慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞TLR2 mRNA表达与IFN-γ及IL-4表达相关性分析

Toll样受体2（Toll-like receptor，TLR2）是一种模式识别受体（Pattern recognision receptors，PRRs），广泛分布于各类免疫细胞。我们检测慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞TLR2 mRNA的表达，用流式细胞术检测外周血CD3^＋ CD8^- T细胞内IFN-γ和IL-4水平，反映Th1、Th2细胞数量，     

血浆sIL-2R对急性期川崎病调节性T 细胞的影响

目的探讨sIL-2R血浓度对急性期川崎病（ KD）患儿调节性T细胞（ Treg）的影响。方法急性期KD患儿33例,正常同龄对照儿童14例。流式细胞术检测外周血CD4＋CD25＋Foxp3＋Treg细胞的比例和CD4＋CD25＋T细胞磷酸化STAT5（pSTAT5）蛋白平均荧光强度（MFI）;流式微球阵列术（CBA）检测血浆sIL-2R、IL-2、IL-7、IL-15的浓度;荧光定量PCR（real-time PCR）检测CD4＋CD25＋T细胞Foxp3、GITR、CTLA-4、IL-2Rα、IL-2Rβ、IL-2Rγ和CD 4＋CD25-T 细胞 IL-17A、RoR-γt 等基因mRNA表达。结果（1）急性期KD患儿CD4＋CD25＋Foxp3＋Treg细胞比例及相关分子Foxp3、GITR、CTLA-4 mRNA表达明显低于同龄对照组（P＜0．05）,Th17细胞相关因子IL-17A、ROR-γt mRNA表达明显增高（P＜0．05）,IVIG治疗后呈不同程度的恢复（P＜0．05）。（2）急性期KD患儿CD4＋CD25＋T细胞pSTAT5蛋白水平显著下调（P＜0．05）,IVIG治疗后明显上调（P＜0．05）。（3）急性期KD患儿血浆sIL-2R浓度显著增高（P＜0．05）,IVIG治疗后下降（P＜0．05）;其中KD合并冠脉损伤组（KD-CAL＋）明显高于无冠脉损伤组（KD-CAL-）（P＜0．05）;IL-2、IL-7、IL1-5浓度无明显改变（P＞0．05）。（4）急性期KD患儿CD4＋CD25＋T细胞IL-2Rα、IL-2Rβ基因mRNA表达明显低于同龄对照组（P＜0．05）,IVIG治疗后呈不同程度的升高（ P＜0．05）;IL-2Rγ基因mRNA表达无明显改变;sIL-2R血浓度与IL-2RβmRNA、pSTAT5及Foxp3 mRNA表达呈负相关（ P＜0．05）;pSTAT5与Foxp3 mRNA表达呈正相关（ P＜0．05）。结论血浆sIL-2R明显增高可致IL-2/STAT5信号途径传导异常,这可能是导致急性期KD Treg细胞下调的因素之一。     

大肠杆菌麦芽糖结合蛋白激活TLR2介导的MyD88依赖途径和TLR4介导的TRIF/TRAF3依赖途径诱导Th1活化

目的探讨TLR2/TLR4介导的信号通路在大肠杆菌麦芽糖结合蛋白诱导Th1活化中的调控作用。方法免疫磁珠分选方法获取纯的CD4+T细胞,经CD3/CD28抗体活化后的CD4+T细胞分别用MBP、MBP+anti-TLR2、MBP+anti-TLR4刺激。ELISA检测培养上清中IFN-γ和IL-4的分泌;RT-PCR检测CD4+T细胞IFN-γ、MyD88、TRIF、TRAF3和TRAF6的mRNA表达;Western blotting方法检测CD4+T细胞MyD88、TRIF、TRAF3和TRAF6的蛋白表达。结果 MBP组IFN-γ水平升高、IFN-γ、MyD88、TRIF、TRAF3的mRNA上调、TRAF6的mRNA下调;MBP+anti-TLR2组IFN-γ水平降低、TRAF6的mRNA上调、MyD88的mRNA下调、TRIF、TRAF3的mRNA无影响;MBP+anti-TLR4组IFN-γ水平升高、TRAF6的mRNA上调、MyD88、TRIF、TRAF3的mRNA下调,Western blotting实验也出现了相似的结果。结论 TLR2介导的MyD88依赖途径和TLR4介导的TRIF/TRAF3依赖途径在MBP诱导的Th1活化过程中发挥了重要的调控作用。     

