盐酸椒苯酮胺对耳蜗缺血再灌注后白介素-1β、肿瘤坏死因子-α mRNA及Fas 蛋白表达的影响

目的探讨豚鼠耳蜗白介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）mRNA、Fas蛋白表达与耳蜗缺血再灌注损伤关系及盐酸
椒苯酮胺（PPTA）对豚鼠耳蜗缺血再灌注损伤保护机制。方法豚鼠64只随机分为4组,每组16只,分别为正常组、空白对照组、
缺血再灌注对照组和缺血再灌注PPTA组,每组随机选6只用于RT-PCR检测,剩余10只用于免疫组化。微血管夹夹闭双侧椎
动脉及右侧颈总动脉1 h松开动脉夹以制造耳蜗缺血模型,缺血再灌注PPTA组于缺血1 h再灌注后立即经股静脉注射PPTA
（10 mg/kg）,缺血再灌注对照组注射等量生理盐水,24 h后取标本。用RT-PCR法检测IL-1β和TNF-α的mRNA的表达。结果
缺血再灌注对照组耳蜗组织IL-1β、TNF-α mRNA表达量显著高于正常组和空白对照组（P<0.001）;缺血再灌注PPTA组耳蜗组
织IL-1β mRNA、TNF-α mRNA表达量显著低于缺血再灌注对照组（P<0.001）;缺血再灌注组Corti器、螺旋神经节和血管纹Fas
表达阳性,积分光密度值（IOD）值较其它三组明显增高（P<0.05）,缺血再灌注PPTA干预组IOD值与正常组及空白对照组差异
无统计学意义（P>0.05）。结论PPTA可抑制缺血再灌注耳蜗各部位IL-1β、TNF-α mRNA、Fas蛋白表达;PPTA可能通过抑制炎
性反应及抑制细胞凋亡实现对耳蜗缺血再灌注损伤的拮抗作用。
     

盐酸椒苯酮胺对庆大霉素所致豚鼠听力损伤的保护作用

目的观察豚鼠耳蜗自噬相关蛋白beclin1和LC3、Na+-K+-2Cl-联合转运体（NKCC1）mRNA、内皮素（ET）表达与耳蜗庆大霉 素（GM）损伤关系及盐酸椒苯酮胺（PPTA）对损伤的保护作用及其机制。方法将60只豚鼠随机分成对照组、模型组、同期治疗 组、造模后对照组、后期治疗组。对照组给NS+人工外淋巴液、模型组给GM+人工外淋巴液、治疗组给GM+PPTA（均连续给药 7 d）,造模后对照组及后期治疗组均连续注射GM 7 d后,再分别行人工外淋巴液及PPTA连续注入7 d。所有豚鼠给药前均手 术行听泡置管,NS及GM（160 mg·kg-1·d-1）采用腹腔注射,人工外淋巴液及PPTA采用听泡注入。各组豚鼠完成给药后ABR测 试分析听力,检测beclin1和LC3、NKCC1 mRNA及ET-1的表达。结果模型组、造模后对照组的ABR结果差异无统计学意义 （P>0.05）,但两者均明显高于其余3 组（P<0.05）,同期治疗组豚鼠ABR阈值明显低于后期治疗组（P<0.05）;模型组LC3Ⅱ及 Beclin1的表达量较其余4组明显升高,后期治疗组LC3Ⅱ及Beclin1的表达量较造模后对照组降低;模型组NKCC1 mRNA表 达较其余4组明显升高（P<0.05）,后期治疗组NKCC1 mRNA表达明显低于造模后对照组（P<0.05）。模型组各部位ET-1表达 较其余4组明显增高,对照组各部位ET-1表达低于其余4组,后期治疗组各部位ET-1表达较造模后对照组降低。结论PPTA可 抑制耳蜗细胞自噬、NKCC1、ET-1的表达,从而对耳蜗庆大霉素损伤起到保护作用;PPTA早期对抗庆大霉素耳蜗损伤效果更 优,提示GM可能对听觉细胞产生不可逆损伤。     

