大鼠骨髓造血干细胞体外定向诱导、扩增树突状细胞及其功能鉴定

目的：以大鼠骨髓造血干细胞为来源，建立体外诱导、扩增树突状细胞(dendritic cells，DC)的方法，并进行表型鉴定及功能检测。方法：从大鼠骨髓细胞中分离出造血干细胞，加入rGM-CSF、rIL-4和nrhTNF-α培养12天获得大量DC，经标抗大鼠OX62单抗免疫磁珠分离纯化后的DC，进行形态学观察、表型检测及刺激T细胞增殖能力分析。结果：大鼠骨髓造血干细胞经诱导培养12天后，倒置显微镜和电镜下显示典型的DC形态和超微结构；流式细胞术分析显示细胞表面抗原高表达，其中OX62为62．19％；MHCⅠ为70．40％；MHCⅡ为78．28％；CDSO为55．58％；CD86为68．38％，是典型的大鼠DC表型特征，同种混合淋巴细胞反应结果显示，DC具有高效的刺激T淋巴细胞活化增殖的能力。结论：大鼠骨髓造血干细胞可成功诱导为具有典型形态特征及功能的DC，为进一步研究其在肿瘤免疫治疗中的应用打下基础。     

健康供者外周血造血干细胞动员的临床研究

目的:探讨造血生长因子(HGFs)对健康供者外周血干细胞(PBSC)的动员作用,并比较粒细胞集落刺激因子(G-CSF)单用及G-CSF联合粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)的动员效果.方法:52例健康供者分成G-CSF单用组(34例)及与GM-CSF合用组(18例),分别采用G-CSF(5 μg·kg-1·d-1)及G-CSF(3 μg·kg-1·d-1)+GM-CSF(2 μg·kg-1·d-1),连续皮下注射5～6 d动员,采集PBSC.动员前后动态检测外周血及采集物MNC、CD34+细胞、CFU-GM计数.52例血液病患者接受上述供体动员之PBSC并行异基因PBSC移植(Allo-PBSCT).结果:动员后CD34+细胞及CFU-GM分别较动员前增加10.83及8.7倍,并在第5～6天达到高峰;G-CSF单用及与GM-CSF合用均可有效动员CD34+细胞和CFU-GM,但合用较单用更有效(P<0.05);所有患者接受Allo-PBSCT后均满意获得造血重建;随访观察至今应用HGFs对健康供者无明显不良反应.结论:采用中小剂量G-CSF单用和与GM-CSF合用均能安全、有效动员健康供者PBSC,但以合用更为有效.     

rhG-CSF和rhGM-CSF动员小鼠外周血干细胞效果的比较研究

目的比较重组人粒细胞集落刺激因子（rhG-CSF）和重组人粒-巨噬细胞集落刺激因子（rhGM-CSF）单独、同时或序贯联合应用对小鼠外周血干细胞（PBSC）的动员作用,从而选择最佳的动员方案。方法72只BALB/c小鼠随机分成6组,每组12只。A组皮下注射rhG-CSF 400μg.kg^-1.d^-1;B组皮下注射rhGM-CSF 400μg.kg^-1.d^-1;C组皮下注射rhG-CSF 200μg.kg^-1.d^-1＋rhGM-CSF 200μg.kg^-1.d^-1;D组皮下注射rhGM-CSF 400μg.kg^-1.d^-1（前3天）＋rhG-CSF 400μg.kg^-1.d^-1（后2天）;E组皮下注射rhG-CSF 400μg.kg^-1.d^-1（前3天）＋rhGM-CSF 400μg.kg^-1.d^-1（后2天）,连续注射5天。对照组连续5天皮下注射生理盐水0.2 ml。动态观察各组外周血白细胞计数、CD34＋细胞比例、CFU-GM产率的变化。结果rhG-CSF与rhGM-CSF单独或联合使用时,外周血白细胞计数、CD34＋细胞、CD34＋CD38-细胞和粒-单核细胞集落形成单位（CFU-GM）产率明显高于对照组（P〈0.01）。实验组中,含有rhG-CSF组的外周血白细胞计数、CD34＋细胞产率明显高于单用rhGM-CSF组（P〈0.01）;含有rhGM-CSF组的CD34＋CD38-细胞产率明显高于单用rhG-CSF组（P〈0.01）;rhG-CSF与rhGM-CSF联合组CFU-GM产率高于单用rhG-CSF、rhGM-CSF组（P〈0.05）。结论rhG-CSF联合rhGM-CSF方案可作为外周血干细胞动员的一个较好的选择。     

