蟾毒灵诱导人胰腺癌细胞凋亡及其对Survivin基因表达的影响

目的：探讨蟾毒灵诱导人胰腺癌细胞凋亡及其对Survivin基因表达的影响。方法：建立裸鼠人胰腺癌模型，随机分为4组：对照组（NS）、5-氟尿嘧啶组（5-Fu）、蟾毒灵组（Bu）、蟾毒灵加5-氟尿嘧啶组（Bu／5-Fu）。分别腹腔注射生理盐水（NS）20ml／kg、5-Fu24mg／kg、Bu1mg/kg、Bu1mg／kg＋5-Fu24mg／kg。用药后第7天处死，计算肿瘤生长抑制率，TUNEL法检测瘤体凋亡指数，免疫组化S-P法检测Survivin蛋白的表达，RT-PCR法检测Survivin mRNA的表达。结果：与NS组相比，各药物干预组瘤体体积均显著缩小（P〈0．05），凋亡指数明显增高（P〈0．01），Survivin蛋白的表达显著降低（P〈0．01）。其中Bu／5-Fu组瘤体体积明显小于Bu组、5-Fu组（P〈0．05）；Bu／5-Fu组凋亡指数明显高于Bu组、5-Fu组（P〈0．01）；Bu／5-Fu组Survivin蛋白的表达明显低于Bu组、5-u组（P〈0．01）。结论：蟾毒灵能够抑制胰腺癌细胞增殖，诱导细胞凋亡，联合5-Fu可起到增效的作用。其作用机制可能与抑制Survivin基因表达有关。     

慢性应激对心肌梗死大鼠心肌细胞凋亡和bax、bcl-2表达的影响

目的：探讨慢性应激对心肌梗死模型大鼠心肌细胞凋亡及bax、bcl-2表达的影响。方法：大鼠随机分为4组（每组12只）,正常对照组（A组）,假手术组（B组）,心肌梗死模型组（C组）,心肌梗死后慢性应激组（C组）;用TUNEL法检测心肌细胞凋亡,免疫组织化学法检测bax和bcl-2蛋白表达。结果：（1）与A、B组比较,C、D组心肌细胞凋亡指数明显增加,P〈0.01;与C组比较,D组心肌细胞凋亡指数明显增加,P〈0.01;A和B组心肌细胞凋亡指数比较无统计学差别;（2）与A、B组比较,C、D组心肌细胞bax和bcl-2蛋白表达均明显增加,P〈0.01;与C组比较,D组心肌细胞bax蛋白表达明显增加,P〈0.01,而bcl-2蛋白表达明显减少,P〈0.01。结论：慢性应激可促进心肌梗死后大鼠心肌细胞凋亡,其机制可能与上调bax蛋白表达和下调bcl-2的蛋白表达有关。     

Survivin在侵袭性垂体腺瘤中的表达及其与bcl-2、bax表达的关系

目的探讨凋亡抑制基因survivin在侵袭性垂体腺瘤中的表达，及其与bcl-2、bax蛋白表达的相关性。方法应用免疫组织化学链霉素抗生物素蛋白-过氧化酶连接法（SP法），检测39例侵袭性垂体腺瘤瘤组织中survivin、bcl-2、bax蛋白的表达，与非侵袭性垂体腺瘤32例进行对照。结果侵袭性垂体腺瘤中survivin蛋白阳性表达率为61．5％，明显高于非侵袭性垂体腺瘤的阳性表达率21．9％（P〈0．01）；在侵袭性垂体腺瘤中survivin蛋白表达与bcl-2蛋白表达呈正相关（P〈0．01），而与bax蛋白表达呈负相关（P〈0．01）。结论survivin可通过抑制肿瘤细胞凋亡，对侵袭性垂体腺瘤的发生、发展起重要作用，并与凋亡相关基因bcl-2、bax在侵袭性垂体腺瘤的发展中分别起协同和拮抗作用。     