CD40配基化的肿瘤特异性树突状细胞介导Th1细胞分化的研究

目的：探讨CD40配基化的肿瘤特异性DCs在介导Th1细胞分化中的作用。方法：采用GM-CSF和IL-4联合方案体外诱导小鼠髓系DCs，并利用mCD40L-CHO和TNF-α分别刺激凋亡肿瘤细胞负载的DCs制备DCs瘤莆；^3H-TdR掺入试验检测DCs对T淋巴细胞的促增殖效应；ELISA测定细胞培养上清中IL-10、IFN-1、IL-12的含量；胞内染色和流式细胞术检测经成熟DCs活化的T细胞中CD4^＋IFN-γ^＋T和CD4^＋IL-4^＋T的比例。结果：体外刺激T细胞增殖能力在CD40配基化DCs组最高（P〈0．05），CD40配基化DCs能更有效地促进活化T细胞分泌IFN-γ和介导CD4^＋IFN-γ^＋T细胞的分化（P〈0．05）。同时，CD40配基化DCs分泌IL-12的量也明显高于TNF-α组（P〈0．05）。结论：CD40配基化的肿瘤特异性DCs体外能有效介导Th1细胞的分化。     

肾移植患者手术前后外周血CD4＋T淋巴细胞IL-18Rα的表达及意义

目的：探讨外周血CD4^＋T淋巴细胞IL-18Rα表达在肾移植急性排斥反应中的作用及临床意义。方法：采用分别检测肾移植患者手术前、手术后1w及2w外周血CD4^＋T淋巴细胞IL-18Rα表达量，并进行比较分析。结果：肾移植患者手术前外周血CD4^＋T淋巴细胞IL-18Rα表达量明显高于正常对照组（P〈0．01）。急性排斥组手术后1w、2w与手术前比较外周血CD4^＋T淋巴细胞IL-18Rα表达量明显增加（P〈0．01）。稳定组手术后1w与手术前比较外周血CD4^＋T淋巴细胞IL-18Rα表达量明显增加（P〈0．01），手术后2w则下降至手术前水平（P〉0．05）。结论：肾移植患者手术前、手术后存在Th1／Th2失衡，表现为Th1优势应答。肾移植手术前后监测外周血CD4^＋T淋巴细胞IL-18Rα表达量变化对于判断急性排斥反应有一定临床意义。     

LSD1影响CD4~+T细胞Th1/Th2分化的机制研究

目的探讨LSD1的脱甲基酶活性对人外周血CD4+T细胞Th1/Th2分化格局的影响及其分子机制。方法 anti-CD3/28刺激活化人外周血CD4+T细胞48 h后,shLSD1和反苯环丙胺(TCP)抑制LSD1的表达,流式细胞术检测细胞内细胞因子IFN-γ、IL-4的表达情况;逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和实时荧光定量PCR(RQ-PCR)检测不同浓度TCP对T细胞IFN-γ、IL-4、Tbet mRNA表达的影响;Western blot观察LSD1、T-bet、STAT1和pSTAT1蛋白表达情况。结果 shLSD1和TCP组细胞IFN-γ+T细胞比例[(26.13±1.89)%和(27.01±1.18)%]明显高于对照组[(14.67±0.65)%,(P0.05)],而IL-4+T细胞比例与对照组无显著变化(P0.05);RT-PCR检测显示,shLSD1和TCP组IFN-γmRNA表达明显高于对照组(P0.05),IL-4基因表达则没有改变(P0.05);转染shLSD1或TCP处理引起T-bet、pSTAT1表达明显高于对照组(P0.05),而STAT1表达无明显变化(P0.05)。结论下调LSD1表达可以促进人CD4+T细胞向Th1方向分化,对Th2方向细胞无影响。其分子机制涉及T-bet/STAT1信号通路。     

