抗人胰腺癌单克隆抗体杂交瘤的建立

用小鼠骨髓瘤细胞系SP 2/0与新鲜癌组织匀浆免疫的Balb/C小鼠脾细胞融合制备抗人胰腺癌单克隆抗体。经间接荧光抗体法和免疫组织化学法筛选及有限稀释法克隆化后,获得一株产生与正常人体组织不反应,与人胰腺癌反应率高的抗人胰腺癌单克隆抗体的杂交瘤细胞株。     

人OX40单克隆抗体的制备、纯化及初步鉴定

目的 应用杂交瘤技术,制备鼠抗人OX40单克隆抗体.方法 以本室纯化的OX40胞外段融合蛋白免疫6～8周龄的雌性BalB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,筛选分泌鼠抗人OX40单克隆抗体的杂交瘤细胞阳性克隆.用杂交瘤细胞接种小鼠腹腔诱生腹水,腹水经饱和硫酸铵纯化沉淀后用间接ELISA法测定抗体的Ig类别.SDS-PAGE分析抗体的纯化程度,用免疫组化技术鉴定单克隆抗体与表达有OX40分子的组织及细胞特异性结合的情况.结果 获得1株能稳定分泌鼠抗人OX40单克隆抗体的杂交瘤细胞,细胞株诱生的小鼠腹水纯化后抗体纯度较高,Ig类别为IgG,蛋白浓度为6.129g/L.制备的单抗经淋巴细胞免疫组化及炎性淋巴组织免疫组化技术初步鉴定结果表明,该抗体与OX40单克隆抗体标准品制剂相比具有类同的特异性.结论 成功获得能稳定分泌鼠抗人OX40单克隆抗体的杂交瘤细胞株,制备的单克隆抗体具有较高的纯度和活性.     

高效价抗人血红蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

目的制备高效价抗人血红蛋白(Hb)单克隆抗体并对其进行鉴定。方法用纯化人血红蛋白免疫Balb/c小鼠,取免疫后小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合,筛选分泌抗人Hb单克隆抗体的细胞株,将阳性细胞株接种于小鼠腹腔制备单克隆抗体并对腹水抗体进行纯化,测定抗体亚类,分析其敏感性、特异性及纯化抗体的相对亲和力。结果共获得3株单克隆抗体杂交瘤细胞株,均与人Hb有较高的亲和力,其敏感性可达0.5μg/ml,而且与人肌红蛋白(Mb)及各种动物血红蛋白、肌红蛋白均无交叉反应。结论3株单克隆抗体杂交瘤细胞株有较好的特异性,与人Hb有较高的亲和力。     

B7-H4在胰腺癌中的表达及其临床意义

目的：制备小鼠抗B7-H4单克隆抗体后研究B7-H4在胰腺癌中的表达情况及临床意义。 方法：以稳定表达B7-H4胞外段的3T3-B7-H4细胞为免疫原,免疫Babl/C小鼠;应用常规杂交瘤技术将免疫的小鼠脾细胞与Sp2/0小鼠骨髓瘤细胞融合,使用间接ELISA方法筛选分泌抗B7-H4 单克隆抗体的杂交瘤细胞株。对所获得的单克隆抗体进行亚型鉴定,使用Western blot、免疫沉淀和免疫组化等方法对单克隆抗体特异性进行鉴定;应用免疫组织化学染色检测B7-H4 分子在胰腺癌中的表达情况,并评价其与临床病理特征的关系。 结果：获得1株亚型为IgM、轻链为κ型的单克隆抗体,经鉴定该单克隆抗体能与B7-H4发生反应。免疫组化显示：胰腺癌组织中B7-H4 在胞浆和(或)胞膜弥漫表达,表达量显著高于正常胰腺组织(P<0.05)。B7-H4在临床肿瘤分级较高患者的胰腺癌组织及有淋巴结转移患者的胰腺癌组织中表达显著增强。 结论：成功获得了特异性抗B7-H4的单克隆抗体,B7-H4 在胰腺癌组织中表达上调,并与患者肿瘤分级和淋巴结转移密切相关。     

