色素上皮细胞衍生因子与胶质瘤侵袭的相关性

目的 评价色素上皮细胞衍生因子(PEDF)对胶质瘤侵袭的抑制作用.方法 将PEDF(100 ng/ml)加入胶质瘤细胞U87中(U87PEDF),以未加PEDF蛋白的胶质瘤细胞作对照组(U87con),同时在U87PEDF中加入0.25μg/ml的促血管生成因子(VEGF,U87PEDF+VEGF).细胞迁徙实验检测PEDF抑制胶质瘤细胞侵袭性;实时荧光定量逆转录(RT)-PCR检测层粘连蛋白Laminin-8表达.结果 迁徙实验结果表明,对照组胶质瘤细胞穿透数明显多于PEDF处理组细胞,加入VEGF后,胶质瘤细胞迁徙率的抑制率仍减少38%;实时荧光定量RT-PCR结果显示,U87对照组 Laminin-8α4、β1、γlmRAN表达分别为(1.043±0.090)、(0.823±0.012)、(0.762±0.005)拷贝/μl,明显高于U87PEDF组[(0.633±0.004)、(0.442±0.005)、(0.424±0.002)拷贝/μl,P＜0.05].结论 在VEGF存在的条件下,PEDF能有效抑制胶质瘤细胞的迁徙,表明其可能由下调Laminin-8基因的表达所致.     

重组腺病毒p53 上调凋亡调控因子通过凋亡通路增强胶质瘤细胞对替莫唑胺敏感性的体外研究

目的 探讨转染p53 上调凋亡调控因子(PUMA)的人脑胶质瘤细胞对替莫唑胺敏感性增强的作用机制.方法 将人脑胶质瘤细胞U87MG 分为正常对照组、空载体组和实验组进行培养,分别将感染复数(MOI) ＝50 的空载体腺病毒(Ad-△ BH3)和携带PUMA 的重组腺病毒(Ad-PUMA)转染U87MG 细胞,转染后用MTT 比色法测定各组细胞的存活率并计算替莫唑胺(TMZ)IC50,流式细胞仪检测细胞周期的变化,应用TUNEL 法检测细胞的凋亡情况.Western blot 检测凋亡相关蛋白p53、Bax 的表达.结果 外源性PUMA 基因在Ad-PUMA 转染U87MG 48 h 后,随着时间延长,PUMA 表达使U87MG 细胞的增殖能力降低并诱导凋亡,转染24 h、48 h、72 h 的生长抑制率分别为17.3%、35.6%、43.3%,凋亡率分别为20.3%、31.4%、45.4%.正常对照组、Ad-PUMA、Ad-△BH3 组细胞的TMZ IC50分别为(15.0 ±1.9)μmol/L、(2.3 ±0.1)μmol/L 和(14.4 ±1.6)μmol/L.PUMA 表达的U87MG 细胞DNA 合成受到抑制,周期阻滞在G2 期;Western blot 检测显示p53 表达在各组中差异无统计学意义(P ＞0.05)、PUMA 和Bax 在实验组中表达较对照组强,差异有统计学意义(P ＜0.01).结论 Ad-PU-MA 转染可有效增强人脑胶质瘤细胞U87MG 对TMZ 的敏感性,抑制人脑胶质瘤细胞U87MG 的增殖,通过诱导细胞G2 期阻滞促进其凋亡,促凋亡机制不依赖于p53.     

siRNA干扰半乳凝集素-3对恶性胶质瘤细胞株U87MG细胞凋亡及增殖的影响

目的研究抑制半乳凝集素-3(Gal3)的表达对恶性胶质瘤细胞株U87MG细胞凋亡及增殖的影响。方法构建Gal3siRNA表达载体,转染U87MG细胞,并筛选出单克隆细胞株U87MG/Gal3 RNAi;用RT-PCR方法检测该稳定细胞株中Gal3的mRNA表达,用Western blot检测其蛋白表达;通过流式细胞技术和MTT法检测Gal3对肿瘤细胞凋亡及增殖的影响。结果 U87MG野生型细胞株、U87MG/空载体稳定细胞株和U87MG/Gal3 RNAi稳定细胞株的Gal3 mRNA表达值分别为1.28±0.0431,1.31±0.0278和0.38±0.0506;Gal3蛋白表达值分别为0.56±0.0479,0.54±0.0351和0.12±0.0418,U87MG/Gal3 RNAi稳定细胞株的Gal3 mRNA及蛋白表达显著低于对照组细胞(P<0.05);三种细胞株对凋亡诱导剂CDDP所诱导的细胞凋亡率分别为(30.83±0.13)%、(30.82±0.159)%和(54.56±0.12)%,U87MG/Gal3 RNAi稳定细胞株凋亡率显著高于对照组细胞(P<0.05);U87MG/Gal3 RNAi稳定细胞株细胞增殖率在不同时间点均显著低于对照组细胞(P<0.05)。结论抑制Gal3基因的表达能够促进该肿瘤细胞的凋亡,并抑制细胞的增殖。Gal3可以成为治疗恶性胶质瘤的有效的靶基因。     

