丙泊酚对大鼠脑缺血-再灌注损伤后水通道蛋白4表达的影响

目的丙泊酚具有脑保护作用,其分子机制尚不清楚。水通道蛋白4(aquaporin 4,AQP-4)与脑损伤后脑水肿有关。文中探讨大鼠脑缺血-再灌注损伤后AQP-4基因的表达规律及丙泊酚的作用。方法雄性SD大鼠108只,体重(220±20)g,随机等分为3组,即假手术组:仅开颅,不做缺血再灌注处理;缺血再灌注损伤组(I/R组);丙泊酚组:I/R组、丙泊酚组经右股静脉置管后分别用微量泵持续给予等渗盐水2 ml/(kg.h)和丙泊酚20 mg/(kg.h),在大脑中动脉阻断前开始用药,至再灌注3 h后停止给药,各组又分为缺血2 h后再灌注0.5、1、3、6、12及24 h 6个亚组,每亚组6只大鼠。测定各组大鼠脑含水量,分别用RT-PCR和Western blot检测脑内各时相点AQP-4的mRNA和蛋白水平。结果再灌注后3 h开始,脑组织含水量即有增加。与I/R组相比,再灌注损伤后3、6、12及24 h丙泊酚组脑组织含水量均明显下降(P<0.05或0.01)。脑缺血-再灌注损伤后,脑组织AQP-4 mRNA表达升高(P<0.05或0.01),于12 h达峰值,而蛋白则于6 h达峰值。再灌注后24 h AQP-4 m...     

大鼠局部脑缺血再灌注后淀粉样前置蛋白基因的表达

目的检测大鼠局部脑缺血再灌注后淀粉样前置蛋白(APP)基因的表达情况.方法选取SD大鼠136只,随机分为八组.采用线栓法制作右侧大脑中动脉(MCA)缺血再灌注模型.A组为对照组,B～H各组大鼠脑缺血1h后,分别再灌注0、1、3、8h和1、3、7d后处死.取双侧脑皮质,用RT-PCR方法检测APP770、APP751、APP695 mRNA的表达水平;应用Western印迹及免疫组化方法检测APP蛋白质的表达.结果缺血再灌注后脑皮质含KPI结构区的APP770和APP751mRNA水平在再灌注ld后开始升高(P≤0.01),第3d达高峰后逐渐下降,第7d达基础水平.APP695 mRNA在缺血再灌注后第1d到第3d逐渐下降后回升(P≤0.01),直到第7d达基础水平.再灌注8h后神经变性开始出现,同时神经胶质酸性蛋白(GFAP)免疫阳性的星形细胞开始增多.结论缺血再灌注损伤能诱发APP mRNA的表达升高;选择性诱发KPI-APP表达升高的原因可能是由于反应性星形细胞增多所致,调节APP剪切的一些因素也参与脑缺血病理过程.     

大鼠局部脑缺血再灌注后淀粉样前置蛋白基因的表达

目的检测大鼠局部脑缺血再灌注后淀粉样前置蛋白(APP)基因的表达情况.方法选取SD大鼠136只,随机分为八组.采用线栓法制作右侧大脑中动脉(MCA)缺血再灌注模型.A组为对照组,B～H各组大鼠脑缺血1h后,分别再灌注0、1、3、8h和1、3、7d后处死.取双侧脑皮质,用RT-PCR方法检测APP770、APP751、APP695 mRNA的表达水平;应用Western印迹及免疫组化方法检测APP蛋白质的表达.结果缺血再灌注后脑皮质含KPI结构区的APP770和APP751mRNA水平在再灌注ld后开始升高(P≤0.01),第3d达高峰后逐渐下降,第7d达基础水平.APP695 mRNA在缺血再灌注后第1d到第3d逐渐下降后回升(P≤0.01),直到第7d达基础水平.再灌注8h后神经变性开始出现,同时神经胶质酸性蛋白(GFAP)免疫阳性的星形细胞开始增多.结论缺血再灌注损伤能诱发APP mRNA的表达升高;选择性诱发KPI-APP表达升高的原因可能是由于反应性星形细胞增多所致,调节APP剪切的一些因素也参与脑缺血病理过程.     

