X线辐射对成年小鼠睾丸ghrelin表达的影响

目的:探讨ghrelin在X射线全身照射后小鼠睾丸中表达及其意义。方法:采用辐射剂量1.0GyX线对成年小鼠进行全身照射,于照射后16h、4w取小鼠睾丸组织制备标本,免疫组织化学ABC法检测ghrelin的表达及变化。结果:正常小鼠睾丸ghrelin的阳性表达主要集中在间质细胞,生精细胞呈阴性反应,照射后ghrelin间质细胞为阴性,而生精细胞中出现阳性反应,阳性反应定位于精原细胞、精母细胞和早期变形精子细胞,但照射后4w组中的精子细胞中未见阳性反应。结论:ghrelin在X线辐射后小鼠睾丸中表达的变化,表明ghrelin参与了小鼠睾丸辐射急性损伤及损伤后修复过程。     

X-线辐射损伤小鼠睾丸生精上皮内Ghrelin表达的研究

目的 在X线辐射损伤小鼠睾丸生精上皮中Ghrelin表达变化的意义.方法 采用辐射剂量1.0 GyX线对成年小鼠进行全身照射,于照射后16 h、2 w和4 w取小鼠睾丸组织制备标本,免疫组织化学ABC法检测Ghrelin的表达及变化.结果 正常小鼠睾丸Ghrelin表达主要集中在睾丸间质的间质细胞,生精上皮呈阴性反应,照射后Ghrelin间质细胞为阴性,而生精上皮内出现阳性反应,阳性反应定位于精原细胞、精母细胞和早期变形精子细胞,支持细胞未见阳性反应.但随照射时间延长,Ghrelin表达逐渐减少.结论 在X线辐射损伤小鼠睾丸生精上皮中Ghrelin表达的变化,表明Ghrelin及其受体GHS-R系统在小鼠睾丸辐射急性损伤及损伤后修复过程中具有一定的调节作用.     

人睾丸中各级生精细胞的鉴定

目的:建立人睾丸生精细胞鉴定方法.方法:用机械法离散人睾丸细胞,涂片,用Diff-Quik法染色显示细胞形态.在Hoffman光学镜头下根据细胞形态进行活细胞分类,选取各类细胞分别涂片,行17号染色体着丝粒探针化学显色原位杂交和c-kit抗原表达免疫细胞化学染色.结果:在配置Hoffman镜头的倒置显微镜下人睾丸圆形细胞主要可分为4群:支持细胞(Sertoli)细胞,粗线期初级精母细胞,精原细胞,圆形精子细胞.原位杂交结果为:Sertoli细胞、粗线期初级精母细胞、精原细胞均显示2个着丝粒信号,圆形精子细胞及精子显示单个着丝粒信号.抗c-kit抗体免疫化学染色显示:粗线期初级精母细胞、精原细胞反应呈阳性,Sertoli细胞、圆形精子细胞、精子反应呈阴性.结论:人睾丸各类细胞在活体形态、染色形态、染色体倍性、抗原表达上均有各自显著的特征,其中据Hoffman成像形态区分各级生精细胞是在活体状态下一种简便有效的鉴别人生精细胞的方法.     

X线辐射损伤对小鼠睾丸生精上皮结构的改变

目的探讨X线辐射对小鼠睾丸生精上皮结构的改变。方法成年雄性小鼠15只,随机分为辐射组和对照组。辐射组小鼠接受1.0Gy剂量X线全身照射,于照射后16h和4w观察生精细胞超微结构的改变。结果X线辐射后,生精小管内呈现生精细胞的变性坏死：细胞质固缩,细胞膜破裂,坏死脱落,主要集中在精原细胞和初级精母细胞的变性。随着照射时间的延长,管腔内生精细胞层数明显减少,生精上皮明显变薄,成熟精子明显减少甚至缺少,各生精小管形状不规则,管腔间隙增大。结论X线辐射可引起小鼠睾丸内生精上皮结构的明显损伤,且睾丸细胞的损伤程度和照射时间呈正相关。     

