NGF、BDNF及受体trkA、trkB、trkC在正常猴脊髓的表达

采用免疫组织化学方法观察了神经生长因子 (NGF) ,脑源性神经营养因子 (BDNF)以及 NGF家族因子受体 trk A、trk B、trk C的免疫阳性反应在正常猴脊髓的分布。结果表明 :NGF免疫反应阳性的神经元在脊髓灰质各层中均有分布 ,灰、白质内也可见较多的 NGF免疫反应阳性的胶质细胞。 BDNF在脊髓各型神经无有明显的表达 ,特别是前角运动神经元。 trk A、trk B、trk C的免疫阳性反应产物主要分布在灰质的神经元及胶质细胞。本实验结果揭示了在正常猴脊髓中神经营养因子 (NGF、BDNF )及受体 trk A、trk B、trk C的表达状况 ,提示这些神经营养因子及受体在维持猴脊髓神经元的正常生理功能中具有重要作用。     

脊髓半横断损伤后腹角神经元神经生长因子、脑源性神经营养因子、神经营养因子-3和神经营养因子-4表达的变化

目的:探讨大鼠脊髓半横断损伤(htSCI)后脑源性神经营养因子(BDNF)、神经生长因子(NGF)、神经营养因子(NT-3、NT-4)在脊髓腹角神经元表达的早期变化。方法:免疫组织化学ABC法分别染4种神经因子并作阳性细胞计数。结果:NGF主要分布于脊髓腹角神经元的胞核,BDNF、NT-4与NT-3主要分布于胞浆。htSCI前后它们在细胞内的分布范围没有变化。BDNF、NGF与NT-3的3 d在损伤尾侧段脊髓双侧腹角阳性神经元数与对照组相比显著减少。BDNF与NGF的14 d的双侧腹角阳性神经元数量均较正常组明显增多,NT-3与NT-4的14 d~21 d的双侧腹角阳性神经元数量均较正常组明显增多,BDNF7~21 d以及NGF14 d的健侧的阳性神经元数量均分别多于相应的伤侧。结论:内源性BDNF、NGF、NT-3、NT-4增加对脊髓损伤修复具有重要作用,BDNF和NGF在健侧表达的增加说明健侧代偿功能的活跃。     

脂肪源性干细胞促进大鼠受损坐骨神经传导及脊髓脑源性神经营养因子和睫状神经营养因子的表达

目的:探讨脂肪源性干细胞(ADSCs)对坐骨神经损伤大鼠神经传导功能以及脊髓脑源性神经营养因子(BDNF)和睫状神经营养因子(CNTF)表达的影响。方法:将第4代ADSCs移植入脱细胞神经移植物(ANA)中,构建组织工程神经。大鼠随机分为正常组、杜氏改良Eagle培养基营养混合物F12(DMEM)组和ADSC组。DMEM组和ADSC组均建立坐骨神经损伤模型,后用相应的组织工程神经桥接损伤神经的断端。术后6周采用神经电生理记录仪检测各组大鼠坐骨神经传导速度和波幅,采用免疫荧光和Real-time PCR检测各组大鼠脊髓脑源性神经营养因子(BDNF)、睫状神经营养因子(CNTF)蛋白和mRNA的表达。结果:ADSC组大鼠坐骨神经传导速度、波幅和脊髓BDNF和CNTF蛋白及mRNA表达均显著高于DMEM组。结论:ADSCs可增加坐骨神经传导速度和波幅、上调脊髓BDNF和CNTF的表达。     