丙泊酚对大鼠局灶性脑缺血再灌注后AQP-4mRNA表达的影响

目的探讨丙泊酚对大鼠局灶性脑缺血再灌注后AQP-4mRNA表达的影响。方法健康雄性SD大鼠192只,按随机数字表法分成丙泊酚组(n=64),生理盐水组(NS)(n=64),假手术组(n=64)。采用线栓法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,NS、丙泊酚组在阻断大脑中动脉lh后行再灌注,丙泊酚组在缺血前10min腹腔注射丙泊酚10mg/100g,NS组给予等量生理盐水,假手术组只作切口。各组分别在再灌注后3h、1d、3d、7d做神经功能测定,其后将大鼠断头处死,测量脑水含量,用RT-PCR法测定AQP-4mRNA表达水平。结果①与假手术组比较,丙泊酚组术后3h、1d、3d、7d神经功能评分均高于假手术组(P<0.05),与NS组比较,丙泊酚组术后各时间点神经功能评分均低于NS组(P<0.05)。②术后各时间点丙泊酚组与假手术组比较,脑含水量显著增加(P<0.05);与NS组比较,脑含水量显著减少(P<0.05)。与假手术组比较,NS组脑含水量也显著增加(P<0.05)。③丙泊酚组AQP-4 mRNA含量在各时间点表达与NS组比较均较低(P<0.05)。NS组在术后各时间点,AQP-4 mRNA含量均比假手术组高(P<0.05)。结论丙泊酚可下调脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织AQP-4mRNA的表达,可能是其减轻大鼠脑缺血再灌注损伤的机制之一。     

脑缺血再灌注损伤后miR-29a及AQP4的表达及关系

目的:探讨脑缺血再灌注损伤(CIRI)后miR-29a和水通道蛋白4(AQP4)的表达及相互关系。方法:通过Targetscan软件预测及双萤光素酶报告实验验证AQP4为miR-29的靶基因;将20只雄性成年C57BL/6J小鼠随机分为4组:假手术组、脑缺血后再灌注(I/R)6 h、12 h、24 h组,每组5只,建立CIRI模型。通过采用实时定量PCR法(real time PCR)比较随再灌注时间的逐渐延长各组缺血区域(主要是缺血半暗带)miR-29a的表达情况,同时免疫荧光法检测AQP4表达;另外,将新生小鼠原代培养的星型胶质细胞分为正常组、脂质体转染miR-29a mimics组和miR-29a inhibitor共3组,建立体外糖氧剥夺/复氧损伤(OGD/RX)模型后,采用real time PCR和免疫印迹法(Western Blot)分别比较3组miR-29a及AQP4的表达。结果:Targetscan软件预测miR-29与AQP4 mRNA的3'UTR区存在可能的结合位点,双萤光素酶报告实验验证miR-29是与AQP4序列结合的。体内实验中,随再灌注时间的逐渐延长,与对照组相比,I/R组缺血半暗带区域内miR-29的表达明显下降(P<0. 01);与miR-29a表达趋势相对应,AQP4在半暗带区的表达增强。体外实验中,miR-29a mimics和miR-29a inhibitor转染星型胶质细胞后,可分别增强或抑制miR-29a,而同时抑制或增强AQP4的表达;OGD/RX后,miR-29a表达下降而AQP4的表达增高(P<0. 05)。结论:CIRI后miR-29a显著下调,伴随AQP4的表达升高,提示miR-29a可能通过对星型胶质细胞上AQP4的负调控改善CIRI,从而对CIRI后脑水肿发挥保护作用。     

