体外超声激活血卟啉单甲醚抗C6胶质瘤细胞的研究

目的 研究超声激活血卟啉单甲醚(HMME),对C6胶质瘤细胞的生物效应,为声动力疗法(sonodynamic therapy,SDT)治疗脑胶质瘤奠定实验基础. 方法实验分为SDT组(超声 HMME组)、超声组、HMME组及仅加入肿瘤细胞的对照组.HMME终浓度为10 μg/ml,SDT组、超声组进行超声照射(频率:1.0 mHz,声强度:0.5 W/cm2,时间:120 s)处理.采用噻唑蓝比色分析法(MTT法)观察SDT处理后6、12、24、48和72 h的抑瘤率;流式细胞学检测SDT处理后6 h C6细胞凋亡率及细胞周期百分比.结果 SDT组抑瘤率显著增高;超声组也有一定的抑瘤率;HMME组抑瘤率与对照组无明显差别.SDT后凋亡率升高,G0/G1期、G2/M期百分比降低,S期百分比升高、凋亡增殖比(APR)升高.结论 SDT能显著杀伤C6胶质瘤细胞,并诱导其凋亡,使细胞阻滞于S期→G2期.     

外科

体外超声激活血卟啉单甲醚(HMME)抗C6胶质瘤细胞的研究岳武1宋大勇1赵钊1孟祥喜2张旭2王殿洪2王策1目的:研究超声激活HMME(SDT)对C6胶质瘤细胞的生物效应,为SDT治疗脑胶质瘤奠定实验基础。方法:采用MTT法观察SDT后各时段的抑瘤率;流式细胞学检测C6细胞凋亡率及细胞周期百分比。结果:SDT后抑瘤率显著增高,超声组也有一定的抑瘤率,HMME组抑瘤率与对照组无明显差别。SDT后凋亡率升高,G0/G1期、G2/M期百分比降低,S期百分比升高、凋亡增殖比(APR)升高。结论:SDT能显著杀伤C6胶质瘤细胞,并诱导其凋亡,使细胞阻滞于S期→G2期。…     

声动力治疗中钙超载机制的研究

目的探讨声动力诱导C6胶质瘤细胞凋亡中钙超载现象及部分机制。方法将对数期生长的C6胶质瘤细胞（4×104个/ml）放入试管中,每管5 ml。实验分对照组、HMME、超声组和声动力治疗组。采用流式细胞仪检测细胞凋亡,荧光分析仪检测细胞内钙离子水平,加入钙离子拮抗剂观察凋亡率的变化;采用免疫印迹的方法观察各组中钙离子ATP酶（SERCA）的表达水平,并分析钙离子的来源。结果声动力治疗组细胞内钙离子浓度为（224.26±10.24）nm,较其他组明显升高,加入钙离子拮抗剂后其细胞凋亡率明显降低,声动力组SERCA2表达明显降低。结论声动力诱导部分作用机制是细胞内出现钙超载现象,其原因可能是声动力对内质网SERCA2的破坏,进一步导致钙离子水平升高,引起凋亡反应所致。     

光动力疗法联合顺铂治疗脑胶质瘤对血瘤屏障毛细血管内皮P-糖蛋白表达的影响

目的探讨光动力疗法联合顺铂治疗C6脑胶质瘤后,血瘤屏障中毛细血管内皮细胞上P-糖蛋白(P-gp)的表达及临床价值。方法建立雄性Wistar大鼠脑深部胶质瘤模型60只,2周后随机分成3组:光动力疗法联合顺铂组(20只)、非光动力疗法联合顺铂组(20只)、空白对照组(20只)。PDT联合顺铂组:腹腔注射血卟啉单甲醚(HMME,5mg/kg)3.5h后,自大鼠尾静脉注射顺铂1μg/g,30min后行PDT治疗。非光动力疗法联合顺铂组:除腹腔内未注射HMME外,余相同。空白对照组:不做任何处理。免疫组织化学方法分别检测脑胶质瘤血瘤屏障中毛细血管内皮细胞上P-糖蛋白的表达。结果PDT联合顺铂组、非PDT联合顺铂组阳性和对照组P-gp阳性表达率分别为5%、40%和45%。PDT联合顺铂组与非PDT联合顺铂组比较差异有显著意义(P0.05),PDT联合顺铂组与对照组比较差异有显著意义(P0.05),非PDT联合顺铂组与对照组比较差异无显著意义(P0.05)。结论光动力疗法联合顺铂治疗后血瘤屏障中毛细血管内皮细胞上的P-gp阳性表达率降低,促进药物通过血瘤屏障,为临床治疗脑胶质瘤提供新的途径和方法,具有重要的参考价值。     

