肺癌患者血浆游离DNA微卫星检测的意义

目的 研究肺癌患者血浆游离性肿瘤DNA微卫星不稳定(Microsatellite instability，MSl)和杂合性缺失(Loss of beteroxygosity，LOH)在肺癌基因检测中的价值。方法 通过PCR—银染法检测肺癌病人的37例新鲜手术标本、94例全血标本DNA3p部位三个微卫星位点的LOH、MSI.结果 大多数肺癌患者的血浆游离DNA的浓度在微克水平以上。联合三个位点进行LOH、MSI检测时，组织和血浆的阳性率均在70％以上。不同分期、不同病理类型之间差异不显著；有无淋巴结转移之间差异有显著性意义。结论 血浆游离DNA水平检测肺癌可以作为肺癌基因检测的新途径。     

肺癌患者血浆游离性DNA的研究

目的：研究（1）肺癌患者血浆游离DNA的肿瘤特异性；（2）肺癌患者血浆游离DNA3p部位微卫星不稳定（microsat-ellite instability,MSI）和杂合性缺失（loss of heteroxygosity,LOH）在肺癌诊断、监测中的意义。方法：本研究以37例肺癌术后新鲜标本、94例肺癌患者的全血标本作为研究对象；15例健康正常人和15例结核病人的全血标本作为对照。通过PCR－银染法检测血浆游离DNA3p部位3个微卫星位点的LOH、MSI情况；并和组织标本结果进行对比。结果：（1）大多数肺癌患者的血浆游离DNA的浓度在微克水平以上，而15例正常对照和15例结核病人多在微克水平以下；（2）联合3个位点进行LOH、MSI检测时，组织和血浆的阳性率均在70％以上，一致性在80％以上；而对照组未检测到有LOH、MSI；（3）不同分期、不同病理类型的LOH、MSI之间差异无显著性意义；（4）有淋巴结转移与无淋巴结转移之间差异有显著性意义。结论：血浆游离DNA的未可微克含量水平具有一定的诊断意义，其3p部位的微卫星检测在肺癌的诊断中具有较高的敏感性和特异性，并和组织标本有较高的一致性变化。肺癌患者血浆游离DNA可以作为基因检测的新途径，具有广阔的应用前景。     

肝细胞癌患者血浆循环DNA微卫星变异的研究

目的 探讨肝细胞癌（HCC）患者血浆循环DNA微卫星变异的特点及其与肿瘤组织的一致性。方法 选择位于染色体8p上3个具有高度多态性的微卫星标记,对62例肝细胞癌血浆、组织标本的DNA进行了杂合性缺失（LOH）和微卫星不稳定（MSI）检测。结果 在联合检测的3个微卫星位点上,39例发生了LOH的组织标本其对应的血浆标本中有33例在相应位点检测到了相同的改变,一致性为84．6％;在19例MSI阳性的组织标本中,其对应的血浆中有14例检测到了相同的MSI,一致性为73．7％;62例HCC血浆DNA在至少一个位点的LOH阳性率（58．1％,36／62）明显高于MSI（29．0％,18／62）（P〈0．01）;HCC组织、血浆DNA在D8S277位点的MSI阳性率皆明显高于其他两个位点（P均〈0．05）。结论 HCC血浆循环DNA与肿瘤组织微卫星变异有较高的一致性变化,血浆循环DNA可以用来反映肿瘤组织的微卫星变异;LOH方式在HCC的发生发展过程中起着重要作用,MSI的作用次之;D8S277是HCC中对MSI敏感的一个检测位点。     

非小细胞肺癌患者血浆游离DNA 3p杂合性缺失的研究

目的 研究血浆游离ＤＮＡ第３号染色体短臂的杂合性缺失（ＬＯＨ）在非小细胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）诊断中的价值。方法 ２７例ＮＳＣＬＣ手术病例在术前抽取全血,术后在癌中心切取组织。１５例健康志愿者和７６例非手术ＮＳＣＬＣ患者也抽取全血标本。用ＰＣＲ－银染法对ＮＳＣＬＣ２７例手术病例、７６例非手术病例血浆中游离ＤＮＡ的３ｐ部位进行ＬＯＨ分析。结果 ２７例病理组织标本ＬＯＨ的发生率为６３％（１７／２７）,在１７例病理组织阳性的病例中,血浆游离ＤＮＡ同时发生ＬＯＨ的百分率为８４．４％（１４／１７）;７６例非手术病例中,血浆游离ＤＮＡＬＯＨ的发生率为６４．５％（４９／７６）。结论 血浆游离ＤＮＡ ３ｐ部位的ＬＯＨ在ＮＳＣＬＣ诊断中有一定的诊断价值。     