全人源抗狂犬病病毒糖蛋白抗体的制备及鉴定

目的:利用重组狂犬病病毒糖蛋白(RVG)免疫人源IgM转基因小鼠,制备全人源抗重组RVG蛋白单克隆抗体,并对其免疫学特性进行初步鉴定?方法:以重组RVG蛋白作为抗原免疫人源IgM转基因小鼠,采用杂交瘤技术制备筛选全人源抗重组RVG蛋白杂交瘤细胞株,双抗体夹心ELISA实验鉴定单抗的人源性及抗体类型,并对其特异性及与灭活狂犬病病毒CVS-11株的结合能力进行鉴定?结果:建立了5株稳定分泌抗重组RVG的全人源单克隆抗体杂交瘤细胞株,分别命名为5D1?6H11?9A3?15D6?19E6,均为人源IgM免疫球蛋白,5株单抗均能特异性识别重组RVG蛋白,其中3株能与灭活狂犬病病毒CVS-11株特异性结合?结论:筛选制备了特异性全人源抗重组RVG蛋白的单克隆抗体,能与灭活狂犬病病毒CVS-11株特异性结合,为进一步研制用于狂犬病防治的抗体药物奠定了基础?     

人血管性血友病因子A1区单克隆抗体的研制及其生物学功能的初步研究

目的 研制人血管性血友病因子(vWF)A1区的单克隆抗体及其生物学特性的鉴定.方法 采用基因重组技术体外表达人vWF A1区蛋白(rv, WF-A1),以rvWF-A1免疫Balb/c小鼠,通过细胞融合,HAT选择性培养,用ELISA筛选阳性杂交瘤细胞.采用Western blot和免疫组织化学方法进行单抗鉴定.结果 构建了rvWF-A1表达载体pQE30-vWF-A1.rvWF-A1在大肠杆菌M15中稳定表达.通过融合、筛选获得两株阳性杂交瘤细胞,命名为SZ-129和SZ-130.其分泌的抗体能特异性地与rvWF-A1和人血浆中vWF结合.结论 表达了rvWF-A1,并制备了具有潜在抗血栓作用的vWF-A1单克隆抗体SZ-129和SZ-130.     

舌鳞癌角蛋白单抗的制备与鉴定

目的:以人舌鳞状细胞癌角蛋白组群为抗原,制备了抗舌鳞癌角蛋白单克隆抗体,并对单抗的特异性进行鉴定和免疫组织定位。方法:提取和纯化的舌鳞癌角蛋白免疫小鼠,建立了五株稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株。免疫组化方法对18例口腔鳞癌病例进行抗体的特异性鉴定。结果:共获得5株抗角蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞株,分别命名为Lck1-5,免疫鉴定Lck1、Lck3、Lck4、Lck5都可在癌组织及癌转移淋巴结中部分表达,表达阳性细胞位于癌巢中的癌细胞胞浆中。其中以Lck4的特异性和敏感性最高。结论:成功进行了舌鳞癌角蛋白单克隆抗体的制备,其中Lck4敏感度、特异度最高。     

抗人肝微粒体蛋白单克隆抗体细胞系的建立及鉴定

目的 初步建立抗人肝微粒体蛋白单克隆抗体规模化制备技术平台,为制备抗人细胞色素P450(CYP450)亚型蛋白的单克隆抗体奠定基础.方法 按常规方法进行细胞融合,以酶联免疫吸附测定法(ELISA)筛选杂交瘤,以ELISA、免疫组化(HI)、免疫印迹(Western Blot)、免疫沉淀(IP)对单克隆抗体加以鉴定.结果 进行6次融合,共筛出216株杂交瘤,其分泌抗体类型为IgG1、IgG2a、IgG2b、及IgM.免疫组化(IH)图片上,人肝细胞浆内均可见阳性颗粒.免疫沉淀(IP)和免疫印迹(Western Blot)结果显示,所制备抗体与人肝微粒体蛋白有特异性结合.结论 筛选制备的单克隆抗体杂交瘤能分泌抗人肝微粒体蛋白单克隆抗体,并且有较强特异性,为下一步研究提供了基础与技术平台.     

