胃癌病人NK细胞活性变化机理的初步研究

应用~(51)Cr释放试验和效靶结合试验,同时测定了正常人和胃癌病人外周血NK细胞活性与靶结合细胞数(TBC),研究了正常人及病人血浆对NK细胞功能的影响。发现正常人NK细胞活性与靶结合细胞数之间的关系呈直线正相关,但在NK活性降低的病人中靶结合细胞数却无明显改变,二者无相关性,而病人的血浆对正常人外周血NK活性则有明显的抑制作用(P<0.05),且抑制率与胃癌人NK细胞活性存有着负相关的关系,提示胃癌病人血浆具有抑制NK细胞活性的物质。     

NKG2D配体介导雷帕霉素对自然杀伤细胞的间接抑制作用

[摘要] 目的 探讨雷帕霉素对高表达三磷酸腺苷(ATP)结合转运蛋白G超家族成员2(ABCG2)人耐药鼻咽癌细胞CNE2/DDP (简写作ABCG2HighCNE2/DDP) NKG2D配体表达及其对NK(Natural killer NK)细胞杀伤活性的影响。方法 利用免疫磁珠技术分离ABCG2HighCNE2/DDP细胞及NK细胞,流式细胞技术检测分离后细胞纯度及经雷帕霉素处理前后靶细胞NKG2D配体表达率,LDH释放测定法检测经雷帕霉素处理前后ABCG2HighCNE2/DDP细胞对NK细胞的杀伤敏感性。结果 ABCG2HighCNE2/DDP细胞分离后ABCG2表达率为(91.40±2.32)%,分选后NK细胞CD3－CD16+CD56+细胞的纯度达90%以上,经雷帕霉素处理之后靶细胞MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3表达率,由药物处理之前的(2.92±0.33)%、(4.27±0.33)%、(5.80±0.62)%、(11.10±3.15)%、(7.75±1.14)%分别下降到(1.50±0.36)%、(2.36±0.72)%、(2.24±0.12)%、(5.06±1.16)%、(3.94±0.78)%。在效靶比为10:1、20:1时,NK细胞对雷帕霉素处理前后ABCG2HighCNE2/DDP细胞的杀伤率由处理前的(15.32±1.34)%、(27.26±2.02)%下降到(10.82±0.73)%、(22.72±2.03)%,处理前后杀伤率有显著性差异(F=71.40 P＝0.000)。结论 雷帕霉素通过诱导肿瘤细胞低表达NKG2D配体(MICA/B、ULBP1-3),间接抑制了NK细胞的杀伤活性。     

同种异体NK细胞对CD34+早期急性髓系白血病细胞的细胞毒效应

目的 探讨同种异体NK细胞对CD34 早期急性髓系白血病细胞的细胞毒效应.方法 免疫磁珠法分离5例健康个体NK细胞,乳酸脱氢酶释放法测定不同效靶比时NK细胞对CD34 早期急性髓系白血病细胞KG1a的杀伤活性,甲基纤维素克隆形成实验检测NK细胞对KG1a细胞的克隆形成抑制率,同时与NK杀伤敏感细胞株K562比较.结果 急性髓系白血病细胞株KG1a中CD34抗原表达率为(98.0±1.1)%,分选后的NK细胞(CD3CDl6 CD56 细胞)纯度为(93.2±3.7)%.不同效靶比时NK细胞对KG1a细胞均有杀伤活性,均能抑制其克隆形成.随着效靶比的增高,其杀伤活性和克隆抑制率随之增高(P＜0.05).同一效靶比时,NK细胞对KG1a的杀伤活性和克隆抑制率低于K562(P＜0.05).结论 同种异体NK细胞对CD34 早期急性髓系白血病细胞具有细胞毒效应.     

LAK细胞对直肠腺癌细胞杀伤的观察

采用体外培养方法,在恒温(37℃)和5％CO_2条件下,连续观察LAK细胞对直肠腺癌细胞系(HR8348)的结合率。杀伤活性及杀伤动态。结果表明:HR8348细胞对LAK细胞杀伤较敏感,在相同的效靶比例条件下,4h时效靶细胞结合率为52.0±3.6,LAK细胞杀伤率为49.0±2.3％。效靶细胞结合率及杀伤率呈正相关(P<0.01),LAK细胞的杀伤取决于效靶细胞的稳定结合。LAK细胞杀伤HR8348的动态过程是:效靶细胞主动趋向运动→相互识别→接触与结合→LAK细胞发挥杀伤作用→靶细胞溶解。LAK细胞杀伤作用随效靶共育时间延长乃效靶比例的增高而增强。     