顺铂致豚鼠耳毒性作用中细胞凋亡及caspase-3表达的研究

目的：通过顺铂（CDDP）致豚鼠耳毒性作用中细胞凋亡及caspase-3表达的观察,探讨CDDP致耳毒性的作用机制。方法：实验组和对照组豚鼠各10只,前者以CDDP 2.0 mg/（kg.d）连续腹腔注射6 d,后者以等量生理盐水替代。通过ABR测试用药前后豚鼠听力的变化,应用TUNEL法检测耳蜗凋亡细胞,免疫组化法检测caspase-3在耳蜗中的表达。结果：实验组耳蜗凋亡细胞明显增多,caspase-3的表达亦明显增强。结论：caspase-3介导的信号传导机制,可能参与了CDDP所致的耳蜗细胞凋亡过程,导致耳毒性的发生。     

豚鼠耳蜗外毛细胞凋亡时听力变化的实验研究

目的：观察耳蜗外毛细胞发生凋亡时听力改变情况。方法：对20只豚鼠药物造模,诱发耳蜗外毛细胞发生凋亡。应用TUNEL技术观察凋亡表达,测试ABR阈值观察听力变化。结果：应用丁胺卡那霉素1天即可诱发豚鼠耳蜗外毛细胞发生凋亡,连续应用3d,耳蜗外毛细胞凋亡呈强阳性表达,但ABR阈值无明显改变;随着用药时间延长,凋亡细胞数目增加,甚至出现部分毛细胞缺失现象,此时ABR阈值明显升高。结论：耳蜗外毛细胞发生凋亡早期对豚鼠听力无明显影响,随着耳毒性药物应用时间延长,豚鼠ABR阈值升高可能存在两种原因：毛细胞凋亡或毛细胞坏死。     

红景天苷通过抑制凋亡相关蛋白的表达保护缺氧对培养神经干细胞的损伤

目的观察红景天苷对缺氧损伤成年大鼠侧脑室室管膜下区（SVZ）组织分离培养神经干细胞凋亡比例和Bax、Bcl-2、
caspase-3蛋白表达的影响。方法原代培养成年大鼠SVZ神经干细胞,不同浓度红景天苷预处理24 h 后,干细胞厌氧工作站缺
氧损伤48 h。四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测各组细胞活力;显微镜下观察各组细胞形态;TUNEL染色和流式细胞仪检测细胞
凋亡情况;Western blot 检测细胞内Bax ,Bcl-2 和caspase-3蛋白的表达变化。结果红景天苷预处理可显著改善缺氧损伤后的
细胞生长状态和活力,降低缺氧引起的细胞凋亡率的升高（P<0.05）;拮抗缺氧损伤导致的细胞Bcl-2/Bax 蛋白比例的下降,降低
活化的caspase-3蛋白的表达（P<0.05）。结论红景天苷通过抑制神经干细胞的凋亡,保护缺氧对神经干细胞的损伤,其机制可
能与调节凋亡相关基因Bax、Bcl-2和caspases-3的表达有关。
     

庆大霉素耳中毒后不同时间耳蜗血管纹HSP70表达与ABR的关系

目的：观察庆大霉素（GM）耳中毒后不同时间豚鼠耳蜗血管纹热休克蛋白70（HSP70）表达与ABR的关系。方法：选用健康白色红目豚鼠100只,体重200-250g,随机分为：生理盐水组、GM组,各组皆连续用药10d。各组动物混合饲养,每日测量体重调整药量。在用药前和停药后1、3、7、14、30d分别检测ABR阈值,停药处死后应用SABC免疫组化技术,观察GM中毒后不同时间豚鼠耳蜗血管纹HSP70表达情况。结果：GM组停药3d时耳蜗血管纹HSP70阳性反应产物表达最多,ABR阈值最高。以后随着停药时间延长,染色逐渐变浅,ABR阈值逐渐降低,停药30d时染色接近正常,但ABR阈值仍明显高于正常,它们与正常对照组相比差异均有显著意义（P〈0.01）。结论：耳蜗血管纹HSP70阳性反应产物灰度值与ABR之间呈线性关系,可以作为细胞受到应激刺激后细胞恢复程度的一个指标。     