不同Th1/Th2细胞免疫应答支气管肺泡灌洗液中细胞学的变化

目的 探讨不同Th细胞优势应答下支气管肺泡灌洗液（BALF）中的细胞学变化，了解Th1/Th2细胞免疫应答的细胞和分子机制。方法 用鸡卵清蛋白（OVA）致敏Wistar大鼠（每组10只），制作致敏大鼠哮喘模型；用“冻干BCG”皮内注射制作BCG免疫大鼠模型。收集BALF并做HE染色，进行细胞分类计数。采用流式细胞术，测定BALF中，CD2^ ,CD28^ 及γδTCR^ T细胞占总淋巴细胞的百分率及平均荧光密度（MIF）。用原位杂交法，检测肺组织中IL－4mRNA的IFN－γmRNA的表达。用ELISA法检测血清IL－4和IFN－γ的浓度。结果 哮喘组BALF中淋巴细胞，嗜酸性粒细胞（EOS），浆细胞和中性粒细胞的总数，均显著多于正常组（P＜0．01）；BCG免疫组BALF中，淋巴细胞和巨噬细胞的总数也显著高于正常组（P＜0．001）。哮喘组BALF中，CD2^ T 细胞的明显增加。但哮喘组CD2^ T细胞的F1显著高于正常组及BCG组（P＜0．05）；BCG组BALF中，CD^2 T细胞的百分率与正常组相比产无显著差异（P＞0．05），其CD2^ T细胞的MFI显著高于正常组(P＜0．05）。哮喘组和BCG组BALF中，CD28^ 细胞占淋巴细胞的百分率显著多于正常组（P＜0．01）；BCG组CD28^ 细胞的MFI高于哮喘组（P＜0．01）。两组的CD28^ 细胞的MF1均显著多于正常组（P＜0．05）。哮喘组和BCG组BALF中，γδTCR^ 细胞占淋巴细胞的百分率显著高于正常组（P＜0．01）。结论 支气管哮喘患者Th2细胞的优势应答，与BALF中的B细胞，EOS，浆细胞和中性粒细胞等APC数的增加及T细胞上CD2的高表达有关；而BCG免疫组中的Th1细胞的优势应答与BALF中巨噬细胞，T细胞增加及T细胞上CD28的高表达有关。γδT细胞可能存在Th1/Th2细胞免疫模式，既参与哮喘免疫也参与BCG免疫过程，可能是调节Th0细胞分化的重要始动细胞。     

异丙酚对肺癌病人外周血Th亚群分化的影响

目的 探讨异丙酚麻醉对非小细胞型肺癌患者外周血T细胞Th亚群分化的影响.方法 30例肺叶切除手术病人随机分为异丙酚组(P组)和异氟烷组(Ⅰ组),于麻醉诱导前(T0)、诱导后10 min(T1)、切皮后1 h(T2)、麻醉停药即刻(T3)、术后1 h(T4)、24 h(T5)采血,测定CD4 CD28 表达率及血清IL-12、IFN-γ、IL-4及皮质醇浓度.结果与T0比较,P组T4、5时CD4 CD28 、IFN-γ明显增高(P＜0.05或P＜0.01),T5时IL-12、IFN-γ/IL-4增高明显(P＜0.05),而且均高于Ⅰ组(P＜0.05).两组IL-均有增高趋势,但组间无明显差异.T1～5时,P、Ⅰ组皮质醇浓度均增高(P＜0.05或0.01),I高于P组(P＜0.04).结论 异丙酚可增强外周血CD4 T细胞CD28的表达和IL-12、IFN-γ的分泌,增高IFN-γ/IL-4比值;促进Th1亚群的分化.     

