rhIL-6,rhGM-CSF和rhEPO对造血干细胞的作用

据《中华内科杂志》1994年33卷第5期报道 北京医科大学第三医院血液科,用三种细胞因子对人正常造血干细胞进行了体外观察。 结果表明:重组人白细胞介素(rhIL-6)和重组人-单细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)与正常人造血干细胞培养1周后,IL-6组细胞数增至4.3±0.6倍;CM-CSF组细胞数增至9.4±0.9倍,IL-6 CM-CSF组细胞数增至13.7±1.0倍,明显高于对照组(P<0.01)。CFU-E集落分析结果:IL-6单独应用未见CFU-E集落形成,仅有CFU-GM集落形成;IL-6 EPO(促红细胞生成素)组则CFU-E集落数明显高于EPO组(P<0.01)。CFU-Mix     

神经生长因子对正常和放化疗复合损伤小鼠粒-巨噬系血发生的影响

目的 探讨神经生长因子(NGF)对小鼠粒-巨噬系血细胞发生的影响.方法 采用流式细胞术、祖细胞集落分析、血细胞计数、实时荧光定量PCR及酶联免疫吸附分析法(ELISA),检测注射NGF对正常和经60Coγ射线照射 腹腔注射环磷酰胺(放化疗复合损伤)小鼠骨髓细胞(BMC)增殖周期、粒-巨噬系祖细胞集落(CFU-GM)产率、外周白细胞总数、骨髓细胞粒-巨噬系集落刺激因子(GM-CSF)mRNA的表达及血清中GM-CSF和IL-3浓度的影响.并观察在体外培养体系中加入不同浓度的NGF时CFU-GM集落产率的变化及与GM-CSF的关系.结果 在体外CFU-GM培养中,加入重组小鼠GM-CSF (rmGM-CSF)时,NGF剂量依赖性地提高集落产率.注射NGF[7.5 μg/(kg·d)或10 μg/(kg·d)]持续7 d,正常和放化疗复合损伤小鼠外周血白细胞总数、小鼠骨髓细胞中S G2/M期细胞比例、CFU-GM集落产率显著高于注射生理盐水的对照组;放化疗复合伤小鼠血清中的GM-CSF和IL-3也显著升高.结论 NGF可与体外培养体系中的造血刺激因子协同作用,促进正常和放化疗复合损伤小鼠CFU-GM的形成.NGF在体内可促进正常和放化复合损伤小鼠骨髓细胞进入有丝分裂,促进造血干细胞向粒-巨噬系方向分化,促进CFU-GM的形成,提高外周血白细胞数;NGF还可刺激放化疗复合损伤小鼠体内GM-CSF和IL-3的分泌,这可能是NGF促进放化疗复合损伤后粒-巨噬系造血恢复的途径之一.     

卵黄囊干细胞向粒-单系造血祖细胞的定向诱导分化

目的：观察卵黄囊干细胞向粒-单系造血祖细胞（CFU-GM）的定向诱导分化,稳定和优化检测卵黄囊CFU-GM的方法。方法：应用体外琼脂培养法,观察多种因素对小鼠卵黄囊干细胞形成粒-单系造血祖细胞集落形成单位的影响;应用染色压片法对所生成的集落性质作鉴定。结果：植入不同数量的E7.5~8.5 d的卵黄囊干细胞与CFU-GM生成数量之间呈高度正相关;在接种相同数量的卵黄囊细胞数的情况下,DMEM培养体系生成的CFU-GM数明显多于IMDM培养体系生成的集落数（P<0.01）;马血清（HS）组优于胎牛血清（FBS）组（P<0.01）;与GM-CSF相比,WEHI-3条件培养液（W3-CM）能明显促进卵黄囊CFU-GM的生成（P<0.01）。采用完整琼脂凝块压片法对卵黄囊细胞所形成的集落进行鉴定表明为粒-单系细胞集落。结论：卵黄囊干细胞具有向CFU-GM分化的能力;卵黄囊干细胞CFU-GM诱导体系中各组分变化均可影响CFU-GM的集落生成率;以DMEM,GM-CSF或W3-CM,HS为组分的体系可稳定地检测卵黄囊细胞CFU-GM的集落生成率。     

人胎盘提取物对脐带血造血干细胞的体外扩增实验研究

目的 研究人胎盘提取物对脐带血造血干细胞体外扩增的影响.方法 分离脐带血造血干细胞体,用常规培养法和加入人胎盘提取物的方法 进行体外扩增培养,扩增培养第1、2、3、4周分别进行单个核细胞(MNC)计数和造血祖细胞集落培养及计数.结果 到第4周时胎盘提取物组MNC扩增最高可达78.25倍,而常规培养组仅增加了8.32倍;造血祖细胞集落计数显示第3周达高峰,第4周逐渐下降,但胎盘提取物组扩增集落形成细胞(CFC)的能力明显高于常规培养组.结论 胎盘提取物能有效促进脐带血造血干细胞的体外增殖,但应避免长时间的体外扩增培养,以防止细胞发生分化,影响扩增质量.     