豚鼠耳蜗外毛细胞凋亡时听力变化的实验观察

目的观察耳蜗外毛细胞发生凋亡时听力改变情况.方法对20只豚鼠药物造模,诱发耳蜗外毛细胞发凋亡.应用TUNEL技术观察凋亡表达,测试ABR阈值观察听力变化.结果应用丁胺卡那霉素1天即可诱发豚鼠耳蜗外毛细胞发生凋亡,连续应用3d,耳蜗外毛细胞凋亡呈强阳性表达,但ABR阈值无明显改变;随着用药时间延长,凋亡细胞数目增加,甚至出现部分毛细胞缺失现黎,此时ABR阈值明显升高.结论耳蜗外毛细胞发生凋亡早期对豚鼠听力无明显影响,随着耳毒性药物应用时间延长,豚鼠ABR阈值升高可能存在两种原因毛细胞凋亡或毛细胞坏死.     

丹参注射液拮抗庆大霉素耳蜗毒性的实验研究

目的：探讨丹参注射液对庆大霉素（GM）耳蜗毒性的防护作用。方法：选择白色豚鼠40只，随机分成4组（n=10）：正常对照组、GM组、GM＋丹参组和丹参组。GM组腹腔注射硫酸庆大霉素100mg/kg/d，丹参组腹腔注射丹参注射液6g/kg/d，GM＋丹参组同时注射硫酸庆大霉素和丹参注射液，正常对照组注射等量生理盐水，连续用药10d后观察耳蜗的功能与形态。结果：GM＋丹参组豚鼠听功能受损明显轻于GM组，听脑干反应ABR阈值两组比较有显著性差异（P＜0．01），且形态学改变与听阈变化相一致。结论：丹参注射液可有效拮抗GM对豚鼠的耳蜗毒性，这种拮抗作用可能是通过对耳蜗血管纹边缘细胞和毛细胞内线体的保护来实现的。     

腺苷预处理对大鼠脊髓缺血再灌注损伤的保护作用

目的通过观察腺苷对大鼠脊髓缺血再灌注损伤后细胞凋亡及葡萄糖调节蛋白-78（GRP-78）和半胱氨酸天冬氨酸特异性
蛋白酶12（caspase 12）表达的影响,探讨其对脊髓损伤的保护作用。方法通过阻断大鼠肾动脉水平的腹主动脉90 min建立大
鼠脊髓缺血再灌注损伤模型。27只成年健康雄性SD大鼠随机分成3组：假手术组（A组）;缺血再灌注损伤组（B组）;腺苷预处
理组（C组）。于再灌注6、12、24 h观察大鼠并对其后肢运动功能进行评分,取再灌注24 h大鼠的L2-L5节段脊髓组织作HE染
色及TUNEL 染色,Western blot检测GRP-78和caspase 12蛋白的表达。结果HE染色结果显示：C组细胞水肿等组织形态学变
化较B组轻;TUNEL染色结果显示：与A组比较,B组的凋亡细胞数量显著增加;与B组相比,C组凋亡细胞数量较少。WB检
测结果显示：相较于B组,C组GRP-78蛋白表达增多（P<0.01）,caspase 12蛋白表达减少（P<0.01）。结论腺苷通过上调GRP-78
的表达,下调caspase 12的表达,抑制细胞凋亡而发挥其保护作用。     

丁胺卡那霉素对豚鼠耳蜗毛细胞凋亡及听力阈值的影响

目的探讨丁胺卡那霉素作用于耳蜗系统时毛细胞凋亡现象及其在听力损伤中的作用。方法15只豚鼠随机分为3组,各组肌内注射丁胺卡那霉素400mg·kg-1·d-1,分别于用药1d,3d,6d后处死。处死前检测其听脑于反应(auditorybrainstemresponses,ABR)的变化,并利用光镜和TUNEL标记技术检测耳蜗毛细胞发生凋亡的情况。结果①豚鼠肌内注射丁胺卡那霉素1d后耳蜗毛细胞即出现凋亡现象,连续用药3～6d,毛细胞凋亡呈强阳性表达;②耳蜗毛细胞凋亡出现的早期豚鼠听力阈值无明显改变,连续用药6d后听力阈值则明显提高。结论①丁胺卡那霉素作用于耳蜗毛细胞可引起毛细胞凋亡,细胞凋亡是豚鼠耳蜗毛细胞损伤的一条途径;②丁胺卡那霉素耳毒性作用机制可能与其引起耳蜗毛细胞凋亡有关。     