大鼠脊髓腰节段神经营养因子及其受体的增龄变化

目的 观察不同月龄(1、3、6、12、18和24月龄)大鼠脊髓腰节段神经营养因子及其受体的变化,探讨其与增龄之间的关系。方法 用免疫组织化学和Western blot 法观察脊髓腰节段神经营养因子及其受体的表达,用尼氏染色法观察脊髓腰节段存活神经元数量。结果 大鼠脊髓腰节段神经生长因子(NGF)及其受体TrkA、脑源性神经营养因子(BDNF)及其受体TrkB和胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)表达具有明显的随增龄变化规律,即1月龄（幼年期）时表达量较低,随年龄增高逐渐上升,至6月龄（青年期）达高峰,24月龄（老年期）明显减低,其中以GDNF的变化更为明显。大鼠脊髓腰节段存活神经元数量在1月龄至6月龄均保持在较高水平,之后开始逐渐下降,24月龄时降至最低。结论 神经营养因子及其受体在大鼠脊髓腰节段中的表达存在增龄变化,特别是老年期表达量显著降低,可能是导致脊髓老化的重要机制之一。     

神经营养因子及其受体在造血干细胞的体外表达检测

目的体外检测神经营养因子及其受体在造血干细胞的表达情况。方法造血干细胞由小鼠股骨的骨髓细胞培养纯化而来,并用免疫组织化学CD34＋鉴定。RT-PCR的方法在mRNA水平检测造血干细胞表达神经营养因子及其受体的情况。结果造血干细胞可以表达多种神经营养因子及其受体,包括NGF、BDNF、NT-3、EGF、PDGF、CNTF、VEGF、TGF-β1、Trk-A、TrkC,其中NGF、BDNF、NT-3、TrkC有强阳性表达;EGF、PDGF、CNTF、TGF-β1、VEGF、Trk-A有表达但相对较NGF、BDNF、NT-3、TrkC弱;GDNFI、GF-1及TrkB无表达。结论造血干细胞能不同程度的表达多种重要的神经营养因子及其相关受体,可能是一种潜在的移植治疗中枢神经系统损伤的良好细胞来源。     

神经营养因子与周围神经再生

人们对神经营养因子在促进周围神经元的存活 ,维持周围神经元的数目方面的作用进行了大量研究。神经损伤后 ,给予外源性神经营养因子 ,能够产生与靶器官源性的神经营养因子相似的作用。周围神经再生过程中 ,神经营养因子NGF、NT 3和BDNF对背根节初级感觉神经元和脊髓运动神经元的存活及其表型的表达具有明确的选择性作用。其他神经营养因子 ,如CNTF、GDNF、LIF、GGF等 ,对神经元细胞也具有不同作用。本文将就神经营养因子对治疗周围神经损伤及周围神经疾病的潜在作用作一综述     

NGF、BDNF和NT-3在正常成年大鼠主要脑区表达的免疫组织化学研究

目的研究神经生长因子(NGF)﹑脑源性神经营养因子(BDNF)﹑神经营养素-3(NT-3)在正常成年大鼠主要脑区的表达。方法将正常成年大鼠用4%多聚甲醛灌注固定后取脑制成20μm厚的冰冻切片,应用上述3种因子的抗体进行免疫组织化学染色。结果3种因子的表达既有共同点也有不同点:共同点是在主要脑区都能表达,不同点是在单个细胞中,BDNF主要表达于胞浆边缘;NGF在大部分神经元的整个细胞都表达,但少量神经元则在胞核无表达;NT-3则与BDNF相似。结论3种因子在正常成年大鼠主要脑区都能表达。     

神经营养因子（NGF,NT—3,BDNF及CNTF）和受体trkA,trkB,trkC在？…

本研究采用免疫组织化学观察了ＮＧＦ家族和非ＮＧＦ家族的ＣＮＴＦ以及ＮＧＦ家族因子受体ｔｒｋＡ、ｔｒｋＢ、ｔｒｋＣ在正常大鼠脊髓腰段的分布和胎鼠脊移植体在移植后４周的表达。在正常大鼠脊髓腰段,各种神经因子及受体反应主要存在于脊髓灰质,特别是前角的运动神经元。     