rhG-CSF动员正常供者与恶性血液病患者外周血造血干细胞质量的比较

目的探讨正常供者与恶性血液病患者使用重组人粒细胞集落刺激因子（rhG—CSF）动员后,用血细胞分离机采集的外周血造血干细胞,通过形态学观察PBSC中淋巴细胞比例及单个核细胞活力。方法分别对15例正常供者和14例恶性血液病患者使用rhG—CSF动员剂,用血细胞分离机采集外周血中单核细胞（MNC）,观察有核细胞数、有核细胞分类、MNC计数及细胞活力。结果（1）正常供者组采集的PBSC有核细胞总数为（4．31&#177;1．41）&#215;10^8／kg,恶性血液病患者组有核细胞总数MNC数为（6．21&#177;4．37）&#215;10^8／kg。（2）恶性血液病组采集的PBSC有核细胞数高于供者组（P〈0．01）。（3）用淋巴细胞比值乘以有核细胞总数计算单个核细胞,正常供者组（2．82&#177;1．03）&#215;10^8／kg、恶性血液病患者组（2．58&#177;1．79）&#215;10^8／kg,正常供者组与恶性血液病组单个核细胞数比较差异无统计学意义（P〉0．05）。（4）正常供者组MNC计数为（96．7&#177;5．1）％,其中淋巴细胞占（65．9&#177;9．4）％、粒细胞占（16．3&#177;8．7）％、单核细胞占（16．5&#177;4．0）％;恶性血液病组MNC计数为（92．7&#177;15．6）％,其中淋巴细胞占（55．3&#177;16．7）％、粒细胞占（24．3&#177;16．5）％、单核细胞占（14．9&#177;9．1）％。（5）正常供者组冻存前后细胞活力分别为（91．5&#177;4．3）％、（67．4&#177;9．1）％,恶性血液病组冻存前后细胞活力分别为（82．9&#177;11．1）％、（56．5&#177;20．1）％;两组冻存前后细胞活力差异均有显著性（P〈0．01）。（6）rhG—CSF动员前后正常供者组及恶性血液病组T细胞在CD3单克隆抗体＋rhIL-2刺激下,外周血T淋巴细胞的增生能力在应用rhG—CSF后下降[（68．5&#177;15．1）％vs（52．3&#177;12．5）％（P〈0．05）。结论单用rhG—CSF或化疗联合rhG—CSF动员均可采集到足够数量的外周血造血干细胞,应用淋巴细胞乘以有核细胞数作为外周血造血于细胞移植时计算输入外周血造血干细胞数量的指标时简便、快捷,不失为一良好的临床检测方法。     

细胞表面黏附分子在造血干细胞动员中的作用机制

目的　研究粒系集落刺激因子 (G CSF)进行干细胞动员时干细胞表面黏附分子的变化 ,从黏附分子角度说明G CSF的动员机制。方法　将重组人G CSF(惠尔血 )或生理盐水注射于小鼠皮下 ,每日两次 ,连续 7d ,收集G CSF使用前后骨髓和外周血单个核细胞 ,计数外周血Sca 1 干细胞数目和骨髓有核细胞数 ,同时分别检测细胞表面CD49d、CD44的表达和干细胞与骨髓基质蛋白黏附能力的变化。结果　重组人G CSF对小鼠有和人类相似的动员作用 ,使用G CSF 7d后外周血Sca 1 细胞数增高近 2倍 ,骨髓有核细胞数明显下降 ,同时骨髓和外周血单个核细胞表面CD49d表达以及细胞黏附能力都有所下降 ,而对照组无类似现象。结论　G CSF可能通过降低某些黏附分子的表达 ,削弱造血细胞与骨髓基质的黏附而产生动员效果     