腺伴随病毒携带神经营养因子-3对庆大霉素致聋豚鼠耳蜗的保护作用

目的 探讨采用腺伴随病毒(AAV)携带神经营养因子-3(NT-3)对庆大霉素(GM)致聋豚鼠的局部基因治疗及其对耳蜗功能及形态的保护作用.方法 选用18只杂色健康豚鼠,用GM按80 mg/kg·d连续肌肉注射4 d后随机分为3组:AAV-NT-3治疗组(A组)7只,AAV对照组(B组)7只,GM对照组(C组)4只.A、B组动物在埋植微量渗透泵后继续肌肉注射GM 10 d,C组动物继续注射GM 10 d.AAV-NT-3及空白AAV载体滴度均为1.1×1010pfu/ml.对A、B两组注射GM前及术后10 d、C组注射GM后14 d进行听性脑干反应测听(ABR)及畸变产物耳声发射(DPOAE)测定.而后将动物麻醉处死取听泡,行基底膜铺片和毛细胞计数,计算外毛细胞损失率.结果 实验组与对照组相比听功能(ABR及DPOAE)及耳蜗毛细胞生存率均有显著性差异(P＜0.05).结论 腺伴随病毒介导NT-3转基因治疗可用于保护受氨基甙类药物损害的豚鼠听功能和耳蜗毛细胞;在行局部耳蜗转基因治疗中应严格遵循无菌原则.     

鼓阶开窗微孔技术注入胰岛素样生长因子-1对庆大霉素致聋豚鼠的治疗作用

目的 探讨通过鼓阶开窗,微孔技术注胰岛素样生长因子-1(IGF-1)入内耳鼓阶,研究IGF-1对感音神经性聋动物模型(庆大霉索致耳聋豚鼠)的治疗作用.方法 豚鼠20只,施用庆大霉素致耳聋后均分为IGF-1组和对照组,行鼓阶开窗术,微孔技术注入试剂(IGF-1组注入鼠重组IGF-1,对照组注入人工生理外淋巴液)10μl,分别在术前和术后7、14 d行ABR测试;测试完后每组3只断头取听泡,在扫描电镜下观察耳蜗毛细胞改变.结果 IGF-1组ABR反应阈(RT)术后7、14 d均比术前有显著降低;IGF-1组比对照组RT在术后14 d有显著降低.扫描电镜发现对照组较IGF-1组毛细胞受损严重;同时,IGF-1组受损毛细胞表面有指状微绒毛生长.结论 微孔技术注入IGF-1可以改善豚鼠受损听力,减轻庆大霉素耳毒性的继续损伤,其机制可能为减轻耳蜗毛细胞的损伤并修复部分毛细胞,同时保护传人神经.     

庆大霉素耳蜗毒性早期诊断和治疗的实验研究

目的 比较畸变产物耳声发射(DPOAE)和听性脑干反应(ABR)对庆大霉素(GM)致聋早期诊断中的作用。一旦发现致聋后立即给予肌注谷胱苷肽(GSH),观察其听力能否改善。方法选听力正常豚鼠40只,随机分DPOAE组10只,ABR Ⅰ、Ⅱ组各12只(Ⅰ组为ABR出现变化后停药,Ⅱ组为停药后再注射GSH 5d),对照组6只。实验组每日肌注GM 100mg／kg,对照组注射等量盐水。用药前后采用DPOAE和ABR监测其振幅和IV波反应阈。停药2周后行耳蜗铺片,观察毛细胞形态学变化。结果DPOAE组在用GM后平均7d出现变化,而ABR组平均10d出现阈移。ABR Ⅰ组用GM 10d停药2周后复查阈移呈进一步增大(P<0．01),而ABRⅡ组(停药后用GSH)2周后复查阈移无明显增大(P>0．05)。毛细胞形态学与功能变化基本一致。结论DPOAE较ABR能更早地发现GM耳毒性,及时停药听力有望不受损害,而ABR出现变化后,即使停药听力损害仍将继续加重。GSH能阻止GM对耳蜗的继续损害。     