c-Met siRNA对U87-EGFRvⅢ胶质瘤细胞凋亡和增殖的影响

目的:合成针对c-Met的小干扰RNA(siRNA),研究其对U87-EGFRvⅢ(表皮生长因子受体Ⅲ型突变体)胶质瘤细胞凋亡和增殖的影响.方法:用脂质体转染合成的c-Met siRNA入U87-EGFRvⅢ细胞,未转染组为对照组,荧光实时定量PCR和Western blotting分别检测c-Met基因和蛋白的表达,MTT和AnnexinV-FITC/PI法检测细胞增殖和凋亡情况.结果:c-Met siRNA明显抑制c-Met表达(P＜ 0.05);明显增加细胞凋亡率(P＜0.05).同时,c-Met siRNA单独或协同EGFRvⅢsiRNA可抑制胶质瘤细胞增殖(P＜0.05).结论:c-Met siRNA可抑制U87-EGFRvⅢ胶质瘤细胞增殖、诱导其凋亡,为研究c-Met基因在胶质瘤中的作用及其靶向联合治疗提供了理论基础.     

过表达miR-129-5p对胶质瘤细胞增殖、迁移 及CDK6、N-cadherin表达的影响

目的:研究过表达miR-129-5对胶质瘤细胞增殖、迁移及细胞周期蛋白依赖性激酶6(CDK6)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)表达的影响。方法:培养胶质瘤U87细胞并分为转染阴性对照mimic的对照组、转染miR-129-5p mimic的miR-129-5p组,采用MTS实验检测增殖活力、划痕实验检测迁移活力、Western blot检测CDK6及N-cadherin的表达量,验证miR-129-5p对CDK6、N-cadherin的靶向调控作用。结果:miR-129-5p组的OD490值(0.78±0.15),明显低于对照组的(1.21±0.34)(P0.05);相对愈合面积(32.39±8.79)%,明显低于对照组的(73.39±17.85)%(P0.05);CDK6的表达量(0.28±0.09)及N-cadherin的表达量(0.34±0.08),明显低于对照组的(0.88±0.18)及(0.67±0.15)(P0.05);生物信息学分析及双荧光素酶报告表明miR-129-5p靶向调控CDK6、N-cadherin基因mRNA 3’UTR。结论:过表达miR-129-5p能够抑制胶质瘤细胞的增殖、迁移,其机制可能与靶向调控CDK6、N-cadherin有关。     

早幼粒细胞白血病蛋白在髓系白血病细胞中的表达及对细胞增殖的影响

目的 探讨早幼粒细胞白血病(promyelocyte leukemia,PML)蛋白在髓系白血病中的表达及其对人慢性粒细胞白血病细胞系K562细胞增殖的影响.方法 采用实时荧光定量PCR技术检测了30例慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)患者及24名健康对照者外周血单个核细胞中PML mRNA水平的差异.构建PML的真核表达载体,转染K562细胞后筛选出稳定表达PML的细胞株,以稳定表达空载体的细胞为对照.四甲基偶氮唑盐(MTT)法和流式细胞术分别检测PML过表达对细胞增殖和细胞周期的影响,并进一步用反转录-PCR(RT-PCR)和蛋白质印迹技术(Westernblot)检测增殖相关因子c-myc和p27kip1(p27) mRNA水平以及蛋白表达水平的改变.最后检测了CML患者及健康对照者外周血单个核细胞中c-myc和p27 mRNA水平的差异.结果 CML患者外周血单个核细胞中PML mRNA表达水平(△Ct=9.02±0.74)明显低于健康对照组(△Ct =7.91 ±0.34),差异有统计学意义(t =5.07,P＜0.001).PML过表达能明显抑制K562细胞增殖,引起细胞周期G0/G1期阻滞.PML稳定表达的K562细胞中,c-myc的mRNA和蛋白表达水平降低,p27的mRNA和蛋白表达水平升高.CML患者外周血单个核细胞中c-myc的mRNA表达水平(△Ct =7.13 ±0.43)显著高于健康对照组(△Ct =9.35 ±0.82),差异有统计学意义(t=6.78,P＜0.001),而p27的mRNA表达水平(△Ct =4.56±0.58)则显著低于健康对照组(△Ct=3.29±0.92),差异有统计学意义(t=2.93,P＜0.01).结论 PML在CML患者中低表达,PML可能通过调节c-myc和p27的表达从而抑制白血病细胞的增殖.     