rhG—CSF动员正常供者与恶性血液病患者外周血造血干细胞质量的比较

目的探讨正常供者与恶性血液病患者使用重组人粒细胞集落刺激因子（rhG—CSF）动员后,用血细胞分离机采集的外周血造血干细胞,通过形态学观察PBSC中淋巴细胞比例及单个核细胞活力。方法分别对15例正常供者和14例恶性血液病患者使用rhG—CSF动员剂,用血细胞分离机采集外周血中单核细胞（MNC）,观察有核细胞数、有核细胞分类、MNC计数及细胞活力。结果（1）正常供者组采集的PBSC有核细胞总数为（4．31±1．41）×10^8／kg,恶性血液病患者组有核细胞总数MNC数为（6．21±4．37）×10^8／kg。（2）恶性血液病组采集的PBSC有核细胞数高于供者组（P〈0．01）。（3）用淋巴细胞比值乘以有核细胞总数计算单个核细胞,正常供者组（2．82±1．03）×10^8／kg、恶性血液病患者组（2．58±1．79）×10^8／kg,正常供者组与恶性血液病组单个核细胞数比较差异无统计学意义（P〉0．05）。（4）正常供者组MNC计数为（96．7±5．1）％,其中淋巴细胞占（65．9±9．4）％、粒细胞占（16．3±8．7）％、单核细胞占（16．5±4．0）％;恶性血液病组MNC计数为（92．7±15．6）％,其中淋巴细胞占（55．3±16．7）％、粒细胞占（24．3±16．5）％、单核细胞占（14．9±9．1）％。（5）正常供者组冻存前后细胞活力分别为（91．5±4．3）％、（67．4±9．1）％,恶性血液病组冻存前后细胞活力分别为（82．9±11．1）％、（56．5±20．1）％;两组冻存前后细胞活力差异均有显著性（P〈0．01）。（6）rhG—CSF动员前后正常供者组及恶性血液病组T细胞在CD3单克隆抗体＋rhIL-2刺激下,外周血T淋巴细胞的增生能力在应用rhG—CSF后下降[（68．5±15．1）％vs（52．3±12．5）％（P〈0．05）。结论单用rhG—CSF或化疗联合rhG—CSF动员均可采集到足够数量的外周血造血干细胞,应用淋巴细胞乘以有核     

急淋白血病细胞对正常骨髓粒单系祖细胞的影响

对109例急淋病人回顾性研究中发现初诊时周围血粒细胞左移可提示患者预后,借助祖细胞培养技术,对急淋伴有严重粒细胞生成障碍的机理进行了研究,实验结果表明预后的好坏与急淋白血病细胞CSF活性的有无或对正常CSF的抑制作用有关,这有助于临床上对患者预后的估计。     

ISOLATION AND EXPANSION OF HUMAN EMBRYONIC NEURAL STEM/PROGENITOR CELLS IN VITRO

Ｎｅｕｒａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓｉｓａｇｒｏｕｐｏｆｕｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｄ ,ｍｕｌｔｉｐｏｔｅｎｔｃｅｌｌｓｗｉｔｈｔｈｅｃａｐａｃｉｔｙｏｆｓｅｌｆ -ｒｅｎｅｗａｌａｎｄｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｎｇｉｎｔｏｎｅｕｒｏｎｓ ,ａｓｔｒｏｃｙｔｅｓａｎｄｏｌｉｇｏ ｄｅｎｄｒｏｃｙｔｅｓ .Ｔｈｅｙｃａｎｂｅａｃｔｉｖａｔｅｄａｆｔｅｒｃｅｎｔｒａｌｎｅｒ ｖｏｕｓｉｎｊｕｒｙｔｏｐａｒｔｉｃｉｐａｔｅｔｈｅｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ[1～ 4 ] .Ｉｔｉｓｃｏｎｓｉｄｅｒｅｄｔｈａｔｎｅｕｒａｌｓｔ…     