异丙酚对谷氨酸诱导大鼠脊髓背角星形胶质细胞凋亡及相关基因表达的影响

目的 观察异丙酚对谷氨酸诱导大鼠脊髓背角星形胶质细胞的凋亡和相关基因bcl-2、bax蛋白表达变化的影响。方法 取新生2～3d Wistar大鼠T12～L5脊髓背角星形胶质细胞，原代纯化培养3周。将细胞分为正常对照组（C组）、乳剂对照组（L组）、谷氨酸对照组（G组）、异丙酚对照组（P组）、谷氨酸和异丙酚合用组（GP1、GP2、GP3组）。加药后培养24h免疫细胞化学法观察bcl-2和bax蛋白平均吸光度（A）值及细胞形态学变化，流式细胞仪检测星形胶质细胞凋亡率。结果 与C组比较，G组、GP。组细胞发生大量凋亡（均P〈0.01），bax蛋白阳性表达，bax蛋白A值升高（均P〈0.01），bcl-2蛋白阴性表达，bcl-2蛋白A值降低（均P〈0.01）。与G组比较，GP2组、GP3组凋亡降低（P〈0.05，P〈0.01），bcl-2蛋白阳性表达，bcl-2蛋白A值升高（P〈0.05，P〈0.01），bax蛋白阴性表达，bax蛋白A值降低（P〈0．05，P〈0.01）。结论 异丙酚通过增强bcl-2蛋白表达，显著抑制谷氨酸诱导的星形胶质细胞凋亡，其抑制程度与剂量有关。     

Tiaml-SiRNA质粒转染HCT116细胞对裸鼠移植瘤淋巴管生成的影响

目的研究Tiaml—SiRNA质粒转染HCT116细胞对裸鼠移植瘤中淋巴管生成的影响。探讨Tiaml与结肠癌淋巴管生成的关系。方法裸鼠10只随机分为对照组（n=5）和Tiaml-SiRNA组（n=5），将含Tiaml—SiRNA质粒的HCT116细胞进行裸鼠皮下接种，5周后处死动物，留取肿瘤标本。利用Western blot和免疫组化SP法检测Tiaml、Racl、VEGFc／D蛋白水平的表达，并进行肿瘤淋巴管染色计数。结果干扰组移植瘤中Tiaml、Racl、VEGF-C、VEGF—D蛋白表达较对照组显著降低（P〈0．01），肿瘤内淋巴管生成也显著减少（P〈0．01）。结论通过RNA干扰技术抑制Tiaml的表达，在裸鼠体内可显著抑制移植瘤组织内淋巴管生成。     

辛伐他汀对缺血再灌损伤心肌细胞凋亡及bcl-2／bax基因蛋白的影响

目的：辛伐他汀对缺血再灌心肌细胞凋亡及bcl-2／bax基因蛋白的影响。方法：20只大白兔随机分为2组，辛伐他汀治疗组（灌服辛伐他汀15mg／kg，每日1次，共7天）及对照组（灌服等量生理盐水，每日1次，共7天）；采用结扎左冠状动脉前降支30分钟后再灌注120分钟制备心肌缺血再灌模型；实验结束前取心脏标本，进行细胞凋亡TUNEL法检测以及免疫组化检测心肌组织中bcl-2、bax蛋白水平。结果：①治疗组心肌细胞凋亡指数（AI）明显低于对照组（P〈0．05）；②治疗组心肌组织bcl-2蛋白明显高于对照组（P〈0．05），bax蛋白明显低于对照组（P〈0．05）。结论：辛伐他汀可抑制细胞凋亡，减轻心肌损伤，其抑制凋亡可能是通过上调bcl-2蛋白表达和下调bax蛋白表达来实现的。     

兔脑出血灶周围脑组织细胞凋亡及bcl—2和bax的检测

目的：探讨兔脑出血灶周围脑组织中bcl-2、bax蛋白表达和细胞凋亡的关系。方法：家兔40只,分为A、B、C、D4组。B、C、D3组采用兔自体血二次注射法制作脑出血模型,分别于模型制作完成后12h,24h,72h断头处死,运用TUNEL法、免疫组化SP技术,检测出血灶周围脑组织中细胞凋亡及bcl-2、bax蛋白表达。结果：出血灶周围脑组织中细胞凋亡、bcl-2和bax蛋白表达在各组间差异有显著性（P＜0．05）。bcl-2蛋白表达与凋亡阳性细胞数呈负相关(r=－0．781,P＜0．05）,bax蛋白表达与其呈正相关（r＝0．723,P＜0．05）。结论：出血灶周围脑组织中存在细胞凋亡,细胞凋亡的变化在一定程度上反映了周围脑组织的损伤程度。bcl-2和bax蛋白对凋亡具有调控作用。     