单次化疗后肿瘤99Tcm-rh-Annexin Ⅴ分布与Survivin、Caspase-3蛋白表达的相关性研究

目的 评价99Tcm-重组人膜联蛋白Ⅴ(rh-Annexin Ⅴ)显像检测单次化疗后肿瘤细胞凋亡的可行性,探讨其在肿瘤组织的分布与凋亡调控蛋白Survivin、Caspase-3表达的相关性.方法 采用99Tcm直接标记法标记rh-Annexin Ⅴ,作为核素凋亡显像剂.将小鼠肝癌细胞Hca-F25接种于小鼠右腋窝皮下;区组随机化分为A(对照组,9只)和B(化疗组,10只)组,肿瘤生长至直径约1 cm时,B组一次性接受环磷酰胺腹腔内注射,剂量为按体质量150 mr,/kg,A组注射同体积生理盐水;20 h后2组同时由鼠尾静脉注入99Tcm-rh-AnnexinⅤ;4 h后行SPECT显像并处死、取肿瘤组织,用井型γ闪烁计数器检测荷瘤小鼠肿瘤组织内放射性分布,以每克组织百分注射剂量率(%ID/g)表示.采用原位末端标记法(TUNEL)检测肿瘤细胞凋亡;采用免疫组织化学SP法检测标本中Survivin、Caspase-3蛋白表达.采用SPSS 10.0软件对数据进行统计学处理.结果 单次化疗后B组肿瘤组织内99Tcm-rh-Annexin Ⅴ分布[(0.478±0.123)%ID/g]、TUNEL检测阳性细胞数[(18.030±5.600)个/视野]及caspase-3蛋白表达[(3.266±0.482)%]均明显高于A组[分别为(0.332±0.061)%ID/g,(6.744±2.325)个/视野,(2.387±0.387)%],A组Survivin蛋白表达[(4.227±0.636)%]明显高于B组[(3.407±0.519)%],差异有统计学意义(F值依次为10.502,31.507,18.971,9.560,P均＜0.01).相关性研究表明,肿瘤组织的放射性摄取(%ID/g)与TUNEL阳性细胞数呈明显正相关(r=0.858,P=0.000);肿瘤组织内Survivin蛋白表达与Caspase-3蛋白表达呈明显负相关(r=-0.818,P=0.000);肿瘤组织内99Tcm-rh-Annexin Ⅴ分布与Caspase-3蛋白表达呈明显正相关,与Survivin蛋白表达呈明显负相关(P＜0.01).结论 肿瘤组织内99Tcm-rh-AnnexinⅤ的分布可以反映化疗后早期肿瘤组织细胞凋亡的状况以及Survivin、Caspase-3表达水平的变化.     

HMME介导的光动力疗法诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡的实验研究

目的:探讨光动力疗法对肝癌细胞SMMC-7721凋亡的影响。方法:以血卟啉单甲醚(HMME)为光敏剂,波长635nm激光为激发光源的光动力疗法作用于肝癌SMMC-7721细胞。细胞分别与浓度5、10、20、30μg/ml的光敏剂孵育4h后,用不同能量密度的激光照射。MTT法检测HMME的暗毒性以及光动力疗法作用24h后的细胞活性。Hoechst细胞     

血卟啉甲醚-PDT诱导C6胶质瘤细胞凋亡机制的研究

目的探讨血卟啉甲醚-光动力学疗法（PDT）诱导C6胶质瘤细胞的凋亡机制。 方法常规传代培养C6胶质瘤细胞系,取处于对数生长期细胞按实验要求分组接种于96孔培养板上,应用光敏剂血卟啉甲醚,以不同照光剂量（40、80、120、160、200、240、280和320J/cm^2）处理C6胶质瘤细胞。MTT法检测不同照光剂量的细胞死亡率;电镜观察PDT后C6细胞形态学变化;以Fluo-3/AM为细胞内钙离子荧光指示剂,激光共聚焦显微镜测定不同照光剂量作用后C6胶质瘤细胞内[Ca^2＋]i。 结果PDT组对C6胶质瘤细胞死亡率影响显著,照光剂量与细胞死亡率正相关,随照光剂量增加,细胞死亡率逐渐增大,当达到能量密度大于200J/cm^2时,细胞死亡率不再明显增加。PDT作用后早期出现一定数量凋亡的C6胶质瘤细胞和多数线粒体、内质网等亚细胞结构肿胀。PDT作用晚期可见大量坏死细胞和部分凋亡细胞。PDT作用后C6胶质瘤细胞内游离钙明显升高。 结论血卟啉甲醚-PDT诱导C6胶质瘤细胞坏死和凋亡,钙超载在广泛超微结构损伤中起重要作用。     