健康供者外周血造血干细胞动员的临床研究

目的:探讨造血生长因子(HGFs)对健康供者外周血干细胞(PBSC)的动员作用,并比较粒细胞集落刺激因子(G-CSF)单用及G-CSF联合粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)的动员效果.方法:52例健康供者分成G-CSF单用组(34例)及与GM-CSF合用组(18例),分别采用G-CSF(5 μg·kg-1·d-1)及G-CSF(3 μg·kg-1·d-1)+GM-CSF(2 μg·kg-1·d-1),连续皮下注射5～6 d动员,采集PBSC.动员前后动态检测外周血及采集物MNC、CD34+细胞、CFU-GM计数.52例血液病患者接受上述供体动员之PBSC并行异基因PBSC移植(Allo-PBSCT).结果:动员后CD34+细胞及CFU-GM分别较动员前增加10.83及8.7倍,并在第5～6天达到高峰;G-CSF单用及与GM-CSF合用均可有效动员CD34+细胞和CFU-GM,但合用较单用更有效(P<0.05);所有患者接受Allo-PBSCT后均满意获得造血重建;随访观察至今应用HGFs对健康供者无明显不良反应.结论:采用中小剂量G-CSF单用和与GM-CSF合用均能安全、有效动员健康供者PBSC,但以合用更为有效.     

rhG-CSF、rhGM-CSF在血液病治疗中的应用

<正>骨髓造血细胞的增殖分化有赖于各种造血因子的作用。其中作用于髓系造血细胞的生长因子主要为CSF(Colony Stimulating Factor,集落刺激因子),它是一组低分子量的酸性糖蛋白,依其作用靶细胞的不同可分为粒-单核细胞集落刺激因子(GM-CSF)、粒细胞集落刺激因子(G-CSF)、巨核细胞集落刺激因子(M-CSF)、白细胞介素-3(IL-3)等。利用基因重组技术,目前这类因子已能大量制备,供实验和临床应用。临床应用最多的造血因子包括重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)和重组人粒-单核细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)。     

脐血造血干/祖细胞集落体外生物特性的研究

目的探讨脐血造血干/祖细胞CD34+含量、集落生长及产率等生物特性并与骨髓进行相关比较。方法选择脐血标本25份,正常骨髓标本18份,健康成人标本20份,对脐血体积测量和有核细胞计数,用流式细胞仪对脐血、骨髓、外周血中CD34+细胞含量进行检测;采用体外细胞培养法测定脐血和骨髓的粒单系祖细胞集落(CFU-GM)和粒-巨噬细胞与红系细胞混合集落(CFU-GEM)的产率、生长、构成,并进行了相关比较。结果①脐血量平均为96.73 mL(64~150 mL)含有核细胞数为7.84×108[(4.94~11.3)×108];②脐血中CD34+细胞含量0.85%虽低于骨髓的1.68%,但明显高于外周血的0.15%,P均<0.05,差异有显著性;③CFU-GM的产率脐血为(92.9±12.2)/2×105高于骨髓的(73.4±14.1)/2×105,脐血CFU-GEM的产率(11.64±1.86)/2×105高于骨髓的(8.63±1.17)/2×105,差异均有显著性(P<0.01,P<0.05)。结论①脐血中含有丰富的造血干/祖细胞,是造血干细胞移植的较好的来源。②脐血的造血干/祖细胞对外源性集落刺激因子反应较骨髓更敏感,更易在外源条件下增殖分化,体外扩增获得大量脐血造血干/祖细胞以达到移植阈值是完全可行的。     

集落刺激因子促进体内造血的研究

集落刺激因子(CSF)是一组糖蛋白物质,包括粒细胞集落刺激因子(G-CSF)、粒一巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)等,在体外实验刺激粒一巨噬祖细胞增殖、形成集落。近年来国外有报导G-CSF、GM-CSF在体内也能促进造血,升高周围血白细胞,也有报导应用重组的G-CSF、GM-CSF治疗疾病,取得良好的疗效。我们以胎盘条件培养液(HPCM)为CSF来源,在动物体内应用,观察CSF对拉一巨噬系祖细胞(CFU-GM)增殖的影响,以及提升周围血白细胞的影响。     