5-氟尿嘧啶联合人参皂苷Rg3抑制胃癌细胞的增殖

目的探讨5-氟尿嘧啶（5-Fu）联合人参皂苷Rg3对胃癌细胞增殖的抑制作用。方法MTT法检测5-FU联合Rg3对人胃癌细胞MGC-803和MKN-28细胞增殖的抑制作用。构建体外肿瘤球模型研究5-FU联合人参皂苷Rg3对肿瘤球的生长抑制作用;流式细胞仪检测5-FU联合人参皂苷R驴对MKN-28细胞的凋亡诱导作用“构建胃癌裸鼠移植瘤模型,随机分为生理盐水组（阴性对照组）、5-FU组、Rg3组和5-Fu＋Rg3组（联合给药组）;研究5-Fu联合人参皂苷Rg3对裸鼠移植瘤的生长抑制作用,统计各组肿瘤的大小,绘制肿瘤生长曲线。结果MGC-803胃癌细胞和MKN-28胃癌细胞给药48h后,联合给药组细胞存活率显著低于其他组,差异具有统计学意义（P〈0．01）。MGC-03胃癌细胞肿瘤球和MKN-28胃癌细胞肿瘤球给药7d后,联合给药组肿瘤球体积显著小于其他组,差异具有统计学意义（P〈0．01）。细胞凋亡实验结果显示：联合给药组诱导肿瘤细胞凋亡能力显著强于其他组,差异具有统计学意义（P〈0．01）。荷瘤裸鼠实验结果显示：各给药组均能有效抑制肿瘤的生长,与阴性对照组比较差异具有统计学意义（P〈0．01）。联合给药显著延长荷瘤裸鼠的中位生存期,差异具有统计学意义（P〈0．01）。结论5-Fu与Rg3均具有抗胃癌细胞的作用,二者联合应用是一种潜在的治疗胃癌的有效手段。     

川芎嗪对大鼠失神经骨骼肌细胞凋亡及bcl-2、bax表达的影响

目的探讨川芎嗪对失神经骨骼肌细胞凋亡及bcl-2、bax表达的影响,寻找延缓失神经骨骼肌萎缩的新途径。方法将54只Wistar大鼠,随机分为9组,分别为正常对照组（A）、失神经对照组（B、C、D、E）、川芎嗪干预组（F、G、H、I）。失神经对照组、川芎嗪干预组建立右下肢失神经腓肠肌动物模型。正常对照组（0d）不做任何处理;川芎嗪干预组于腹腔注射川芎嗪注射液80mg.kg-1.d-1;失神经对照组腹腔注射等剂量生理盐水。在术后第0、2、7、14、28d分别处死1组大鼠取其两侧腓肠肌并称肌湿重。采用RT-PCR、Western Blot检测各时段bcl-2以及bax的蛋白表达水平。使用TUNEL法检测肌细胞凋亡。结果川芎嗪干预组肌湿质量比显著高于失神经对照组（P〈0.05）。川芎嗪干预组bcl-2的蛋白表达水平均高于失神经对照组（P〈0.05）,而bax的蛋白表达水平均低于失神经对照组（P〈0.05）。失神经组凋亡率逐渐升高,且与正常对照组相比差异有统计学意义（P〈0.05）,采用川芎嗪治疗2d时,细胞凋亡率显著低于同期失神经对照组（P〈0.05）。结论川芎嗪可以通过促进bcl-2抑制bax的表达来延缓失神经骨骼肌萎缩。     