血浆游离FHIT基因杂合性缺失在非小细胞肺癌中的临床意义

目的 探讨脆性组氨酸三联体(fragile histidine triad,FHIT)基因在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者血浆及组织中杂合性缺失(loss of heterozygosity,LOH)的特点,检测血浆游离FHIT基因的LOH在NSCLC研究中的临床意义.方法 通过聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)-银染法检测69例NSCLC患者(手术前、后)血浆和新鲜癌组织标本中FHIT基因的3个微卫星位点D3S1300、D3S1234、D3S4103的LOH,并进行比较;15例肺良性病变患者静脉血、组织标本及5例健康志愿者的静脉血标本作对照.对应的组织病理切片进行FHIT蛋白的免疫组化染色.结果 NSCLC患者术前血浆和组织FHIT基因的3个微卫星位点上LOH阳性率分别为53.6%(37/69例)、72.5%(50/69例),其共同检出率达74.0%(37/50例).肺良性病变及健康人血浆中未检出该基因突变,两组相比差异有显著性意义(P<0.05).不同病理类型的肺癌患者手术前后血浆FHIT基因LOH之间差异无统计学意义(P＞0.05);有淋巴结转移的肺癌患者与无淋巴结转移者相比,血浆更易检测到FHIT基因的LOH,差异有统计学意义(P<0.05);不同临床分期患者术前血浆FHIT基因LOH之间差异无统计学意义(P＞0.05),而术后同一患者血浆FHIT基因的LOH的检出率差异有统计学意义(P<0.05);免疫组化染色发现在78.3%(54/69)NSCLC患者肿瘤组织中检测出FHIT蛋白表达缺失,而在FHIT蛋白表达缺失的54例肿瘤组织中,有39例患者血浆FHIT基因存在1个或2个上述微卫星位点的LOH.结论 NSCLC患者血浆与肿瘤组织中FHIT基因LOH有较高的一致性变化;LOH可能是NSCLC肿瘤组织FHIT蛋白表达下调的重要机制之一,血浆FHIT基因的LOH检测对于评估肺癌的预后、转移具有潜在的价值和广阔的应用前景.     

肺癌组织3号染色体短臂上抑癌基因异常改变的初步分析

目的 探讨3号染色体短臂上的抑制基因Fhit,hMLH1及VHL在肺癌发展中的可能作用。方法 选取上述基因内含子或附近的微卫星多态位点对45例肺癌组织进行杂合性缺失（LOH）分析,并对其中17例进行了Fhit蛋白的免疫组化染色。结果 Fhit基因内含子3个位点D3S1234、D3S1300及D3S4103的杂合率分别为77．8％（35／45）、73．3％（33／45）和82．2％（37／45）,LOH阳性率分别为62．9％（22／35）、63．6％（21／33）和59．5％（22／37）。与hMLH1基因连锁的两个位点D3S1561、D3S1612杂合率分别为48．9％（22／45）、42．2％（19／45）,LOH阳性率分别为54．5％（12／22）和63．2％（12／19）。与VHL基因连锁的两个位点D3S1038、D3S1283的杂合率分别为62．2％（28／45）和80．0％（36／45）,LOH阳性率分别为64．3％（18／28）和41．7％（15／36）。17例肺癌组织有64．7％（11／17）Fhit蛋白表达缺失。在Fhit蛋白缺失的11个病例中,有10例存在一个或多个Fhit基因位点的LOH。结论 上述3个抑癌基因存在的高频率LOH可为肺癌的早期诊断提供新的途径和依据。Fhit基因的杂合性缺失可能是Fhit蛋白表达下调的机理之一。     