顺铂对豚鼠耳蜗损害作用实验研究

目的观察顺铂对耳廓反射正常的健康豚鼠耳蜗功能的损害作用，以探讨顺铂对豚鼠耳蜗毒性作用及其损伤机制，为防治顺铂耳毒性作用提供理论依据。方法将60只耳廓反射灵敏的健康豚鼠随机分成两组，顺铂组腹腔注射顺铂4mg／（k·d），1次／d，连续注射5d。正常对照组腹腔注射同等剂量的生理盐水。实验前和实验5d后分别行耳廓反射和听性脑干反应测听。测定麻醉状态下豚鼠听觉脑干诱发电位，比较实验前后两组听觉诱发电位阈值及各波潜伏期、波幅变化。结果顺铂组豚鼠听性脑干反应测试听闽明显提高，各波潜伏期延长，波幅降低，甚至出现波形变异不易辨认，两组比较差异有显著性。结论顺铂可导致豚鼠耳蜗功能损害，表现为豚鼠耳蜗听性脑干反应阂值显著提高，各波潜伏期延长。波幅降低。     

热休克蛋白70的诱导表达对豚鼠耳蜗听功能的影响

目的探讨热休克蛋白(heat shock protein,HSP)70的诱导表达对豚鼠耳蜗听功能的影响。方法将经白噪声预刺激(100 dB SPL,45 min)诱导耳蜗产生HSP70的豚鼠与无预刺激的正常豚鼠同时暴露于强噪声(125 dB SPL,90 min)中,观察强噪声刺激后不同时间的听性脑干反应(ABR)阈值。结果100 dB SPL的白噪声能诱导耳蜗HSP70的表达。强刺激后12 h,两组间ABR阈值无显著差异(P>0.05);强刺激后60 和108 h,预刺激组的ABR阈值均低于无预刺激组(P<0.01)。在预刺激组内,108 h ABR阈值低于60 h ABR阈值(P<0.05),而在无预刺激组内,108和60 h ABR阈值无显著差异(P>0.05)。结论经预刺激诱导耳蜗产生的HSP70对豚鼠耳蜗听功能具有保护作用。     

热休克蛋白70的诱导表达对豚鼠耳蜗听功能的影响

OBJECTIVE: To investigate the effect of evoked heat shock protein 70 (HSP70) expression on the hearing function of the cochlea in guinea pigs. METHODS: Guinea pigs were divided into pre-exposure group (pre-treated with white noise exposure at 100 dB SPL for 45 min) and none pre-exposure group. Auditory brainstem response (ABR) thresholds were recorded at 12, 60 and 108 h after the animals in both groups were exposed to loud white noise (125 dB SPL, 90 min). RESULTS: HSP70 expression was evoked by pre-treatment with white noise (100 dB SPL, 45 min). There was no significant difference of ABR thresholds between the 2 groups (P>0.05) at 12 h after exposure to loud noise, while ABR thresholds became lower in pre-exposure group than in none pre-exposure group (P<0.01) at both 60 and 108 h. In the pre-exposure group, ABR thresholds at 108 h were significantly lower than that measured at 60 h (P<0.05), but which was not the case in none pre-exposure group. CONCLUSION: HSP70 expression induced by pre-exposure to noise protects the hearing function of the cochlea in guinea pigs.     

腺病毒介导GDNF的过表达对药物耳毒性损害后的保护作用

目的 确定腺病毒编码GDNF(glia1 cell line—derived neurotrophic factor)是否能挽救损伤后耳蜗毛细胞的缺失，寻求一种治疗药物性耳聋的行之有效的方法。方法 15只杂色豚鼠，研究组A注入带有GDNF基因的腺病毒(Ad—GDNF)而研究组B注入带有GFP基因的腺病毒(Ad—GFP)。空白对照组C经圆窗注入人工外淋巴液(AP)，11d后15只杂色豚鼠双侧耳蜗行听性脑干反应(ABR)检查，然后处死取材，耳蜗标本经硝酸银染色后铺片。结果 研究组听阈值与庆大霉素组和空载体组差异有显著性，结果表明Ad—GDNF可能保护庆大霉素损伤后内耳结构和功能。结论 这些数据提示腺病毒介导GDNF可以用于保护受氨基苷类药物毒害的感觉毛细胞和耳蜗听功能。