左归降糖益肾方含药血浆对高糖培养小鼠足细胞凋亡的影响

目的：探讨在高糖作用下,体外培养的小鼠足细胞凋亡及bax、bcl-2表达水平的变化,及左归降糖益肾方含药血浆的调控作用。方法将体外培养的小鼠足细胞随机分为空白组(A组,25 mmoL/L葡萄糖,10%空白血浆)、高糖组(B组,200 mmoL/L 葡萄糖,10%空白血浆)、左归降糖益肾方含药血浆组（C 组,200 mmoL/L 葡萄糖,10%含药血浆）,4-苯基丁酸（4-PBA）含药血浆组（D组,200 mmoL/L葡萄糖,10%含药血浆）。采用间接免疫荧光细胞化学法检测足细胞凋亡情况;MTT自动比色法检测足细胞活力,蛋白质印迹法和逆转录-聚合酶链反应法分别检测bax及bcl-2蛋白或mRNA表达水平的变化。结果与A组相比,B组足细胞活力降低,bax及 bcl-2蛋白或mRNA的表达水平均升高（P＜0.01）;与B组相比,C组、D组足细胞活力升高,bax蛋白或mRNA的表达水平均降低（P＜0.05或P＜0.01）,bcl-2蛋白或mRNA的表达水平均升高（P＜0.01）;与C组比,D组足细胞活力升高（P＜0.05),但bax及bcl-2蛋白或mRNA的表达水平,差异均无统计学意义（P＞0.05）。结论 bax及bcl-2蛋白或mRNA表达水平的升高,是足细胞损伤的分子机制之一;左归降糖益肾方含药血浆可以通过影响bax及bcl-2蛋白或mRNA的表达水平,从而抑制足细胞凋亡。     

The Effect of Targeted Magnetic Nanopaticles on Hepatoma and the Expression of bcl-2/bax Protein

The effect of targeted magnetic nanoparticles on hepatoma and the underlying mechanism were examined. Nude mice transplanted with a human hepatoma cell line （HepG2 cells） were randomized into 5 groups, including： （1） group A, receiving normal saline, （2） group B, receiving 5-fluorouracil （5-Fu）, （3） group C, receiving magnetic nanoparticles containing 5-Fu, （4） group D, consisting of treatment with magnetic nanoparticles containing 5-Fu and inside magnetic field and （5） group E, receiving pure magnetic nanoparticles and inside magnetic field. Morphological features of transplanted tumors in mice in each group were observed under transmission electron microscope （TEM）. The expression of bcl-2/bax protein was immunohistochemically detected by SABC method. The results showed that a large number of apoptotic tumor cells were found in group B and group D under TEM. The expression of bcl-2 protein was significantly decreased and the expression of bax protein increased significantly in both group B and D as compared with those in group A, C and E （P〈0.01 for all）. The decrease in bcl-2 and the increase in bax were more in group D as compared with group B （P〈0.01）. It is concluded that the targeted magnetic nanoparticles containing 5-Fu can improve the chemotherapeutic effect of 5-Fu by decreasing bcl-2 expression, increasing bax expres- sion and inducing apoptosis of the liver cancer cells.     

内磁场在磁靶向治疗胆道恶性肿瘤中作用的实验研究

目的 评价内磁场在磁靶向治疗胆道恶性肿瘤中的作用.方法 建立异位胆管癌移植瘤裸鼠模型32只,随机分成4组,每组8只.A组(实验组):采用自制的胆道磁性支架丝,在肿瘤内部建立30mT的磁场,尾静脉注射纳米氟尿嘧啶(5-FU)磁小体;B组(空白对照组):肿瘤模型自然生长,无磁场和药物应用;C组(单纯内磁场组):建立与A组一致的肿瘤局部内磁场,无药物治疗;D组(外磁场组):建立500mT的肿瘤局部外磁场,药物干预同A组.在首次治疗当天和治疗后第4、7、11、15、19天,分别测各组肿瘤体积,做重复测量的多因素方差分析.观察期结束后处死裸鼠,观察肿瘤组织病理变化.结果 与空白对照组比较,单纯内磁场组、外磁场组和实验组的肿瘤抑制率依次为18.039%、26.078%、40.12%,实验组肿瘤生长受到明显抑制,与3个对照组的肿瘤体积均有显著性差异,该组肿瘤组织镜下显示大量细胞凋亡,可见大量纳米磁小体颗粒沉积在凋亡的肿瘤细胞内.结论 基于内磁场的磁靶向治疗可抑制肿瘤生长,其效果优于传统的依靠外磁场的靶向治疗方法.     