神经突触核蛋白-γ质粒转染胶质瘤细胞及其过表达对紫杉醇耐药性的影响

目的探讨胶质瘤细胞U87中神经突触核蛋白-γ(synuclein-γ,SNGG)过度表达对紫杉醇耐药的影响。方法 U87/SNCG组采用pIRES2-EGFP-SNCG真核表达载体转染U87胶质瘤细胞,构建稳定转染SNCG的U87/SNCG细胞系,U87/neo对照组采用pIRES2-EGFP空载质粒转染U87胶质瘤细胞,构建U87/neo细胞系。采用G418选择培养稳定转染的U87/neo和U87/SNCG细胞系,采用反转录实时定量聚合酶链反应和免疫荧光染色技术鉴定成功后,2组分别于紫杉醇作用6、12、18、24h时检测细胞增殖抑制率,采用流式细胞术检测细胞周期分布和凋亡细胞比例,采用免疫荧光染色法观察细胞形态学变化。结果成功构建U87/SNCG细胞系;U87/SNCG组SNCG mRNA表达较U87/neo对照组上调9.06倍;紫杉醇作用24h时,U87U/SNCG组细胞增殖抑制率[(25.49±2.44)%]和凋亡细胞比例[(7.02±0.26)%]明显低于U87/neo对照组[(34.36±2.95)%、(14.93±1.53)%](P<0.05);紫杉醇作用6h时,U87/SNCG组细胞G2/M期比例[(22.87±0.60)%]低于U87/neo对照组[(26.75±2.70)%](P<0.01);随着紫杉醇作用时间延长,与U87/SNCG组比较,U87/neo对照组细胞总数减少,细胞散落浮于培养液中,出现透明空泡、崩解细胞,并可见大量核固缩、核碎裂之凋亡现象。结论 SNCG过表达可降低抗微管药物诱导的U87细胞有丝分裂期阻滞,增强胶质瘤细胞的增殖能力和抗凋亡能力。     

自然流产蜕膜组织孕激素受体及p53、Bax、Bc1-2蛋白的表达及意义

[目的]通过检测自然流产蜕膜组织孕激素受体(PR)和凋亡相关调控蛋白p53、Bax及Bcl-2的表达,探讨自然流产发病机制.[方法]标本取自在解放军空军总医院妇科就诊要求流产的患者,自然流产组蜕膜标本23例,并以正常早孕蜕膜标本22例为对照组,采用免疫组化SP法检潮蜕膜组织PR、p53、Bax及Bcl-2蛋白的表达.[结果]自然 流产组蜕膜组织PR及Bc1-2蛋白的表达均明显低于对照组(P＜0.01),而p53及Bax蛋白的表达均明显高于对照组(P＜0.01).[结论]蜕膜组织中PR表迭减少及凋亡相关调控蛋白p53、Bel_2及Bax的异常表达在自然流产发病机制中协同发挥作用.     