19 重组人造血细胞生长因子对正常造血细胞体外生长的影响

作者采用4种重组人造血细胞生长因子,包括白细胞介素3(IL-3)和3种集落刺激因子;粒巨噬细胞CSF(GM-CSF),粒细胞CSF(G-CSF)和巨噬细胞CSF(M-CSk),观察它们对12例正常造血细胞体外增殖和克隆形成的影响,比较各自的作用特点以及对CSF的剂量依赖性,探讨CSF临床应用的意义。结果表明,IL-3和GM-CSF对造血前体细胞都有较强的促增殖作用,使细胞的DNA合成增加,但GM-CSF刺激CFU-GM生长的作用明显大于IL-3,表明GM-CSF在诱导粒巨噬细胞分化方面较强。G-CSF和M-CSF属     

昆布多糖对大鼠骨髓巨噬细胞生物活性的影响

目的 研究昆布多糖对大鼠骨髓巨噬细胞生物活性的影响.方法 制备并体外培养大鼠骨髓造血干/祖细胞、巨噬细胞;制备昆布多糖作用后的骨髓巨噬细胞条件培养液,测定培养液中造血生长因子促红细胞生成素(EPO)、粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白细胞介素-3(IL-3)表达及活性;测定昆布多糖条件培养液作用后造血祖细胞的集落产率.结果 经昆布多糖诱导的骨髓巨噬细胞培养上清液可显著提高骨髓造血祖细胞的集落产率;经昆布多糖诱导后,骨髓巨噬细胞的EPO、GM-CSF和IL-3的表达增高.结论 昆布多糖可刺激骨髓巨噬细胞造血因子表达增高,从而促进髓系多向性造血祖细胞(CFU-Mix)、红系祖细胞(CFU-E)、粒一单系造血祖细胞(CFU-GM)的增殖分化.     

造血因子对急性髓性白血病细胞动力学的影响

观察了ｒｈＧＭ－ＣＳＦ，ｒｈＩＬ－３，ｒｈＩＬ－６和ｒｈＩＬ－９单独或配伍与正常和急性髓性白血病（ＡＭＬ）骨髓共同培养不同时间对细胞ＤＮＡ及增殖周期的影响。结果显示正常和ＡＭＬ骨髓经４种造血因子（ＨＧＦｓ）作用后均有异倍体的检出。其异倍体的发生与Ｓ期细胞的增高有一定相关性。ＨＧＦｓ单独或配伍作用７天时ＡＭＬ骨髓细胞Ｓ％的增高明显大于正常骨髓细胞。     

Inducing effects of macrophage stimulating protein on the expansion of early hematopoietic progenitor cells in liquid culture

Background Macrophage stimulating protein （MSP） is produced by human bone marrow endothelial cells. In this study we sought to observe its effects on inducing the expansion of early hematopoietic progenitor cells which were cultured in a liquid culture system in the presence of the combination of stem cell factor （SCF）, interleukin 3 （IL-3）, interleukin 6 （IL-6）, granulocyte macrophage-colony stimulating factor （GM-CSF）, erythropoietin （EPO） （Cys） and MSP or of Cys and bone marrow endothelial cell conditioned medium （EC-CM）. Methods Human bone marrow CD34^＋ cells were separated and cultured in a liquid culture system for 6 days. Granulocyte-macrophage colony forming unit （CFU-GM） and colony forming unit-granulocyte, erythrocyte, macrophage, megakaryocyte （CFU-GEMM） were employed to assay the effects of different treatment on the proliferation of hematopoeitic stem/progenitor cells. The nitroblue tetrazolium （NBT） reductive test and hoechest 33258 staining were employed to reflect the differentiation and apoptosis of the cells respectively. Results MSP inhibited the proliferation of CFU-GM and CFU-GEMM in semi-solid culture and the inhibitory effect on CFU-GEMM was stronger than on CFU-GM. MSP inhibited the differentiation of early hematopoietic progenitor cells induced by hematopoietic stimulators. Bone marrow （BM） CFU-GEMM was 2.3-fold or 1.7-fold increase or significantly decreased in either Cys＋EC-CM, Cys＋MSP or Cys compared with 0 hour control in liquid culture system after 6 days. Conclusion MSP, a hematopoietic inhibitor, inhibits the differentiation of early hematopoietic progenitor cells induced by hematopoietic stimulators and makes the early hematopoietic progenitor cells expand in a liquid culture system.     