PDCD4在雄鼠生殖细胞中的表达研究

目的：验证程序性细胞死亡因子4 (programmed cell death 4,PDCD4)在小鼠雄性生殖细胞中的表达。方法：RT-PCR检测PDCD4在不同周龄小鼠睾丸的基因表达情况;Western blot法检测PDCD4在不同周龄小鼠睾丸中蛋白表达水平;免疫荧光法检测PDCD4在雄性生殖嵴以及在不同周龄小鼠睾丸的定位情况。结果：RT-PCR和Western blot结果均显示PDCD4在0周龄小鼠睾丸中开始有表达,并持续表达至成年;免疫荧光显示PDCD4在胚胎期雄性小鼠生殖细胞中也有表达;在出生后0周和1周龄小鼠睾丸中,PDCD4特异表达于精原细胞;在2周龄小鼠睾丸中,PDCD4分布于精原细胞和精母细胞;而在3、4和5周龄小鼠睾丸组织中,PDCD4主要分布于精原细胞、精母细胞与圆形精子细胞。结论：PDCD4分布于胚胎期和出生后各阶段生精细胞,这为进一步研究PDCD4在精子发生中的作用打下基础。     

生精相关基因Znf230在小鼠睾丸及精子中的表达和定位研究

目的：应用小鼠Znf230多克隆抗血清,对Znf230在小鼠睾丸及精子中的表达及定位进行研究。方法：用RT-PCR分析、Western blot检测、免疫组织化学和免疫荧光染色方法研究Znf230在小鼠不同发育阶段睾丸组织及精子中的表达及亚细胞定位情况。结果：小鼠从出生到成年的发育过程中,Znf230的表达水平基本上是稳定的。小鼠出生6 d和12 d时,该蛋白在精原细胞核中表达,从出生18 d到精子发育成熟这个阶段,该蛋白转移到圆形精子细胞、延长精子细胞和精子中表达,具体定位于顶体区域和精子的尾部。结论：Znf230可能在小鼠生精过程中起着重要的作用。     

环磷酰胺对小鼠精子发生的影响

观察雄性小鼠经腹腔注射环磷酰胺后,在不同时期其精子及睾丸组织学的变化。结果;第３４,３６ｄ,精子计数下降,畸形率增高;第２１,２８,３４,３６ｄ,生精细胞数均减少;睾丸超微结构的变化主要表现为各级生精细胞核膜的溶解,核的破坏及精子细胞顶体囊泡的异常,但紧密连接不受影响。提示ＣＹ通过对精原细胞及细线前期初级精母细胞产生毒害作用而影响精子发生。     

微波辐射对小鼠睾丸超微结构的影响

本实验用频率为2.45GHz、功率密度为19mW/cm~2、20mW/cm~2的微波重复照射BALB/c小鼠,于透射电镜和扫描电镜下观察小鼠睾丸的变化。可见异常曲细精管中有生精细胞形状不规则、生精细胞脱落到管腔中以及无管腔等形态。精原细胞,精母细胞和早期精子细胞的异常主要见于线粒体空化、核周间隙扩张及核膜局部破损,晚期精子细胞主要见于核异形等。     

DNAJB8在小鼠睾丸生殖细胞中的表达定位

目的：探究DNAJB8［DnaJ heat shock protein family（HSP40） member B8］在小鼠精子发生过程中的表达模式。方法：分别采用实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹实验检测小鼠各脏器、不同发育时期睾丸组织以及不同生精细胞DNAJB8的mRNA转录和蛋白表达量;免疫荧光检测DNAJB8在生精细胞中的表达定位。结果：DNAJB8基因在睾丸组织中特异表达,从小鼠出生后21 d（P21）即圆形精子阶段开始DNAJB8 mRNA保持较高的表达,而DNAJB8蛋白在精子变形晚期出生后35 d（P35）才开始表达。DNAJB8蛋白主要定位在晚期精子细胞及精子鞭毛中段。结论：DNAJB8可能参与小鼠精子变形晚期的发育过程。     

雄激素受体敲除小鼠睾丸生精功能变化及p63的表达

目的 研究雄激素受体（AR）敲除小鼠睾丸生精功能及p63在曲细精管中表达的改变.方法 采用雄性Flox-AR小鼠与雌性ACTB-Cre小鼠交配,并敲除胚胎中AR,筛选AR敲除（AR敲除组）和AR未敲除（对照组）雄性小鼠各10只,对比睾丸曲细精管生精功能及p63的表达.结果 两组小鼠曲细精管内径、管周膜厚度、管壁生殖细胞层数、生殖细胞成熟度评分及总Makler评分之间差异均有统计学意义（P＜0.05）,p63的阳性表达主要位于精原细胞及精母细胞,精子细胞及成熟精子中表达呈阴性,且AR敲除组表达阳性率及HSCRE评分均显著低于对照组（P＜0.01）.结论 AR表达与小鼠睾丸曲细精管p63表达关系密切,AR敲除小鼠睾丸曲细精管生精功能受损、p63表达下调,p63调控生殖细胞的早期分化.     

