皮肤组织工程的现状与展望

目的 了解皮肤组织工程的现状.方法 参阅国内外相关文献,就组织工程化皮肤的分类及研究现状、存在问题和发展的方向做一综述.结果 组织工程化皮肤在治疗烧伤和慢性溃疡上取得了一定成效,但目前仅能作为暂时性的皮肤组织替代物使用,其外形、韧性和机械性能以及皮肤屏障功能、免疫功能、物质交换和能量交换等方面仍距正常皮肤有较大的差距.结论 支架材料的研制是皮肤组织工程研究的难点和关键,组织工程化皮肤是解决大面积皮肤缺损的根本方法,组织工程化皮肤有着广阔的研究和临床应用前景.     

一种新型的无细胞真皮替代物的研制及移植试验

目的 研制带密集微孔的异种无细胞真皮替代物，提高真皮替代物与自体皮片复合移植的存活率。方法 采用机械的方法在异种无细胞真皮替代物上行密集的贯穿性打孔，孔径为500～800tan，孔间距为3～5mm。将微孔无细胞真皮替代物埋入SD大鼠皮下，观察孔径大小的变化和新生血管的形成；同时将徽孔无细胞真皮替代物与SD大鼠大张刃厚皮片复合移植，观察移植存活率及创面愈合情况。结果 在无细胞真皮替代物上打孔后可明显增强对创面基底血浆等渗液的渗透性，植入全层皮肤切除创面，基底血浆等渗液可通过孔隙渗透到无细胞真皮表皮面。埋入皮下1周，孔隙仍较明显，部分孔隙可见有红细胞通过；2～3周时，新合成的胶原逐渐填充孔隙，孔腔变小。微孔无细胞真皮替代物与SD大鼠刃厚皮片复合移植的成活率为89．5％，明显高于无孔的无细胞真皮替代物(63．2％)，创面愈合后外观光滑平整，具有良好的弹性及柔韧性。翁论带有密集微孔的无细胞真皮替代物可明显提高移植成活率，且不影响创面愈合后外观，是一种较理想的真皮替代物。     

以表皮细胞及脱细胞真皮构建组织工程皮肤

目的 体外扩增培养表皮细胞，复合脱细胞真皮构建组织工程皮肤，以促进其进一步临床应用。方法 将人表皮细胞进行体外培养扩增后，以生长良好的表皮细胞接种于制备好的异种（猪）无细胞真皮支架上，行气液界面联合体外培养，构建组织工程皮肤。观察细胞生长情况及复合皮结构。结果 培养的表皮细胞扩增良好，脱细胞真皮支架去细胞完全，表皮细胞在脱细胞真皮上可以生长，可体外构建复合皮肤。结论 利用体外扩增的表皮细胞及制备的脱细胞真皮可体外联合构建具有复层结构的组织工程皮肤。     

复合培养人工皮移植12例疗效观察

目的 在体外培养表皮细胞及成纤维细胞并与人工真皮复合培养,用以修复患者皮肤缺损创面.方法 从12例皮肤缺损患者体表切取皮肤标本,分离成单个表皮细胞和小块真皮组织进行体外培养、增殖,将收获的表皮细胞和成纤维细胞与人工真皮复合培养,形成人工皮,移植于患者皮肤缺损创面.结果 复合培养人工皮能存活,形成皮肤替代物,皮肤缺损创面得以修复.结论 复合培养人工皮能在新鲜创面上存活,形成皮肤替代物,性质比单纯培养表皮细胞膜片移植效果好,比自体皮片扩增速度快.     

冷冻异体胎儿真皮—自体表皮复合移植在Ⅲ度烧伤切痂创面的应用

目的：为观察异体胎儿真皮临床应用的可行性．方法：通过１９例经胰蛋白酶处理的冷冻异体胎儿真皮与自体表皮重组复合皮，并以单纯自体表皮为对照，作移植实验和动态观察．结果：复合皮移植后抗感染力强，成活率与自体表皮移植组无显著性差异（Ｐ＞０．０５），且可防止组织收缩和疤痕形成．同时提出异体胎儿真皮移植首先应满足血型的一致，否则对复合皮质量产生影响．结论：经胰蛋白酶处理的冷冻异体胎儿真皮可作自体表皮移植的载体，是理想的真皮替代物．临床应用异体胎儿真皮一次性完成复合皮移植术，提高了植皮外形效果，节省了患者的皮源，可以临床推广应用．     