淋巴瘤病人外周血NK活性变化及其临床意义

应用~(126)I-UdR释放法,检测58例淋巴瘤病人及52例正常人外周血自然杀伤细胞(NK)活性。治疗前和复发病人NK活性分别为39.56±13.45％和43.31±13.30％,均明显低于正常人(58.01±8.21％)。Ⅲ～Ⅳ期病人NK活性(34.72±12.6％)明显低于Ⅰ～Ⅱ期病人(45.47±11.63％);伴有全身症状的病人(31.38±11.43％)明显低于无全身症状病人(45.91±11.45％)。NK活性与治疗效果有关。治疗后完全缓解者NK活性恢复正常,部分或未缓解者则无明显改善。NK活性与淋巴瘤组织类型无关。     

用酶释放试验检测小鼠的自然杀伤细胞活性

用乳酸脱氢酶(LDH)释放试验检测小鼠自然杀伤细胞(NK)活性,以YAC-1为靶细胞,小鼠脾细胞为效应细胞,用分光光度计测定受损靶细胞释放的LDH,探讨靶细胞的最适培养时间和浓度,效靶比例和测定时温度的影响。实验证实了小鼠NK活性水平与鼠龄及鼠的品系有关,并观察到非纯化白细胞介素-2(IL-2)与鼠脾细胞体外共育1h对NK活性有增强作用。     

膀胱癌患者术后的NK和ADCC细胞毒活性及其对HulFN-γ体外调节的反应性

观察了31例膀胱癌患者术后的外周血NK和ADCC细胞毒活性及其对人γ干扰素(HuIEN-γ)体外调节的反应性。结果表明,这些患者平均NK活性为32.48±15。5％,与正常人比较无显著差异(P>0。05);ADCC活性平均为43±21。44％,明显低于正常人(P<0.01)。进一步用HuIFN-γ体外调节这些患者细胞毒活性,可见调节后其NK活性增高至平均53。86±21.2％,比调节前明显增强(P<0.01);ADCC活性平均增高至50.99±23.66％,与调节前比较无显著性差异(P>0.05)。24例低NK活性患者中15例的NK活性经HuIFN-γ调节后恢复至正常水平以上,占62.5％;而25例低ADCC活性患者中仅4例经调节后恢复正常,占16％。提示HUIFN-γ对NK的促进作用似强于K细胞。本研究为临床应用干扰素治疗膀胱癌患者提供了某些有参考意义的实验依据。     

红斑狼疮患者NK细胞的变化

本文报道了126例红斑狼疮(SLE)患者及19例其它胶原疾病患者的NK活性,用LDH释放测定法发现SLE患者NK活性为12.01±8.03%,对照组为32.45±8.17%(P<0.001)。9例类风关的NK活性也低(P<0.001),绝大多数SLE患者的NK活性比正常人的NK活性均值低,仅2例轻型患者(1.59%)的NK活性超过正常人均值。16例具有肾脏损害的SLE患者NK活性更低(7.11±5.11%),20例未用激素治疗的NK活性同样受到损害(13.43±10.99%)。说明SLE患者的NK功能受损,也反映了NK活性与疾病的严重与否有关。     

慢性肝病患者自然杀伤细胞活性观察

应用~(125)I—UdR释放法对25例正常人及50例慢性肝病患者外周血NK活性进行了观察.发现男性NK活性(平均为59.8±10.5%)显著高于女性者(平均为41.0±6.5%)P<0.05.慢性肝病患者NK活性(平均为31.8±18.8%)显著低于正常对照者(平均为57.4±11.0%)P<0.001.且肝硬化病人NK活性(平均为31.6±16.5%)显著低于慢性肝炎者(平均为35.8±18.5%)P<0.05。推测慢性肝病患者NK活性降低可能与乙肝病毒感染有关系。     

重组人白细胞介素-2对白血病患者NK细胞活性的体外调节作用

~(125)I释放法测定42例正常人和36例白血病患者外周血的自然杀伤(NK)细胞活性。结果:初发期患者 7.1±4.0%,缓解期33.6±7.6%,均明显低于正常人57.7±12.3%。用重组人白细胞介素—2(rIL—2)培养外周血单个核细胞(PBMNC)后,可使缓解期患者NK细胞活性恢复到正常水下(60%),但不能使初发期和复发期NK细胞活性(27%)恢复正常。     