NGF、CNTF和GDNF对感觉和运动神经元的协同作用研究

为探讨神经生长因子(NGF)、睫状神经营养因子(CNTF)和胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)对感觉和运动神经元的协同作用机制,本研究采用免疫组织化学技术对脊髓背根节感觉神经元和脊髓运动神经元经特异性烯醇化酶(NSE)和胆碱乙酰转移酶(ChAT)染色后,通过图像分析测量阳性神经元数量、胞体直径、突起数量及长度。结果表明:NGF能明显促进感觉神经元的存活,对突起发育有轻微作用,对胞体发育的作用不显著,对运动神经元的存活无明显作用;CNTF对感觉和运动神经元的胞体发育均有很强的作用,对感觉和运动神经元的存活有一定的作用;GDNF对感觉和运动神经元的突起发育和延伸作用最强,对运动神经元的存活有很强的促进作用,对胞体发育的作用不如CNTF显著。本研究结果提示:联合应用上述三种神经营养因子,可克服单一因子功能的局限,全面促进感觉和运动神经元的存活和生长。     

大鼠坐骨神经压榨损伤后trkB、trkC在雪旺氏细胞内表达的变化

<正> 周围神经损伤后雪旺氏细胞可产生多种神经营养因子以促进受损神经元的存活;轴突再生与功能恢复.最近Ohnishi、Meyer等的研究表明雪旺氏细胞本身也受一些神经营养因子的影响:如BDNF可调节雪旺氏细胞的活性,促进其对新生轴突的髓鞘化;NT3、CNTF等对雪旺氏细胞的存活有一定的影响.本实验采用免疫组织化学的方法检测了BDNF与NT-3的高亲和性受体trkB、trkC在成年大鼠坐骨神经压榨损伤后的不同时期在雪旺氏细胞内表达的变化.动物右侧坐骨神经压榨损伤后分别存活5天、7天、14天、21天.经心灌注固定.在压榨损伤处近侧端与远侧端各取0.1cm长的神经,经后固定、浸糖后纵行冰冻切片.按ABC法做trkB、trkC受体的免疫组化反应.结果显示:在正常的坐骨神经雪旺氏细胞内trkB与trkC均有较强的表达.trkB在损伤后5天、7天在雪旺氏细胞内的表达稍有下降,在损伤后14天恢复到正常水平,远侧段与近侧段无明显差异.在损伤后21天雪旺氏细胞内trkB的表达明显增加,尤以远侧段为重.trkC在雪旺氏细胞内的表达在损伤后5天、7天与正常相比无明显差异,在损伤后14天表达明显增高,在损伤后21天远侧段的表达进一步增加     

Expression of some neurotrophins in the spinal motoneurons after cord hemisection in adult rats

There are numerous studies reporting on the crucial roles of neurotrophins (NTFs) in neuronal survival and sprouting after spinal cord injury (SCI). But studies on endogenous changes of neurotrophins after SCI are few. In this study we explored by means of immunohistochemistry the localization of NGF, BDNF and NT-3 in the normal adult spinal cord (SC) and the changes in the expression of these chemicals in the ventral horn after right cord hemisection at T9-10. The results showed an obvious increase in the numbers of NGF, BDNF and NT-3-immunoreactive neurons in the ventral horn and also an increase in their intracellular optical density (O.D.) at 3, 7 and 21 days after cord hemisection, when compared with sham-operated rats. The expression of NGF peaked at 7 days postoperation (dpo), while BDNF and NT-3 expressions peaked at 3 dpo. Evaluation of hindlimb functions by Basso Beattie Bresnahan (BBB) scoring showed that the hindlimb support and stepping function improved very quickly at 7 dpo. This study indicated that NGF, BDNF and NT-3 could play important but different roles in the mechanisms of spinal neuroplasticity at different times after SCI.     