人骨髓间充质干细胞表面抗原单克隆抗体的制备及初步鉴定

目的制备人骨髓间充质干细胞(MSCs)的特异性细胞表面抗原的单克隆抗体.方法以人骨髓MSCs为抗原,常规方法免疫Balb/c小鼠,细胞融合制备杂交瘤细胞,并用免疫荧光法在流式细胞仪上对杂交瘤产生的抗体进行初测和复测.结果通过分泌的抗体与人MSCs表面抗原特异性结合的鉴定,进行杂交瘤筛选,将复测为阳性的克隆连续克隆化培养,获得两株持续分泌抗人MSCs的杂交瘤细胞株:8g8、8f9.两株单抗经体外连续传代培养,生长良好,稳定分泌抗体.结论人骨髓MSCs的特异性细胞表面抗原单克隆抗体可望在MSCs的提纯和体外富集、特异性骨病的诊断等方面有广阔的应用前景.     

抗重组人乳腺珠蛋白单克隆抗体的制备及其特异性鉴定

目的通过杂交瘤技术获得特异性抗hMAM单克隆抗体,为进一步研制基于hMAM的乳腺癌早期诊断试剂盒奠定基础。方法以纯化的重组蛋白为抗原免疫Balb/c小鼠,运用杂交瘤技术制备、间接ELISA法及免疫组化法筛选出能稳定分泌特异性抗hMAM的单克隆抗体细胞株。结果通过杂交瘤技术获得了2株能分泌特异性抗hMAM单克隆抗体的杂交瘤细胞株hMAM-A2及hMAM-B7,其分泌的单克隆抗体亚类均属于IgG1,Western blotting结果显示2株细胞分泌的单克隆抗体特异性强能与34kDa处的hMAM抗原形成单一的蛋白质显色条带,免疫组化结果显示其仅与乳腺癌组织呈阳性反应,与其他肿瘤组织不发生交叉反应。结论利用鼠-鼠杂交瘤技术成功的制备了2株稳定分泌高效价、高特异性抗hMAM的杂交瘤细胞株。     

抗人胰腺癌细胞单克隆抗体SZ-121的放射免疫显像实验研究

目的研究^99mTc标记抗人胰腺癌单克隆抗体SZ-121在荷人胰腺癌裸鼠体内的显像及生物分布,探讨其用于胰腺癌早期诊断的可行性。方法采用皮下种植法建立荷人胰腺癌裸鼠移植瘤模型,以2-亚氨基噻吩盐酸盐（2-IT）修饰SZ-121,^99mTc-葡庚糖酸钠（GH）配体交换法标记SZ-121,经裸鼠尾静脉注入^99mTc-SZ-121后1、4h对裸鼠进行γ显像,于24h测定荷瘤小鼠体内组织的放射性分布。结果γ显像及生物分布显示,^99mTc-SZ-121被静脉注入荷瘤鼠后1h,肿瘤即清晰显影,随时间延长趋于增浓,且瘤组织与非瘤组织的放射性比值（T/NT）也逐渐增高,肿瘤每克组织百分注射剂量率（%IDPg）均高于注射^99mTc-IgG的对照组（P〈0.05）。结论^99mTc-SZ-121具有活体内定位导向能力,显像时间短,可能是一种有前途的胰腺癌显像剂。     

SZ-121单抗在人胰腺癌病理学诊断中的初步研究

目的　探讨一株新的高特异性抗人胰腺癌单克隆抗体SZ 12 1(McAbSZ 12 1)在人胰腺癌组织中的特异结合程度。方法　以人胰腺癌细胞株Patu8988为抗原 ,免疫Balb/C小鼠 ,利用杂交瘤技术 ,研制出一株McAbSZ 12 1。通过免疫组织化学方法检测了SZ 12 1在 4 7例不同分化胰腺癌及 10例良性胰腺组织上的结合反应。结果　SZ 12 1在良性胰腺组织上的结合率仅为 10 % ;而在 12例低分化胰腺癌上的结合率为 10 0 % ,14例中分化胰腺癌上的结合率为 85 .7% ,2 1例高分化胰腺癌上的结合率为 76 %。SZ 12 1在胰腺癌组织上的结合反应显著高于正常胰腺组织 (P <0 .0 0 1)。结论　SZ 12 1在人胰腺癌中的特异性高结合 ,可以为胰腺癌的诊断提供新的手段。     