光动力治癌新药血卟啉单甲醚（HMME）的研究

本文报道了一种单体卟啉血卟啉单甲醚的合成及其光敏化力、人癌细胞光灭活作用、动物移植瘤光动力疗效和有关的临床前药理毒理学研究资料。实验结果表明,与临床应用的混合卟啉制剂血卟啉衍生物(HpD)相比,HMME具有光敏化力强、肿瘤选择性摄入率高、光动力效应强、毒性低、无致突变和致畸胎作用等优点,是一种较理想的光动力治癌新药。     

高压氧对大鼠脊髓损伤后Fas/Fas1及Caspase-3表达与细胞凋亡的影响

目的 观察高压氧对大鼠脊髓损伤后Fas/Fas1、Caspase-3和凋亡细胞的影响,探讨高压氧治疗脊髓损伤的机制.方法 按照Allen's打击法制备SD大鼠脊髓损伤模型,将20只大鼠损伤后随机分为高压氧组、常氧高压氮组、常压吸氧组和常压空气组,于损伤后6 h开始治疗;1、2、 3、 7、和11 d取材.采用凋亡细胞检测法检测凋亡细胞,免疫组化法检测Fas/Fas1和Caspase-3表达,光镜下观察并计数分析.结果 Fas/Fas1、Caspase-3和凋亡细胞于损伤后1 d即升高,Fas/Fas1和Caspase-3于伤后2 d即达到高峰,细胞凋亡高峰出现在第3天,高压氧组与各组比较,峰值降低且差异有统计学意义(P<0.01).结论 高压氧对大鼠继发性脊髓损伤有保护作用,其作用与下调Fas/Fas1的表达,减少Caspase-3,从而抑制细胞凋亡有关.     

HMME-PDT对原代培养瘢痕成纤维细胞中Cyc表达的影响

目的观察血卟啉单甲醚(hematoporphyrin monomethyl ether,HMME)-光动力学疗法(photodynamic therapy,PDT)对增生性瘢痕成纤维细胞(hypertrophic scar fibroblast,HSF)中细胞色素C(cytochrome C,Cyc)表达的影响。方法采用组织块法原代培养瘢痕组织来源的成纤维细胞,建立HSF的传代细胞系,实验用第4～6代细胞。取对数生长期的HSF细胞,分为对照组和HMME-PDT组,其中HMME-PDT组的处理方法为培养的HSF与4μg/ml的HMME避光孵育3h,PDT治疗采用波长为630nm的激光,功率密度10mW/cm2,能量密度2.5J/cm2,两组细胞爬片细胞经固定、打孔后加入Cyc(1∶50)抗体以及FITC标记的二抗(1∶100),荧光显微镜下观察Cyc的荧光强度。用PI单染后经FCM检测细胞凋亡率。每标本计数105个细胞,实验重复5次。结果对照组HSF的细胞浆中Cyc-FITC荧光微弱,PDT组荧光显著增强;PI染色分析表明对照组凋亡率低(2.45±0.22%),PDT组的凋亡率显著升高(30.54±3.78%),二者相比差异有显著意义(P0.05)。结论光动力治疗后导致的线粒体功能障碍可能在瘢痕成纤维细胞凋亡中发挥了重要作用。     

药物联合高压氧治疗突发性聋132例

 目的 探讨药物联合高压氧治疗(hyperbaric oxygen treatment,HBOT)突发性聋的效果.方法 连续就诊的261例突发性聋患者随机分为药物治疗组(对照组)和HBOT结合药物治疗组(CHBOT),对照组采用常规药物治疗,HBOT组除上述药物治疗外,在舱内压力达0.20 MPa下,吸纯氧30 min 2次(中间吸空气10 min),1/d.在治疗后第30天或其间结束治疗的时间点按预定疗效指标评价.结果 与对照组相比,CHBOT 组听力显著改善(P＜0.01);耳鸣显著减轻,有效率为 76.8%, 对照组为56.63%(P＜0.01).在有眩晕的患者中,CHBOT组98.11% 的患者消失,而对照组仅 83.3%消失(P＜0.05).CHBOT组疗程明显短于对照组(P＜0.01).分析显示,无论采用何种治疗方法,入院前病程长、听力丧失(PTA＞55 dB)明显以及伴随眩晕的患者预后差.结论 CHBOT治疗突发性聋的疗效明显优于单纯药物治疗.尽早启动HBOT结合药物治疗是提高突发性聋治愈率的重要途径.     