乳腺浸润性导管癌染色体8p22、11p15、17p13区杂合性缺失的研究

目的：观察乳腺浸润性导管癌中8p22、11p15、17p13三个染色体区的杂合性缺失(LOH)及其与临床病理参数之间的关系。方法：从石蜡包埋的存档标本中选取34例肿瘤组织和其对应的自身正常对照组织，用PCR方法扩增位于此三个染色体区域的三个微卫星位点D8S136、D11S988、TP53，扩增产物用6％聚丙稀酰胺凝胶电泳，银染显色后进行LOH的判定。用免疫组化方法观察ER、PR、P53和c-erBb-2在乳腺癌中的表达情况。结果：34例乳腺癌中有12例(35．29％)D8S136位点发生LOH，D11S988和TP53两个位点分别发现5例(14．71％)LOH。D11S988和TP53两个位点的LOH与临床病理参数之间无明显相关性，而D8S136发生LOH的肿瘤平均直径明显高于LOH阴性的肿瘤(P=0．0049)。结论：染色体8p22区域有较高的LOH发生率，位于此区域的肿瘤抑制基因的失活可能与乳腺癌的迅速生长有关。     

食管癌组织3p、18q位点微卫星杂合性缺失的研究

目的 探讨食管癌组织中3p 14.3～3p21.1、18q 22.3～18q23杂合性缺失（loss of heterozygosity,LOH）频率与人食管癌发生及其临床病理特征的关系。方法应用聚合酶链反应（polymerase chain reaction,PCR）和变性聚丙烯酰胺凝胶电泳技术（denaturalized polyacrylamide gel electrophoresis,PAGE）,对28例食管癌中微卫星DNA序列不稳定性（microsatellite instability,MSI）表达情况进行研究。结果 28例食管癌标本中23例鳞状细胞癌9例LOH阳性,5例食管小细胞癌4例LOH阳性;LOH与肿瘤的病理分级、PTNM分期、有无区域淋巴结转移和浸润深度无相关性（P＞0．05）;3P位点上有较高频率的LOH发生。结论 LOH与食管癌的临床病理类型、临床分期、细胞分化程度、癌组织浸润深度和有无区域淋巴结转移等参数无相关性（P＞0.05）;食管癌在多个染色体位点均存在LOH现象,3P是食管癌相关的热点区域,3p位点基因的改变在食管癌发生过程中具有较重要意义。     

胰岛素瘤频发MEN-1抑癌基因及22q的杂合缺失及其意义

目的探讨胰岛素瘤发病的可能机制,寻找鉴别胰岛素瘤良恶性的分子遗传学指标。方法40个胰岛素瘤肿瘤标本(8个恶性,32个良性)经显微切割获取肿瘤组织和正常对照组织,并提取相应的基因组DNA。用聚合酶链反应(PCR)检测MEN-1基因以及22号染色体长臂(22q)的杂合缺失(LOH)。结果40．0％的肿瘤发生MEN-1的LOH,75．0％的肿瘤发生22q的LOH。22q12(D22S929与D22S280之间)和22q13．3是LOH的2个频发区域,分别占30个22qLOH的37．0％(11／30)和47．0％(14／30)。在D22S280位点,有8个肿瘤标本发生D22S280LOH,但无一例发生MEN-1 LOH,而无D22S280 LOH的30个肿瘤标本中,有14个发生MEN-1 LOH(47．0％)(P=0．016)。在第2个频发区中,14个发生LOH的肿瘤有6个(43．0％)为恶性,26个无LOH肿瘤中有2个(8．0％)为恶性(P=0．0088)。结论在D22S280位点上发生LOH可能是一个与MEN-1基因无关的独立的胰岛素瘤致病因素。发生22q13．3 LOH可能与肿瘤恶性相关。     

3p、9p微卫星DNA异常与肺癌的早期诊断

目的研究3p、9p微卫星DNA异常在肺癌早期诊断中的价值。方法应用PCR-银染法从外周血检测105例原发性肺癌及9例肺部良性疾病3p14、3p21、9p21上的3个微卫星位点（D3S1228、D3S1029、D9S171）的异常表现。结果肺癌患者血清中DNA含量多于良性病变患者。肺癌组各微卫星位点的微卫星不稳症（MSI）或微卫星杂合性缺失（LOH）异常的阳性率为43％。50％,以D3S1029最高,达49．6％,3个位点中至少1个位点出现微卫星异常者占76．2％．其中45．7％呈多位点改变,同肺良性病变组比较有显著性差异（P〈0．05）。肺癌组中各微卫星位点的异常表现与肺癌临床分期和临床病理类型之间无显著相关性沪〉0．05）。结论3p、9p微卫星DNA异常和肺癌分期无关,可以作为一项肺癌早期基因检测的新途径。不同微卫星位点出现异常表现的具体形式有所不同,多位点联合检测可以提高诊断的敏感性和特异性。     

