SIRT1通过CREB/BDNF通路调控吗啡诱导大鼠条件位置偏爱的机制研究北大核心CSCD

目的研究腹外侧眶皮层(ventrolateral orbital cortex,VLO)内微量注射sirtuin1(SIRT1)抑制剂EX527对吗啡诱导大鼠条件位置偏爱(conditioned place preference,CPP)的影响,并探讨CREB/BDNF通路在其中的作用。方法应用脑立体定位术在大鼠双侧VLO内留置导管,建立吗啡诱导大鼠CPP模型,d 1为适应,d 2~4为前测,d 5~14为条件性训练,隔日交替腹腔注射吗啡(1 mL·kg^(-1),5 mg·kg^(-1))或生理盐水(1 mL·kg^(-1)),提前30 min通过导管向双侧VLO内微量注射EX527(1μL,5 g·L^(-1))或DMSO(1%,1μL),d 15为测试。CPP测试后立即取脑分离VLO组织,Western blot检测VLO内SIRT1、PSD95、c-fos、p-ERK、CREB、BDNF的表达水平。结果吗啡诱导大鼠CPP模型构建成功,吗啡诱导CPP形成组VLO内SIRT1、PSD95、c-fos、p-ERK、CREB蛋白表达明显增高(P<0.05),BDNF蛋白表达明显降低(P<0.05)。VLO内微量注射EX527抑制了吗啡诱导大鼠CPP形成,且明显降低了VLO内SIRT1、PSD95、c-fos、p-ERK、CREB、BDNF蛋白表达(P<0.05)。结论EX527通过抑制吗啡引起的VLO内SIRT1及其下游相关分子表达的增高,并进一步降低BDNF表达,从而有效阻断了大鼠吗啡成瘾的形成。     

虎门合剂对吗啡诱导的大鼠条件性位置偏爱效应及伏核内BDNF蛋白表达的影响

目的:研究虎门合剂对吗啡诱导的大鼠条件性位置偏爱(CPP)效应及伏核内BDNF表达水平的调节作用。方法:使用盐酸吗啡建立大鼠CPP模型,采用Obersiver5.0行为学软件分析大鼠的CPP效应:使用高中低剂量虎门合剂干预CPP形成;利用Western blot方法测定伏核内BDNF的蛋白含量。结果:吗啡模型组大鼠在伴药箱中停留的时间较正常对照组明显延长(P<0.001),同时伏核中的BDNF蛋白表达水平亦显著升高(P<0.001)。而虎门合剂中高剂量干预组大鼠较吗啡模型组在伴药箱中停留的时间和伏核内BDNF含量则显著下降(P<0.01)。结论:中高剂量虎门合剂能显著抑制吗啡诱导的CPP效应,其作用机制与降低伏核内BDNF蛋白表达水平有关。     

褪黑素抗大鼠吗啡奖赏效应的表达与脑内CREB及其磷酸化

目的:观察褪黑素(melatonin,Mel)对大鼠吗啡诱导的条件性位置偏爱(CPP)效应表达的影响及此过程中脑内cAMP反应元件结合蛋白(CREB)及其磷酸化的变化。方法:(1)大鼠连续6 d给予吗啡(sc,5 mg.kg-1/d)建立CPP模型,于CPP测试前20 min ip Mel(50和25 mg.kg-1),观察Mel对大鼠吗啡诱导的CPP效应表达的影响。(2)大鼠同上建立吗啡CPP模型,d7上、下午,d8上午ip Mel 50 mg.kg-1,共3次,最后一次ip后6 h,采用免疫组化结合计算机图像处理技术测定脑内伏隔核、海马内CREB及磷酸化CREB(p-CREB)的免疫阳性反应强度。结果:Mel 50 mg.kg-1可显著翻转大鼠吗啡诱导的CPP评分升高(P<0.01),同时显著降低吗啡诱导的大鼠伏隔核、海马内p-CREB的上调(P<0.01)。结论:Mel抑制大鼠吗啡奖赏效应的表达,此作用可能与其抑制吗啡诱导的伏隔核、海马内p-CREB蛋白水平上调有关。     