大鼠脑缺血/再灌注层粘连蛋白表达的实验研究

目的探讨层粘连蛋白(Laminin,LN)在大鼠脑缺血再灌注中的作用.方法制备大鼠脑缺血再灌注(MCAO/R)模型,分为假手术组与缺血再灌注组;缺血2h后依照再灌注时间点的不同分为2h、6h、12h、24h、3d及7d共6组.各时相点取材,免疫组化观察脑组织LN的表达变化,并使用多媒体彩色病理图像分析系统进行定量分析.结果 LN的表达于再灌注2h开始降低,24h时达最低,第3日时开始回升.结论 LN可能参与了缺血再灌注血管源性脑水肿的形成与发展,并且可能参与了再灌注损伤后新生血管的生成、血管重塑及侧支循环的建立.     

氯胺酮预处理对大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤后脑水肿和水通道蛋白4表达的影响

目的 观察氯胺酮缺血前预给药对大鼠短暂性脑缺血/再灌注损伤后神经缺失症状、脑水肿及Aquaporin 4(AQP4)表达的影响.方法 62只健康雄性Sprague-Dawley大鼠,体重220～250 g,随机分为假手术组(Sham组,n=18只)、生理盐水组(Vehicle组,n=22只)和氯胺酮预处理组(Ketamine组,n=22只).Vehicle组、Ketamine组大鼠采用线栓法阻塞大鼠右侧大脑中动脉,90 min后拔出栓线实现再灌注,建立局灶性脑缺血/再灌注模型.Ketamine组、Vehicle组分别于缺血前30min静脉持续输注(1mg·kg-1·min-1)5%氯胺酮及0.9%生理盐水,30 min后实施缺血再灌注损伤.Sham组手术操作同前,但线栓未阻塞大脑中动脉.再灌注24 h大鼠进行神经缺失症状评分,后断头取脑,采用干湿重法测定缺血侧脑半球的水肿度,Western-blot检测缺血周边区脑组织AQP4表达.结果 Vehicle组、Ketamine组大鼠脑缺血/再灌注损伤后神经功能缺失症状明显,缺血侧脑半球干湿重比值较Sham组明显增加(P<0.01);与Vehicle组相比,Ketamine组缺血侧脑半球干湿重比值无明显减小(P>0.05).与Sham组相比,Vehicle组、Ketamine组大鼠脑缺血/再灌注损伤后缺血周边区AQP4表达明显上调(P<0.01);与Vehicle组相比,Ketamine组AQP4表达无明显下调(P>0.05).结论 大鼠脑缺血/再灌注损伤后神经功能缺失症状及脑水肿明显,缺血周边区脑组织AQP4表达上调;氯胺酮缺血前预处理未能明显改善神经缺失症状及脑水肿,对缺血周边区脑组织AQP4的表达无影响.     

超敏C反应蛋白在大鼠脑缺血再灌注后12h的表达

目的:观察大鼠脑缺血再灌注12 h后血清hS-CRP含量的变化,以探讨血清hS-CRP水平对于急性脑血管病的诊断意义。方法:线栓法制备大鼠大脑中动脉阻塞模型,缺血2 h再灌注12 h后,评价大鼠神经功能状态,观察大鼠脑梗死情况,心脏取血检测血清hS-CRP含量。结果:与正常组比较,模型组大鼠神经功能缺损评分升高,血清hS-CRP含量升高,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:hS-CRP与大鼠脑缺血造成的神经功能缺损密切相关。     