Photo-activated elimination of Aggregatibacter actinomycetemcomitans in planktonic culture: Comparison of photodynamic therapy versus photothermal therapy method

BackgroundPeriodontal pathogens are the main factors responsible for periodontal diseases and considering the limitations of conventional mechanical debridement, new treatment approaches are under investigation. This study was designed to evaluate and compare the antibacterial effects of two different systems of photodynamic and photothermal therapy on Aggregatibacter actinomycetemcomitans as the main pathogen involved in aggressive Periodontitis.MethodsCultures of Aggregatibacter actinomycetemcomitans were exposed to 662 nm laser in presence of Radachlorin^® photosensitizer (photodynamic group) or 810 nm laser in presence of EmunDo^® photosensitizer (photothermal group), then bacterial suspension of each well in the study groups were diluted and subcultured on the surface of Muller-Hinton agar plates. subsequently the number of colony forming units per milliliter of the wells were determined and checked by analysis of variance and Tukey test (p < 0.05).ResultsAggregatibacter actinomycetemcomitans suspensions showed significant reduction in both groups of photodynamic and photothermal therapy with no priority.ConclusionBased on the results of this study, photodynamic and photothermal therapy can be proposed as a new promising approaches for bacterial elimination in periodontal diseases.     

峨眉山疗养地疗养因子对老年慢性失眠症的康复作用

75例老年慢性失眠症患者经自然因子和人工疗养因子的综合性治疗后取得较好的效果。75例中,治愈56例,占74.7％;显效10例,占13.3％;有效5例,占6.7％;总有效率达94.7％。结果说明,上述各种疗养因子综合作用于人体后,对慢性失眠症有良好的康复作用。     

饮食和运动干预治疗飞行人员高血压病的临床效果

目的：评价饮食和运动干预治疗飞行人员高血压病的临床疗效。方法：将41高血压病飞行人员分配到治疗组（28例）和对照组（13例），治疗组接受严格的饮食和中等强度运动干预治疗，对照组则接受口服硝苯地平10－20mg,3次／d治疗，测量两组飞行人员入组时，1个月后、2个月后和1年后的血压、体重指数、腰臀比、血脂和血液流变学相关指标。结果：经过1年严格的饮食和运动干预后，治疗组在1个月、2个月和1年后体重指数、腰臀比、总胆固醇、载脂蛋白B、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇和血液流变学相关指标低于对照组（P＜0．01），但对照组血压的降低出现在1个月左右，而治疗组则出现在2个月左右，随访1年后发现治疗组高血压病复发率低于对照组（P＜0．05）。结论：长期严格的饮食和中等强度运动干预能降低高血压病飞行人员的体重指数、腰臀比和血压水平，并纠正血脂代谢紊乱，降低高血压病复发率。     

激光光动力学疗法联合微波治疗小鼠移植性实体肿瘤的实验研究

本文对130只小鼠移植性实体瘤应用PDT联合微波进行治疗。动物分成5组:A组PDT/MWT,B组MWT/PDT,C组 PDT;D组 MWT,E组空白组。PDT:腹腔注入HpD(50mg/kg),48h后激光照射(200J/cm~2)。微波治疗:10～20W×5′,使瘤体内温度达42～48℃。结果:治疗后各试验组瘤体迅速缩小(P<0.01),而空白对照组瘤体则迅速增大(P<0.001)。抑瘤作用A>B,C(P<0.05),A>D(P<0.01)。结果提示PDT联合微波可提高对恶性肿瘤的治疗作用。     