吗啡依赖大鼠海马内脑源性神经营养因子的表达

目的研究脑源性神经营养因子（BDNF）在大鼠吗啡精神依赖中所起的作用。方法大鼠连续6d腹腔注射吗啡10mg／kg,诱导吗啡条件性位置偏爱（CPP）形成。免疫组化法测定大鼠海马内BDNF的表达。结果经6d吗啡训练后,吗啡组在伴药侧的停留时间较对照组显著增加（P〈O．01）。吗啡组大鼠海马内BDNF的阳性细胞数、平均光密度值分剐为（99．18±15．85）、（188．29±22．42）,均显著高于对照组（36．01±9．53）、（73.28±13．36）（P〈0．01,P〈O．01）。结论BDNF在慢性吗啡处理大鼠海马内的表达上调,证实BDNF参与了慢性吗啡依赖生物学过程,推测BDNF可能在精神依赖中起重要作用。     

不同给药时间间隔对吗啡诱导的条件性位置偏爱的影响

目的:比较两种不同给药时间间隔的实验方案对大鼠吗啡条件性位置偏爱(CPP)的影响。方法:采用三箱式非平衡设计的CPP装置,在实验方案1中,吗啡组大鼠注射吗啡(10 mg.kg-1.d-1,ip)后放入伴药箱50 min,间隔6 h后注射同等剂量的生理盐水后放入非伴药箱50 min,共12 d,检测期检测13 d。实验方案2中,奇数天给吗啡组大鼠注射吗啡(10 mg.kg-1,ip),偶数天注射同等剂量的生理盐水,共8 d,在检测期不定期地把大鼠放入到CPP箱中进行检测。结果:两种实验方案的吗啡组大鼠在伴药箱停留的时间均明显多于生理盐水对照组(P<0.01,P<0.01);自然戒断后,实验方案1和实验方案2中吗啡组大鼠的CPP维持分别为5 d和42 d。结论:两种实验方案均能有效建立大鼠吗啡CPP模型,而实验方案2更经济、省时,可提高实验效率。     

氯胺酮诱导的大鼠条件性位置偏爱

目的:探讨氯胺酮在大鼠模型上形成条件性位置偏爱(CPP)的特点,分析氯胺酮精神依赖性潜力。方法:(1)60只SD♂大鼠随机分为对照组、氯胺酮及吗啡阳性对照组。(2)氯胺酮组每隔24h腹腔注射氯胺酮10m·lkg-1一次,连续6d,建立大鼠氯胺酮精神依赖性模型,吗啡组给予等剂量的吗啡,对照组则给予等剂量的生理盐水;(3)氯胺酮组及吗啡组于CPP形成后给予生理盐水进行消退实验。结果:(1)氯胺酮组及吗啡组大鼠出现了明显的CPP;(2)与吗啡组相比,氯胺酮组的CPP效应更显著,但消退较快。结论:氯胺酮可诱导大鼠产生CPP,但随着时间的推移CPP消退速度较吗啡快。     

基于单一视觉线索建立大鼠吗啡条件性位置偏爱

目的:研究大鼠在单一视觉线索条件下是否能够形成吗啡条件性位置偏爱。方法:仅以训练箱体顶部的LED图案作为辨别和条件性刺激信号,采用剂量递增法对各组大鼠(吗啡-动态图案组、生理盐水-动态图案组、吗啡-静态图案组、生理盐水-静态图案组)进行条件性位置偏爱训练,训练周期分别为6 d和4 d,每天一个训练周期。吗啡-动态图案组和吗啡-静态图案组大鼠每天上午(或下午)给吗啡,在CPP箱伴药图案侧中停留45m in;下午(或上午)给生理盐水,在CPP箱非伴药图案侧中停留45 m in。吗啡的初始剂量为5 mg.kg-1,每2 d递增5 mg.kg-1。训练结束后的d1进行效果测试。生理盐水-动态图案组和生理盐水-静态图案组大鼠按同样操作,但一直给生理盐水,不给吗啡。结果:训练6 d后,吗啡-动态图案组大鼠在CPP箱体伴药图案侧停留的时间比生理盐水-动态图案组大鼠长(P<0.01),吗啡-静态图案组大鼠在CPP箱伴药图案侧停留的时间比生理盐水-静态图案组大鼠长(P<0.01)。在训练4 d的方案中,吗啡-动态图案组大鼠在CPP箱体伴药图案侧的停留时间则明显高于吗啡-静态图案组大鼠(P<0.05)。结论:大鼠在单一视觉线索下能够形成吗啡条件性位置偏爱,动态视觉线索较静态视觉线索更易使大鼠形成条件性位置偏爱。本实验可为药物成瘾领域中研究药物奖赏效应与条件刺激的关联机制提供一种新的方法学依据。     