大鼠去骨瓣减压术后水孔蛋白-4表达变化的实验研究

目的：研究去骨瓣减压术对大鼠创伤性脑损伤后脑水肿、水孔蛋白-4（AQP-4）表达的影响。方法：应用改良Feeney’s自由落体脑损伤打击装置制成大鼠创伤性脑损伤模型,分为假手术组（SO组）、对照组（C组）及去骨瓣减压组（DC组）,各组在损伤后再分为6、12、24、72、120 h及168 h等6个时间点断头取脑损伤区组织。分别利用干湿重量法测量脑组织含水量和Western-Blot检测AQP-4蛋白的表达。结果：大鼠去骨瓣减压组脑组织含水量及AQP-4蛋白表达呈现先升高后降低的趋势,于伤后24 h达高峰后逐渐下降。与C组相比,上述指标含量均有所下降：脑组织含水量在24、120、168 h差异有统计学意义（P〈0.05）,72 h差异有高度统计学意义（P〈0.01）;AQP-4蛋白表达在12、120 h时间点有统计学意义（P〈0.05）,24、168 h时有高度统计学意义（P〈0.01）。结论：创伤后大鼠脑组织脑水肿与AQP-4表达上调密切相关;去骨瓣减压术可减轻脑水肿,减缓AQP-4表达。该手术对创伤性脑损伤的保护机制可能与减缓AQP-4蛋白表达,从而减轻脑水肿和继发性脑损伤,保护脑组织有关。     

大鼠局灶性脑缺血/再灌注后血管源性脑水肿的时相变化

目的 探讨大鼠局灶性脑缺血/再灌注后血管源性脑水肿的时相变化.方法 线栓法制作大鼠大脑中动脉阻塞模型,SD健康大鼠随机分为脑缺血/再灌注组、正常组和假手术组,用甲基酰胺浸泡法测脑组织伊文思蓝(EB)含量,干湿重法测脑含水量,光镜下观察HE染色的脑组织结构.结果 脑缺血/再灌注后3 h,脑组织EB含量和脑含水量均明显增加,上述两项指标在24 h和72 h时两次达到高峰(P＜0.05),96 h后基本恢复正常,光镜下定性观察脑水肿时相变化.结论 血管源性脑水肿在脑缺血/再灌注3 h后形成的脑水肿中占据重要地位.     

大鼠急性放射性脑水肿水通道蛋白4的表达

目的:探讨大鼠伽玛刀照射后诱发急性放射性脑水肿水通道蛋白4(AQP4)表达的变化及其与放射性脑水肿的关系.方法:单次50 Gy伽玛刀照射大鼠大脑半球中线右旁开2 mm(中心点在双外耳道连线上)建立伽玛刀照射模型,用干湿重法和免疫组织化学方法检测照射后不同时间段脑含水量和AQP4的表达.结果:伽玛刀照射后12 h脑含水量和靶区、靶周围区AQP4表达增加,照射后2 d达到高峰,14 d后仍高于正常,AQP4表达的灰度值和脑含水量呈显著负相关(r=-0.9857,P＜0.05).结论:AQP4与急性放射性脑水肿的形成密切相关.     

水通道蛋白基因4在子痫前期模型大鼠脑组织中的表达

目的研究水通道蛋白基因4(AQP4)在子痫前期模型鼠脑组织中的表达变化。方法成年SD大鼠分为PE模型组(7只)通过尾静脉注射内毒素(1μg/kg)的方法建立,正常妊娠组(6只)和非孕组(12只)注射等量生理盐水。应用免疫组化和Westernblot检测各组大鼠海马区AQP4的表达水平。结果妊娠第19日PE模型组大鼠血压(135±9)mmHg明显高于正常妊娠组(116±8)mmHg和非孕组(112±6)mmHg(P<0.02);PE模型组尿蛋白(3.8±0.5)水平明显高于正常妊娠组(2.6±0.6)和非孕组(2.3±0.4)(P<0.05)。免疫组化结果显示AQP4集中分布在脑内血管壁,Western-blot灰度分析提示子痫前期大鼠海马组织中AQP4蛋白的表达水平(41.7±4.2)明显高于正常妊娠组(26.3±5.3)和非孕组(9.2±2.1)(P<0.01)。结论 AQP4在子痫前期模型大鼠脑组织中表达上调,可能与子痫发病有关。     