自身免疫性溶血性贫血患者外周血Th1／Th2、Th3／Tr1细胞的检测及意义

目的探讨自身免疫性溶血性贫血（AIHA）患者外周血Th1／Th2、Th3／Tr1细胞状态,分析它们在AIHA发病机制中的作用。方法收集AIHA患者及健康者外周抗凝静脉血,分离纯化淋巴细胞。运用FITC-CD3单抗,Cy5-CD4单抗,PE—CRTH2单抗,以CD3／CD4设门作三色流式细胞术检测Th1／Th2细胞,ELISA法检测血清中Th3细胞相关的细胞因子TGF-β1的含量和Tr1细胞的相关因子IL-10的含量。结果与正常对照相比．AIHA患者外周血CD3^＋CD4^＋CRTH2-T细胞（Th1）百分率、CD3^＋CD4^＋CRTH2^＋T细胞（Th2）百分率均下降（P〈0．05）,而CD4^＋CRTH2^-T／CD4^＋CRTH2^＋T比例（Th1／Th2）均明显升高（P〈0．01）,Th3／Tr1细胞分泌的相关细胞因子TGF-β1和IL-10的含量均降低（P〈0．05）。结论AIHA患者外周血存在细胞免疫功能失调,T细胞亚群极化状态发生改变,呈Th1型细胞优势,Th3／Tr1细胞因子含量下降,可能与AIHA的免疫学发病机制有关。     

HIV／AIDS患者体内Th17及Th1应答失衡

目的 探讨HIV/AIDS患者体内Th17、Th1应答情况及Th17与Th1应答之间的相互关系.方法 选取38例符合诊断标准的慢性HIV感染患者,根据抗病毒治疗与否,将其分为2组：治疗前16例,治疗后22例,同时选取24例健康志愿者为对照.采用全血胞内细胞因子染色方法,使用BD FACSCanto流式细胞仪检测各项指标,FACSDiva软件分析CD4^＋IL-17^＋T细胞及CD4^＋IFN-γ^＋T细胞表达情况,将结果进行统计学分析并比较各组之间的差异.结果 未治疗患者CIM^＋IL-17^＋T细胞表达显著低于健康对照（1.14±0.79）%vs（3.98±1.14）%,P=0.000,经抗毒治疗后明显升高（2.22±1.00）%,P=0.001;而CD4^＋IFN-γ^＋T细胞则在治疗前后没有显著变化（34.35±24.38% vs42.10＋15.57%）,与健康人比较亦差异无统计学意义P=0.383;进一步相关性分析表明CD4^＋IL-17^＋T细胞与CD4^＋T细胞计数呈正相关（R=0.345,P=0.034）,而CD4^＋IFN-γ^＋T细胞则与CD4^＋T细胞计数没有明显相关性（R=-0.247,P=0.136）.结论 人体感染HIV病毒以后,机体出现Th17应答显著下调,Th17/Th1平衡紊乱,Th17免疫应答可能在HIV感染致病机制中起着重要作用.     