组织工程皮肤修复动物皮肤缺损的实验研究

目的利用表皮细胞复合脱细胞真皮构建组织工程皮肤，探讨其用于修复动物皮肤缺损的可行性。方法将扩增的人表皮细胞复合异种（猪）脱细胞真皮支架构建组织工程皮肤，将制备的人工皮肤移植于裸鼠全层皮肤缺损，观察创面愈合情况并进行直接免疫荧光鉴定。结果构建的组织工程皮肤可用于修复裸鼠全层皮肤缺损，创面愈合良好，新生的表皮由移植的人表皮细胞增殖形成。结论利用表皮细胞复合脱细胞真皮构建的组织工程皮肤可用于修复动物全层皮肤缺损。     

激光微孔化猪脱细胞真皮基质的设计、制备及同步移植实验

目的 构建一种新型真皮替代物——激光微孔化猪脱细胞真皮基质材料(LPADM)并验证其修复全层皮肤缺损的效果.方法 取新鲜健康小白猪断层真皮,一部分经高钠-SDS法脱细胞获得脱细胞真皮基质(ADM),另一部分则先行激光打孔再经脱细胞获得LPADM;检测LPADM的物理性状.在SD大鼠(n=30)背部制作2.0 cm ×2.0 cm的全层皮肤缺损创面(n=4),分别采用LPADM自体中厚皮片(L组)和无孔ADM自体中厚皮片(A组)复合移植及自体全厚皮片(F组)和中厚皮片原位移植(C组)修复.分别于术后第3、5、7、10、14天,每组随机选取6只大鼠,观察创面皮片成活情况,处死动物后采集创面组织行组织学检查.结果 制备的LPADM呈瓷白色,柔软有光泽;显微镜下观察未见细胞残留.移植术后第3天,组织学检查发现L组创面组织有内皮细胞围成的空腔样结构;术后第3、5、7、10天,L组和C组创面移植皮片成活良好,L组血管样结构中已可见红细胞;A组皮片起泡甚至发黑坏死;F组皮片部分起小泡,但泡皮下基底红润.术后第14天,L组真皮微孔中可见大量血管形成,L组、C组和F组移植皮片全部或基本存活,创面愈合率分别为(99.10±0.66)％、(99.25 ±0.23)％、(97.07±1.32)％,差异无统计学意义(P＞0.05);A组皮片全部坏死脱落,创面愈合率为(27.46±2.05)％,显著低于其他各组(P＜0.01).结论 构建的新型激光微孔化猪脱细胞真皮基质,同步复合自体皮移植,移植成功率高,较快实现早期血管化,为一种较理想的真皮替代物.     

脱细胞异种真皮皮下埋植的实验研究

目的 :观察胰蛋白酶及冻融法制备的脱细胞真皮能否为构建人工复合皮提供一种理想的真皮替代物。方法 :将胰蛋白酶消化和冻融法制备的脱细胞异种真皮 ( 2cm× 2cm)埋入SD大鼠皮下 ,分别于术后 2、4、6、8周活检行组织学检查。结果 :术后 4周脱细胞真皮内有明显的微血管和成纤维细胞长入。结论 :胰蛋白酶消化和冻融法制备的脱细胞异种真皮能诱导宿主微血管和成纤维细胞长入 ,为其上培养的表皮或重叠移植的自体薄皮片提供营养 ,是一种理想的真皮替代物。     

四种真皮替代物的制备和比较研究

目的 通过调整复合壳多糖真皮替代物的组分，比较不同配方获得的真皮替代物的组织学特性的异同。方法 在无菌条件下将浓缩的DMEM培养基、小牛血清、鼠尾胶原溶液、糖胺聚糖和壳多糖按比例配制成凝胶溶液，然后将成纤维细胞与上述凝胶溶液混合制成真皮替代物(替代物A)。以A为标准，缺如成纤维细胞为替代物B，缺如壳多糖为替代物C，缺如壳多糖和成纤维细胞为替代物D。比较A、B、C、D四种替代物的生物学特性，并在培养半个月时作组织学检查。结果 四种替代物以C收缩率为最大，A其次，B、D两种替代物几乎无收缩，组织学上A、C未见明显差异，B可见均匀的蜂窝状结构，D结构无序。结论 A复合壳多糖真皮替代物配方是四种真皮替代物中生物学特性最为理想的一种，可以在组织工程研究中发挥重要作用。     