缺损运动神经元的大鼠脊髓内胚胎脊髓移植物的存活与生长

ＳＤ大鼠于出生２４ｈ内行左侧坐骨神经钳压术，造成左侧腰段脊髓前角运动神经元缺损。５￣１２周后，作为脊髓移植的受体鼠。供体为胚龄１３￣１４ｄ的ＳＤ大鼠胚胎，取其脊髓腹侧组织块作为移植物，植入受体鼠左侧腰段脊髓的背外侧部。将受体鼠右侧带神经的Ｍｕ长伸肌移放到脊椎旁，神经的断端插入胚胎移植物处。术后动物存活６￣８周，行组织学（包括电镜）、ＡＣｈＥ组织化学、ＣｈＡＴ免疫组织化学和ＨＲＰ逆行追踪等观察。结果     

NT-3mRNA分子杂交在胚胎脊髓修复成鼠受损脊髓过程中的变化

为了从神经营养因子角度探讨移植修复机理，将大鼠１４ｄ胚胎脊髓（ＥＳＣ）植入急性损伤成鼠脊髓后１、３、５、７、１０、１５和３０ｄ，用原位杂交和斑点杂交技术对ＥＳＣ和宿主脊髓（ＨＳＣ）内ＮＴ－３ｍＲＮＡ的变化进行定性和定量观察。定性观察显示，在正常脊髓内，ＮＴ－３ｍＲＮＡ以前角运动神经元和少量胶质细胞分布为主；脊髓损伤以后，杂交产物扩大到中小型神经元，同时更多的胶质细胞参与了反应；ＥＳＣ植入后，除移植物本身继续表达外，宿主脊髓阳性反应神经元和胶质细胞数量进一步增加。定量结果表明，损伤组原位杂交和斑点杂交的反应强度明显高于正常组；而移植组的分子杂交反应又在很多时相点上显著高于损伤组。除此而外，分子杂交反应在损伤组和移植组内持续的时间也不相同，前者的最强反应期为术后７ｄ，后者为术后１０～１５ｄ．我们认为，移植的ＥＳＣ除为自身和ＨＳＣ提供神经营养外，也诱发了ＨＳＣ在发生过程中曾经拥有的合成机制，以增强ＮＦ表达的方式为自身再生提供营养，同时也为移植物的发育分化提供合适的营养环境。     

肌源性神经营养因子(MDNF)对体外培养的大鼠脊髓运动神经元缺氧时Bcl-2表达的影响

为证明大鼠肌源性神经营养因子对损伤神经的保护作用 ,本文观察了此因子对缺氧时体外培养的大鼠脊髓运动神经元Bcl-2表达的影响。本实验从成鼠和乳鼠骨骼肌中提取肌源性神经营养因子 ,取 10 0μl (0 .1μg/ml)加入培养的胚胎大鼠脊髓运动神经元的培养液中 ,对照组加入等量的 PBS。然后用液体石蜡封闭液面造成神经元缺氧损伤 ,3 d后行 Nissl染色和免疫组化反应 ,观察和计数大鼠脊髓运动神经元存活数以及 Bcl-2免疫反应阳性神经元数 ,并对 Bcl-2阳性神经元作平均光密度分析。结果发现 :经成鼠和乳鼠肌源性神经营养因子孵育的脊髓运动神经元缺氧后的神经元存活数、Bcl-2阳性神经元数以及平均光密度均明显高于对照组 ,但乳鼠肌源性神经营养因子的效果更好。提示 :大鼠肌源性神经营养因子能增强缺氧时脊髓运动神经元 Bcl-2的表达 ,抑制缺氧后运动神经元的死亡 ,以乳鼠肌源性神经营养因子的效果为最好     

Early postnatal corticosterone administration regulates neurotrophins and their receptors in septum and hippocampus of the rat