IFN-γ对AKT基因激活的32D细胞的影响及作用机制探讨

目的 观察IFN-γ对AKT基因激活的小鼠髓系祖细胞系(32D细胞)的影响,探讨IFN-γ对造血细胞增殖和凋亡双向调节的可能机制.方法 用质粒转导技术使32D细胞高表达AKT基因,以IFN-γ作用32D细胞,用水溶性四氮唑(WST-1)细胞增殖检测法检测细胞增殖水平,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot法检测磷酸化胞外信号调节激酶(p-Erk)1/2、信号转导和转录活化蛋白(Stat)3、p-Stat3的表达.结果 ①低浓度(100 U/ml)IFN-γ能促进32D细胞增殖、抑制凋亡,高浓度(1000 U/ml)IFN-γ则相反(100 U/ml处理24 h细胞密度为0.238±0.010;而1000 U/ml处理后为0.106±0.010,未处理组为0.170±0.010).②低浓度IFN-γ可使32D细胞内Stat3磷酸化水平升高(1124±13),高浓度时减低(601±13).③转染激活型AKT质粒的32D细胞(激活型细胞)较其他组细胞的增殖率显著增高、凋亡率明显降低[分别为0.287±0.010、(9.57±0.17)%](P＜0.05).④激活型32D细胞较其他组细胞p-Erk1/2蛋白表达明显减低(P＜0.05).结论 ①IFN-γ对32D细胞有双重作用,即低浓度促进细胞增殖、抑制凋亡,高浓度抑制细胞增殖、促进凋亡.②IFN-γ对32D细胞的双重效应可能是通过Stat3的磷酸化水平的增减实现的.③激活型AKT能明显促进32D细胞增殖、抑制凋亡,IFN-γ可通过调控AKT来调节细胞增殖及凋亡.④AKT激活后可以抑制Erk信号通路,可能是通过抑制Rafl的修饰实现的.     

NGAL对肾小管上皮HK-2细胞的缺氧与复氧损伤保护作用

目的 探究NGAL对肾小管上皮HK-2细胞缺氧与复氧损伤的作用及其机制.方法 以HK-2细胞为模型,体外模拟缺氧与复氧环境(缺氧时氧浓度＜0.1％).先用WB和实时定量RT-PCR检测正常对照组、缺氧与复氧组细胞内NGAL蛋白和基因水平.用噻唑蓝(MTT)法和磷脂结合蛋白V-异硫氰酸荧光素( Annexin V-FITC)/碘化丙啶双染法检测并比较缺氧与复氧同时加入不同浓度NGAL( 20、100、200、400、1 000 ng/ml)处理组、正常对照组、缺氧与复氧组细胞增殖和凋亡情况,确定加入重组NGAL的适宜浓度.用流式细胞术和实时定量RT-PCR检测并比较正常对照组、缺氧与复氧组、缺氧与复氧同时加适宜浓度NGAL组细胞周期及凋亡相关基因bax、bcl-2、caspase-3.平行实验重复3次,比较各组检测结果.结果 WB法检测细胞内NGAL蛋白/肌动蛋白缺氧与复氧组为5.88±0.08,与正常对照组(1.51±0.03)比较差异有统计学意义(t=96.89,P＜0.05).RT-PCR法检测NGAL/肌动蛋白基因水平缺氧与复氧组为12.32±1.27,正常对照组为1.00±0.00,两组差异有统计学意义(t=15.40,P＜0.05).MTT结果正常对照组吸光度(A)值为0.97±0.03,缺氧与复氧组为0.56±0.04,两组差异有统计学意义(=18.68,P＜0.05).缺氧与复氧同时加入不同浓度的NGAL(50、100、200、400、1 000 ng/ml)组A值分别为0.56 ±0.04、0.53±0.03、0.56±0.04、0.53±0.03、0.54±0.02,缺氧与复氧组和不同浓度NGAL处理组间A值水平相近,差异无统计学意义(F =0.978,P＞0.05),但其与正常对照组比较A值差异均有统计学意义(F=105.20,P＜0.05).Annexin VFITC/碘化丙啶双染检测细胞早期凋亡率(Annexin V阳性,碘化丙啶阴性的细胞群),正常对照组为(1.0±0.2)％、缺氧与复氧组为(27.6±1.4)％,两组细胞早期凋亡率差异有统计学意义(t=33.590,P＜0.05);加入重组NGAL50、100 ng/ml后分别为(27.8±1.1)％、(26.4±1.3)％,和缺氧与复氧组比较,其差异无统计学意义(t分别为0.250、1.520,p均＞0.05);加入NGAL 200 ng/ml组为(19.4±0.6)％,明显低于缺氧与复氧组,且早期凋亡率差异有统计学意义(t=10.350,P＜0.05);而NGAL400、1 000 ng/ml组为(19.3±1.1)％、(18.9±0.5)％,与NGAL 200 ng/ml组间早期凋亡率差异均无统计学意义(t分别为0.130、0.630,P均＞0.05);因此选取NGAL浓度为200 ng/ml.流式细胞术检测PI正常对照组为(30.2±0.4)％,而缺氧与复氧组下降至(22.1±2.7)％,两组PI差异有统计学意义(t=3.750,P＜0.05),而缺氧与复氧同时加入NGAL 200 ng/ml组PI为(23.2±3.7)％,和缺氧与复氧组比较,差异无统计学意义(t=0.510,P＞0.05).实时定量RT-PCR法检测各组细胞内bax/bcl-2、caspase-3基因水平,正常对照组分别为1.00±0.00、1.00±0.00,缺氧与复氧组为5.83±0.33、8.13±0.20,加入NGAL 200 ng/ml后为2.52 ±0.07、1.89±0.02,三组bax/bcl-2(f=485.30,P＜0.05)和caspase-3基因水平(F=3 456.78,P＜0.05)差异有统计学意义.结论 NGAL在缺氧与复氧损伤的肾小管上皮HK-2细胞中通过调节凋亡相关基因表达发挥抗凋亡作用,且为缺血再灌注致急性肾损伤治疗提供了新思路和实验室依据.     