水通道蛋白-4在大鼠创伤性脑水肿中的表达及其意义

目的探讨水通道蛋白-4(AQP4)在大鼠创伤性脑水肿形成过程中的表达变化及其意义。方法选择健康成年Wistar大鼠随机分为实验组(n=60)和对照组(n=15),实验组采用改进的Feeney氏法,造成大鼠右侧大脑半球局部脑损伤;对照组仅切开头皮,不造成大鼠脑损伤。分别进行脑组织形态学观察、脑含水量检测、免疫组织化学方法检测各组AQP4的表达水平。结果实验组72h病灶区域脑组织含水量百分率[(80.18±0.55)%较对照组(78.10±0.52)%]高(P<0.05)。实验组1、3h AQP4平均吸光度值(0.210 0±0.029 4、0.186 0±0.016 5)较对照组(0.143 3±0.053 8)高(P<0.05)。结论在脑创伤早期,AQP4强烈表达,可能与脑创伤后的应激反应有关。在脑创伤后期,由于AQP4表达呈下调趋势,其活性降低,出现混合性脑水肿。     

环磷酰胺对大鼠脑缺血再灌流损伤的免疫保护

目的 观察免疫抑制剂对脑缺血再灌流损伤的影响及可能作用机制。方法 采用４－ＶＯ法制作大鼠脑缺血再灌流损伤模型,观察环磷酰胺预治疗大鼠外周血白细胞数,海马ＣＡ１区的计量病理,海马区内二醛含量和Ｎａ＾＋,Ｎ＾＋－ＡＴＰ酶活性的变化。结果 与对照组比较,预治疗组大鼠外周血内白细胞数明显降低,ＣＡ１区正常神经元计数增加,结论 环磷酰胺可ＡＴ酶活性升高而ＭＤ芩明显减低。结论 环磷酰胺可减轻大鼠离缺血再灌流损     

地龙抗大鼠大脑局灶性脑缺血诱导的凋亡研究

目的：观察地龙水提取物对大鼠大脑中动脉缺血再灌注诱导凋亡的影响.方法：大鼠灌胃地龙水提取物（相当生药量1.4 g/kg） 14 d后经大脑局灶性脑缺血再灌注损伤造模,运用HE组织染色、Caspase-3免疫组化染色、Hoechst 33342荧光染色及DNA琼脂糖电泳进行观察.结果：地龙水提取液能有效地减轻缺血再灌注损伤导致的大脑皮层水肿、充血,改善神经元的正常形态结构;地龙水提取液能显著地降低大脑皮层损伤后的caspase-3蛋白表达,降低神经元凋亡.结论：地龙水提取液有良好地抗大鼠大脑缺血再灌注诱导的神经元凋亡作用.     

脑缺血再灌流后脑含水量、线粒体呼吸功能的改变

目的：探讨脑缺血与再灌流后线粒体呼吸功能变化以及与脑水肿的关系。方法：采用Ｃｌａｒｋ氧电极法测定脑缺血及再灌流后脑细胞线粒体呼吸Ⅲ、Ⅳ态及呼吸控制率（ＲＣＲ）；采用烘干法按Ｅｌｉｓ公式计算脑含水量。结果：脑缺血后脑含水量增加，再灌流后加重脑水肿；线粒体呼吸Ⅲ态及ＲＣＲ于脑缺血时均降低，再灌流早期代偿性升高，再灌流６ｈ后呼吸Ⅳ态明显升高，而呼吸Ⅲ态未恢复，导致ＲＣＲ进一步下降。结论：脑缺血及再灌流均造成脑水肿，线粒体呼吸功能于脑缺血时受抑制，再灌流使线粒体功能进一步受损，无效耗氧增加，提示线粒体功能的改变是再灌流损伤的病理基础之一。     