一组抗人血栓调节蛋白单克隆抗体的建株

用纯化人血栓调节蛋白(TM)免疫Balb/c 小鼠,经细胞融合获得6株抗人TM 单抗,分别命名为SZ—52、SZ—53、SZ—54、SZ—55、SZ—56、和SZ—57。这6株单抗都能与人TM 和内皮细胞结合,并能抑制人TM 活性,而与除TM 外的血浆蛋白无交叉反应。其中SZ—52、SZ—53和SZ—57与红细胞、白细胞和血小板呈阴性反应,为特异性抗人TM 单抗;其余3株单抗则与白细胞或血小板有不同程度的交叉反应。     

抗人活化血小板单克隆抗体SZ-49的研究

本文报道1株抗人活化血小板的单克隆抗体——SZ-49。SZ-49仪和凝血酶刺激活化的血小板结合,而不与静止的血小板反应,为IgG1亚型。它和活化血小板结合是Ca~(2+)依赖性的,对血小板功能有明显的影响,SZ-49亲和层析获得的纯化抗原为小分子量蛋白。这种新的单克隆抗体为研究血小板活化过程中的系列改变及疾病状态下体内,外血小板活化程度的评估提供了新的方法。     

大鼠抗小鼠重组膜联蛋白A2单克隆抗体的制备与鉴定

目的建立能够分泌特异性抗小鼠膜联蛋白A2（AnxA2）的大鼠-小鼠融合单克隆抗体杂交瘤细胞系。方法利用重组小鼠AnxA2蛋白作为抗原免疫Wistar大鼠,通过细胞融合和杂交瘤筛选技术建立特异分泌抗小鼠AnxA2蛋白的大鼠-小鼠融合单抗杂交瘤细胞株。采用酶联免疫吸附方法确定单克隆抗体亚型,免疫印迹和流式细胞术验证所筛选的单克隆抗体的特异性。结果通过对30多个分泌抗体的融合细胞克隆的筛选,获得一株分泌特异性抗小鼠AnxA2的大鼠-小鼠融合单克隆抗体杂交瘤细胞系SZ-158,连续培养传代后染色体分析证实,Wistar大鼠脾细胞与小鼠SP2/0细胞稳定融合;免疫印迹和流式细胞术显示该单克隆抗体可以特异识别小鼠AnxA2重组蛋白。结论该研究所获得的大鼠-小鼠融合单克隆抗体特异性针对小鼠AnxA2蛋白,可用于AnxA2转基因小鼠中AnxA2表达的检测,为深入研究AnxA2的功能提供了物质保障。     

99Tcm-抗血栓成分单克隆抗体对动物血栓的放免显像研究

目的　评价９９Ｔｃｍ 标记抗血栓成分（ 血小板和纤维蛋白）的单克隆抗体（ＭｃＡｂ） ＳＺ－ ５１ 和ＳＺ－ ６３,对实验性动物（ 兔、狗）股动脉和股静脉血栓模型显像的作用。方法　以亚氨基噻吩盐酸盐（２ － ＩＴ） 修饰,９９Ｔｃｍ 标记葡庚糖酸钠（ＧＨ） 配体交换法标记ＳＺ－ ５１ 和ＳＺ－ ６３。狗、兔股动脉和股静脉血栓模型制备完毕后,耳缘静脉注入９９　Ｔｃｍ － ＳＺ－ ５１或９９Ｔｃｍ － ＳＺ－ ６３ 进行ＳＰＥＣＴ 显像。９９Ｔｃｍ 标记非特异性鼠ＩｇＧ 作为阴性对照。结果　９９Ｔｃｍ － ＳＺ－５１ 和９９Ｔｃｍ － ＳＺ－５１／６３ 对狗新鲜血栓均显示清晰,其最佳显像时间分别为注射后２ ～４ｈ 和０．５ ～２ｈ,而陈旧血栓未见显像。９９Ｔｃｍ － ＳＺ－ ６３ 兔陈旧血栓显示清晰,其最佳显像时间为注射后２ ～４ｈ。结论　９９Ｔｃｍ － ＳＺ－ ５１ 和９９Ｔｃｍ － ＳＺ－ ６３ 具有活体内血栓定位导向能力,显像时间短,用于血栓性疾病的放免显像有一定的可行性。     

Application of a monoclonal antibody SZ-51 specific for activated human platelets in canine thrombosis imaging]