NOB1影响胶质瘤细胞增殖、凋亡的实验研究

目的 利用RNA干扰（RNAi）在人胶质瘤U251和U87-MG细胞中沉默NOB1基因的表达,探讨NOB1对恶性胶质瘤细胞增殖以及凋亡的影响.方法 构建NOB1基因的短发卡（shRNA）慢病毒表达载体,包装成病毒颗粒并感染人胶质瘤U251和U87-MG细胞,采用实时定量聚合酶链反应检测NOB1在恶性胶质瘤细胞系中的表达.采用甲基噻唑基四唑（MTT）比色法和克隆形成实验检测细胞增殖和克隆形成能力情况;同时利用PI染色流式细胞仪检测细胞凋亡情况,观察NOB1基因对U251和U87-MG细胞增殖、凋亡的影响.结果 NOB1基因在人胶质瘤U251、U87-MG细胞系中均明显高表达.NOB1-shRNA慢病毒能有效感染胶质瘤细胞,实验结果显示感染后U251和U87-MG细胞的增殖能力明显下降;U251克隆形成能力明显受到抑制;细胞周期在G0/G1停滞,而且细胞出现显著性凋亡;上述差异均具有统计学意义（P＜0.05）.结论 NOB1在人胶质瘤U251和U87-MG细胞中高表达;降低NOB1基因的表达,可以显著降低胶质瘤细胞的增殖,并促进胶质瘤细胞凋亡;NOB1基因在体外对胶质瘤细胞的发生发展可能具有癌基因的调节作用.     

Retracted Article: Long noncoding RNA PTPRG-AS1 regulates growth of glioma cells by sponging miR-185-5p

Previous studies have found that long noncoding RNA (lncRNA) protein tyrosine phosphatase, receptor type, G, antisense (PTPRG-AS1) was upregulated in glioma cells. Our study aimed to explore the detailed molecular mechanisms of PTPRG-AS1 involved in glioma progression. qRT-PCR assay was performed to measure the expressions of PTPRG-AS1 and microRNA-185-5p (miR-185-5p). Cell viability, migration, invasion, and apoptosis were determined by CCK-8 assay, colony formation assay, transwell assay, and flow cytometry assay. Autophagy was evaluated using GFP-LC3 puncta analysis and western blot. Luciferase reporter and RIP assays were employed to explore the association between PTPRG-AS1 and miR-185-5p. Our data showed PTPRG-AS1 was upregulated in glioma cells and tissues. Besides, high expression of PTPRG-AS1 was positively associated with a low survival rate. Upregulation of PTPRG-AS1 promoted proliferation, migration, invasion, colony formations, and autophagy, and inhibited cell apoptosis in U373-MG cells. By contrast, PTPRG-AS1 downregulation had the inverse effect in SHG44 cells. PTPRG-AS1 negatively regulated the expression of miR-185-5p in U373-MG and SHG44 cells and the expression of miR-185-5p was decreased in glioma tissues and cells. In addition, miR-185-5p overexpression suppressed proliferation, metastasis, colony formations, and autophagy, while inducing cell apoptosis in SHG44 cells. As expected, miR-185-5p depletion exhibited the inverse effect in U373-MG cells. Enhanced expression of miR-185-5p attenuated the effect of PTPRG-AS1 upregulation on U373-MG cells, while silencing of miR-185-5p undermined the effect of downregulation of PTPRG-AS1 on SHG44 cells. Our data disclosed that LncRNA PTPRG-AS1 was upregulated in glioma cells and tissues. PTPRG-AS1 regulated glioma proliferation, invasion, migration, apoptosis and autophagy by sponging miR-185-5p in vitro. A new signaling pathway PTPRG-AS1/miR-185-5p was first observed in glioma.