脱氢表雄酮增强去势鼠Th1型偏移及成骨细胞增殖能力

目的：探讨脱氢表雄酮（DHEA）对去势鼠CD4＋T细胞Th1/Th2型细胞因子表达和成骨细胞（OB）增殖的影响。方法：建立小鼠绝经后骨质疏松（PMO）模型，分为OVX组、OVX＋DHEA组、OVX＋E2组。另设Sham组为假手术对照。取腰椎和股骨行骨组织形态计量分析；流式细胞术（FCM）检测各组鼠脾脏CD4＋T细胞内IL-2、IFN-γ（Th1型）和IL-4、IL-10（Th2型）的表达；并取椎骨植块法培养OB，FCM分析增殖细胞核抗原（PCNA）表达。结果：OVX组与Sham组相比，椎骨和股骨骨小梁面积显著下降（P〈0.01），说明PMO模型成功建立；与OVX组相比，OVX＋DHEA组腰椎、股骨及OVX＋E2组腰椎、股骨骨小梁面积都明显增加（P〈0.01）。OVX组IL-2及IFN-γ表达显著低于Sham组（P〈0.05）；而OVX＋DHEA组和OVX＋E2组显著高于OVX组（分别为P〈0.01和P〈0.05）。OVX＋DHEA组IL-4及IL-10表达显著低于OVX组（P〈0.01）。OVX组IFN-γ/IL-4比值明显低于Sham组（P〈0.05）；OVX＋DHEA组和OVX＋E2组IFN-γ/IL-4比值均显著高于OVX组（P〈0.01）。OVX组OB的PCNA表达与Sham组相比显著增高（P〈0.05）；与OVX组相比，OVX＋DHEA组OB核内PCNA的平均表达强度和阳性细胞百分率皆显著增高（分别为P〈0.05和P〈0.01）。OVX＋DHEA组OBPCNA表达与CD4＋T细胞IFN-γ水平呈明显正相关（r=0.931，P〈0.05）；与IL-4水平呈负相关（r=-0.815，P〈0.05）。结论：DHEA可通过细胞免疫调节作用形成Th1型免疫偏移，从而显著改善PMO的免疫状态；并有效促进OB增殖，显著改善骨形态。     

霉酚酸对系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞细胞因子分泌及Th亚群的影响

目的研究霉酚酸（mycophenolic acid,MPA）对系统性红斑狼疮（systemic lupus erythematosus,SLE）患者外周血单个核细胞（PBMCs）细胞因子分泌及Th细胞亚群的作用。方法分离SLE患者及健康对照的外周血单个核细胞（PBMCs）,加入MPA或对照药物地塞米松（DEX）培养48h,用ELISA法测培养上清中IL-10、IL-12及IFN-γ的水平,用三色流式细胞术检测培养细胞中CD4^＋IFN-γ^＋IL-10^-T细胞、CD4^＋IFN-γ^-IL-10^＋T细胞及CD4^＋IFN-γ^＋IL-10^＋T细胞百分率。结果①MPA可使SLE患者PBMCs培养上清中IL-10、IL-12及IFN-γ的分泌显著降低,而DEX却使IL-10分泌水平增高。②MPA可降低SLE患者培养的PBMCs中CD4^＋IFN-γ^＋IL-10^-T、CD4^＋IFN-γ^-IL-10^＋T及CD4^＋IFN-γ^＋IL-10^＋T细胞比率,而DEX在使CD4^＋IFN-γ^＋IL-10^＋T细胞亚群比率增高的同时,却使CD4^＋IFN-γ^＋IL-10^-T细胞亚群的比率降低。结论MPA可抑制SLE患者PBMCs细胞因子分泌,并降低SLE患者外周血培养的PBMCs中Th亚群比率。     

苯扎贝特对原发性胆汁性肝硬化患者外周血CD4＋T细胞的抑制作用研究

目的：观察苯扎贝特（Bezafibrate,BF）对原发性胆汁性肝硬化（Primary biliary cirrhosis,PBC）患者外周血CD4＋T细胞活化增殖和分化的影响,探讨其免疫抑制作用机理,为BF治疗PBC的作用靶点提供实验依据。方法：分离PBC患者的PBMCs,磁珠分选CD4＋T细胞,加入anti-CD3、anti-CD28及不同浓度的BF,以流式细胞方法和ELISA分析BF对CD4＋T细胞活化、增殖及Th1/Th17细胞因子产生的影响。结果：（1）BF能抑制PBC患者外周血CD4＋T细胞活化;（2）BF呈浓度依赖性抑制PBC外周血CD4＋T细胞增殖（P＜0.05）;（3）BF也能够抑制PBC患者外周血CD4＋T细胞产生IFN-γ和IL-17（P＜0.05）。结论：BF可通过抑制CD4＋T细胞活化增殖及细胞因子分泌,发挥免疫抑制作用。     

