酶保护性分析等方法，测定15例原发性肝癌及其癌周组织中AP-1与DNA的结合活性、AP-1复合物的蛋白组成以及细胞增殖状况。结果：与正常肝组织相比，AP-1与DNA结合活性在。73％的癌周组织中增高；60％的肝癌组织中AP-1结合活性比癌周组织进一步增高；其AP-1二聚体主要由JunD、c-Jun和c-Fos蛋白参与组成，AP-1结合活性与JunD和c-Jun蛋白表达水平呈正相关。结论：AP-1的激活是肝癌发生过程中的早期频发事件，可能有助于肝细胞恶性转化表型的获得，在肝癌的形成中具有重要作用。     

大鼠肝抑素提取物生物效应的体外研究

应用酒精深山析和超速离心等方法人正常成年大鼠中提取肝抑素粗制品。离体实验检测提取物对再生肝肝细胞，、肝癌细胞、胃癌细胞的生物效应，结果是：（１）肝抑素提取物对再生肝肝细胞增殖具有很强抑制作用。随剂量的增加，细胞增殖抑制率增大，其最大抑制率为７１．４％（２）对肝癌细胞同样具有抑制作用，其最大抑制率为４３％；对人胃癌细胞无抑制作用。表明提取物中含有肝抑素，经对培养再生肝肝细胞、人肝癌细胞的增殖具有抑制     

介入热化疗栓塞治疗对肝癌患者癌细胞恶性生物学行为的影响

目的:研究介入热化疗栓塞治疗对肝癌患者癌细胞恶性生物学行为的影响。方法:将94例原发性肝癌患者随机分为A组和B组,每组47例,A组患者接受介入热化疗栓塞术治疗、B组患者接受常规肝动脉化疗栓塞术治疗。化疗后,采集血清样本并检测肿瘤标志物的含量,采集肝癌病灶并检测增殖基因、侵袭基因的表达量。结果:治疗后第4周、第8周时,A组和B组患者血清中AFP、AFP-L3、GP73的含量均显著低于治疗前,且A组患者血清中AFP、AFP-L3、GP73的含量均低于B组,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后第8周时,A组患者肝癌病灶中LETM1、Cyclin D1、CDK4、BMP4、Vimentin、N-cadherin、FAT10、Rho A、ROCK的表达量低于B组,PPP1R16A、TMPy P4的表达量高于B组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:介入热化疗栓塞治疗肝癌能够较肝动脉化疗栓塞术更为有效地抑制癌细胞增殖和侵袭。     

蝎毒对人肝癌细胞Bel-7404凋亡及端粒酶逆转录酶基因的作用

目的观察蝎毒对人肝癌Bel-7404细胞增殖的影响及对端粒酶逆转录酶基因(hTERTmRNA)活性的影响。方法以人肝癌细胞株Bel-7404为研究对象,以不同浓度的蝎毒处理体外培养的人肝癌Bel-7404细胞72 h,以噻唑蓝(MTT)法测定细胞增殖抑制,采用RT-PCR法检测细胞hTERTmRNA的表达情况。结果MTT结果显示蝎毒抑制Bel-7404细胞增殖、诱导细胞凋亡且抑制有浓度依赖性。同时,蝎毒可抑制hTERTmRNA的表达。结论抑制端粒酶逆转录酶基因(hTERTmRNA)表达而抑制端粒酶的活性、诱导细胞凋亡,可能是蝎毒的抗癌细胞机制之一。