脐血CD_(34)~+细胞体外扩增的实验研究

目的　探讨脐血造血细胞体外扩增及其移植的最佳时期。方法　用免疫磁珠法分离纯化人脐血CD+34细胞 ,从CD+34细胞不同体外培养系中取样检测细胞总数、CD+34细胞百分率和CFC(包括CFU -GM和BFU-E)。结果　A组 (加rhSCF、rhIL - 3、rhG -CSF、rhEpo及rhTPO)与B组 (加rhFL、rhIL - 3、rhG -CSF、rhEpo及rhTPO)对各阶段造血细胞扩增效果无显著差异 ,C组 (加rhSCF、rhFL、rhIL - 3、rhG -CSF、rhEpo及rhTPO)各项结果均显著优于A组 (P <0 0 1)和B组 (P <0 0 1) ,rhCSF与rhFL有明显的协调效应 ;培养 7d时开始增多 ,培养 14d进入高峰 ,培养 2 1d开始下降 ,培养 2 8d明显下降。结论　C组能明显扩增人脐血造血细胞 ,培养 7～ 14d造血细胞达高峰 ,为移植最佳时间。     

用胚胎干细胞诱导的造血干/祖细胞重建小鼠造血功能研究

目的 胚胎干细胞体外诱导分化出现CD34^ 造血干/祖细胞，然后将其注射入致死量照射小鼠体内，以研究其重建造血功能。方法 胚胎干细胞自由分化形成胚胎体后，加入造血刺激因子混合液以诱导产生CD34^ 造血干／祖细胞，将这些造血干／祖细胞注射入经致死剂量照射的小鼠，观察小鼠存活率的改变，并取存活2个月的小鼠骨髓和脾脏，PCR检测嵌合体形成。结果 体外分化第13日CD34^ 造血干／祖细胞比例可高达17．36％，将这些细胞注射入致死量照射小鼠后，可提高存活率达86．67％，存活小鼠的骨髓和脾脏均检测到供体来源的细胞。结论 胚胎干细胞体外分化获得CD34^ 造血干/祖细胞，且后者具有其相应的正常生物学功能。     

人PBMC和脐血CD34+细胞诱导DC2的实验方法研究

目的:探讨从人外周血单个核细胞(PBMC)和脐血CD34+造血干细胞(HSC)诱导DC2方法。方法:分别用rhIL-3(10ng/ml)+rhG-CSF(100ng/ml)和rhFlt-3L(100ng/ml)+rhIL-3(10ng/ml)+rhG-CSF(100ng/ml)诱导人PBMC和脐血CD34+HSC向DC2分化,并采用流式细胞仪分析细胞的表型,同时观察rhTNF-α和人CD40单抗诱导DC2分化成熟的作用。结果:rhG-CSFh+rhIL-3未能较好地从PBMC中诱导出DC2,但是从富集的脐血CD34+HSC用rhFlt-3L+rhIL-3+rhG-CSF诱导,可以获得相对较多的DC2,并有较高的扩增效率,但离临床研究和应用还有一定距离,因此DC2的诱导方法仍需进一步优化。人CD40单抗和rhTNF-α一样,能有效地诱导DC2分化成熟。结论:体外联合多种细胞因子从CD34+HSC成功地诱导出DC2,抗人CD40单抗有利于DC2的活化成熟。     

Effect of Angiotensin Ⅱ on Cord Blood CD34+ Cells Expansion in vitro

In order to investigate the influence of angiotensin Ⅱ on hematopoietic system, CD34+cells in cord blood were purified, and the effects of angiotensin Ⅱ in combination with various cytokines on their growth and differentiation were studied by cell culture in vitro. It was found that angiotensin Ⅱ in suspending medium could stimulate both BFU-E and CFU-GM expansion. The number of BFU-E and CFU-GM was increased with the increases of angiotensin Ⅱ concentrations during a certain range. In addition, the expansion fold of CFU-GM was increased from 2.3±0.8 times to 7.8±2.3 times when angiotensin Ⅱ was added in the presence of SCF+G-CSF+GM-CSF+IL-3 cytokines mixture. Similarly, the expansion fold of BFU-E was increased from 3.1 ±1.8 times to 9.2±2.3 times with angiotensin Ⅱ in the presence of SCF+EPO+TPO+IL-3. In the semi-solid medium, angiotensin Ⅱ could stimulate CFU-GM expansion but had no effect on the growth of BFU-E. In conclusion, angiotensin Ⅱ had some stimulating effects on cord blood hematopoietic progenitors expansion in vitro in the presence of other cytokines.     