玉屏风散对S180荷瘤小鼠Th1／Th2型细胞因子的影响

目的探讨玉屏风散对荷瘤小鼠Th1／Th2型细胞因子产生的影响。方法采用体外培养S180肉瘤细胞，接种C57BL／6纯系小鼠，建立荷瘤小鼠模型，设正常对照、荷瘤对照及玉屏风散给药组，检测各组脾脏T淋巴细胞增殖能力及Th1（IL-2、IFN-γ）和Th2（IL-4、IL-10）细胞因子产生水平。结果荷瘤组T细胞增殖能力明显下降，Th2型细胞因子IL-10的产生明显增加，与正常对照组比较均有统计学意义（P〈0．01），而IL-4的含量略有增加，但无统计学意义。Th1型细胞因子IL-2及IFN-γ的产生明显减少，与正常对照组比较有统计学意义（P〈0．01，P〈0．05）。玉屏风散给药对T细胞增殖能力及细胞因子的产生有较为明显的调节作用，与荷瘤组比较T细胞增殖能力及IL-2、IFN-γ的产生明显增加（P〈0．01），Th2型细胞因子IL-10的血清含量下降（P〈0．01）．IL-4的含量略有下降，但与荷瘤对照组比较无统计学意义。结论玉屏风散可有效调节荷瘤小鼠的免疫功能，促进荷瘤鼠Th1型细胞因子的产生，有效纠正荷瘤导致Th1／Th2的失衡，增强机体的抗肿瘤免疫功能。     

青少年吸毒者免疫细胞、细胞因子和生长激素的改变

目的：通过测定青少年吸食海洛因者外周血中T细胞亚群、Th1／1112细胞因子和血清中的生长激素，从分子水平探讨吸食海洛因对青少年免疫功能和生长发育的影响。方法：用微量全血直接免疫荧光染色，用流式细胞术检测外周血中T细胞亚群；流式细胞（Cytometric bead array，CBA）技术测定Th1／Th2细胞因子；化学发光法测定生长激素。结果：青少年吸食海洛因组（n=20）CD3^＋、CD3^＋＋CIM^＋、CD3^＋＋CIM^＋／CD3^＋＋CD8^＋、Th1细胞因子（IL-2，TNF-α和IFN-γ）和Th2细胞因子（IL-4，IL-10）低于健康组（n=23）（P〈0．01或0．05）；且Th1细胞因子下降程度大于Th2细胞因子（P〈0．05）；血清生长激素显著高于健康组（P〈0．01）。结论：海洛因降低青少年机体免疫功能，对细胞免疫的损伤大于体液免疫；海洛因能升高青少年血清生长激素，机制需进一步探讨。     

甲状腺与外周血T淋巴细胞亚群比例差异

目的观察正常甲状腺与外周血T淋巴细胞亚群,包括调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)、辅助性T细胞1(T helper 1 cells,Th1 cells)和辅助性T细胞2(T helper 2 cells,Th2 cells)的分布,Treg细胞中干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)、白介素-4(interleukin-4,IL-4)及其mRNA的表达。方法 20名良性甲状腺肿物患者、3名胸腺手术及3名脾脏切除术患者,术前当天留取外周空腹静脉血,术中分别留取甲状腺、胸腺及脾脏标本,分离单个核细胞,流式细胞术检测标本组织及外周血T淋巴细胞亚群差异。磁珠分离法分离甲状腺及外周血CD25+T细胞,RT-PCR检测Treg中IFN-γ和IL-4 mRNA的表达。NKT细胞受体激动剂α-Galcer刺激Treg 7 d后,RT-PCR检测Treg中IFN-γ、IL-4、CD1d、Vα24及Vβ11 mRNA的表达。结果 1)甲状腺组织Th1、Th2细胞比例低于外周血(P0.001),而Th0、Treg细胞比例高于外周血(P0.001)。2)在甲状腺内,几乎所有的CD4+CD25+Foxp3+细胞可以同时分泌IL-4、IFN-γ,RT-PCR提示其IL-4、IFN-γmRNA表达明显高于外周血,而在外周血中,CD4+CD25+Foxp3+细胞并不表达IL-4或IFN-γ。3)在胸腺和脾脏中,未检测到同时表达IL-4、IFN-γ的CD4+CD25+Foxp3+细胞。4)甲状腺内Treg在α-GalCer刺激前后均不表达NKT细胞的表面标志CD1d、Vα24及Vβ11 m RNA,而IL-4和IFN-γmRNA的表达在刺激前后无明显差异。结论正常甲状腺与外周血T淋巴细胞亚群分布存在差异,甲状腺内Treg特异性的同时表达IL-4及IFN-γ。     