Experimental study on relative biological effectiveness of tritium and risk estimates of genetic damage

The relative biological effectiveness (RBE) and the genetic effect of tritium internal exposure compared with those of Co-60 gamma rays external exposure are studied in mice. Two different irradiation models are used: 1) irradiation by single intake of tritium, or by Co-60 gamma rays external exposure with gradually decreasing doses simulating the exponential decreasing function of tritium in the mouse body; 2) irradiation by continual intake of tritium, or by Co-60 gamma rays external exposure at constant dose rates. The biological effective end points observed in this study are dominant lethal mutations, dominant skeleton mutations, survival rates of primary oocytes and spermatogonia and chromosome aberrations in spermatocytes. The experimental results show that the RBE values of tritium would be 2.24 to 2.99 in the dose range of 0.02-0.06 Gy/day. The risk estimates of genetic damage from dominant skeleton mutations are 10959/10(6). Gy for tritium beta rays and 3605/10(6). Gy for Co-60 gamma rays.     

Experimental study on relative biological effectiveness of tritium and risk estimates of genetic damage

The relative biological effectiveness (RBE) and the genetic effect of tritium internal exposure compared with those of Co-60 gamma rays external exposure are studied in mice. Two different irradiation models are used: 1) irradiation by single intake of tritium, or by Co-60 gamma rays external exposure with gradually decreasing doses simulating the exponential decreasing function of tritium in the mouse body; 2) irradiation by continual intake of tritium, or by Co-60 gamma rays external exposure at constant dose rates. The biological effective end points observed in this study are dominant lethal mutations, dominant skeleton mutations, survival rates of primary oocytes and spermatogonia and chromosome aberrations in spermatocytes. The experimental results show that the RBE values of tritium would be 2.24 to 2.99 in the dose range of 0.02-0.06 Gy/day. The risk estimates of genetic damage from dominant skeleton mutations are 10959/10(6). Gy for tritium beta rays and 3605/10(6). Gy for Co-60 gamma rays.     

输精管结扎对大鼠睾丸生精细胞凋亡的影响

为探讨输精管结扎对睾丸曲精管生精细胞凋亡程度的影响，应用流式细胞仪和脱氧核糖核酸末端转移酶介导的ｄＵＴＰ缺口末端标记技术，检测大鼠输精管结扎和假手术后２－１２周睾丸生精细胞的凋亡情况。     

低剂量电离辐射对小鼠免疫器官Bcl-2蛋白表达的影响

目的 :研究低剂量电离辐射对小鼠胸腺、脾和肠系膜淋巴结 Bcl- 2蛋白表达的影响 ,以揭示辐射诱导细胞凋亡 J型曲线的分子机理。方法 :采用免疫组织化学及图像分析定量方法。结果 :假照组各免疫器官存在 Bcl- 2蛋白的基础表达 ;而照射组随着照射后时间的推移 ,Bcl- 2蛋白表达逐渐增高 ,2 4 h达峰值 ,且差异显著 ;72 h回复至假照水平。结论 :上述结果为揭示低剂量辐射免疫兴奋效应和辐射诱导细胞凋亡 J型曲线的分子机理提供了有意义的数据     

赖氨酸和锌对精子核浓集的影响

取正常及缺锌大鼠睾丸和附睾、正常人及男性不育者精子，制成苯胺蓝染色标本及电镜标本观察，并对确定为精浆低锌的男性不育者给于口服硫酸锌治疗，观察锌含量的变化。结果正常大鼠睾丸曲细精管中精原细胞及精母细胞染色深，精子细胞及精子染色渐淡，附睾头部精子较尾部精子染色深（尾部精子几乎不着色）。正常人苯胺蓝染色阳性（着色深）精子数明显少于不育者。电镜图显示睾丸精子、附睾头部及尾部精子核逐渐致密，正常人精子核致密均匀，多数不育者精子核呈粗颗粒状。结果还显示缺锌大鼠生精细胞和精子苯胺蓝染色较对照大鼠深，表明赖氨酸含量增加。精浆低锌者口服硫酸锌治疗后，精浆锌含量明显提高。因而作者认为，赖氨酸含量增加导致精子核浓集障碍，可能是男性不育的一个重要原因。而缺锌可能会导致生精细胞和精子赖氨酸含量增加，口服硫酸锌治疗精浆低锌的不育者有一定疗效