人参总皂甙诱导人骨髓基质细胞表达GM-CSF的实验研究

目的：研究人参总皂甙(TSPG)对人骨髓基质细胞表达GM—CSF的影响及其与人粒单系血细胞发生的关系。方法：采用造血祖细胞与骨髓基质细胞体外培养、造血生长因子生物学活性检测、免疫细胞化学和核酸分子原位杂交等技术。结果：TSPG能显著刺激粒单系造血祖细胞(CFU—GM)增殖；经TSPG诱导制备的骨髓基质细胞条件培养液富含GM—CSF样活性；TSPG能显著促进骨髓基质细胞的GM—CSF蛋白和mRNA表达。结论：TSPG可能通过直接和/或间接途径促进造血诱导微环境中的骨髓基质细胞合成和分泌GM—CSF，进而促进CFU—GM的增殖分化。     

参芪扶正注射液对化疗后小鼠造血功能影响的实验研究

目的 探讨参芪扶正注射液对化疗后小鼠造血功能的影响.方法 用5-氟尿嘧啶（5-FU）225 mg/kg腹腔注射复制骨髓抑制动物模型,治疗组给予参芪扶正注射液5 ml/kg,对照组给予同剂量生理盐水.治疗1周后,做血细胞计数、各系造血祖细胞集落（CFU-GM、CFU-E、CFU-MK）培养和骨髓病理检查.结果 参芪扶正注射液能升高外周血细胞计数：治疗组小鼠外周血的红细胞、白细胞和血小板计数均高于对照组（P〈0.05）.促进造血祖细胞增殖：治疗组小鼠的CFU-GM、CFU-E、CFU-MK集落数均大于对照组（P〈0.05）.改善骨髓抑制：骨髓病理检查对照组出现大片空白区,造血细胞稀少,而治疗组造血组织结构较完整,造血细胞量丰富.结论 化疗后小鼠在骨髓抑制、造血功能低下时,参芪扶正注射液能通过促进骨髓各系造血祖细胞的增殖,改善骨髓造血组织增生,从而促进血细胞的生成.     

内毒素对造血细胞的动员

本文报告了低毒性的紫色杆菌内毒素对小鼠造血干细胞的动员作用,并研究了动物对内毒索的敏感性与动员作用的关系。结果表明,静脉注射内毒素后,小鼠血中造血干细胞数(CFU-S)逐渐升高,第5天达高峰,为对照组的2倍。在内毒素敏感动物(ICR纯种小鼠),内毒素对粒-巨系祖细胞(CFU-GM)的动员作用明显增强。因此,预先先注射卡介苗,使机体对内毒素的敏感性提高后,内毒素可动员出更多的造血祖细胞。     

Transwell培养体系中人AGM区基质细胞支持脐血CD34+细胞造血

[目的]探讨Transwell系统中人胚主动脉-性腺-中肾(AGM)区基质细胞对脐带血造血干/祖细胞的造血能力长期维持及扩增的作用.[方法]采用免疫磁珠方法分离人脐带血CD34 细胞,接种于底层铺有人AGM区基质细胞的Transwell培养板的Inserts中,非接触共培养7～35 d,每星期取样检测细胞总数,用半固体培养基分析CFU-C及HPP-CFU集落形成数,流式细胞术检测CD34 、CD34 CD38-细胞百分率.[结果]在Transwell中非接触共培养条件下,人AGM区基质细胞培养体系较胚胎躯干基质细胞和无饲养层培养体系对有核细胞总数、CFC和CD34 细胞均具有明显的扩增作用,共培养14 d的CD34 、CD34 CD38-造血干/祖细胞均获得峰值扩增(2.62±0.8和2.15±1.04,P<0.05),而MNC总数和CFC均在21 d获得最大扩增(32.5±4.3和4.2±0.6倍,P<0.05).克隆分析发现CFU-Mix、CFU-GM、BFU-E在共培养4～5星期后均仍然可见.原始祖细胞HPP-CFC在3星期也得到2.23倍的扩增,较空白及hFT对照组均有显著性差异(P<0.05),并在共培养35 d后仍可见HPP-CFU集落形成.[结论]人AGM区基质细胞hAGM-S3/hAGM-S4均具有造血支持作用,在非接触共培养条件下中可长期维持脐血中造血干/祖细胞的多系造血能力和高增殖潜能达21～35 d,对脐血CD34 /CD34 CD38-细胞数也有一定程度的扩增作用.