可乐定脱毒治疗对吗啡依赖大鼠吗啡条件性位置偏爱效应和镇痛作用的影响

目的:研究给予吗啡依赖大鼠可乐定治疗对吗啡奖赏效应和镇痛作用的影响。方法:采用剂量递增法(5-40mg·kg-1,每天3次,30d)建立吗啡依赖大鼠模型,在自然戒断后7d内给予可乐定(0.1mg·kg-1,每天3次)进行治疗;停用可乐定后训练大鼠吗啡(1mg·kg-1)条件性位置偏爱(CPP),观察CPP的形成速度和维持情况;期间利用热痛甩尾法,观察吗啡(5mg·kg-1)的镇痛作用。结果:CPP训练4d后,经可乐定治疗的大鼠形成了吗啡CPP,而未经可乐定治疗的大鼠没有形成CPP;经过8d训练后,经可乐定治疗及未治疗的大鼠均形成了明显的吗啡CPP;在训练停止后14d,经可乐定治疗大鼠的CPP已消退,而未经可乐定治疗的大鼠CPP没有消退。在镇痛实验中,可乐定治疗及未治疗大鼠应用吗啡前后的甩尾时间组间比较差异不显著。结论:可乐定治疗能改变吗啡依赖大鼠的吗啡奖赏效应,但不影响大鼠对吗啡镇痛作用的耐受。     

吗啡不同剂量和给药时程对建立大鼠条件性位置偏爱模型的影响

目的：比较吗啡不同给药剂量及不同给药时程对建立大鼠条件性位置偏爱（cPP）模型的影响，用于建立满意的CPP模型。方法：分别采用15mg／kg吗啡连续颈背部皮下注射（SC）6d，10mg／kg吗啡连续颈背部皮下注射（SC）6d、8d、10d进行CPP训练，测定大鼠在伴药箱停留的时间。结果：与对照组比较，15mg／kg吗啡6d组、10mg／kg吗啡8d组和10mg／kg吗啡10d组大鼠在伴药箱停留的时间均明显延长（P〈0．05），诱导大鼠CPP建立，三组大鼠在伴药箱停留时间比较差异无统计学意义；10mg／kg吗啡训练大鼠6d后，与相应的生理盐水对照组比较，大鼠在伴药箱停留时间差异无统计学意义，未能诱导CPP形成。结论：大鼠在用10mg／kg吗啡训练8d、10d及15mg／kg吗啡训练6d后，均可诱导大鼠CPP形成，但10mg／kg吗啡训练8d建立的CPP模型较满意。     

电击对大鼠吗啡条件性位置偏爱表达的影响

目的:研究电击对吗啡致大鼠条件性位置偏爱(CPP)长期表达的影响。方法:24只通过CPP筛选的Wistar大鼠(♀),随机分为3组,分别为空白对照组、CPP模型组和电击处理组;CPP模型组和电击处理组采用倾向性训练程序训练大鼠(6d),每天的上午和下午分别进行吗啡匹配训练和生理盐水训练;空白对照组用生理盐水代替吗啡,其它处理和CPP模型组及电击处理组完全相同。电击组在d10于药物箱中接受电击(100V,25mA,1 s)处理,然后分别在d14、d19、d24测定各组的CPP值。结果:电击组的CPP值明显低于CPP模型组(P<0.01),且在处理后15d内,维持在相对稳定的范围内。结论:恰当安排的短暂的电击处理,能明显地抑制CPP的表达,且这种抑制作用可维持较长的时间。     

Effects of<Emphasis Type="Italic">Coptis japonica</Emphasis> on morphine-induced conditioned place preference in mice