小细胞肺癌中p53基因突变与临床研究

目的：探讨小细胞肺癌的发生、发展机理,提高临床早期对小细胞肺癌患者的诊断水平。方法：应用免疫组化和聚合酶链式反应——单链构象多态性分析的方法技术。对14例小细胞肺癌的石蜡包埋切片进行研究。结果：p53基因的5、6、7、8外显子突变率为57．1％(8／14)。在小细胞肺癌组织中存在着较高的p53基因突变率。结论：p53基因突变可能为人类肺癌发生的关键基因。     

食管癌组织中 9p21 的杂合性缺失

目的探讨食管癌组织中９ｐ２１（Ｄ９Ｓ１７１）杂合性丢失在食管癌发生中的作用。方法抽提正常和肿瘤组织中的ＤＮＡ，应用９ｐ染色体微卫星标志，经聚合酶链反应，检测食管癌组织中９ｐ２１的杂合性丢失。结果３２例食管癌组织，１４例出现９ｐ２１位点条带的缺失，杂合性丢失率为４３．７％。杂合性丢失与临床病理之间无明显关系。结论杂合性丢失在高发区食管癌病人中有较高的检出率，表明杂合性缺失与食管癌的形成密切相关。     

人乳头瘤病毒DNA在原发性肺癌组织中的表达

目的：探讨人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）ＤＮＡ在原发性肺癌组织中的表达．方法：利用西京医院病理科２７５例肺癌病理标本进行研究,以同期３２例支气客粘膜鳞状化生和３４例粘膜慢性炎症标本作为双非肿瘤对照组．采用随机引物法制备地高辛标记ＨＰＶ６Ｂ／１１,１６,１８,３１型ＤＮＡ探针,应用原位杂交检测肺癌组织中的ＨＰＶ－ＤＮＡ存在情况．结果：ＨＰＶ感染总阳性率为３３．８％（９３／２７５）而各细胞类型阳性率为：肺鳞癌     

喉癌患者血浆DNA微卫星等位基因杂合型缺失的监测及意义

目的:分析喉癌患者肿瘤DNA微卫星多态位点等位基因杂合型缺失在肿瘤组织与血浆的表达及关系,探讨血浆肿瘤DNA的动态变化在临床早期诊断、筛查及随访中的意义。方法:2003年9月~2004年12月青岛大学医学院附属烟台毓璜顶医院耳鼻咽喉头颈外科喉癌患者43例,抽取术前、术后防凝血,分离淋巴细胞和血浆,采集肿瘤、癌旁组织标本,分别提取DNA。选取头颈部鳞状细胞癌等位基因杂合型缺失(LOH)表达较高的3个微卫星多态位点D9S162、D9S1782、D17S1665,设计并合成引物,PCR扩增,聚丙烯酰胺电泳,用ID Image Analysis Software凝胶成像分析系统分析电泳结果。结果:D9S162肿瘤、术前血浆、术后血浆LOH表达率分别为51.85%,44.44%,33.33%;D9S1782分别为43.48%,39.13%,34.78%;D17S1665分别为51.43%,42.86%,37.14%。术后血浆3个位点有6位次LOH消失;早期和晚期喉癌血浆DNA的LOH表达无统计学差异(P>0.05)。结论:肿瘤DNA的LOH的表达与血浆肿瘤DNA的表达一致,监测血浆肿瘤DNA的变化有助于喉癌的早期诊断,术后随访过程中动态监测血浆肿瘤DNA可以预测肿瘤有无复发或再发。     

原发性肝癌全基因组杂合性缺失的研究

目的 研究肝癌全基因组等位基因杂合性缺失（ＬＯＨ）及其临床意义。方法 采用３８２对微卫星标志,对６５例肝癌２２条常染色体等位基因ＬＯＨ进行检测。结果 全组平均杂合子６８．１％。ＬＯＨ〉３０％的有１ｑ、３ｑ、４ｑ、８ｐ、１３ｑ、１６ｑ和１７ｐ。ＨＢｓＡｇ阳性者Ｄ４Ｓ２９６４ ＬＯＨ（６６％）较ＨＢｓＡｇ阴性者（３０％）高（Ｐ〈０．０５）;Ｄ３Ｓ３６８１和Ｄ１７Ｓ９３８ ＬＯＨ者术后复发率（９１％、８