永久性皮肤替代物的研究现状及展望

表皮细胞培养与扩增技术使得表皮替代物的构建和应用成为可能,但其远期效果欠佳。真皮基质和成纤维细胞的引入可促进表皮细胞的生长、分化和基底膜的形成,诱导血管内皮细胞生长,提高移植成功率,改善修复质量,但与理想的皮肤替代物仍有一定差距。未来主要在表皮干细胞的分离和培养、表皮细胞和成纤维细胞的基因修饰、表皮层与真皮层的有效整合、真皮的血管化,以及皮肤附件的构建等方面展开深入的研究。     

皮肤替代物的研究现状与进展

近年来随着皮肤替代物的研究工作的深入开展和普及，将彻底改变烧伤创面修复对自体皮源的高度依赖，提高严重创伤和大面积烧伤救治成功率，并改善创面修复质量。皮肤替代物具有广阔的临床使用价值和应用前景。本文介绍了永久性皮肤替代物研究的现状和进展。     

组织工程皮肤与正常皮肤组织学差异的实验研究

目的:研究组织工程皮肤与正常皮肤表皮层组织学的差异,并探讨其意义.方法:用组织工程方法构建人全层皮肤,以正常在体皮肤作为对照,组织学、免疫细胞化学、透射电镜观察表皮层的异同.结果:组织工程皮肤与正常皮肤在组织学上有一定差异,缺少上皮钉突,CK19在组织工程皮肤成熟期表达阴性,但CK10和pan-CK在两者表达皆为阳性,透射电镜观察上皮结构接近正常皮肤.结论:组织工程皮肤表皮层与真皮层结合不如正常皮肤紧密,可能与缺少上皮钉突有关,其表皮细胞基本分化成熟.     

以表皮干细胞与HaCaT细胞为种子细胞构建组织工程皮肤的比较研究

目的 比较人表皮干细胞(epidermal stem cells,ESCs)与人永生化角质细胞HaCaT作为种子细胞构建组织工程皮肤的差异.方法 Ⅳ型胶原快速黏附法分选表皮干细胞,无血清培养基DK-SFM培养,取第2代备用;应用DK-SFM培养HacaT细胞,取对数生长期的细胞备用;利用组织工程技术构建真皮等价物(dermal equivalent);将上述备用的两种种子细胞分别接种在真皮替代物的表面,构建组织工程皮肤,先后进行浸没培养和气-液面器官型培养,从形态学、物理特性、HE染色等方面观察比较培养物的差异.结果 以ESCs构建的组织工程皮肤收缩快,分层分化近似于正常皮肤,具有较好的张力和韧性.以HaCaT细胞构建的组织工程皮肤分层少,生长慢,张力韧性较差.两种皮肤的直径都随培养时间的增加而缩短,且在3～7 d各检测时相点间有显著性差异(P＜0.05).结论 ESCs比永生化的HaCaT细胞更适合作为种子细胞构建组织工程皮肤.     

骨形态发生蛋白-2基因修饰的组织工程化骨修复羊胫骨干骨缺损

目的 评价腺病毒介导的人骨形态发生蛋白2(Adv-hBMP-2)基因转染的组织工程化人工骨对大动物长骨干骨缺损的修复效果。方法 建立羊胫骨干骨缺损模型(2．6cm),单侧(右)植人体外构建的组织工程化骨,26只羊分为5组：(1)Adv-hBMP-2转染的骨髓间充质干细胞(BMSC)加煅烧骨(CB)组(9侧);(2)腺病毒介导的β-半乳糖苷酶(Adv-βgal)基因转染的BMSC加CB组(6侧);(3)未转染的BMSC加CB组(6侧);(4)单纯CB组(3侧);(5)未治疗组(2侧)。分期行X线、计量组织学检查和生物力学测定。结果 X线：4～8周,Adv-hBMP-2转染组的羊胫骨干骨缺损内有明显骨痂形成;26周,(1)、(2)、(3)、(4)和(5)组的完全愈合率,分别为5／8、1／5、0／5、0／2、0／1。计量组织学示,与其他组相比,1组的新生骨量最多,并有皮质骨形成;第1组移植骨的压缩载荷和弹性模量明显大于其他各组。结论 hBMP-2基因修饰的组织工程化人工骨可以修复大动物(羊)负重骨(胫骨)的节段性缺损。     