小鼠 B10细胞的分离、鉴定及功能特征北大核心CSCD

目的：评估小鼠不同组织中B10细胞的比例,分离B10细胞并鉴定其生物学功能,探讨其对效应性T细胞（ CD4＋CD25-T）及调节性T细胞（ Treg）的免疫调节机制。方法采用流式细胞仪检测小鼠不同组织来源B10细胞的表达以及脂多糖（ lipopolysaccharide ,LPS）对B10激活的影响;采用流式细胞分选术（ FACS）和免疫磁珠分选术（ MACS）分选B10细胞、CD4＋CD25-T 细胞和Treg;利用混合淋巴细胞培养实验观察B10对CFSE标记的CD4＋CD25-T细胞和CD4＋CD25＋T细胞增殖的调节作用及机制。结果（1）脾脏CD19＋CD5＋CD1dhigh B细胞表达为（3．95±0．79）％,与外周血、肠系膜淋巴结和外周淋巴结相比较表达最高,组间差异有统计学意义（P＜0．05）;脾脏CD19＋IL-10＋B细胞表达为（2．02±0．16）％,与外周血、肠系膜淋巴结和外周淋巴结相比较表达最高（P＜0．05）,且IL-10主要由CD1dhighCD5＋B细胞亚群分泌（P＜0．01）;（2） LPS联合乙酸佛波醇（PMA）、莫能菌素（monen-sin）和离子霉素（ionomycin）能活化B10细胞分泌IL-10。延长LPS的作用时间（48 h）能促进CD19＋CD5＋CD1dhigh B细胞高表达及IL-10分泌增加（P＜0．01）;（3） CD19＋CD5＋CD1dhigh B细胞在体外可抑制CD4＋CD25-T细胞增殖（P＜0．01）、促进CD4＋T细胞分泌IL-10（P＜0．01）,同时可促进Treg增殖（P＜0．01）。结论 B10细胞在小鼠脾脏高表达,通过Toll样受体（TLR）信号通路被激活。活化的B10细胞具有免疫抑制性,可抑制CD4＋CD25-T细胞增殖,促进Treg增殖,其可能免疫调节机制是IL-10的释放增加。因此B10细胞有望为治疗多种自身免疫性疾病提供一种全新的治疗方法。     

结核分枝杆菌耐热抗原激活的人γδT细胞Th2极性分化特征以及T-bet/GATA-3对分化的调控作用

目的研究结核杆菌耐热抗原(MTB-HAg)激活的人外周血γδT细胞Th2极性分化特点和表达于T细胞中的T盒(T-bet)和GATA结合蛋白3(GATA-3)转录因子的调控作用。方法用MTB-HAg刺激人外周血单个核细胞(PBMC)获得MTB-HAg激活的T细胞(MTBAT),分别在中性条件和Th2极化条件培养后,再经10 ng/m L佛波醇酯(PMA)、500 ng/m L离子霉素(ionomycin)和2.5μmol/L莫能菌素(monensin)刺激6 h,四色荧光抗体染色流式细胞术检测γδT细胞和αβT细胞内细胞因子γ干扰素(IFN-γ)和白细胞介素4(IL-4)的表达。流式细胞术分选28 d MTBAT中的γδT细胞和CD4+T细胞,反转录PCR(RT-PCR)检测T-bet和GATA-3 mRNA的表达。结果在中性条件和Th2极化条件下培养的MTBAT中,γδT细胞一直优势表达IFN-γ,而Th2极化条件下,随培养时间增加IFN-γ+αβT细胞百分率显著下降。与中性条件培养比较,Th2极化条件下MTBAT培养28 d,Th0型(IFN-γ+IL-4+)γδT细胞显著增加;而Th2型(IFN-γ-IL-4+)αβT细胞显著增加。RT-PCR结果显示,Th2极化的γδT细胞仍高表达T-bet mRNA,而在CD4+T细胞T-bet mRNA表达被显著下调;同时,GATA-3 mRNA在γδT细胞和CD4+T细胞的表达均显著上调。结论 Th2极化条件下,大部分γδT细胞仍为Th1型,仅部分极性分化为Th0型细胞;Th2极性分化的γδT细胞转录因子T-bet和GATA-3未表现出交互调节功能。     