慢性肝炎患者NK细胞活性与TNF含量的观察及其临床意义

本文应用乳酸脱氢酶(LDH)释放法对28例正常人及27例慢性肝炎患者外周血NK细胞活性进行了观察．发现慢性肝炎患者NK细胞活性(X±S为19.82±8.67%)显著低于正常对照组(X±S为29.6±8.62％)，P<0．01。另应用ELISA法对20例正常人及20例慢性肝炎患者血浆中TNF含量进行了测定．结果表明．慢性肝炎患者血浆中TNF含量(X±S为160．95±256μg/L)与健康人血浆对照组(X±S为0.66±0．97μg/L)比较，P<0．01。文章还对慢性肝炎患者NK细胞活性和TNF含量及其与临床的关系进行了讨论.     

NK细胞免疫编辑后的人鼻咽癌细胞株CNE2 HLA Ⅰ类分子和MICA/MICB的表达及其对NK细胞杀伤活性的影响

目的: 探讨自然杀伤(NK)细胞与表达NKG2D配体的人鼻咽癌细胞株CNE2混合培养24 h时CNE2细胞表面HLA Ⅰ类分子及MHC Ⅰ类链相关分子(MICA/MICB)的变化及编辑前、后的CNE2细胞对NK细胞杀伤敏感性的差异. 方法:PCR-SSP法检测NK细胞KIR分型,流式细胞仪检测编辑前的CNE2细胞(单纯培养的CNE2细胞),编辑后的CNE2细胞(NK细胞与CNE2细胞10∶ 1混合培养24 h)表面HLA Ⅰ类分子及MHC Ⅰ类链相关分子(MICA/MICB)的表达情况,LDH释放法测定3例健康者的NK细胞在不同效靶比时对编辑前、后的CNE2细胞的杀伤活性. 结果:编辑前、后的CNE2细胞表面MICA/MICB的表达率分别为(88.67±2.81)%和(34.53±3.15)%,两者相比差异有统计学意义(P＜0.01);编辑前、后的CNE2细胞表面HLA Ⅰ类分子表达率分别为(99.77±0.12)%和(97.80±0.87)%,两者相比差异无统计学意义(P＞0.05). NK细胞对编辑前、后的CNE2细胞的杀伤活性在效靶比10∶ 1时分别为(26.96±1.47)%和(6.60±0.86)%,两者相比差异有统计学意义(P＜0.01);效靶比20∶ 1时分别为(35.74±3.59)%和(11.57±2.02)%,两者相比差异有统计学意义(P＜0.01). 结论: CNE2细胞与NK细胞持续性接触24 h,CNE2细胞表面HLA Ⅰ类分子表达无改变,MICA/MICB表达下调,导致编辑后的CNE2细胞激发NK细胞杀伤活性下降. 本研究初步证明了NK细胞对编辑后的肿瘤细胞杀伤活性下降的分子基础,同时为我们如何提高NK细胞的杀伤活性提供了新的干预的靶点.     

干扰素对急性淋巴细胞性白血病和宫颈癌患者PBMC-ADCC活性的影响

本文以~(51)Cr标记的鸡红细胞为靶细胞,检测急淋和宫颈癌两类肿瘤患者外周血单个核细胞的ADCC活性,并研究干扰素对该活性的影响。40名正常人的ADCC活性为43.52±10.18％。14例急淋患者的ADCC活性为27.84±10.38％,比正常人组明显降低(P<0.001)。20例宫颈癌患者的ADCC活性为41.12±11.35％,与正常人组相比无显著差异(P>0.05)。     

NK-92细胞对人卵巢癌细胞体外杀伤活性

目的研究NK-92细胞对人卵巢癌细胞的体外杀伤活性以及放射线照射后对其杀伤活性的影响. 方法以体外培养人卵巢癌细胞系HO-8910为靶细胞,以NK-92的敏感细胞株K562作为对照,应用4 h 51Cr释放法检测不同效靶比情况下体外培养NK-92细胞的杀伤活性,并应用医用电子直线加速器对NK-92细胞进行照射处理(0、400 cGy)后再检测其杀伤活性变化. 结果 NK-92细胞未照射组,效靶比较低时(1∶1、5∶1)对于HO-8910细胞杀伤率为39%～45%,随效靶比升高,杀伤率随之上升,10∶1时杀伤率显著上升为59%,20∶1时杀伤率仅上升了6%;对于K562细胞,杀伤率为58%～71%.照射后2 d,400 cGy组NK-92细胞对HO-8910细胞不同效靶比的杀伤率与0 cGy组相比有所降低,其总体杀伤率为42%～62%,对K562细胞杀伤范围在44%～61%之间. 结论 NK-92细胞对人卵巢癌细胞系HO-8910具有较高的杀伤活性,经放射线照射后仍保留一定的杀伤活性.     