骨髓基质干细胞接种于纤维蛋白凝胶的体外培养

目的：研究经分离培养的免音舱基质子细胞(MSC)接种在可吸收性纤维蛋白凝胶上向成分细胞分化，表型维持的影响。方法：取兔骨髓基质子细胞于含100nl/L胎牛血清的DMEM培养液中培养，并向成管细胞诱导。将细胞与纤维蛋白凝胶复合，通过扫描电镜观察细胞附着情况，共聚焦显微镜观察I型胶原的分泌，组织化学染色检测碱性磷酸酶(ALP)阳性细胞，ALP含量测定。结果：骨髓基质子细胞在可吸收性纤维蛋白凝胶表面附着良好并继续增殖，可分泌I型胶原，这些细胞的ALP染色呈强阳性，细胞碱性磷酸酶含量增高。结论：具有良好的可塑性、低抗原性、好的降解吸收性的纤维蛋白凝胶具有促进骨髓基质细胞表达成管细胞表型、合成细胞外基质的功能，是良好的细胞载体。     

组胺和甲氰咪胍对粒-单系祖细胞的影响

用体外琼脂培养法研究组胺和甲氰咪胍对小鼠粒-单系祖细胞的影响,结果表明,10~(-9)M～10~(-5)M 组胺和10~(-8)M～10~(-4)M 甲氰咪胍分别作用时,对粒-单系祖细胞的产率没有影响,用甲氰咪胍阻断 H_2-受体后,组胺可增加粒-单系祖细胞的产率和自杀率。对此结果的理论意义和临床意义进行了讨论。     

_3H-TdR掺入率对骨髓造血细胞低温保存效果的评价

利用~3H-TdR掺入率液体闪烁测定法结合台盼蓝拒染率和单层琼脂CFU-GM培养对骨髓造血细胞低温保存后的活力进行了研究。观察了骨髓MNC的不同细胞浓度和孵育时间、不同保存温度(新鲜,4℃,-80℃,液氮)和保存时间(30分,7天,28天,90天)的~3H-TdR掺入年,并与台盼蓝拒染率、单层琼脂CFU-GM培养进行了对比,表明~3H-TdR掺入率是评价低温保存后骨髓造血细胞活力的一项敏感可靠的指标,周期短,并可较准确的反映细胞中处于DAN合成期(S期)的细胞含量。     

多发性硬化患者骨髓造血干(祖)细胞体外集落培养及其意义

目的：探讨多发性硬化（MS）患者骨髓造血干（祖）细胞体外培养的增殖分化功能及其临床应用意义。方法：采用体外胶原半固体培养法观察19例MS患者骨髓造血干（祖）细胞巨核系集落形成情况，甲基纤维素半固体培养法观察粒单系和红系集落形成情况。并将各系集落形成单位按复发期和缓解期分组及按病程≤3年和病程〉3年分组与健康对照组分别进行比较分析。结果：①MS复发期组的粒-单系集落形成单位（CFU-GM）显著低于健康对照组（P=0．006），也显著低于缓解期组（P=0．001）。MS缓解期组CFU-GM虽比健康对照组高，但差异无统计学意义（P〉0．05）。MS复发期组、缓解期组的巨核系集落形成单位（CFU-MK）、红系集落形成单位（CFU-E）与健康对照组相比，差异均无统计学意义（均P〉0．05）。②MS病程≤3年组和病程〉3年组的CFU-MK、CFU-GM、CFU-E与健康对照组相比。差异均无统计学意义（均．P〉0．05）。结论：MS复发期患者骨髓造血干（祖）细胞本身或其分化成粒-单系的过程存在异常；MS复发期造血干（祖）细胞也可能对造血生长因子的反应较缓解期差．     