新四联根除幽门螺旋杆菌的临床对比研究

目的 比较3种不同用药方法治疗幽门螺旋杆菌感染(helicobacter pylori,Hp)的临床效果及其不良反应发生情况.方法 选取420例Hp阳性患者,随机分成3组.A组标准四联组(埃索美拉唑+胶体果胶铋+阿莫西林+克拉霉素),B组新四联组(埃索美拉唑+胶体果胶铋+阿莫西林+环丙沙星),A、B两组用药疗程14d.C组序贯治疗组(埃索美拉唑+阿莫西林治疗5d,随后埃索美拉唑+环丙沙星+替硝唑再治疗5d).比较3组患者Hp根除率,随访3、6个月的Hp再感染率及不良反应发生率.结果 B组、C组Hp根除率分别为92.9％、95.7％,优于A组的85.0％ (P＜0.05),随访3个月A、B、C组再感染率分别为10.1％、6.2％、7.5％,3组比较差异无统计学意义.6个月A组Hp再感染率为26.9％,显著高于B、C两组的13.8％、11.9％ (P ＜0.05).不良反应发生率组间比较差异无统计学意义.结论 以环丙沙星为基础的新四联及10d序贯疗法高效、复发率低、安全、患者依从性好,可推荐作为抗Hp治疗的一线标准治疗方案.     

超声热疗临床应用的基础研究

目的 :了解超声热疗的加温特性和温度分布特征 ,寻求减轻临床常见副作用的有效对策。材料与方法 :应用美国 SONOTHERM～ 10 0 0型超声热疗治癌系统 ,在体模和家猪实测不同深度的温度分布 ,针对骨性疼痛和皮肤过热的副作用采用铝箔复合纸屏蔽骨头和适当减少辐射器水囊内水量的对策。结果 :用超声低频率加温可获 6～ 8cm深度的温度分布 ,用高频率加温可获得 1～ 3cm深度的温度分布。超声加温时骨组织表面的温度比软组织的温度明显高。铝箔纸对超声辐射有明显的屏蔽效果。通过减少水囊内水量 ,可增加辐射器与皮肤表面的接触面积和减轻皮肤表面过热。结论 :本超声热疗治癌系统对面积为 15 cm× 15 cm、深度在 8cm以内的肿瘤 ,可获得有效的治疗温度。而且 ,通过合理应用减轻副作用的对策 ,可获得更有效的加热效果。     

超声热疗临床应用的研究

目的：通过超声热疗配合常规放疗治疗晚期恶性肿瘤的临床研究，评价超声热疗的疗效及与疗效有关的加热参数。材料和方法： 对１７ 例晚期恶性肿瘤的１７ 个病灶用常规放疗加超声热疗。放疗用直线加速器外照射，每次２ Ｇｙ、周５ 次， 总剂量４０～７０ Ｇｙ。热疗在放疗后３０ ｍ ｉｎ 内进行，每周加热１～２ 次，每次加温时间 ６０ ｍ ｉｎ，６～８ 次一疗程。全例病人每次加温时实测肿瘤内温度。结果：在可评价的１３例中，ＣＲ ２３．１％ （３／１３）、ＰＲ ４６．２％ （６／１３）、ＮＣ ２３．１％ （３／１３）、ＰＤ ７．７％ （ １／１３） ， 有效率（ＣＲ＋ ＰＲ）为６９．３％ 。肿瘤中心部温度达到４２．５℃以上的累积时间和总加热次数是决定疗效的重要参数。在１７ 例患者的 ８９ 次加温中，副作用的发生率相对较低。结论：使用超声热疗配合放疗，只要实现满负荷加温，进一步提高肿瘤的局部控制率是完全可能的     

乏氧照射双敏感启动子HRE.CArG调控HSVtk基因对肺癌细胞的杀伤效应

 目的 观察乏氧照射后HRE.CArG融合性启动子诱导增强的绿色荧光蛋白(EGFP)在SPCA1和A549肺癌细胞株中的表达变化及乏氧照射诱导下该启动子驱动自杀基因HSVtk对肺癌细胞的杀伤作用.方法 用聚乙烯亚胺转染法转染SPCA1和A549细胞,乏氧照射后24 h测EGFP表达强度;乏氧照射后24 h加入GCV,48 h后用MTT法测定细胞存活率.结果 乏氧照射后转染pDNA.HRE.CArG.EGFP质粒的SPCA1和A549细胞EGFP表达强度分别是对照组的(3.37±0.23)倍和(3.10±0.28)倍(P＜0.01);转染pDNA.HRE.CArG.HSVtk质粒的SPCA1和A549细胞存活率较对照组分别降低(63.23±2.31)%和(76.58±2.19)%(P＜0.01).结论 质粒载体中包含的HRE.CArG元件对乏氧照射敏感,乏氧照射后通过诱导下游的HSVtk基因大量表达,使转染细胞对GCV的敏感性增高,而大大增加对SPCA1和A549细胞的杀伤效应.