慢性 HCV 感染者外周血中 CD56＋T 细胞频数、表型和体外细胞毒功能研究

目的探讨慢性HCV感染者外周血中CD56＋T细胞的频数、表型和体外细胞毒功能特征。方法采用流式细胞术检测33例慢性HCV感染者及21例健康对照者外周血CD56＋T细胞的频数和细胞表面活化性受体NKG2C、CD16、NKp46和抑制性受体CD158a、NKG2A的表达水平;检测体外未刺激及K562细胞刺激作用下CD 56＋T细胞毒效应（ CD107a）和细胞因子分泌水平（ IFN-γ和TNF-α）,并分析上述3种CD56＋T细胞功能指标之间的关联性。结果与健康对照相比,慢性HCV感染者外周血中CD56＋T细胞在淋巴细胞中的比例明显降低（ P＝00．18）。 CD56＋T细胞表面的活化性受体 NKG2C（P＝0．015）、CD16（P＝0．036）、NKp46（P＝0．001）均有不同程度降低,而抑制性受体CD158a、NKG2A未发现有统计学意义的差异（P＞0．05）。体外未刺激情况下,慢性HCV感染者CD56＋T细胞分泌细胞因子IFN-γ和TNF -α均显著弱于健康对照组（P ＜0．0001）;在K562细胞刺激作用下,慢性HCV感染者 CD56＋T细胞CD107 a水平及分泌细胞因子IFN-γ和TNF-α均呈显著降低趋势（ P＜0．0001）,且3种功能指标表达水平密切关联（r＞0．80, P＜0．0001）。结论慢性HCV感染者CD56＋T 细胞频数降低,细胞毒能力和重要细胞因子分泌能力均明显减弱。该结果提示显著受损的CD56＋T细胞功能可能与HCV慢性持续性感染有关。     

肝素诱导的DC对慢性乙肝患者Th1/Th2分化的影响

探讨肝素体外对慢性乙肝患者CD4~+T细胞亚群分化的影响。分离慢性乙肝患者外周血单核细胞,以rhIL-4(50 ng/ml)、rhGM-CSF(10 ng/ml)、rhTNF-α(100 u/ml)和肝素(50 u/ml)诱导培养DC。免疫磁珠分离外周血CD4~+T细胞亚群,ELISA法检测DC或CD4~+T细胞培养上清中IL-6、IL-12、IFN-γ和IL-4的含量。以流式细胞仪检测肝素处理前后DC表面CD1a、CD83、CD80、CD86、HLA-DR分子表达情况。结果:纯化的慢性乙肝患者CD4~+T细胞培养上清中IFN-γ显著低于同期培养的正常人CD4~+T细胞(P0.05);肝素处理的慢性乙型肝炎患者的DC表达CD1a、CD83、CD80、CD86、HLA-DR分子水平及分泌的IL-12水平明显升高(分别P0.05、P0.01);而分泌的IL-6水平降低(P0.05)。肝素处理后的DC与慢性乙肝患者外周血中CD4~+T细胞共培养后,其上清中Th1型细胞因子IFN-γ的水平明显升高(P0.01)。体外肝素处理后的慢性乙肝患者的DC能部分改善外周血Th1细胞分化的不足。