Morphine, an analgesic with significant abuse potential, is considered addictive because of drug craving and psychological dependence. It is reported that repeated treatment of morphine can produce conditioned place preference (CPP) showing a reinforcing effect in mice. CPP is a useful method for the screening of morphine-induced psychological dependence. In the present study, we investigated the effect of the methanolic extract of Coptis japonica (MCJ) on morphine-induced CPP in mice. Furthermore, we examined c-fos expression in the parietal cortex, piriform cortex, striatum, nucleus accumbens, and hippocampus of the morphine-induced CPP mouse brain. Treatment of MCJ 100 mg/kg inhibited morphine-induced CPP. Expression of c-fos was increased in the cortex, striatum, nucleus accumbens, and hippocampus of the morphine-induced CPP mouse brain. These increases of expression were inhibited by treatment with MCJ 100 mg/kg, compared to the morphine control group. Taken together, these results suggest that MCJ inhibits morphine-induced CPP through the regulation of c-fos expression in the mouse brain.     

吗啡依赖对大鼠不同脑区内神经甾体水平的影响

目的建立大鼠条件性位置偏爱(CPP)模型，探讨吗啡精神依赖对大鼠脑内神经甾体水平的影响。方法 大鼠连续10 d腹腔注射吗啡5 mg·kg^-1，诱导CPP形成。高效液相色谱-质谱法测定大鼠伏隔核、杏仁核、下丘脑和血浆中脱氢表雄酮、孕烯醇酮、别孕烯醇酮、脱氢表雄酮硫酸酯及孕烯醇酮硫酸酯的含量。结果经10 d吗啡训练后，吗啡组大鼠在伴药侧的停留时间显著长于对照组，吗啡诱导的大鼠CPP形成。与对照组相比，吗啡组大鼠下丘脑内孕烯醇酮明显降低，伏隔核和血浆中的脱氢表雄酮明显降低。结论吗啡诱导CPP形成，吗啡处理影响大鼠脑内某些神经甾体的水平，表明内源性神经甾体可能参与吗啡依赖的形成。     

大鼠吗啡条件性位置偏爱期间前额叶皮质和伏隔核中GluR1、GluR2阳性神经元的变化

目的:研究吗啡依赖期间大鼠前额叶皮质和伏隔核中GluR1、GluR2阳性神经元的变化。方法:采用免疫组织化学实验方法观察吗啡条件性位置偏爱模型大鼠前额叶皮质和伏隔核中GluR1和GluR2阳性神经元的形态及数目变化。结果:与空白对照组比较,吗啡模型组GluR1和GluR2的阳性神经元数均明显升高(P<0.01)。结论:大鼠条件性位置偏爱期间前额叶皮质和伏隔核中GluR1和GluR2的阳性神经元增多,提示AMPA受体GluR1和GluR2两个亚基参与了吗啡精神依赖的形成。     

大鼠吗啡精神依赖时伏核和前额叶皮质中NR2A、NR2B表达的变化

目的:建立条件性位置偏爱(CPP)模型,检测吗啡精神依赖大鼠伏核和前额叶皮质N-甲基-D-天冬氨酸受体(NMDA受体)调节亚基NR2A、NR2B表达的变化。方法:使用盐酸吗啡建立大鼠CPP。CPP形成后,每组大鼠5只灌注固定后进行免疫组织化学形态学检测,3只断头处死取伏核和前额叶皮质,并提取细胞膜蛋白进行Western blot定量检测。结果:吗啡诱导大鼠形成CPP时,前额叶皮质和伏核中NR2B有明显变化,免疫组织化学结果显示NR2B阳性细胞数明显增高(前额叶皮质P<0.05,伏核P<0.01)。Western blot结果显示NR2B蛋白表达量明显上调(前额叶皮质P<0.05,伏核P<0.01),而NR2A则无明显改变。结论:使用吗啡建立的大鼠CPP模型中,NMDA受体调节亚基NR2B在与奖赏作用密切相关脑区伏核和前额叶皮质中均有明显变化,而NR2A则无明显改变,表明NMDA受体中NR2B调节亚基在吗啡精神依赖形成中发挥着重要作用。     