组织工程化皮瓣的构建

目的应用脂肪组织来源干细胞(ASCs)在体外构建组织工程脂肪并与已构建的复合皮组装培育,试构建出含脂肪层的组织工程化皮瓣。方法(1)构建组织工程脂肪从脂肪组织中分离培养ASCs并进行三系分化诱导鉴定。ASCs与胶原凝胶混合并进行体外成脂诱导,诱导15 d后分别进行倒置显微镜、油红O染色及HE染色观察。(2)构建复合皮从包皮组织中分离培养表皮细胞(Kc)和成纤维细胞(Fb)。Fb与胶原凝胶混合后培养5 d,将Kc接种到含有Fb的凝胶表面,在液面下培养4 d后移至气-液界面继续培养10 d形成复合皮。(3)构建含皮下脂肪组织的3层结构的皮肤复合组织将培养的复合皮与脂肪组织按正常皮肤结构顺序组装后继续培养3 d并行HE染色观察。结果(1)ASCs具有成脂、成软骨和成骨分化能力。ASCs凝胶复合物体外成脂诱导15 d后,可见细胞内充满圆形脂滴,呈单房或多房形,油红O染色及HE染色均显示为成熟脂滴。(2)经过气-液界面培养后,Kc成层分化,形成基底上层。(3)组装培育后的皮肤复合组织分3层,表层Kc成层分化并形成基底上层;中层和底层连接处细胞聚集;成脂分化的ASCs位于底层。结论分别应用Kc、Fb和ASCs三种细胞,在体外构建出组织工程化脂肪和复合皮,且按序组装培育,可构建出组织工程化皮瓣。     

胆管替代物研究进展

胆管替代物的研发是现代胆道外科不可或缺的组成部分,是恢复胆道系统正常功能的途径,具有重大的临床意义。胆管替代物植入体内后,导致移植部位出现的胆道堵塞或狭窄是人工胆管研究中最迫切需要解决的问题,其根本原因是胆道替代物慢性炎性刺激导致的组织增生,促进移植部位新生胆管组织的形成可解决这一问题。本文通过总结国内外的文献,对非降解型人工胆管、降解型人工胆管,以及组织工程化人工胆管的研究与开发进行综述,以期为胆道替代物的进一步发展提供参考。未来的研究应重点关注如何快速在组织工程化人工胆管壁形成胆道上皮层、促进新生胆道组织形成、调控人工胆管降解性能和力学性能等几个方面,从根本上解决人工胆管研究中面临的问题,推进人工胆管研发的进程。     

两种血浆代用品对凝血功能影响的比较

目的：比较血定安与血代两类药物对患凝血功能的影响。方法：选择60例ASA（美国麻醉医师学会）1－2级手术患随机分为两组（血定安组与血代组）。入室后采集静脉血测定凝血酶原时间、纤维蛋白酶定量、血小板计数、血球压积和血钙含量。分别输入血定安与血代1000ml后,再次于非输液侧采集静脉血,监测上述指标。结果：比较两类药物输液前后血球压积P＜0．05,差异显性。其余各项指标均在正常范围内变化。结论：输注血浆代用品后对凝血机制无明显,仅对血液有稀释作用。通过稀释血液,还能提高血液的运氧能力。     

药用抛射剂含氯氟烃代用品的研究进展

气雾剂作为众多药物剂型中的一个分支，具有分布均匀、奏效快、使用方便、剂量小等特点，经过多年来的发展，现已广泛为人们所接受。传统的气雾制品采用含氯氟烃(chlorofluorocarbon，CFC)作为抛射剂。但由于CFC对大气臭氧层的破坏作用，近年来其应用受到了限制，国内外都在积极寻找CFC代用品，相继出现了无氯氟代烷烃如四氟乙烷，七氟丙烷等。由此也促使不含CFC的新型肺部药物传递系统取得了重大发展。本文对药用气雾剂中抛射剂CFC代用品的相关研究进展作一综述。