红景天苷对大鼠缺血性脑水肿的影响

目的研究红景天苷(salidroside)对水通道蛋白4(aquaporin 4,AQP4)在大鼠缺血性脑组织中表达的影响。方法采用线拴法制作大鼠局灶性脑缺血模型,实验分为模型组、假手术组、红景天苷组。通过光镜技术观察各组别脑水肿区的病理变化,干湿质量法检测脑含水量,采用原位杂交、免疫组化方法观察AQP4及其mRNA在脑组织中的表达,硫代巴比妥酸法和定磷法测定缺血脑组织中丙二醛(MDA)、Na ,K -ATPase活性。结果缺血后模型组的细胞及血管周围间隙明显扩大,部分细胞坏死,神经胶质细胞增生;大鼠穹隆下器官、脉络丛、大脑皮质、视上核、海马等部位AQP4及其mRNA的表达上调,48～72 h达峰值;脑组织含水量亦在72 h达高峰。红景天苷组脑组织形态结构无明显改变,脑组织含水量、MDA水平、AQP4及其mRNA的表达明显低于模型组;而Na ,K -ATPase活力明显高于模型组。结论红景天苷可抑制缺血性脑水肿组织中AQP4及其mRNA的过表达,防止脑水肿的发生。     

异氟烷和七氟烷对脑缺血大鼠水通道蛋白4表达的影响

目的 观察异氟烷和七氟烷对脑缺血后大鼠水通道蛋白4(AQP4)表达的影响.方法 72只SD大鼠随机分为假手术组、对照组、Ⅰ(异氟烷)组和S(七氟烷)组.线栓法制作大鼠局灶性脑缺血模型,再按缺血后24,48,78h分为3亚组,每组6只,观察每组大鼠的脑水肿程度和AQP4的表达.结果 与假手术组比较,缺血后48,78h对照组、Ⅰ组和S组大鼠脑肿胀率和AQP4吸光度比值均明显增加(P＜0.01或P＜0.05);与对照组比较,Ⅰ组、S组缺血后48,72h脑肿胀率和AQP4吸光度比值均明显减少(P＜0.05).结论 异氟烷和七氟烷均可降低大鼠脑缺血后AQP4表达和减轻脑水肿.     

Endogenous nitric oxide on mitochondrial oxygen consumption after cerebral ischemic reperfusion

Braintissueisrathersensitivetoischemiaandanoxia.Itmaybefurtherdamagedafterreperfusion.Anumberofstudiesaboutpathologicmechanismhavebeenmade.EndogenousNOisanewkindofneurotransmitterandisnotedintherecentdecade:l3j.ItalsoshowscytoxiceffectwhenNOisoverproduced.WehavemadeanexperimentonthechangeofmltochondriaoxygenconsumptionstatustoexploretheeffectofendogenousNOafterischemicreperfusion.Thepresentstudywillprovideuswithmoreevidencetodescribethemechanismofcerebralischemicreperfusioninjury.MATERIA…     

大鼠脑外伤诱导水通道蛋白4表达增强加重脑水肿

目的探讨大鼠外伤性脑水肿组织水通道蛋白4(aquaporin 4,AQP4)的表达变化及其与血-脑脊液屏障(blood-brain barrier,BBB)通透性的关系。方法SD大鼠94只,用随机数字表法分为脑外伤组(包括脑外伤后1、6、24、48和168 h)、假手术对照组及空白组。复制大鼠自由落体脑损伤模型,用干质量湿质量法测定脑组织水含量,用IgG免疫组化染色法检测血-脑脊液屏障通透性的变化,用免疫组化染色法及Western blotting法检测神经胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)和AQP4蛋白的表达并进行图像分析。结果大鼠脑外伤后,损伤侧脑组织水含量较假手术组增加,6 h时差异有统计学意义,24 h达高峰。与假手术组比较损伤侧脑组织IgG漏出在外伤后1 h差异有统计学意义,6 h达高峰。免疫组化染色显示损伤周围处星形胶质细胞上AQP4的分布极性发生改变,不仅毛细血管周围的星形胶质细胞足突上AQP4表达增加,而且星形胶质细胞胞体亦出现AQP4表达。AQP4表达变化的时间与脑组织水含量变化一致,晚于IgG漏出的变化。损伤周围处GFAP在损伤后1 h～7d表达持续增强。结论大鼠脑损伤后先出现BBB通透性增加,并引起AQP4表达增加,二者均促进了脑水肿的发生。