The principal glucocorticoid in rats, corticosterone, interacts with neurons in the limbic system and leads to morphological and behavioral changes. Putative corticosterone-triggered mediators are neurotrophins. In the present study we investigated the effects of early postnatal corticosterone treatment in rats on neurotrophic factors of the nerve growth factor (NGF) family and their receptors. Newborn rats were treated with corticosterone-containing polymers until postnatal day 12. The mRNA and protein levels of the neurotrophins of the NGF family (NGF, BDNF, NT-3 and NT-4/5) and their receptors (trkA, trkB, trkC and p75) were quantified in septum and hippocampus using RT-PCR. In the septal region, we found an unchanged mRNA expression after corticosterone treatment, whereas in the hippocampus there was a general increase in mRNA. Particularly, the gene expression of NGF, NT-3, and the high affinity receptors trkA, trkB and trkC increased significantly. Quantification of the neurotrophin protein levels using an ELISA revealed significant treatment effects for NGF and NT-4/5 in the hippocampus. The present study of corticosterone treatment in young rats demonstrates interactions of steroid hormones with neurotrophic factors and their receptors in the septo-hippocampal system during the first two postnatal weeks.     

脑红蛋白在成年大鼠脊髓中的分布

目的观察脑红蛋白（NGB）在成年大鼠脊髓中的分布。方法制备成年大鼠脊髓的冰冻切片,用免疫组织化学染色方法研究NGB蛋白在成年大鼠脊髓内的分布及细胞定位。结果在脊髓的颈、胸、腰段,NGB免疫反应阳性细胞主要分布于脊髓灰质中,其范围包括灰质脊髓前角、中间带和后角。NGB免疫反应阳性物质广泛存在于脊髓灰质神经元的胞浆中。结论NGB蛋白在大鼠脊髓灰质有广泛的表达,提示NGB在脊髓功能活动中可能起重要作用。     

外源性NGF对大鼠坐骨神经切断缝合术后脊髓和背根节CGRP表达的影响

观察外源性神经生长因子(NGF)对坐骨神经切断立即缝合后大鼠脊髓和背根节(DRG)内不同时间点降钙素基因相关肽(CGRP)表达的影响。成年SD雄性大鼠随机分为NGF组、生理盐水(NS)组、假手术组与正常对照组。实验组动物右侧坐骨神经切断后立即缝合,每天给予NGF(400单位/kg腹腔注射),动物分别存活1、3、5、7、14、21、28d,免疫组织化学方法结合图像分析检测相应节段脊髓和背根节内CGRP的表达。结果表明,NGF处理组术侧背根节与脊髓后角内的CGRP表达明显高于同时间点的NS对照组,平均光密度值相比P<0.05。但各组中脊髓前角运动神经元内的CGRP表达没有明显变化(P>0.05)。结果提示外源性的NGF能明显增加损伤后背根节感觉神经元与损伤侧脊髓后角的CGRP表达,对CGRP在脊髓前角运动神经元内的表达没有明显影响。     

胚胎大鼠脊髓神经干细胞体外培养与定向分化为胆碱能神经元的研究

为了研究胚胎大鼠脊髓源神经干细胞(ESCSCs)的培养和体外分化为胆碱能神经元的情况,本文从孕龄13d的胚胎大鼠脊髓组织中分离获得神经干细胞,采用含表皮生长因子(EGF)及碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的无血清限定性培养基培养,并通过添加维甲酸(RA)、音猬因子(SHH)和神经营养因子-3(NT-3)等诱导因子,进行干细胞体外诱导,用免疫荧光细胞化学方法观测其向胆碱能神经元分化的情况。结果表明:从胚胎脊髓中可分离得到大量的神经干细胞,通过含EGF和bFGF的限定性培养基培养可获得干细胞球,通过添加RA、SHH和NT-3等诱导因子后,可见有胆碱能神经元生成。本研究结果提示,胚胎大鼠脊髓神经干细胞在添加EGF与bFGF的限定性培养基中可以增殖并长期保持稳定的ESCSCs性状,在添加特殊因子的条件下,并在体外ESCSCs可以被定向诱导分化为胆碱能神经元。