人类淋巴结自然杀伤(NK)细胞活性的探讨

作者在不同效靶比例下检测16例手术区引流淋巴结单个核细胞(LNMC)的NK活性,并与自体外周血作了比较;在体外试验中观察了IL-2和IFN_a对LNMC NK活性的影响。结果显示,在外周血NK活性检测的常规效靶比例(100:1)下,测得的LNMC NK活性甚低(10.30%),远低子外周血水平(50.03％)。P<0.01。随效靶比例增大,LNMC NK活性直线升高,600:1时测得的NK活性达34.11%,接近于外周水平(50.03%),P>0.05。相并分析发现,LNMC和PBMC的NK活性水平呈正相关(p<0.05)。在效靶细胞作用的同时加入外源性Ⅱ-2和IFN_a,能显著性地促进LNMC NK活性(P<0.001和P<0.01)。该试验表明不     

骨转移瘤LAK细胞治疗前后NK活性水平变化及意义

目的了解骨转移瘤患病机体NK活性变化及免疫状况与致命再转移的关系.方法对20例骨转移瘤转输自体LAK前后作了NK活性动态性监测,所测参数与10例正常人作了分析比较.结果正常对照组平均NK活性率(49.5±12.2)%;LAK组治疗前平均NK活性(19.9±20.5)%,治疗后平均活性(35.48±17.44)%,与正常对照组比较差异有显著性(P＜0.05).结论动态个体NK活性监测用以判断机体免疫状态与疗效较为客观,可作为监测恶瘤再转移的参考指标.     

128名健康人的天然杀伤细胞活性

本文研究目的是建立上海地区正常人外周血 NK 细胞的活性水平。应用4小时 NK 细胞溶解~(51)Cr 标记人体髓样白血病肿瘤靶细胞的微量细胞毒性试验,测定了上海浦东地区128名正常人(年龄20～60岁)NK 细胞的活性。外周血效应细胞和靶细胞的比例为50∶1时,平均活性为45.5±16.7。男性64例 NK 细胞平均活性为48.3±15.4;女性64例 NK 细胞平均活性为43.1±17.3两者间无统计学差异(P>0.05),实验还提出,各年龄组间,男女同年龄组间 NK 活性均无统计学差异(P>0.05)。本文就人体 NK 细胞的作用与其临床医学和基础免疫生物学研究的意义进行了讨论.     

NKG2D配体在耐药鼻咽癌细胞的表达及其对NK细胞杀伤活性的影响

目的 探讨NKG2D的主要活化性配体在鼻咽癌亲本细胞CNE2和多药耐药细胞CNE2/DDP的表达及其对自然杀伤(NK)细胞杀伤活性的影响.方法 流式细胞仪检测NKG2D的主要活化性配体MHC-Ⅰ类链相关蛋白A和B(MICA、MICB)、UL16结合蛋白1-3(ULBP1、ULBP2、ULBP3)在CNE2、CNE2/DDP细胞的表达情况;PCR-SSP法检测CNE2、CNE2/DDP细胞HLA-A、B、Cw分型和NK细胞KIR分型;LDH释放法测定5例健康者的NK细胞在不同效靶比时对CNE2、CNE2/DDP细胞的杀伤活性;效靶比20∶1时观察不同单抗对NK细胞杀伤CNE2、CNE2/DDP细胞活性的阻断作用.结果 CNE2、CNE2/DDP细胞HLA分型为A2,24,B18,35,Cw4,7;5例健康者的NK细胞表达KIR2DL1,KIR2DL3,KIR3DL1,KIR3DL2与CNE2、CNE2/DDP细胞表面的HLA-I类分子之间存在错配.CNE2、CNE2/DDP细胞均表达NKG2D的配体MICA、MICB、ULBP2,均不表达ULBP1、ULBP3;CNE2细胞MICA、MICB的表达率与CNE2/DDP细胞相比差异有统计学意义(P＜0.01).效靶比5∶1、10∶1、20∶1、30∶1时NK细胞对CNE2、CNE2/DDP细胞的杀伤活性分别是(10.50±2.17)%、(4.98±0.95)%;(27.68±1.47)%、(15.48±2.10)%;(36.99±3.13)%、(28.46±4.30)%;(55.00±2.20)%、(40.95±2.21)%.在各效靶比时NK细胞对CNE2细胞的杀伤活性与CNE2/DDP细胞相比差异有统计学意义(P＜0.01);效靶比20∶1时anti-MICA、anti-MICB、anti-ULBP2单抗可明显抑制NK细胞对CNE2、CNE2/DDP细胞的杀伤活性,与阻断前相比差异有统计学意义(P＜0.05);anti-ULBP1、anti-ULBP3单抗不能阻断NK细胞对CNE2、CNE2/DDP细胞的杀伤活性.结论 NKG2D的主要活化性配体MICA、MICB在CNE2、CNE2/DDP细胞的表达差异与NK细胞的杀伤活性有关,肿瘤细胞在发生多药耐药的同时获得了免疫逃避能力.     