To detect specifically the localization of thrombus in vivo, we prepared a monoclonal antibody (McAb) SZ-51 specific for an alpha-granule membrane protein (GMP-140) exposed on the surface of activated human platelets. 131I labeled SZ-51 antibody combined preferentially with thrombus induced by thrombin in vitro. Owing to McAb SZ-51 crossreaction with the activated platelets of dogs, thrombi in both femoral artery and vein were prepared and imaged with SPECT in dogs. The ratio of radioactivity between thrombi and blood pool was significantly increased in both arterial and venous thrombus after injection of 131I-SZ-51, especially at the 4th hour. Moreover, the imaging of arterial thrombus is better than that of venous thrombus. However, both arterial and venous thrombi could not be imaged by the injection of 131I-nonimmune IgG. These findings were in agreement with the radioactivity ratios between the removed thrombi and blood 24 hours after injection. Therefore, these results indicate that McAb SZ-51 has the power of detecting thrombi in vivo.     

131Ⅰ-KDR单克隆抗体抑制荷人膀胱癌SCID小鼠瘤体生长的实验研究

目的探讨131Ⅰ标记抗KDR单抗对SCID小鼠人膀胱癌皮下移植瘤模型瘤体生长的抑制作用.方法在复制SCID小鼠人膀胱癌皮下移植瘤模型的基础上,用131Ⅰ标记抗KDR单抗3G9,尾静脉注射荷瘤SCID小鼠作为实验组,以非标记抗KDR单抗3G9及生理盐水尾静脉注射荷瘤SCID小鼠作为对照组及空白组,观察131Ⅰ标记抗KDR单抗对SCID小鼠人膀胱癌皮下移植瘤模型瘤体生长的抑制作用.结果131Ⅰ-3G9尾静脉注射荷瘤SCID小鼠后3周,移植瘤瘤体内癌组织可见大片坏死,对照组移植瘤瘤体内癌组织也可见部分坏死,与空白组相比实验组与对照组对瘤体生长大小的抑制率分别为96.8%和87.7%.结论131Ⅰ-抗KDR单抗对肿瘤的抗血管生成治疗有潜在的临床应用前景.     

单克隆抗体-阿霉素免疫交联物在脑胶质瘤裸鼠模型体内导向治疗的初步研究

将本室制备的免疫导向药物-抗人脑胶质瘤单克隆抗体SZ-39和阿霉素交联物在脑胶质瘤裸小鼠模型NHG-1体内进行导向治疗研究。实验显示免疫交联物对胶质瘤的抑制作用显著优于游离药物、游离抗体及药物和抗体的混合物。免疫交联物治疗后肿瘤组织~3H-TdR掺入量显著低于各对照组,表明肿瘤细胞DNA合成被明显抑制。而免疫交联物对正常小肠上皮细胞DNA合成影响较小,提示其副作用较小。     

Immunohistochemical distribution of tubulin beta II in human normal and neoplastic tissues

Tubulin is the major constituent protein of microtubules. In mammals, there are seven beta-tubulins and six alpha-tubulins. Each beta-tubulin isotype has a unique tissue distribution. The purpose of this study was to describe the distribution of tubulin beta II in normal and neoplastic human tissues with immunohistochemical techniques. We obtained normal tissues from 33 cases (8 fetuses, 17 neonates, 3 children and 5 adults) and 121 samples of neoplastic tissue from surgical specimens or at autopsy. Immunohistochemical staining for tubulin beta II was performed using a monoclonal antibody, KNY379 developed in our laboratory. Tubulin beta II was detected in various normal tissues, particularly in fetal and neonatal tissues, such as the nervous system, pulmonary alveoli, bronchioles and bronchi, colon, pancreatic ducts and acini, renal convoluted tubuli, skin epidermis, body cavity mesothelial cells, smooth muscle and thymus. In the adult, broad expression was also observed; however, the immunoreactivity was weaker and the extent of its distribution decreased with age. In neoplastic tissues, tubulin beta II immunoreactivity was detected in various nervous system neoplasms and other neoplasms such as pancreatic solid cystic carcinoma, pleomorphic adenoma, Warthin's tumor, nephroblastoma, basal cell carcinoma and malignant mesothelioma. We conclude that our monoclonal antibody, KNY379, may be useful as a marker of nervous system neoplasm, pancreatic solid cystic carcinoma, pleomorphic adenoma, Warthin's tumor, nephroblastoma, basal cell carcinoma and malignant mesothelioma.