Previous studies have found that long noncoding RNA (lncRNA) protein tyrosine phosphatase, receptor type, G, antisense (PTPRG-AS1) was upregulated in glioma cells.     

The effect of triptolide on apoptosis of glioblastoma multiforme (GBM) cells

Triptolide, derived from the traditional Chinese herb, Tripterygium wilfordii, sensitizes cancer cells to apoptosis. Glioblastoma multiforme (GBM), which accounts for most cases of central nervous malignancy, has a very poor prognosis and lacks effective therapeutic inventions. We, therefore, investigated the effects of different concentrations of, and different periods of exposure to, triptolide on cell proliferation and apoptosis in the glioma cell lines, U251MG and U87MG, and in normal human fetal astrocytes. Cell proliferation was investigated by MTT (3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphenyl-tetrazolium bromide) assay and growth curve analysis, and apoptosis was assessed from genomic DNA fragmentation. Triptolide showed dose-dependent inhibition of cell proliferation and induction of apoptosis in glioma cells. It also increased the ratio of the pro-apoptotic protein, Bax, to the anti-apoptotic protein, Bcl-2. Since U87MG has the wild-type p53 gene whereas U251MG harbours a mutated p53 gene, our results indicate that triptolide induces apoptosis in GBM cells via a p53-independent pathway. The dose-dependent inhibition of cell proliferation and induction of apoptosis by triptolide may involve upregulation of Bax and downregulation of Bcl-2.     

miR-146a靶向调控MIF基因对胶质瘤细胞增殖的影响

目的研究微小RNA-146a(miR-146a)靶向调控巨噬细胞移动抑制因子(MIF)基因对胶质瘤细胞增殖的影响。方法回顾性收集2017年6月至2019年7月济南市人民医院收治的经手术病理证实的胶质瘤患者36例,取胶质瘤组织和癌旁组织。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测miR-146和MIF表达水平。体外培养U87胶质瘤细胞系,检测U87中miR-146a水平,并将U87细胞株分为转染miR-146a模拟物组(miR-146a mimic组)和miR-146阴性对照组(NC组)。采用双荧光素酶检测系统和集落形成实验分析miR-146a与MIF 3’UTR基因靶向关系。采用RT-PCR检测U87细胞转染miR-146a mimic和NC后,MIF mRNA和蛋白表达水平。结果脑胶质瘤组织miR-146a水平为0.30±0.13,显著低于癌旁组织(0.63±0.19),MIF水平为0.54±0.08,显著高于癌旁组织(0.41±0.15),差异均有统计学意义(P <0.05)。miR-146a mimics+pGL3-MIF 3’UTR-Wt共转染组荧光信号为0.43...     