阻断转化生长因子-β信号通路对自然杀伤细胞体外抗肿瘤效应的影响

目的 将pIRES2-AcGFP-DNTβRⅡ质粒转染原代NK细胞阻断其转化生长因子-β(TGF-β)信号,观察对人结肠癌细胞株HT-29的体外杀伤能力.方法 将HT-29细胞与TGF-β1共孵育,使其终浓度为10ng/ml,采用Amaxa Nucleofector技术分别将pIRES2-AcGFP-DNTβRⅡ质粒和pIRES2-AcGFP空质粒转染原代NK细胞,活细胞计数试剂盒-8法检测二者对HT-29的体外杀伤活性.结果 pIRES2-AcGFP-DNTβRⅡ质粒和绿色荧光蛋白空质粒的转染效率分别为18.85%和35.28%;Western blotting、RT-PCR证实DNTβRⅡ在NK细胞表达;与TGF-β1共孵育后,原代NK细胞的杀伤活性减弱(效靶比10∶ 1时 14.40%±2.00%比26.14%±2.50%,P＜0.05;效靶比20∶ 1时19.18%±2.49% 比 40.81%±3.50%,P＜0.05);pIRES2-AcGFP-DNTβRⅡ质粒转染组NK细胞的杀伤活性高于绿色荧光蛋白对照质粒转染组(效靶比10∶ 1时21.17%±2.49% 比11.48%±1.11%,P＜0.05;效靶比20∶ 1时35.30%±3.78% 比17.19%±2.29%,P＜0.05).结论 pIRES2-AcGFP-DNTβRⅡ质粒转染原代NK细胞提高了NK细胞的体外抗肿瘤活性,为NK细胞过继性免疫治疗提供了新的方法.     

NK细胞杀瘤活性与肿瘤细胞表面MICA/B表达的相关性研究

 目的探讨自然杀伤NK细胞杀瘤活性与肿瘤细胞表面MICA/B表达的相关性。方法采用流式细胞术检测人红白血病细胞K562、乳腺癌细胞Bcap37、肾癌细胞769P及肺癌细胞A549表面MICA/B的表达,RosetteSep誖改进法分离人外周血NK细胞,MTT法检测不同效靶比时NK细胞对几种肿瘤细胞的杀伤活性。结果K562、Bcap37、769P及A549细胞表面MICA/B的表达阳性率分别是(60.35±0.50)%、(90.72±0.64)%、(55.59±0.55)%、(3.84±0.10)%;RosetteSep誖改进法分选出的NK细胞纯度为(96.52±2.42)%,在同一效靶比时,NK细胞对K562、Bcap37及769P的杀伤活性较强,与A549相比有显著性差异(P<0.01),其中K562与Bcap37之间无显著性差异(P>0.05);效靶比为5∶1、10∶1、20∶1时,NK细胞的杀伤活性与4种肿瘤细胞表面MICA/B表达均呈正相关关系(P<0.01),随着效靶比增加,相关性增强。结论NK细胞的杀伤敏感性与肿瘤细胞表面MICA/B的表达水平相关,肿瘤细胞表面MICA/B的表达水平影响NK细胞的杀伤活性。