促红细胞生成素对大鼠脑缺血再灌注神经元凋亡、bcl-2和bax表达的影响

目的观察促红细胞生成素(Epo)对大鼠局灶性脑缺血再灌注神经细胞凋亡及凋亡相关蛋白bc l-2、bax表达的影响。方法60只SD大鼠随机分为6组,缺血再灌注治疗A组、B组、C组、D组(分别在缺血前30 m in及再灌注后2 h、6 h、12 h腹腔注射Epo 3 000 IU.kg-1)、缺血再灌注组(E组)和假手术组(F组)。观察Epo对大鼠脑缺血再灌注后脑组织的病理变化,Epo、bc l-2、bax的表达及神经细胞凋亡情况。结果(1)A组、B组、C组及F均未见明显病理性改变,D组及E组显示梗死区神经元缺血改变;(2)各组均可见不同程度Epo阳性表达细胞,且A组、B组、C组较D组、E组表达明显增多(P<0.05);(3)TUNEL法见A组、B组、C组、F组凋亡阳性细胞较D组、E组明显减少(P<0.05);(4)A组、B组、C组bc l-2蛋白表达较D组、E组、F组明显增多(P<0.05),而bax蛋白表达较D组、E组及F组明显减少(P<0.05)。结论Epo通过调控凋亡相关基因bc l-2/bax的比率而发挥抗神经元凋亡的脑保护作用。     

抑郁对心肌梗死大鼠缺血心肌细胞凋亡及Bcl-2、Bax和Caspase-3表达的影响

目的:探讨抑郁对心肌梗死大鼠缺血心肌细胞凋亡及Bcl-2、Bax和Caspase-3的影响。方法:大鼠随机分为四组,各组8只,A组为假手术组,B组为抑郁大鼠假手术组,C组为心肌梗死组,D组为抑郁大鼠心肌梗死组。用TUNEL法检测心肌细胞凋亡,用免疫组织化学法和逆转录-聚合酶链反应方法检测Bcl-2、Bax和Caspase-3的基因表达。结果:各组大鼠心肌细胞凋亡指数以及心肌细胞Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达和心肌细胞Bcl-2、Bax、Caspase-3 mRNA表达的差异有统计学意义(P<0.01),C、D组大鼠心肌细胞凋亡指数以及心肌细胞Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达和心肌细胞Bcl-2、Bax、Caspase-3 mRNA表达均高于A组和B组,差异有统计学意义(P<0.01),D组大鼠心肌细胞凋亡指数以及心肌细胞Bax、Caspase-3蛋白表达和心肌细胞Bax、Caspase-3 mRNA表达高于C组,而心肌细胞Bcl-2蛋白及mRNA表达低于C组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:抑郁可以加重心肌梗死大鼠缺血心肌细胞凋亡,其机制可能与上调促凋亡基因Bax及Caspase3表达、下调抗凋亡基因Bcl-2的表达有关。     

白藜芦醇对动脉粥样硬化兔心肌组织凋亡的影响

目的探讨白藜芦醇（Res）对动脉粥样硬化兔心肌组织线粒体途径凋亡的影响。方法健康雄性新西兰白兔70只,随机分为5组：正常组、病理对照组、病理＋低剂量Res组（4 mg·kg^-1·d^-1）,病理＋中剂量Res组（8 mg·kg^-1·d^-1）、病理＋高剂量Res组（16 mg·kg^-1·d^-1）。分笼饲养12周后,取左心室尖部心肌组织。H-E染色观察心肌组织形态学改变,原位末端标记法检测心尖部细胞凋亡率,半定量RT-PCR检测bax、bcl-2的mRNA变化。结果H-E染色下各组细胞形态学改变不明显;病理对照组细胞凋亡指数高于正常组（P〈0.01）和Res干预组（P〈0.01）,Res作用下凋亡指数下降呈剂量依赖性（P〈0.05）;病理对照组bax、bcl-2mRNA表达量较正常组升高（P〈0.01）,而加入Res干预后,bax的表达量明显下降,bcl-2表达升高（P〈0.01）。结论Res可以减少促凋亡基因bax的表达,增加抗凋亡基因bcl-2的表达,降低Bax/bcl-2比值,抑制心肌细胞的凋亡。     