miR-124 靶向调控CMTM6 增强CIK 对胶质瘤细胞杀伤效应机制研究

目的 研究细胞因子诱导杀伤（cytokine induced killer ,CIK）细胞对胶质瘤细胞杀伤效应的影响以及微小核糖核酸（miRNA,miR）-124 在此过程中的调节作用及可能机制。方法 收集2017 年3 月～ 2019 年10 月鄂州市中心医院神经外科收治的30 例脑胶质瘤患者的癌组织及癌旁组织标本,通过qRT-PCR 法检测脑胶质瘤及癌旁组织中miR-124,含MARVEL 跨膜结构域的趋化素样因子家族基因6 (chemokine-like factor-like MARVEL transmembrane domaincontainingfamily member 6,CMTM6) mRNA 表达量及相关性。诱导培养CIK 细胞后,分别与胶质瘤细胞C6 和U87共培养,另转染miR-124 mimic,inhibitor 及阴性对照序列,通过CCK-8 实验检测CIK 细胞及转染对胶质瘤细胞的杀伤效应;双荧光素酶报告实验分析miR-124 与CMTM6 基因的靶向关系,qRT-PCR 和Western blot 检测胶质瘤细胞中miR-124,CMTM6 mRNA 及蛋白表达。结果 与癌旁组织比较,脑胶质瘤组织中miR-124 表达(0.325±0.031 vs1.004±0.086) 显著降低,CMTM6 mRNA 表达(3.167±0.324 vs 0.981±0.089) 显著升高,差异有统计学意义（t=39.051,26.337,均P ＜ 0.001）,二者呈负相关（r2=0.262）。与转染阴性对照比较,miR-124 mimic 转染及其与CIK 细胞共培养对C6(72.84%±3.81% vs 99.67%±3.45%,51.46%±3.18% vs 74.59%±3.47%),U87 细胞(71.93%±3.94% vs98.26%±3.59%,52.67%±3.24% vs 76.28%±3.64%) 增殖均有显著抑制作用,差异有统计学意义（q=16.340,15.486,14.087, 13.886,均P ＜ 0.001）。双荧光素酶报告实验显示,miR-124 和CMTM6 具有明显的靶向关系。Western blot 结果显示,与转染阴性对照+CIK 组比较miR-124 mimic 与CIK 细胞共培养的C6,U87 细胞CMTM6蛋白表达(0.435±0.042vs 0.897±0.061,0.354±0.029 vs 0.725±0.068) 显著降低,转染miR-124 inhibitor 与CIK 细胞共培养的C6,U87 细胞CMTM6 蛋白表达(1.142±0.121 vs 0.897±0.061,1.326±0.125 vs 0.725±0.068) 显著增加,差异均有统计学意义（q=13.817,10.839, 7.327,17.558,均P ＜ 0.001）。结论 CIK 细胞可有效杀伤胶质瘤细胞,miR-124 可通过靶向抑制CMTM6 增强CIK 细胞对胶质瘤细胞的杀伤效应。     

Survivin基因沉默对恶性胶质瘤U87细胞的影响

目的探讨Survivin基因沉默对人脑胶质瘤细胞株U87体外细胞增殖、周期和凋亡的影响。方法利用脂质体将pGenesil Survivin shRNA干扰质粒转染U87细胞,通过western法检测干扰48h后Survivin蛋白的抑制率,通过MTT法观察转染后24 h、48 h和72 h细胞增殖的变化,流式细胞术观察转染后48 h细胞凋亡和细胞周期的变化。结果pGenesil Survivin shRNA干扰质粒转染U87细胞48 h后,Survivin蛋白的抑制率约为78%;阻滞U87细胞由G1期进入S期,抑制细胞的生长,增加了细胞的凋亡。结论Survivin shRNA表达载体可以特异高效地抑制胶质瘤U87细胞Sur-vivin基因的表达,从而调控肿瘤细胞周期,抑制肿瘤细胞增殖。     

康普瑞汀磷酸钠对U87细胞增殖和迁移的影响以及信号通路研究

目的 研究药物康普瑞汀磷酸钠（CA4P）对人胶质瘤细胞U87细胞增殖迁移的影响以及相关信号通路。 方法 体外培养U87细胞并用不同浓度的CA4P处理,CCK8方法检测不同药物浓度对细胞活性的影响,划痕和transwell实验检测不同药物浓度对U87细胞迁移能力的影响,Western blot检测不同浓度处理后U87细胞中E-Cadherin蛋白。Path Scan对相关激活的通路进行检测。 结果 CA4P能够明显抑制体外U87细胞增殖。划痕和transwell实验表明CA4P能够在体外抑制U87细胞的迁移能力,CA4P浓度为50 nmol/L和100 nmol/L能显著抑制迁移（P<0.001）。不同浓度的CA4P作用细胞24 h后,E-Cadherin的蛋白水平随着CA4P的浓度增加而增高。Path Scan结果表明,细胞内信号通路Akt, Bad, SAPK/JNK, S6 ribosomal Protein被激活。 结论 CA4P能够抑制人U87细胞的增殖和迁移,并且可能与Akt, Bad, SAPK/JNK的上调和S6 ribosomal Protein下调有关。