小鼠骨髓基质细胞系QXMSC1促进骨髓移植后的造血重建

目的：观察骨髓基质细胞系QXMSC1在骨髓移植后早期能否加速造血重建。方法：用脾克隆形成单位（CFU-S）测定QXMSC1对造血干细胞的影响。计数每根股骨有核细胞数，用半固体琼脂克隆形成法测定粒单系祖细胞（CFU－GM），微量甲基纤维素法测定红系祖细胞（CFU-E及BFU－E）。结果：QXMSC1细胞可明显增加CFU－S克隆数。在骨髓移植后第10天，QXMSC1可增加骨髓有核细胞数，增加CFU－GM、CFUE克隆数。移植后第20天，这些作用更明显，且对BFU-E也有明显的刺激作用。结论：骨髓基质细胞系QXMSC1与骨髓细胞共移植可明显促进骨髓移植后早期造血功能重建。     

人骨髓基质细胞的分离、培养及成骨鉴定

目的建立一种体外分离培养人骨髓基质细胞 (HumanBoneMarrowStromalCells ,hBMSCs)的方法。方法 :从髂棘 (髂前或髂后 )抽取骨髓液 5～ 8ml,经密度离心后的骨髓单核细胞 ,以 10 6/ml浓度接种培养 ,贴壁细胞接近长满后 ,进行传代培养 ,每传一代约 5～ 7d。培养期间进行碱性磷酸酶的检测和钙染色。结果 :原代培养和传代培养的细胞均为贴壁、形态不一的细胞。两种细胞在体外可向成骨方向转化。结论 :人骨髓基质细胞在体外长期培养后仍具有成骨能力 ,为骨髓中间充质干细胞 ,掌握其培养方法为其广泛应用奠定基础。     

COLONY GROWTH AND GRANULOPOIETIC EFFECTS OF HUMAN BONE MARROW FIBR.OBL.AST COLONY-FORMING CELLS IN VITRO

Human bone marrow derived fibroblast colony- ;forming cells (F-CFU) and granulocytemacrophage colony-forming cells (GM-CFU) were simultaneously studied by liquid and semi-solid agar culture in 26 normal individuals and 33 hematological disorders iii 13 patients with aplastic anemia, 9 acute non lymphocytic leukemia, 6 acute Iymphocytic leukemia and 5 malignant lymphoma. After 2 weeks of liquid culture, the growth rates and morphological charac teristics of F-CFU from aplastic and leukemic mar rows did not differ markedly from the normal, except that patient groups show a wider range of colony number. The F-CFU incidence in patients with malignant lymphoma was lower than normal. Growth of GM-CFU from patients with aplastic anemia and Ieukemia was very poor. GM-CFU stimulation was not detected iii any supernatants of F-CFU cultures. Confluent mono layers of fibroblast cells grown from normal and aplastic marrow could directly stimulate the growth cf GM-CFU of normal marrow cells and little GM- CFU was observed in areas lacking fibroblast cells. Fibroblast monolayers derived from acute leukemic marrows were poor stimulators of GM-CFU, this abnormality in interactions between stromal cells and hematopoietic progenitors may be important in the pathogenesis and clinical manifestation of leukemia. This study suggests that bone marrow fibroblast cells may directly affect hematopoietic stem cell proliferation and differentiation and supports the hypothesis that marrow fibrosis observed in patients with leukemia is of non-ncoplastic origin and may be a reactive phenomenon. Analysis of the pathoge- nesis of aplastic patients with defective hematopoie tic microenvironments may be possible.     

EFFECTS OF INTERLEUKIN－4 ON GRANULOCYTE－MACROPHAGE－COLONY FORMATION FROM MURINE BONE MARROW CELLS AND HEMATOPOIETIC RECONSTIT

ＥＦＦＥＣＴＳＯＦＩＮＴＥＲＬＥＵＫＩＮ－４ＯＮＧＲＡＮＵＬＯＣＹＴＥ－ＭＡＣＲＯＰＨＡＧＥ－ＣＯＬＯＮＹＦＯＲＭＡＴＩＯＮＦＲＯＭＭＵＲＩＮＥＢＯＮＥＭＡＲＲＯＷＣＥＬＬＳＡＮＤＨＥＭＡＴＯＰＯＩＥＴＩＣＲＥＣＯＮＳＴＩＴＵＴＩＯＮＦＯＬＬＯＷＩＮ...