孕酮对大鼠吗啡奖赏效应及下丘脑和纹状体内单胺递质水平的影响

目的:观察孕酮对于吗啡所致奖赏效应及下丘脑、纹状体内单胺类神经递质水平的影响。方法:采用大鼠条件性位置偏爱(CPP)模型,建立离体电化学检测技术高效液相色谱法测定大鼠下丘脑及纹状体内去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)和5-羟色胺(5-HT)的含量。结果:吗啡(5mg·kg-1)可诱导大鼠产生稳定的CPP效应;孕酮(5mg·kg-1及20mg·kg-1)本身不产生CPP效应,但能抑制吗啡诱导的CPP效应。与对照组比较,吗啡诱导CPP形成时,下丘脑内NE水平明显升高(P<0.05),纹状体内NE、DA和HT的水平明显升高(P<0.05,P<0.01)。与吗啡组比较,合用20mg·kg-1孕酮使纹状体内DA水平显著下降(P<0.01)。结论:孕酮对吗啡的CPP效应具有一定的抑制作用,其机制可能与降低纹状体内DA水平有关。     

多巴胺D_1受体参与吗啡介导的小鸡条件性位置偏爱的表达

目的 :利用条件性位置偏爱模型探求吗啡对小鸡的奖赏作用及其相关的多巴胺机制。方法 :ip 2mg·kg-1吗啡对小鸡进行 4次条件化训练后进行条件性位置偏爱测试 ,测试前 15min分别ip生理盐水、0 .2 5mg·kg-1多巴胺D1受体拮抗剂SCH2 3390或者等剂量的多巴胺D2 受体拮抗剂雷氯必利 (raclopride) ,观察其干预效果。结果 :吗啡诱导出小鸡的条件性位置偏爱 (P <0 .0 1) ,条件性位置偏爱的表达被SCH2 3390阻断 (P <0 .0 5 ) ,而不受雷氯必利的影响 (P >0 0 5 )。结论 :吗啡的奖赏作用在鸟类中也有体现 ,小鸡可以成为研究药物成瘾的合适的模型。多巴胺D1受体可能参与对吗啡药物渴求的形成。     

酸枣仁提取物对小鼠吗啡条件性位置偏爱的影响

目的:观察酸枣仁提取物对吗啡(MOR)诱导建立小鼠条件性位置偏爱(CPP)行为的影响。方法:连续给予吗啡(6mg·kg-1,sc)5d,引起小鼠产生显著的CPP效应,观察酸枣仁提取物对CPP效应的影响。结果:吗啡可诱导小鼠对伴药箱产生显著的位置偏爱;训练阶段于每次给予吗啡前30min给予酸枣仁醇提物800mg·kg-1可拮抗小鼠对吗啡产生的CPP效应(与吗啡对照组比较P<0.05),但酸枣仁醇提物200和400mg·kg-1不影响其效应(P>0.05);酸枣仁乙酸乙酯提取物13mg·kg-1、20mg·kg-1,正丁醇提取物160mg·kg-1可拮抗小鼠对吗啡产生的CPP效应(P<0.05),但酸枣仁石油醚提取物、乙醚提取物、水提物均不影响其效应(P>0.05)。结论:酸枣仁醇提物及其乙酸乙酯提取物、正丁醇提取物能在一定程度上抑制吗啡诱导小鼠建立的CPP行为。     

Different effects of GABAergic receptors located in the ventral tegmental area on the expression of morphine-induced conditioned place preference in rat

In the present study, an unbiased conditioned place preference paradigm was used to study the effects of intra-ventral tegmental area injections of Gama-amino-butyric acid (GABA)-A and B (GABA(A) and GABA(B)) receptor agonists and antagonists on the expression of morphine-induced conditioned place preference (CPP) in rats. Subcutaneous (s.c.) injections of morphine sulfate (5 mg/kg) induced CPP. Intra-ventral tegmental area administration of the GABA(A) receptor agonist, muscimol (6 microg/rat) reduced the expression of morphine-induced CPP. Muscimol (25 microg/rat) increased the expression of CPP induced by morphine. A reduction of the expression of morphine-induced CPP was observed on intra-ventral tegmental area injection of GABA(A) receptor antagonist bicuculline (25 microg/rat). Bicuculline (10 microg/rat) increased the expression of CPP induced by morphine. Baclofen (12 microg/rat) increased where as (19 and 25 microg/rat) reduced the expression of morphine-induced CPP. Injection of CGP38345 (10, 19, 25 and 50 microg/rat) into the ventral tegmental area significantly reduced the expression of CPP induced by morphine. It is concluded that GABA(A) and GABA(B) receptor subtypes within the ventral tegmental area may have different effects on the expression of morphine-induced CPP.