中西医联合用药对糖尿病大鼠视网膜神经节细胞bcl-2和bax基因表达的影响

[目的]观察不同治疗方法对糖尿病大鼠视网膜神经节细胞bcl-2和bax基因表达的影响。[方法]将40只雄性SD大鼠随机分成正常对照组、糖尿病对照组、盐酸二甲双胍治疗组、中药治疗组和中西医联合用药组,小剂量两次腹腔注射链脲佐菌素诱发糖尿病大鼠模型。中药治疗组和中西医联合用药组在造模前15天就进行预防性给药(以中药补肾通窍方煎剂灌胃)。西药组和中西医联合用药组在成模后给以盐酸二甲双胍给药。成模6W后将实验大鼠脱臼处死,取出眼球加入液氮磨碎,提取RNA,进行PCR电泳,再进行荧光PCR扩增,检测视网膜神经节细胞bcl-2和bax基因表达的情况。[结果]中西医联合用药组大鼠视网膜神经节细胞bcl-2和bax表达跟其它组比较具有显著性差异(P0.05),有统计学意义。[结论]中西医联合用药可以有效影响糖尿病大鼠视网膜神经节细胞bcl-2和bax基因的表达,从而抑制糖尿病大鼠视网膜神经节细胞的凋亡。     

全身亚低温对大鼠全脑缺血再灌注后海马CA1区bcl-2, bax基因表达的影响

目的:观察全身亚低温对大鼠全脑缺血再灌注损伤相关基因表达的影响及其机制. 方法:采用改良的Pulsinelli-WA 4VO法,制备大鼠全脑缺血再灌注模型,采用SABC法观察亚低温对大鼠全脑缺血再灌注后bcl-2, bax基因表达规律. 结果:SABC法观察显示bcl-2在缺血再灌注后6 h有少量表达,24 h达峰值,7 d时明显减弱. 亚低温组再灌注后6 h表达较弱,3 d时表达增强达峰值,7 d时明显减弱. 亚低温组与单纯缺血再灌组比较,在缺血再灌注后3 d时有显著性差异(P<0.01). bax基因在缺血再灌注后6 h出现表达, 5 d时达高峰,7 d时仍有较高水平表达. 亚低温组各时间点bax基因呈低表达,与缺血再灌组比较,5 d和7 d时相差最显著(P<0.01),并且未见表达高峰出现. 结论:亚低温可抑制脑缺血再灌注后促凋亡基因如bax基因的表达,从而抑制脑缺血后神经元凋亡的发生. 亚低温的脑复苏作用可能与其抑制脑缺血再灌注后神经元凋亡的发生有关.     

复方中药对慢性萎缩性胃炎细胞凋亡及bcl-2、bax表达的影响

【目的】观察胃萎Ⅰ号治疗慢性萎缩性胃炎的临床效果,并从细胞凋亡和相关基因的表达方面探讨其作用机理。【方法】120例患者均经胃镜与病理检查证实为慢性萎缩性胃炎,分成两组,分别采用胃萎Ⅰ号、三九胃泰冲剂治疗,原位末端标记法（Tunel）检测细胞凋亡,免疫组化检测bcl-2、bax的表达。【结果】治疗组（胃萎Ⅰ号）综合疗效优于对照组（三九胃泰）（P〈0．05）。治疗组细胞凋亡率和bax表达率分别从21．81％、41．18％升高至40．52％、61．76％;而bcl-2表达率从85．71％下降至22．86％（P〈0．05）。对照组上述指标无明显变化。【结论】胃萎Ⅰ号能有效治疗慢性萎缩性胃炎,其机理可能是通过增强bax表达而抑制bcl-2表达,诱导胃黏膜细胞凋亡。